способ получения рибонуклеазы панкреатической

Формула изобретения

1. Способ получения рибонуклеазы панкреатической аморфной, включающий экстракцию рибонуклеазы из животного сырья 0,25 н раствором серной кислоты, отделение экстракта центрифугированием, очистку, стерилизацию и сушку, отличающийся тем, что в качестве сырья используют отходы производства инсулина, а очистку продукта осуществляют ультрафильтрацией с последующей обработкой активированным углем.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве исходного сырья используют спиртовой шрот поджелудочной железы.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к производству лекарственных препаратов из животного сырья, и может найти применение в производстве бионуклеазы панкреатической аморфной.

Рибонуклеаза панкреатическая аморфная широко используется в медицине для лечения вирусных заболеваний, например клещевого энцефалита.

Известны способы получения рибонуклеаз из микроорганизмов, включающие культивирование продуцентов на соответствующих питательных средах и очистку целевого продукта хроматографическими методами последовательно на нескольких сорбентах.

Недостатками этих способов являются многостадийность и низкий выход целевого продукта. Кроме того, применение микробных рибонуклеаз в качестве медицинских препаратов часто осложняется их иммуногенностью, обусловленной чужеродностью их для организма человека.

Наиболее близким к заявляемому способу по технической сущности, достигаемому результату и свойствам продукта прототипом является способ получения рибонуклеазы панкреатической аморфной, включающий следующие стадии:

измельчение поджелудочной железы крупного рогатого скота;

экстрагирование рибонуклеазы 0,25 н раствором серной кислоты, отделение экстракта от осадка;

высаливание балластных белков сульфатом аммония;

очистка рибонуклеазы с применением кизельгура;

повторная очистка солевым фракционированием, обработкой фенолом, ацетоном, этанолом;

получение готовой формы продукта.

Недостатками прототипа является:

низкий выход целевого продукта, составляющий 1 г рибонуклеазы из 1480 г поджелудочной железы;

сложность и многостадийность процесса;

использование легковоспламеняющихся и токсичных веществ (фенола, ацетона, этанола);

использование дефицитных импортных реагентов (кизельгур);

использование поджелудочной железы, являющейся ценным дефицитным сырьем для получения других препаратов (инсулина).

Технической задачей изобретения является упрощение известного способа получения рибонуклеазы панкреатической аморфной и увеличение выхода целевого продукта.

Для решения поставленной задачи в качестве исходного животного сырья используют спиртовой шрот поджелудочной железы, являющийся неутилизируемым в настоящее время отходом производства инсулина, а очистку рибонуклеазы панкреатической аморфной осуществляют ультрафильтрацией на полых волокнах с последующей обработкой активированным углем.

Предлагаемый способ осуществляют следующим образом. Рибонуклеазу панкреатическую экстрагируют из спиртового шрота поджелудочной железы 0,25 н раствором серной кислоты в соотношении 1:4 в течение 24 ч при перемешивании. Отделяют экстракт, содержащий рибонуклеазу, от шрота стандартными методами, Очищают рибонуклеазу ультрафильтрацией на полых волокнах с помощью установки УПЛ-6, скомплектованной аппаратами разделительными типа АР-2,0 (ТО 17 216.00.00.00). Для удаления пирогенных примесей очищенную РНКазу пропускают через колонку с гранулированным активированным углем. Полученный раствор рибонуклеазы панкреатической подвергают концентрированию, стерилизации, розливу и сушке стандартными методами, предусмотренными для лекарственных препаратов.

Способ иллюстрируется следующим примером.

Пример. К 1 кг спиртового шрота поджелудочной железы добавляют 4 л 0,25 н раствора серной кислоты, проводят экстракцию при постоянном перемешивании в течение 24 ч при температуре +4^oC, отделяют экстракт центрифуригованием при 8 тыс. об/мин в течение 15 мин и очищают рибонуклеазу аморфную ультрафильтрацией на установке УПЛ-6. Для удаления пирогенных примесей пропускают раствор рибонуклеазы через колонку с гранулированным активированным углем. Соотношение активированного угля к раствору рибонуклеазы 20 г/л. После концентирования, стерилизации, розлива и сушки стандартными методами получают 1 г (100 терапевтических доз) препарата рибонуклеазы аморфной, соответствующего требованиям ВФС 42-819-79.

Из сопоставления способов, принятого за прототип и предлагаемого, видно, что предлагаемый способ по сравнению с прототипом (см. табл.):

1. является менее сложным и трудоемким процессом и позволяет автоматизировать производство;

2. не использует легковоспламеняющиеся жидкости;

3. не использует токсичные вещества;

4. предполагает использование отечественных реагентов и оборудования;

5. позволяет на порядок повысить выход рибонуклеазы аморфной;

6. позволяет совместить технологию получения рибонуклеазы аморфной и инсулина, т.к. в качестве исходного сырья использует неутилизируемые ранее отходы производства инсулина.