способ получения гипериммунной сыворотки против лептоспир
| Классы МПК: | A61K39/42 вирусные |
| Автор(ы): | Стоянова Н.А., Токаревич Н.К., Пермяков Г.М. |
| Патентообладатель(и): | Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им.Пастера |
| Приоритеты: |
подача заявки:
1998-10-13 публикация патента:
27.09.1999 |
Изобретение относится к области медицины и ветеринарии и может быть использовано для получения противолептоспирозных сывороток для приготовления диагностических и лечебных препаратов. Способ предусматривает введение лептоспир продуценту сыворотки с последующим забором крови. Предложено лептоспиры первоначально вводить в одну конечность внутримышечно и в область лимфатического узла по 1х108 - 1,5x108 микробных клеток (мк) на 1 кг массы и через 5-6 суток - в другую конечность по той же схеме. Через 35-40 дней проводят ревакцинацию в нарастающей дозе: первую - внутримышечно 1х108 - 1,5х108 мк, затем подкожно 2х108 - 2,5х108 мк, 3х108 - 3,5х108 мк, 5х108 - 5,5х108 мк, 6х108 - 6,5х108 мк на кг массы через каждые двое суток. Способ позволяет получить сыворотки со стабильно высокими титрами специфических антител и сократить сроки иммунизации.
Формула изобретения
Способ получения гипериммунной сыворотки против лептоспир путем введения лептоспир продуценту сыворотки с последующим забором крови от продуцента, отличающийся тем, что лептоспиры первоначально вводят в одну конечность внутримышечно и в область лимфатического узла по 1 х 108 - 1,5 х 108 микробных клеток (мк) на 1 кг массы, через 5 - 6 суток в другую конечность по той же схеме, а через 35 - 40 дней проводят ревакцинацию в нарастающей дозе: первую - внутримышечно 1 х 108 - 1,5 х 108 мк, затем подкожно 2 х 108 - 2,5 х 108 мк, 3 х 108 - 3,5 х 108 мк, 5 х 108 - 5,5 х 108 мк, 6 х 108 - 6,5 х 108 мк на 1 кг массы через каждые двое суток.Описание изобретения к патенту
Изобретение относится к области медицины и ветеринарии и может найти применение для получения противолептоспирозных сывороток с целью приготовления диагностических и лечебных препаратов. Наиболее близким по сущности к предлагаемому изобретению является способ получения гипериммунной сыворотки к лептоспирам, предусматривающий введение антигена лептоспир продуценту сыворотки с последующим забором крови от продуцента (см. Тарасевич Н.Н.- Иммунология и серологическая диагностика лептоспирозной инфекции.- М. -Медицина.- 1972.-С. 137). Однако недостатком способа является:- недостаточная стабильность титров антител в сыворотках от 1: 20000 до 1:200000;
- длительная иммунизация, следовательно, и сроки получения сыворотки составляют более 80-82 дней;
- необходимость получения из лептоспир сухой массы клеток, что усложняет способ и ограничивает возможности его применения. Изобретение направлено на получение сывороток со стабильно высокими титрами специфических антител и сокращение сроков иммунизации. Способ получения гипериммунной сыворотки против лептоспир предусматривает введение лептоспир продуценту сыворотки с последующим забором крови от продуцента. Можно использовать лептоспиры любой серологической группы, в зависимости от цели (лечебная сыворотка, агглютинирующая сыворотка для типирования лептоспир, для приготовления диагностикума). Так, например, использование лептоспир серогрупп Icterohaemorrhagiae и Canicola позволяет получить сыворотку для лечения лептоспироза у собак. Авторами разработана оригинальная схема введения лептоспир продуценту. Для достижения поставленной цели лептоспиры первоначально вводят в одну конечность внутримышечно и в область лимфатического узла в дозе по (1,0
108-1,5108) мк на кг массы продуцента. По истечении 5-6 суток по той же схеме лептоспиры вводят в другую конечность. Ревакцинацию проводят через 35-40 дней в нарастающей дозе (1108-1,5108 мк, (2108-2,5108) мк, (3108-3,5108) мк, (5108-5,5108) мк, (6108-6,5 108) мк на кг массы через каждые двое суток. Первую - внутримышечно, остальные подкожно. Через 8-10 дней проводят забор крови. Иммунизация концентрированным антигеном позволяет уменьшить объем вводимого препарата, а смена выбранных рецепторных зон приводит к включению в иммуногенез значительного количества иммунокомпетентных клеток и обеспечивает депонирование антигена для пролонгированного раздражения; выбранный порядок введения антигена, его концентрация и интервалы между инъекциями исключают появление у реципиента рефракторного состояния, это обеспечивает получение