способ диагностики туберкулезного сальпингоофорита

Формула изобретения

Способ диагностики туберкулезного сальпингоофорита путем иммунологического исследования, отличающийся тем, что определяют концентрацию противотуберкулезных антител в перитонеальной жидкости, полученной путем пункции дугласова пространства и раститрованной 1:16, с помощью стандартной иммуноферментной тест-системы и при величине оптической плотности, равной или превышающей 0,200, диагностируют туберкулезный сальпингоофорит.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине и может быть использовано при диагностике туберкулезного сальпингоофорита.

Профилактика и ранняя диагностика туберкулеза женских гениталий являются главными задачами фтизиогинекологии в связи с ростом заболеваемости туберкулезом на 12 - 17% ежегодно (В.И.Покровский. Современное состояние проблемы эпидемиологии инфекционных болезней // Тр. I-го съезда Российского общества патологоанатомов. М.: 1996.-С. 1-3) Проблема ранней диагностики затрагивает не только медицинские, но и социальные аспекты. Наиболее сложна диагностика малых форм туберкулеза, к которым относится и туберкулез гениталий у женщин. По данным Э.Н.Беллендира и Ю.И. Реккеля (Патогенез туберкулеза женских половых органов в свете новых экспериментальных данных // Пробл. туб. - 1983. - N10. - С.59-63), заболевание первоначально проявляется поражением фимбриальных отделов маточных труб. Их топографическая локализация в значительной мере ограничивает диагностические возможности методов обследования.

Известен способ диагностики туберкулеза женских гениталий с помощью обнаружения в сыворотке крови циркулирующих, противотуберкулезных антител (ПТАТ) в наиболее совершенном из ныне известных серологических микрометодов - твердофазном иммуноферментном анализе(ИФА). При использовании в качестве антигена коммерческого препарата - ультраконцентрата туберкулина точность ИФА составляла около 60% (В.Н. Вербов, О.А. Якунова, Р.И. Шендерова и др. Разработка тест-системы иммуноферментного анализа для серодиагностики туберкулеза внелегочных локализаций // Твердофазный иммуноферментный анализ: Труды института им. Пастера. - Т.64.- Л., 1988.- С. 146-150; Р.И. Шендерова, В. А. Золотухин, В.Н. Евдокимов и др. Оценка иммуноферментной тест-системы для серодиагностики туберкулеза //Диагностика и дифференциальная диагностика туберкулеза легких и внелегочных локализаций.- СПб. - 1991.-С. 62- 65). Точность ИФА повышалась до 70%, когда антигеном служил экспериментально полученный компонент клеточной стенки Mycobacterium tuberculosis штамма H37Rv с молекулярной массой 38-42kDa (А.Б. Базарова. Диагностика туберкулеза женских половых органов (клинико-иммунологическое исследование) // Автореф. дисс.канд. мед. наук - М.,1996.-27с.)

Последний способ, являющийся прототипом предполагаемого изобретения, не отличается высокой диагностической точностью (не более 70,2% совпадений), он основан на применении нестандартизованной иммуноферментной тест-системы (не зарегистрирована в Комитете вакцин и сывороток МЗ РФ) и не учитывает современных представлений клинической иммунологии о локальном иммунном ответе, повышающих диагностические возможности иммунологических методов (Патент 2064187 от 20.06.1996 г. Беллендир Э.Н., Шендерова Р.И., Горяшина В.И. и др. Способ диагностики туберкулезного синовита; Диагностика туберкулезно-аллергического синовита с применением иммунологических тестов: Метод рекомендации / СПб НИИ фтизиопульмонологии: под ред. проф. А.В. Васильева - СПб. - 1994 - 17с.)

ИФА биологического материала, максимально приближенного к очагу поражения, позволил добиться успеха в диагностике других внелегочных локализаций туберкулеза: выявление ПТАТ в спинномозговой жидкости - в серодиагностике туберкулезного спондилита (С.А. Тиходеев, Р.И. Шендерова, В.В. Олейник и др. Показатели системного и местного иммунитета у больных туберкулезом позвоночника //Проб. туб.-1993. - N3.- С.2-4), обнаружение ПТАТ в экстрактах ткани периферических лимфоузлов - в диагностике туберкулезного лимфаденита (Р.И. Шендерова, Э. Н. Беллендир, Т.А. Савина и др. Способ иммунологической диагностики туберкулезного лимфаденита. Заявка на патент N 96114919 от 23.07.1996).

Применяемые в гинекологии (Сундырев Е.Ю. Применение пункционного метода с лечебной и диагностической целью при ретенционных кистах яичника//Автореф. дис. канд. мед. наук. - Уфа, 1996. -18с.) и фтизиогинекологии (Колачевская Е. Н. Туберкулез женских половых органов. -М., Медицина, 1996.-210с.) с диагностической и лечебной целями исследования перитонеальной жидкости, полученной путем пункции дугласова пространства, ограничивались лишь цитологическими и бактериологическими аспектами, которые характеризуются недостаточно высокой диагностической точностью. Изучение такого биологического материала, продуцируемого маточными трубами, яичниками и брюшиной (Donnez Y., Langerock S., Thomas К., Liquor peritoneem roul // Obset and Yynec. - 1982.- Vol.59. -N 2- P.687- 692), на предмет обнаружения в нем ПТАТ для диагностики туберкулезного сальпингоофорита до сих пор никем не предпринималось.

