вакцина ассоциированная гидроокисьалюминиевая против инфекционных пневмоний свиней бактериальной этиологии и способ ее изготовления

Формула изобретения

1. Вакцина ассоциированная гидроокисьалюминиевая против инфекционных пневмоний свиней бактериальной этиологии, отличающаяся тем, что она содержит бактериальную массу штаммов Pasteurella multocida серовариантов А, В и D, Haemophilus pleuropneumoniaе серогрупп 1 и 2 и стрептококков серогрупп С и R, смешанных в равных объемах при следующих исходных концентрациях, млрд. м. т./см³:

Бактериальная масса из штамма Pasteurella multocida сероварианта А- 1231 - 17,5-25,5

Бактериальная масса из штамма Pasteurella multocida сероварианта В- 681 - 17,5-25,5

Бактериальная масса из штамма Pasteurella multocida сероварианта Д-Т-80 - 17,5-25,5

Бактериальная масса из штамма Haemophilus pleuropneumoniaе серогруппы 1- 5870 - 10,5-17,5

Бактериальная масса из штамма Haemophilus pleuropneumoniaе серогруппы 2-ГУ-19 - 10,5-17,5

Бактериальная масса из штамма Streptococcus zooepidemicus серогруппы С-П-2082 - 17,5-25,5

Бактериальная масса из штамма Streptococcus suis серогруппы R-"Касли" - 17,5-25,5

2. Способ изготовления вакцины ассоциированной гидроокисьалюминиевой против инфекционных пневмоний свиней бактериальной этиологии, включающий засев вакцинных штаммов пастерелл, гемофильных бактерий и стрептококков, их раздельное культивирование в жидкой питательной среде на основе перевара Хоттингера в ферментерах с последующей инактивацией культур формальдегидом, адсорбцией их на адъюванте и смешиванием инактивированных культур, отличающийся тем, что при культивировании штаммов стрептококков сразу после засева окислительно-восстановительный потенциал культуральной жидкости снижают до (-150) - (-200) мВ, после чего до окончания процесса культивирования поддерживают рО₂ в культуральной жидкости на уровне 15-25% от насыщения кислородом воздуха, рН культуральной жидкости регулируют на уровне 6,8-7,2 ед.рН, а дробную подачу глюкозы осуществляют дозами до концентрации 0,05-0,2% при лимитировании роста стрептококков глюкозой.

3. Способ изготовления вакцины по пп.1 и 2, отличающийся тем, что инактивацию культур стрептококков проводят формальдегидом при температуре 43-48^oС в течение 12-36 ч, причем конечная концентрация формальдегида в культуре составляет 0,02-0,08%.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к биотехнологии и ветеринарии и может быть использовано при промышленном производстве вакцины ассоциированной гидроокисьалюминиевой против инфекционных пневмоний свиней бактериальной этиологии и в животноводстве для профилактики у свиней инфекционных пневмоний, вызываемых пастереллами, гемофильными бактериями и стрептококками.

Наиболее распространенными возбудителями пневмоний в свиноводческих хозяйствах являются Pasteurella multocida серовариантов А, В и D, Haemophilus pleuropneumoniae серогрупп 1 и 2 и стрептококков серогрупп С и R. В небольших свиноводческих хозяйствах причиной пневмонии может быть лишь один из видов возбудителей, в то время как в крупных хозяйствах и комплексах чаще всего одновременно циркулируют возбудители различных видов и болезнь проявляется в смешанной форме.

В настоящее время разработаны и нашли практическое применение вакцины против пневмоний свиней, вызываемых отдельными видами возбудителей (1, 2, 3). При циркуляции в хозяйствах нескольких видов возбудителей эти вакцины приходится использовать последовательно, что неизбежно ведет к запаздыванию формирования у животных поствакцинального иммунитета к какому-либо из возбудителей, вследствие чего и возникает вспышка пневмоний той или иной этиологии. Решить задачу своевременного формирования поствакцинального иммунитета ко всем наиболее распространенным этиологическим агентам представляется возможным лишь путем создания ассоциированной вакцины против инфекционных пневмоний свиней бактериальной этиологии.

Целью заявляемого изобретения является создание высокоиммунной ассоциированной гидроокисьалюминиевой вакцины, обеспечивающей надежную защиту от инфекционных пневмоний бактериальной этиологии.

Эта цель достигнута подбором и введением в состав вакцины неконкурирующих между собой антигенов производственных штаммов и оптимальным количественным соотношением этих агентов, осуществлением управляемого периодического процесса культивирования и щадящих режимов инактивации.

Способ осуществляется следующим образом.

В стерильный ферментер загружают жидкую питательную среду на основе перевара Хоттингера.

