амид -глицирризиновой кислоты с 6-аминоурацилом, проявляющий анти-спид-активность

Классы МПК:	C07J53/00 Стероиды, в которых циклопента (а) гидрофенантреновый скелет модифицирован конденсированием с карбоциклическими кольцами или получением дополнительного кольца за счет образования непосредственной связи между двумя атомами углерода кольца C07J63/00 Стероиды, в которых циклопента (а) гидрофенантреновый скелет модифицирован расширением только одного из колец на один или два атома
Автор(ы):	Толстиков Г.А., Балтина Л.А., Покровский А.Г., Плясунова О.А., Муринов Ю.И., Сандахчиев Л.С.
Патентообладатель(и):	Институт органической химии Уральского отделения РАН
Приоритеты:	подача заявки: 1991-03-04 публикация патента: 15.12.1994

Использование: в качестве анти-СПИД средства. Сущность изобретения: продукт - амид b -глицирризиновой кислоты с 6-амидоурацилом; 3-0-[2-0-( b -D-гликопиранозилураноил)- b -D-глюкопиранозилураноил] -(3 b , 20 b) -11,30-диоксо-30-(N-6-аминоурацил)-30-норолеан-12-ен. БФ C₄₆H₆₅N₃O₁₇ . Выход 98,9% , т.пл. 261 - 264°С. Реагент 1: амид <img src=

-глицирризиновой кислоты с 6-аминоурацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024545" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> -глицирризиновая кислота. Реагент 2: 6-аминоурацил. Условия реакции: в среде сухого ДМФА, в присутствии N,N амид <img src=

-глицирризиновой кислоты с 6-аминоурацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024545" SRC="/images/patents/449/2024049/697.gif" ALIGN="ABSMIDDLE">-дициклогексилкарбодиимида при 50 - 60°С. 1 табл.

Рисунок 1, Рисунок 2

Формула изобретения

Амид

-глицирризиновой кислоты с 6-аминоурацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024545" SRC="/images/patents/449/2024545/2024545-5t.gif" ALIGN="ABSMIDDLE">

амид <img src=

-глицирризиновой кислоты с 6-аминоурацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024545" SRC="/images/patents/449/2024545/2024545-6t.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> амид <img src=

-глицирризиновой кислоты с 6-аминоурацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024545" SRC="/images/patents/449/2024545/2024545-7t.gif" ALIGN="ABSMIDDLE">

проявляющий анти-СПИД-активность.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к новому биологически активному соединению, конкретно, к амиду амид <img src=

-глицирризиновой кислоты с 6-аминоурацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024545" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> -D-гликопиранозилураноил)- амид <img src=

-глицирризиновой кислоты с 6-аминоурацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024545" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> -D-глюкопиранозилураноил] -(3 амид <img src=

-глицирризиновой кислоты с 6-аминоурацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024545" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE">, 20 амид <img src=

-глицирризиновой кислоты с 6-аминоурацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024545" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE">)-11,30-диоксо-30-(11-6-аминоурацил)-30-норолеан-12-ен формулы (I)

амид <img src=

-глицирризиновой кислоты с 6-аминоурацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024545" SRC="/images/patents/449/2024545/2024545t.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> амид <img src=

-глицирризиновой кислоты с 6-аминоурацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024545" SRC="/images/patents/449/2024545/2024545-2t.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> амид <img src=

-глицирризиновой кислоты с 6-аминоурацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024545" SRC="/images/patents/449/2024545/2024545-3t.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> амид <img src=

-глицирризиновой кислоты с 6-аминоурацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024545" SRC="/images/patents/449/2024545/2024545-4t.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> проявляющему анти-СПИД активность.

Указанное соединение и его свойства в литературе не описаны.

В настоящее время во всем мире интенсивно ведутся исследования по поиску средств лечения СПИДа. Известно уже более 50 препаратов, подавляющих репродукцию вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) in vitro [1]. В 1987-88 гг работами группы японских исследователей было показано, что глицирризиновая кислота (ГК) - активное начало экстракта солодки, эффективно ингибирует репродукцию ВИЧ в культуре клеток [2, 3].

