среда для обеспечения введения различных веществ в личинки домашней мухи musca domestica

Формула изобретения

Среда для обеспечения введения в личинки домашней мухи Musca domestica различных веществ, содержащая кормовую основу и воду, отличающаяся тем, что дополнительно содержит агар-агар и пропионовую кислоту, а в качестве кормовой основы - комбикорм для овец или кроликов при следующем соотношении ингредиентов, мас.%:

Комбикорм для овец или кроликов - 15 - 30

Агар-агар - 0,4 - 0,8

Пропионовая кислота - 0,4 - 0,6

Вода - Остальное

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к биотехнологии.

Известна среда для выращивания личинок синантропных мух, содержащая, мас. %: навоз 70-95, содержимое рубца 30-5 (авторское свидетельство СССР N 1491424,1987).

Известна среда для выращивания личинок синантропных мух, содержащая, мас. %: солодовые ростки 5,0-7,5, свиной навоз 92,5-95,0 (авторское свидетельство СССР N 1692449, 1991).

Однако газовыделения из навоза отрицательно влияют на жизнеспособность мух, также возникает опасность распространения инфекции из навоза и гибели поголовья мух.

Известен субстрат для выращивания личинок синантропных мух, содержащих, мас.%: сухое молоко 4-18, дрожжи 1-6, опилки 10-20, вода остальное.

Среда нетоксична, однако не обеспечивает сохранения стабильности свойств в течение длительного времени.

Целью изобретения является создание твердой среды со стабильными контролируемыми свойствами для развития личинок Musca domestica.

Поставленная цель достигается использованием в качестве кормовой основы различных типов комбикормов для кроликов или овец (например, рецепт К-92-1121815-2-127, ГОСТ 10386-72), добавлением агар-агара для поддержания влажности в среде на постоянном уровне и пропионовой кислоты для предотвращения зарастания среды грибками.

Состав среды, мас.%:

Комбикорм - 15-30

Агар-агар - 0,3-0,9

Пропионовая кислота - 0,4-0,9

Вода - Остальное

Готовят среду путем смешивания компонентов при нагревании. Тестируемые вещества вводятся до застывания среды. После затвердевания среда готова к применению.

Пример 1.

Для выяснения оптимальной кормовой основы для жизнедеятельности личинок мух исследовали ряд субстратов, которые отвечали бы условиям хорошей выживаемости личинок и постоянством свойств разных партий субстрата (таблица 1): молочно-дрожжевая смесь (дрожжи 8%, сухое молоко 10%, сахар 5%, агар 1%, вода остальное), комбикорма для кроликов или овец (напр., ГОСТ 10386-72)(40% - комбикорм, вода остальное), среда с геркулесом (геркулес 40%, дрожжи 8%, сахар 5%, вода остальное). Наиболее эффективным по выживаемости личинок и постоянством свойств разных партий субстрата оказался комбикорм для овец. Выживаемость личинок составила 77% до стадии куколки и 58% до стадии имаго.

Пример 2.

Недостатком всех протестированных сред было значительное высыхание их со временем (срок культивирования личинок 15-18 дней при t^oC=26-32), что могло изменить концентрацию вводимых в среду веществ. Для устранения этого недостатка в среду добавляли агаризующие вещества, способствующие сохранению жидкости, такие как желатин, агароза, агар-агар. Наиболее приемлемые результаты получены при использовании 0,5% агар-агара в среде на основе овечьего комбикорма (таблица 2). При этом среда сохраняет достаточно постоянное количество жидкости в течение 2 недель при наличии влагосберегающей крышки на сосуде (при t^oC=28 и влажности воздуха 75-80%). Благодаря этому концентрация вводимых в среду веществ сохраняется на постоянном уровне. Выживаемость личинок на этой среде составляет 45-50%, что немногим меньше чем на среде без агар-агара. Для предотвращения зарастания среды грибками в нее добавляли припионовую кислоту до концентрации 0,5%.

Пример 3. Среда на основе овечьего комбикорма (напр., ГОСТ 10386-72) с 0,5% агар-агара была испытана на примере проверки устойчивости личинок мух Musca domestica к искусственному антибиотику, аналогу неомицина - генетицину (G418, фирма Sigma, США). В среду вводили искусственный антибиотик в ряде концентраций (таблица 3). При этом личинки дикой домашней мухи при помещении на среду погибали в течение 2-10 дней. Из этого следует, что селективные свойства среды сохранялись. При помещении на среду личинки мух Musca domestica, трансгенные по гену устойчивости к неомицину, выживали при концентрациях генетицина до 600 мкг/мл среды.

В соответствии с изложенным, а также с учетом данных, приведенных в таблицах 1 - 4, можно сделать вывод, что создана твердая среда со стабильными, контролируемыми свойствами для развития личинок Musca Domestica. Среда может использоваться для исследования влияния различных веществ, таких как антибиотики, инсектициды, удобрения и т.д., на развитие насекомых, в частности личинок домашней мухи Musca domestica. Другим применением среды будут научные исследования в области генетики и генной инженерии домашней мухи.