Питательную среду в ферментере засевают культурой стрептококков (Streptococcus zooepidemicus или Streptococcus suis), выращенной в жидкой питательной среде аналогичного состава, и выращивают при температуре 371^oC в течение 6-8 ч.

После засева ферментера окислительно-восстановительный потенциал культуральной жидкости снижают до (- 150) (-200) мВ, после чего до окончания процесса культивирования поддерживают рO₂ в культуральной жидкости на уровне 15-25% от насыщения кислородом воздуха, рН культуральной жидкости регулируют на уровне 6,8-7,2 ед. рН, а дробную подачу глюкозы осуществляют дозами до концентрации 0,05-0,2% при лимитировании роста стрептококков глюкозой, характеризующемся резким повышением рO₂ при неизменных расходе воздуха и оборотах мешалки и прекращением снижения рН культуральной жидкости. Выращивание пастерелл проводят в соответствии с патентом (4), а гемофильных бактерий - по инструкции (2).

Полученную бактериальную массу двух производственных штаммов стрептококков с известной концентрацией бактерий перекачивают в отдельные заранее приготовленные стерильные реакторы (или стеклянные баллоны) и добавляют при постоянном перемешивании дробно формальдегид до его конечной концентрации 0,02-0,08%, доводят рН до 7,1-7,2 ед.рН добавлением 10%-ного раствора гидроокиси натрия, перемешивают 15-20 мин и выдерживают при температуре 43-48^oС в течение 12-36 ч.

Инактивацию пастерелл проводят согласно авторскому свидетельству (5), а гемофильных бактерий - согласно инструкции (2).

После проверки на стерильность и полноту инактивации к инактивированной формальдегидом культуре каждого штамма, содержащей известное количество микробных тел в 1 см³, добавляют 4%-ную взвесь гидрата окиси алюминия рН (7,20,1) из расчета 130 см³ на каждый дм³ культуры, перемешивают 15-20 мин и выдерживают при температуре 18-20^oС в течение 2-3 сут, ежедневно перемешивая 2-3 раза, а затем без перемешивания 2 сут.

После отстоя адсорбированной на гидрате окиси алюминия культуры проводят декантирование прозрачной надосадочной жидкости с таким расчетом, чтобы получить в осадке концентрацию микробных тел (17,5-25,5)10⁹ м.т./см³.

Культуры пастерелл, гемофильных бактерий и стрептококков после инактивации и адсорбции на гидрате окиси алюминия подают в оснащенный перемешивающим устройством реактор-смеситель и смешивают в равных объемах при следующих исходных концентрациях, млрд.м.т./см³:

Бактериальная масса из штамма Pasteurella multocida сероварианта А - 1231 - 17,5 - 25,5

Бактериальная масса из штамма Pasteurella multocida сероварианта В - 681 - 17,5 - 25,5

Бактериальная масса из штамма Pasteurella multocida сероварианта Д-Т-80 - 17,5 - 25,5

Бактериальная масса из штамма Haemophilus pleuropneumoniae серогруппы 1 - 5870 - 10,5 - 17,5

Бактериальная масса из штамма Haemophilus pleuropneumoniae серогруппы 2 - ГУ-19 - 10,5 - 17,5

Бактериальная масса из штамма Streptococcus zooepidemicus серогруппы С - П -2082 - 17,5 - 25,5

Бактериальная масса из штамма Streptococcus suis серогруппы R - "Касли" - 17,5 - 25,5

После тщательного перемешивания вакцину расфасовывают с соблюдением условий асептики при постоянном перемешивании в стерильные флаконы.

Пример 1

Способ изготовления вакцины с минимальными значениями параметров

Для культивирования стрептококков используют жидкую питательную среду на основе перевара Хоттингера.

Среду засевают культурой стрептококков, выращенной в жидкой питательной среде аналогичного состава. Культивируют при 371^oC в течение 6-8 ч. После засева ферментера окислительно-восстановительный потенциал культуральной жидкости снижают до (- 150) мВ путем выдержки культуры без подачи воздуха, после чего до окончания процесса культивирования поддерживают рO₂ в культуральной жидкости на уровне 15% от насыщения кислородом воздуха, рН культуральной жидкости регулируют на уровне 6,8 ед.рН с помощью подачи 10%-ного раствора NaOH, а дробную подачу глюкозы осуществляют дозами до концентрации 0,05% при лимитировании роста стрептококков глюкозой, характеризующемся резким повышением рO₂ при неизменных расходе воздуха и оборотах мешалки и прекращением снижения рН культуральной жидкости.

Процесс инактивации штаммов стрептококков проводят формальдегидом при температуре 43^oС в течение 12 ч, причем конечная концентрация формальдегида в культуре составляет 0,02%.

