способ определения токсичности крови рыб

Формула изобретения

Способ определения токсичности крови рыб путем биохимического исследования белков сыворотки крови, при котором выявляют уровень полипептидных компонентов, отличающийся тем, что выявление уровня полипептидных компонентов осуществляют фотокалориметрически и при значении содержания пептидов выше 0,051 условных единиц диагностируют токсичность крови.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области токсикологии и позволяет установить токсичность жидких сред организма рыб и может быть использовано для выявления антропогенного загрязнения водоемов.

Согласно инструкции по физиолого-биохимическому анализу рыбы /Инструкция Министерства рыбного хозяйства СССР и Всесоюзного научно-производственного объединения по рыбоводству, 1986 г./ токсические изменения организма рыб выявляются после проведения органолептического, физиолого-биохимического, бактериологического исследований. Однако такой комплексный подход определения токсичности требует использования больших количеств методик, сложного оборудования, дорогостоящих реактивов, квалифицированного персонала.

Известен метод определения полипептидных компонентов средней молекулярной массы крови, который исследуют для диагностики патологических состояний теплокровных животных и человека /авторское свидетельство СССР N 1532877, опублик. 30.12.89/. Исследования осуществляют путем осаждения сывороточных белков IM ацетатным буфером с последующей инкубацией пробы на кипящей водяной бане. Недостатком способа является невозможность применения его с целью определения токсичности крови рыб в полевых условиях.

Известен способ определения токсичности жидких сред организма рыб путем определения содержания гистамина в рыбопродуктах, в основе которого лежит измерение интенсивной флюоресценции производного, полученного при взаимодействии гистамина с о-фталевым альдегидом /Временные гигиенические нормативы и метод определения содержания гистамина в рыбопродуктах. Министерство здравоохранения. Москва, 1986/. Недостатком этого способа является техническая сложность исполнения /требуется длительное время для подготовки образца, высококвалифицированный персонал, сложная аппаратура и остродефицитные реактивы/.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому результату является способ определения токсичности крови рыб путем биохимического исследования белков сыворотки крови (Лукьяненко В.И. Общая ихтиотоксикология. -М. : Легкая и пищевая промышленность, 1983, с. 133 - 134; Метлев В.В. и др. Водная токсикология. -М.: Колос, 1971, с. 72).

Задачей изобретения является разработка способа определения токсичности крови рыбы, который упрощает и ускоряет исследование проб. Указанный результат достигается путем фотокалориметрии сыворотки крови рыб и уровня полипептидных компонентов с молекулярной массой 300 - 3000 дальтон и при его значении выше 0,051 условных единиц определяют токсичность крови рыб.

Способ осуществляется следующим образом.

Сыворотку, взятую из хвостовой вены, обрабатывают 10%-ным раствором трихлоруксусной кислоты в соотношении 1:0,5, проводят осветление смеси центрифугированием при 3000 об/мин в течение 30 мин. Детекцию надосадка, освобожденного от грубодисперсных белков, осуществляют после предварительного разделения, при котором к 0,5 мл надосадочной жидкости добавляли 4,5 мл дистиллята. Измерение проводят в фотокалориметре ФКЭ - 26 М при красном светофильтре. В качестве контроля используется дистиллированная вода. Уровень выявленных в сыворотке крови полипептидных компонентов выражают в условных единицах /УЕ/, количественно равных показателям экстинкций. За норму уровня полипептидных компонентов принята величина, равная 0,051 УЕ, полученная при статической обработке результатов исследования 5 проб крови рыб /карп/, выловленных в водоеме Чиликского прудхоза. Этот водоем посчитан условно не загрязненным соединениями антропогенного происхождения - вода в нем обновляется каждый год.

Для доказательства токсического действия на организм рыб веществ антропогенного происхождения было проведено определение уровня содержания полипептидных компонентов в сыворотке крови рыб, выловленных весной и осенью 1994 г. в Чардарьинском водохранилище. Чардарьинское водохранилище, по данным лаборатории токсикологии Каз. НИИ АСХН Республики Казахстан, характеризуется значительным уровнем загрязнения пестицидами, гербицидами, инсектицидами, среди которых значительную долю составляют гексахлорциклогексан, дихлордиметилтрихлорэтан, уровень осаждения которых в водоеме в последние 5 лет сохраняется постоянно. Уровень токсических соединений в воде водохранилища может меняться в зависимости от количества воды в водоеме /которое весной увеличивается в связи с паводками вод, осенью резко падает/.

Для исследования взяли половозрелые особи рыб. Содержание полипептидных компонентов весной в сыворотке крови связана 0,143 0,02 УЕ, карася 0,143 0,037 УЕ, чехони 0,272 0,06 УЕ /таблица/. Содержание полипептидных компонентов в крови рыб осенью составило: у сазана 0,283 0,32 УЕ, у карася 0,242 0,022 УЕ. У карася, зараженного лигулезом, 0,205 0,021 УЕ. В крови же леща уровень полипептидных компонентов достигал 0,320 0,029 УЕ. Видно, что в крови сазана, карася количество полипептидных компонентов весной значительно ниже, чем осенью, что связано с уровнем воды в водохранилище и содержанием в воде токсичных веществ. В то же время из данных таблицы видно, что содержание полипептидных компонентов в крови у каждого вида рыб разное. На основании полученных данных можно заключить, что сыворотка обследованных видов рыб токсична по сравнению с сывороткой крови карпа, принятой за условную норму. Весной уровень полипептидных компонентов в сыворотке крови рыб выловленных в Чардарьинском водохранилище выше условной нормы в 3 раза, а выловленных осенью в 5 - 6 раз.

Таким образом, способ определения токсичности крови рыб является информативным, репрезентативным, экономичным, позволяет быстро и просто определять токсическое действие антропогенного загрязнения воды в водохранилище.