Основным недостатком ГК является ее малоэффективность как ингибитора репродукции ВИЧ на хронически инфицированных клетках.

Целью изобретения является поиск новых соединений в ряду производных амид <img src=

-глицирризиновой кислоты с 6-аминоурацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024545" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> -ГК), обладающих анти-СПИД активностью.

Поставленная цель достигается амидом амид <img src=

-глицирризиновой кислоты с 6-аминоурацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024545" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE">-ГК формулы (I), проявляющим анти-СПИД активность.

Фармакологические свойства описываемого соединения.

Противовирусная активность соединения I была изучена на модели первично инфицированных ВИЧ-1 лимфоидных клеток МТ-4. Раствор препарата в диметилсульфоксиде (ДМСО) (20 мг/мл - 50 мг/мл) вносили в суспензию инфицированных ВИЧ-1 клеток до конечной концентрации препарата 500-1000 мкг/мл, ДМСО до конечной концентрации 0,5-2,0%. В предварительных экспериментах было установлено, что ДМСО в концентрациях 0,5-2,0% не блокирует репродукцию ВИЧ-1. Об ингибировании репродукции ВИЧ-1 в клетках судили по снижению активности обратной транскриптазы и снижению накопления вирусного антигена (методом иммуноферментного анализа) в культуральной жидкости на 4-е сутки культивирования по сравнению с контролем (без добавления препарата).

Для сравнения использовали один из наиболее эффективных для лечения СПИДа препаратов - азидотимидин (АЗТ), механизм действия которого связан с блокированием вирусной обратной транскриптазы и терминированием синтеза вирусной ДНК [4], и амид <img src=

-глицирризиновой кислоты с 6-аминоурацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024545" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> -ГК) (92-95% чистоты), эффективно ингибирующую репродукцию ВИЧ-1 в клетках in vitro.

Основным недостатком АЗТ является его высокая токсичность [5].

Установлено, что исследованное соединение (I) эффективно ингибирует репродукцию ВИЧ-1 в культуре клеток МТ-4 в концентрациях от 0,5 мг/мл до 1,0 мг/мл (на 98,2-99,3%). По уровню выявленной противовирусной активности производное амид <img src=

В отличие от АЗТ амид (I) не оказывает на культуру клеток токсического действия. Более того, количество живых клеток значительно выше, чем в контроле инфицированных клеток без добавления препаратов (табл. 1) и амид <img src=

-глицирризиновой кислоты с 6-аминоурацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024545" SRC="/images/patents/449/2024003/8776.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> в 10 раз больше, чем в случае клеток, обработанных АЗТ и амид <img src=

Соединение (I) менее токсично, чем АЗТ по ЛД₅₀. Так ЛД₅₀ амида (I) > 7000 мг/кг.

На основании Постановления Госкомитета стандартов СМ СССР от 10 марта 1976 г. N 579 данное соединение относится к III классу малоопасных веществ.

Синтез амида (I) проводили путем обработки амид <img src=

-глицирризиновой кислоты с 6-аминоурацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024545" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> -глицирризиновой кислоты и 6-аминоурацила в смеси ДМФА - пиридина N,N"-дициклогексилкарбодиимидом. Продукт кристаллизовали из смеси ДМФА - диоксана - воды. Выход 69,9%.

Таким образом, предложено новое малоопасное производное амид <img src=

-глицирризиновой кислоты с 6-аминоурацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024545" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> -глицирризиновой кислоты - амид с 6-аминоурацилом (I), эффективно ингибирующий репродукцию ВИЧ-1 in vitro (в культуре клеток МТ-4), менее токсичный, чем азидотимидин.

Сущность изобретения демонстрируется следующими примерами:

П р и м е р 1. Изучение анти-СПИД активности.