После инактивации, адсорбции культур на гидрате окиси алюминия и декантации надосадочной жидкости компоненты вакцины смешивают в равных объемах при следующих исходных концентрациях, млрд.м.т./см³:

Бактериальная масса из штамма Pasteurella multocida сероварианта А - 1231 - 17,5

Бактериальная масса из штамма Pasteurella multocida сероварианта В - 681 - 17,5

Бактериальная масса из штамма Pasteurella multocida сероварианта Д-Т-80 - 17,5

Бактериальная масса из штамма Haemophilus pleuropneumoniae серогруппы 1 - 5870 - 10,5

Бактериальная масса из штамма Haemophilus pleuropneumoniae серогруппы 2 - ГУ-19 - 10,5

Бактериальная масса из штамма Streptococcus zooepidemicus серогруппы С - П - 2082 - 17,5

Бактериальная масса из штамма Streptococcus suis серогруппы R - "Касли" - 17,5

Пример 2

Способ изготовления вакцины с оптимальными значениями параметров

Для культивирования стрептококков используют жидкую питательную среду на основе перевара Хоттингера.

Среду засевают культурой стрептококков, выращенной в жидкой питательной среде аналогичного состава. Культивируют при 371^oC в течение 6-8 ч. После засева ферментера окислительно-восстановительный потенциал культуральной жидкости снижают до (- 175) мВ путем выдержки культуры без подачи воздуха, после чего до окончания процесса культивирования поддерживают рO₂ в культуральной жидкости на уровне 20% от насыщения кислородом воздуха, рН культуральной жидкости регулируют на уровне 7,0 ед.рН с помощью подачи 10%-ного раствора NaOH, а дробную подачу глюкозы осуществляют дозами до концентрации 0,125% при лимитировании роста стрептококков глюкозой, характеризующемся резким повышением pO₂ при неизменных расходе воздуха и оборотах мешалки и прекращением снижения рН культуральной жидкости.

Процесс инактивации штаммов стрептококков проводят формальдегидом при температуре 45,5^oС в течение 24 ч, причем конечная концентрация формальдегида в культуре составляет 0,05%.

После инактивации, адсорбции культур на гидрате окиси алюминия и декантации надосадочной жидкости компоненты вакцины смешивают в равных объемах при следующих исходных концентрациях, млрд.м.т./см³:

Бактериальная масса из штамма Pasteurella multocida сероварианта А - 1231 - 21,0

Бактериальная масса из штамма Pasteurella multocida сероварианта В - 681 - 21,0

Бактериальная масса из штамма Pasteurella multocida сероварианта Д-Т-80 - 21,0

Бактериальная масса из штамма Haemophilus pleuropneumoniae серогруппы 1 - 5870 - 14,0

Бактериальная масса из штамма Haemophilus pleuropneumoniae серогруппы 2 - ГУ-19 - 14,0

Бактериальная масса из штамма Streptococcus zooepidemicus серогруппы С - П -2082 - 21,0

Бактериальная масса из штамма Streptococcus suis серогруппы R - "Касли" - 21,0

Пример 3

Способ изготовления вакцины с максимальными значениями параметров

Для культивирования стрептококков используют жидкую питательную среду на основе перевара Хоттингера.

Среду засевают культурой стрептококков, выращенной в жидкой питательной среде аналогичного состава. Культивируют при 371^oC в течение 6-8 ч. После засева ферментера окислительно-восстановительный потенциал культуральной жидкости снижают до (- 200) мВ путем выдержки культуры без подачи воздуха, после чего до окончания процесса культивирования поддерживают рO₂ в культуральной жидкости на уровне 25% от насыщения кислородом воздуха, рН культуральной жидкости регулируют на уровне 7,2 ед.рН с помощью подачи 10%-ного раствора NaOH, а дробную подачу глюкозы осуществляют дозами до концентрации 0,2% при лимитировании роста стрептококков глюкозой, характеризующемся резким повышением pO₂ при неизменных расходе воздуха и оборотах мешалки и прекращением снижения рН культуральной жидкости.

Процесс инактивации штаммов стрептококков проводят формальдегидом при температуре 48^oС в течение 36 ч, причем конечная концентрация формальдегида в культуре составляет 0,08%.