Задачей предлагаемого изобретения является повышение точности иммунологической диагностики туберкулезного сальпингоофорита, что достигается за счет определения концентрации ПТАТ в перитонеальной жидкости, полученной путем пункции дугласова пространства и раститрованной 1:16, с помощью стандартной иммуноферментной тест-системы, и при величине оптической плотности, равной или превышающей 0,200, диагностируют туберкулезный сальпингоофорит.

Отличием предлагаемого способа от прототипа является то, что поиски ПТАТ производятся в анатомической зоне очага поражения. В результате чувствительность заявляемого способа повышается более чем на 15%, а общая информативность достигает 90%. Поиски ПТАТ производились в перитонеальной жидкости дугласова пространства в иммуноферментной тест-системе с различными разведениями биологического материала: от цельного пунктата шагом 2 до титра 1: 64. Оказалось, что оптимальный титр 1: 16; при меньшем разведении резко возрастало число ложноположительных ответов, при большей раститровке снижалась чувствительность метода.

Способ осуществляют следующим образом: образец пунктата раститровывают при помощи разводящего буфера из набора реактивов стандартной иммуноферментной тест-системы до конечной концентрации 1:16. В полученном растворе определяют ПТАТ согласно инструкции, прилагаемой к набору стандартной иммуноферментной тест-системы (ВФС 42-388 ВС-93): - антиген растворяют в буферном растворе, вносят в лунки планшета, инкубируют 18 ч при 400^oC. Затем последовательно добавляют разведенный пунктат и конъюгат - белок A, меченный пероксидазой. После каждого этапа инкубации антигена и пунктата планшет промывают трехкратно, после инкубации с конъюгатом - 5 раз. В качестве субстрата используют раствор О-фенилендиамина, который вносят в лунки и инкубируют вместе с перекисью водорода в течение 30 мин при комнатной температуре. Остановку реакции осуществляют добавлением серной кислоты (1М). Учет результатов проводят на вертикальном фотометре типа Мультискан при длине волны 492 нм.

Полученный результат - концентрация ПТАТ, выраженная через величину оптической плотности (ОП), - соотносят с пороговым значением показателя, рассчитанным на основании статистической обработки результатов индивидуальных значений ОП при титре пунктата 1:16 с данными гистеросальпингографии, подкрепленными гистологическим и бактериологическим исследованиями патологического материала, а также клиническими наблюдениями за больными.

Если пунктат в титре 1:16 имеет величину ОП 0,200, диагностируют туберкулезный сальпингоофорит. При ОП < 0,200 диагностируют неспецифический сальпингоофорит.

Апробацией заявляемого способа служат результаты обследования двух групп больных сальпингоофоритами, всего 93 женщины, I группу составили 47 больных туберкулезным сальпингоофоритом, II - 46 больных неспецифическим сальпингоофоритом. Диагноз туберкулезного поражения не вызывал сомнения, так как был верифицирован положительными результатами гистологического и бактериологического исследований материала, а также на основании клинико-рентгенологических данных.

Оказалось, что у 42 больных I группы ОП пунктата в титре 1:16 >0,200 (0,202-2,660); у 5 больных ОП<0,200 (0,162; 0,164; 0,168; 0,194; 0,196). Следовательно, чувствительность способа составляет 89,4%.

У 42 больных II группы ОП пунктата в титре 1:16 < 0,200 и лишь у четверых оказалась выше порогового значения (0,214; 0,244; 0,271; 0,282). Т.о., специфичность предлагаемого способа составляет 91,3%.

Позитивная и негативная предсказывающие ценности теста составляют 91,3% и 89,4%. В целом, с помощью предлагаемого способа правильный диагноз по двум группам больных был поставлен в 84 случаях из 93; значит, диагностическая эффективность теста составляет 90,3%.

ПРИМЕРЫ РЕАЛИЗАЦИИ ЗАЯВЛЯЕМОГО СПОСОБА

1. Больная М. 47 лет, история болезни N28; СПБ НИИ фтизиопульмонологии 1995 год. Жалобы на слабость, боли внизу живота, нарушение менструального цикла. Реакция Манту 22 мм. Менструации с 14 лет, по 4 дня через 30 дней, установились сразу, обильные последние 4 года. Беременностей не было. По поводу нарушения менструального цикла произведено диагностическое выскабливание полости матки, выявлены эпителиоидные бугорки и гигантские клетки Пирогова-Ланганса. В посеве менструальной крови обнаружены микобактерии туберкулеза. Туберкулезом ранее не болела, контакт отрицает. Операция: надвлагалищная ампутация матки с придатками. При гистологическом исследовании операционного материала - миома матки, эндометрий в пролиферативной фазе, в маточных трубах очаги склероза округлой формы с отложениями извести, между ними единичные эпителиоидноклеточные гранулемы с гигантскими клетками Пирогова-Ланганса.