Противовирусная активность представленного соединения (I) изучалась на модели первично инфицированных ВИЧ-1 лимфоидных клеток МТ-4. Раствор препарата в ДМСО (20 мг/кг - 50 мг/мл) вносили в суспензию инфицированных ВИЧ-1 клеток до конечной концентрации 0,5-2,0%. В предварительных экспериментах было установлено, что ДМСО в концентрациях 0,5-2,0% не блокирует репродукцию ВИЧ-1.

Об ингибировании репродукции ВИЧ-1 в клетках судили по снижению активности обратной транскриптазы и снижению накопления вирусного антигена (методом иммуноферментного анализа) в культуральной жидкости на 4-е сутки культивирования по сравнению с контролем (без добавления препарата). В качестве препаратов сравнения использовали один из наиболее эффективных для лечения СПИДа препаратов - азидотимидин (АЗТ), механизм действия которого связан с блокированием вирусной обратной транскриптазы и терминированием синтеза вирусной ДНК, и амид <img src=

-глицирризиновой кислоты с 6-аминоурацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024545" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> -ГК), эффективно ингибирующую репродукцию ВИЧ-1 в клетках.

В таблице приведены результаты проведенных экспериментов. Установлено, что исследованное соединение эффективно ингибирует репродукцию ВИЧ-1 в культуре клеток в концентрациях от 0,5 мг/мл до 1,0 мг/мл. По уровню выявленной противовирусной активности соединение (I) не уступает АЗТ и сравнимо с амид <img src=

-глицирризиновой кислоты с 6-аминоурацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024545" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> -ГК. В отличие от АЗТ производное ГК (I) не оказывает на культуру клеток токсического воздействия: количество живых клеток значительно выше, чем в контроле инфицированных клеток без добавления препарата и на порядок выше, чем в случае АЗТ и амид <img src=

Таким образом, установлена способность производного амид <img src=

-глицирризиновой кислоты с 6-аминоурацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024545" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> -глицирризиновой кислоты - амида с 6-аминоурацилом (I) эффективно ингибировать репродукцию ВИЧ-1 в культуре клеток.

П р и м е р 2. Получение 3-0-[2-0( амид <img src=

-глицирризиновой кислоты с 6-аминоурацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024545" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> -Д-глюкопиранозилураноил)- амид <img src=

-глицирризиновой кислоты с 6-аминоурацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024545" SRC="/images/patents/449/2024007/946.gif" ALIGN="ABSMIDDLE">)-11,30-диоксо- 30- -(N-6-аминоурацил)-30-норолеан-12-ена (I).

К раствору 0,82 г (1 ммоль) глицирризиновой кислоты и 20 мл сухого N, N"-диметилформамида (ДМФА) прибавляют 0,45 г (4 ммоль) 6-аминоурацила, 5 мл сухого пиридина и 0,7 г (3,4 ммоль) N,N"-дициклогексилкарбодиимида (ДЦГК) и перемешивают при 50-60^оС 8 ч, оставляют смесь на ночь при комнатной температуре, отфильтровывают осадок дициклогексилмочевины, фильтрат выливают в 200 мл холодной воды, подкисляют лимонной кислотой до рН амид <img src=

-глицирризиновой кислоты с 6-аминоурацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024545" SRC="/images/patents/449/2024003/8776.gif" ALIGN="ABSMIDDLE"> 3,4, отфильтровывают осадок, промывают водой, сушат на воздухе, затем при 100-110^оС в сушильном шкафу. Выход 0,92 г (98,9%). После кристаллизации из ДМФА-диоксана-воды и сушки в вакууме при 50-60^оС (3 ч) получают 0,65 г (69,9%) целевого продукта (Пг) в виде белого порошка, гомогенного по ТСХ. Т. пл. 261-264^оС (с разл); [ амид <img src=

-глицирризиновой кислоты с 6-аминоурацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024545" SRC="/images/patents/449/2024007/945.gif" ALIGN="ABSMIDDLE">]_D²⁰ = +30^o +35^o (с 0,01; метанол-диоксан); R_f = 0,51-0,55 (хлороформ:метанол-вода = 45 : 10 : 1).