После инактивации, адсорбции культур на гидрате окиси алюминия и декантации надосадочной жидкости компоненты вакцины смешивают в равных объемах при следующих исходных концентрациях, млрд.м.т./см³:

Бактериальная масса из штамма Pasteurella multocida сероварианта А - 1231 - 25,5

Бактериальная масса из штамма Pasteurella multocida сероварианта В - 681 - 25,5

Бактериальная масса из штамма Pasteurella multocida сероварианта Д-Т-80 - 25,5

Бактериальная масса из штамма Haemophilus pleuropneumoniae серогруппы 1 - 5870 - 17,5

Бактериальная масса из штамма Haemophilus pleuropneumoniae серогруппы 2 - ГУ-19 - 17,5

Бактериальная масса из штамма Streptococcus zooepidemicus серогруппы С - П - 2082 - 25,5

Бактериальная масса из штамма Streptococcus suis серогруппы R - "Касли" - 25,5

Пример 4

Способ изготовления вакцины со значениями параметров ниже минимальных

Для культивирования стрептококков используют жидкую питательную среду на основе перевара Хоттингера.

Среду засевают культурой стрептококков, выращенной в жидкой питательной среде аналогичного состава. Культивируют при 371^oC в течение 6-8 ч. После засева ферментера окислительно-восстановительный потенциал культуральной жидкости снижают до (- 125) мВ путем выдержки культуры без подачи воздуха, после чего до окончания процесса культивирования поддерживают рO₂ в культуральной жидкости на уровне 10% от насыщения кислородом воздуха, рН культуральной жидкости регулируют на уровне 6,6 ед.рН с помощью подачи 10%-ного раствора NaOH, а дробную подачу глюкозы не осуществляют.

Процесс инактивации штаммов стрептококков проводят формальдегидом при температуре 41,5^oС в течение 3 ч, причем конечная концентрация формальдегида в культуре составляет 0,01%.

После инактивации, адсорбции культур на гидрате окиси алюминия и декантации надосадочной жидкости компоненты вакцины смешивают в равных объемах при следующих исходных концентрациях, млрд.м.т./см³:

Бактериальная масса из штамма Pasteurella multocida сероварианта А - 1231 - 14,0

Бактериальная масса из штамма Pasteurella multocida сероварианта В - 681 - 14,0

Бактериальная масса из штамма Pasteurella multocida сероварианта Д-Т-80 - 14,0

Бактериальная масса из штамма Haemophilus pleuropneumoniae серогруппы 1 - 5870 - 7,0

Бактериальная масса из штамма Haemophilus pleuropneumoniae серогруппы 2 - ГУ-19 - 7,0

Бактериальная масса из штамма Streptococcus zooepidemicus серогруппы С - П -2082 - 14,0

Бактериальная масса из штамма Streptococcus suis серогруппы R - "Касли" - 14,0

Пример 5

Способ изготовления вакцины со значениями параметров выше максимальных

Для культивирования стрептококков используют жидкую питательную среду на основе перевара Хоттингера.

Среду засевают культурой стрептококков, выращенной в жидкой питательной среде аналогичного состава. Культивируют при 371^oC в течение 6-8 ч. После засева ферментера окислительно-восстановительный потенциал культуральной жидкости снижают до (- 225) мВ путем выдержки культуры без подачи воздуха, после чего до окончания процесса культивирования поддерживают pO₂ в культуральной жидкости на уровне 30% от насыщения кислородом воздуха, рН культуральной жидкости регулируют на уровне 7,4 ед.рН с помощью подачи 10%-ного раствора NaOH, а дробную подачу глюкозы осуществляют дозами до концентрации 0,275% при лимитировании роста стрептококков глюкозой, характеризующемся резким повышением pO₂ при неизменных расходе воздуха и оборотах мешалки и прекращением снижения рН культуральной жидкости.

Процесс инактивации штаммов стрептококков проводят формальдегидом при температуре 50,5^oС в течение 45 ч, причем конечная концентрация формальдегида в культуре составляет 0,110%.

После инактивации, адсорбции культур на гидрате окиси алюминия и декантации надосадочной жидкости компоненты вакцины смешивают в равных объемах при следующих исходных концентрациях, млрд.м.т./см³:

Бактериальная масса из штамма Pasteurella multocida сероварианта А - 1231 - 28,0

Бактериальная масса из штамма Pasteurella multocida сероварианта В - 681 - 28,0

Бактериальная масса из штамма Pуногенной активностью, а вакцина, приготовленная по примеру 5, обладает повышенной реактогенностью.

Источники информации

1. Инструкция по изготовлению и контролю вакцины, депонированной против стрептококкоза свиней (серогруппы C и R), утв. 25.11.88.

2. Инструкция по изготовлению и контролю вакцины против гемофелезной плевропневмании свиней эмульгированной, утв. 11.07.90.

3. Инструкция по изготовлению и контролю вакцины поливалентной эмульгированной против пастеррелеза свиней, утв. 13.11.91.

4. Патент РФ 1566533, кл. А 61 К 39/102, 07.04.1993.

5. Авт. св. РФ 1792708, кл. А 61 К 9/102, 08.10.1992.