высокоактивной специфической сыворотки, а также воспроизводимость способа. Кроме того, предлагаемый способ позволяет максимально сократить расход антигена, а следовательно, число вакцинированных животных и время содержания их в опыте. Изобретение реализуется следующим образом. Пример 1. Получение гипериммунной сыворотки. Культуры лептоспир серогрупп Icterohaemorrhagiae и Canicola, выращенные на питательной среде Терских, инактивировали в течение 30 минут при 56o, концентрировали центрифугированием при 10000 об/ч разводили физиологическим раствором до концентрации 5 10 мк/мл, соединяли в равных объемах лептоспиры двух серогрупп и иммунизировали баранов - самцов массой 35-40 кг по следующей схеме:1-я иммунизация. 4 мл антигена внутримышечно в левую заднюю ногу и 4 мл антигена в область подколенного лимфатического узла левой ноги. 2-я иммунизация через 5 дней - 4 мл антигена - в правую заднюю ногу и 4 мл антигена в правый подколенный узел. 3-я иммунизация через 35 дней - 8 мл антигена внутримышечно. 4-я иммунизация через 2 дня - 16 мл антигена подкожно. 5-я иммунизация через 2 дня - 24 мл антигена подкожно. 6-я иммунизация через 2 дня - 40 мл антигена подкожно. 7-я иммунизация через 2 дня - 48 мл антигена подкожно. Через 10 дней после последней иммунизации производили кровопускание и определяли титр антител в реакции микроагглютинации с лептоспирами серогрупп Icterohaemorrhagiae и Canicola. Титр антител составляет 1:50000 1:100000. Весь цикл иммунизации баранов составляет 58 дней. Пример 2. Культуры лептоспир серогруппы Grippotyphosa для иммунизации готовили так же, как в примере 1, и вводили их баранам массой 35-40 кг по следующей схеме:
1-я иммунизация - 6 мл антигена внутримышечно в левую заднюю ногу и 6 мл антигена в область подколенного лимфатического узла левой ноги. 2-я иммунизация - через 5 дней - 6 мл антигена в правую заднюю ногу внутримышечно и столько же антигена в область правого подколенного узла. 3-я иммунизация - через 35 дней - 12 мл антигена внутримышечно. 4-я иммунизация - через 2 дня - 20 мл антигена подкожно. 5-я иммунизация - через 2 дня - 28 мл антигена подкожно. 6-я иммунизация - через 2 дня - 44 мл антигена подкожно. 7-я иммунизация - через 2 дня - 52 мл антигена подкожно. Через 8 дней после последней иммунизации производили забор крови. В реакции микроагглютинации с лептоспирами серогруппы Grippotyphosa титр антител составил 1:50000-1:100000. Весь цикл иммунизации баранов составил 58 дней. Пример 3. Культуру лептоспир серогруппы Pomona готовили для иммунизации так же, как в примере 1, и вводили кроликам массой 3 кг по следующей схеме:
1-я иммунизация - 0,3 мл антигена внутримышечно в левую заднюю ногу и 0,3 мл антигена в левый подколенный лимфатический узел. 2-я иммунизация - через 5 дней - 0,3 антигена внутримышечно в область правой задней ноги и 0,3 мл - в правый подколенный узел. 3-я иммунизация - через 35 дней - 0,6 мл антигена внутримышечно. 4-я иммунизация - через 2 дня - 1,2 мл антигена подкожно. 5-я иммунизация - через 2 дня - 1,8 мл антигена подкожно. 6-я иммунизация - через 2 дня - 3 мл антигена подкожно. 7-я иммунизация - через 2 дня -3,6 мл антигена подкожно. Через 10 дней после последней иммунизации производили забор крови. В реакции микроагглютинации титр антител 1:50000. Весь цикл иммунизации составил 58 дней. Пример 4. Культуру лептоспир серогруппы Pomona готовили для иммунизации так же, как в примере 1, и вводили кроликам массой 3 кг по следующей схеме:
1-я иммунизация - 0,3 мл антигена внутримышечно в левую заднюю ногу и 0,3 мл в левый подколенный лимфатический узел. 2-я иммунизация - через 5 дней - 0,3 мл антигена внутримышечно в область правой задней ноги и 0,3 мл - в правый подколенный узел. 3-я иммунизация - через 5 дней - 0,6 мл антигена внутримышечно. 4-я иммунизация - через 5 дней - 1,2 мл антигена вводим подкожно. 5-я иммунизация - через 5 дней - 1,8 мл антигена подкожно. 6-я иммунизация - через 5 дней - 3 мл антигена подкожно. 7-я иммунизация - через 5 дней - 3,6 мл антигена подкожно. Через 10 дней после последней иммунизации производили забор крови. В реакции микроагглютинации титр антител 1: 6400-1: 12800. Весь цикл иммунизации составил 40 дней. В последующие дни (через 20 и 30 дней после последней иммунизации) нарастания титра антител не было. Изменение интервалов между введением антигена сократило сроки иммунизации, но не позволило получить сыворотки с высокими титрами антител.