ИФА перитонеальной жидкости на наличие ПТАТ: ОП пунктата в титре 1:16 - 0,466.

Диагноз: туберкулезный сальпингоофорит, эндометрит, активный, ВК(+). Миома матки.

2. Больная Ш. 25 лет, история болезни N1033, СПБ НИИ фтизиопульмонологии, 1994 год. Жалобы на боли внизу живота, слабость, потливость, первичное бесплодие в течение 5 лет. Реакция Манту 10 мм. Менструации с 14 лет, 4-5 дней, через 28 дней, умеренные. Половая жизнь с 20 лет, в I браке. Гинекологические заболевания отрицает. Семейный контакт по туберкулезу в детстве. Туберкулезом ранее не болела. При гинекологическом осмотре определяется нормальных размеров матка, фиксированная кзади, придатки в спайках с обеих сторон, в виде тяжей. На гистеросальпингограмме определяются ригидные, четкообразно измененные маточные трубы, типичные для туберкулезного поражения. При постановке провокационной туберкулиновой пробы Коха с 20 Т.Е. выявлены положительные очаговая и общая реакции: высокая температура, изменения в гемограмме, увеличение, отечность и болезненность придатков матки.

ИФА перитонеальной жидкости на наличие ПТАТ: ОП пунктата в титре 1:16-0,621.

Диагноз: туберкулезный сальпингоофорит, активный, мелкоочаговая форма, ВК(-).

3. Больная Т.25 лет, история болезни N674, СПБ НИИ фтизиопульмонологии, 1995 год. Жалобы на нарушение менструального цикла и первичное бесплодие в течение 4 лет. Реакция Манту 5 мм. Менструации с 12 лет, по 4 дня, через 28, умеренные, в течение последних трех лет обильные и длительные. Половая жизнь с 22 лет в первом браке. При гинекологическом осмотре определяется нормальных размеров матка, придатки в спайках с обеих сторон, фиксированы, умеренно чувствительны. На провокационную туберкулиновую пробу Коха с 50 Т.Е. была положительная очаговая и общая реакции: озноб, повышение температуры, отечность и болезненность придатков матки. На гистеросальпингограмме левая маточная труба непроходима в интрамуральном отделе, признаки интравазации, правая маточная труба ригидная, четкообразно утолщена, фиксирована спайками, непроходима в ампулярном отделе, т.о. рентгенологическая картина типична для туберкулезного поражения придатков матки.

ИФА перитонеальной жидкости на наличие ПТАТ: ОП пунктата в титре 1:16-0,401.

Диагноз: туберкулезный сальпингоофорит, активный, мелкоочаговая форма, ВК(-).

4. Больная С. 30 лет, история болезни N385, СПБ НИИ фтизиопульмонологии, 1995 год. Жалобы на нарушение менструального цикла, боли внизу живота, отсутствие беременности в течение 8 лет. Менструации с 15 лет по 6 дней через 28, периодически отмечает задержки до 7-10 дней. Половая жизнь с 20 лет в I браке. Реакция Манту 17 мм. Туберкулезом не болела, контакт отрицает. На гистеросальпингограмме определяются двухсторонние сактосальпинксы, маточные трубы непроходимы с обеих сторон. При постановке пробы Коха с 50 Т.Е. общей и очаговой реакций не отмечено. Операция: двухсторонняя стоматопластика, резекция яичников. Гистологическое исследование операционного материала: в маточных трубах атрофия слизистой, склероз подслизистого и мышечного слоев. В яичниках гиперплазия тека-ткани, фолликулярные кисты, белые атретические тела. Данных за туберкулезное поражение придатков матки не выявлено.

ИФА перитонеальной жидкости на наличие ПТАТ: ОП пунктата в титре 1:16-0,136.

Диагноз: хронический сальпингоофорит вне обострения, бесплодие I. Состояние после чревосечения, двухсторонней стоматопластики, резекции яичников.

5. Больная Г.23 лет, история болезни N28, СПБ НИИ фтизиопульмонологии, 1994 год. Жалобы на боли внизу живота, отсутствие беременности в течение 4 лет. Реакция Манту 16 мм. Менструации с 14 лет по 3-4 дня, через 28 дней, умеренные. Половая жизнь вне брака с 17 лет. В анамнезе два искусственных аборта без осложнений. При гинекологическом осмотре определяется нормальных размеров матка, безболезненная, подвижная, придатки в виде тяжей с обеих сторон, своды глубокие. На гистеросальпингограмме матка обычной формы с ровными стенками, маточные трубы несколько ригидны, слегка расширены в ампуллярных отделах, проходимы с обеих сторон. При постановке пробы Коха с 50 Т. Е. общей и очаговой реакций не отмечено.

ИФА перитонеальной жидкости на наличие ПТАТ: ОП пунктата в титре 1:16-0,115.

Диагноз: хронический сальпингоофорит вне обострения, бесплодие II.

Предлагаемый тест, патогенетически обоснованный, позволяет стандартизировать и повысить точность иммунодиагностики до 90% за счет повышения чувствительности более чем на 15%.