ИК(

-глицирризиновой кислоты с 6-аминоурацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024545" SRC="/images/patents/449/2024165/957.gif" ALIGN="ABSMIDDLE">, см^-1) (вазелиновое масло): 3600-3200 (OH); 3328 (NH); 1720, 1700 (COOH); 1656, 1652 (C = 0); 1624, 1576, 1504 (пиридиновое кольцо), 1532 (CONH, Амид П).

УФ,

-глицирризиновой кислоты с 6-аминоурацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024545" SRC="/images/patents/449/2024007/955.gif" ALIGN="ABSMIDDLE">_max ^{MeOH-диоксан} (lg амид <img src=

-глицирризиновой кислоты с 6-аминоурацилом, проявляющий анти-спид-активность, патент № 2024545" SRC="/images/patents/449/2024095/949.gif" ALIGN="ABSMIDDLE">): 248 нм (4,19).

Найдено, %: C 58,49; H 6,86; N 5,05.

C₄₆H₆₅N₃O₁₇. Мол. м. 932.

Вычислено, %: С 59,28; Н 7,03; N 4,51.

Класс C07J53/00 Стероиды, в которых циклопента (а) гидрофенантреновый скелет модифицирован конденсированием с карбоциклическими кольцами или получением дополнительного кольца за счет образования непосредственной связи между двумя атомами углерода кольца

способ получения а-секотритерпеновых с-3(28) моно-и диамидов и их секоинтермедиатов - патент 2525546 (20.08.2014)
способ получения бетулина - патент 2524778 (10.08.2014)

способ получения бетулина (варианты) - патент 2523545 (20.07.2014)
способ синтеза производного эфира и глицирретиновой кислоты и соединение сложного эфира дезоксиглицирретиновой кислоты - патент 2522455 (10.07.2014)
способ получения производных 3,28-дисульфата бетулина - патент 2520971 (27.06.2014)
способ получения бетулина из бересты - патент 2501805 (20.12.2013)
способ получения ацетата 16 ,17 -циклогексанопрегн-5-ен-3 -ол-20-она - патент 2495047 (10.10.2013)
средство, обладающее антиоксидантной, противовоспалительной, нейропротекторной, гиполипидемической, гипохолестеринемической, гипогликемической, гепатопротекторной, иммуносупрессорной активностями - патент 2487884 (20.07.2013)
способ получения натриевой соли 3-сульфата аллобетулина - патент 2482126 (20.05.2013)
способ получения натриевой соли 3-сульфата аллобетулина - патент 2482125 (20.05.2013)

Класс C07J63/00 Стероиды, в которых циклопента (а) гидрофенантреновый скелет модифицирован расширением только одного из колец на один или два атома

способ получения а-секотритерпеновых с-3(28) моно-и диамидов и их секоинтермедиатов - патент 2525546 (20.08.2014)
способ получения бетулина - патент 2524778 (10.08.2014)
способ получения бетулина (варианты) - патент 2523545 (20.07.2014)
способ синтеза производного эфира и глицирретиновой кислоты и соединение сложного эфира дезоксиглицирретиновой кислоты - патент 2522455 (10.07.2014)
способ получения производных 3,28-дисульфата бетулина - патент 2520971 (27.06.2014)
способ получения 3-ацетата-28-сульфата бетулина - патент 2477285 (10.03.2013)
средство, представляющее собой 3-o- -d-глюкуронопиранозил- -d-глюкуронопиранозид олеан-9( 11),12( 13)-диен-30-овой кислоты, проявляющее анти-вич-1 активность, и способ его получения - патент 2475246 (20.02.2013)
способ получения мороновой кислоты - патент 2472803 (20.01.2013)
способ получения 3,28-дисульфата бетулина - патент 2468031 (27.11.2012)
способ получения бетулина - патент 2465281 (27.10.2012)