способ прогнозирования репаративной регенерации при заживлении операционной раны вторичным натяжением
Классы МПК: | G01N33/48 биологических материалов, например крови, мочи; приборы для подсчета и измерения клеток крови (гемоцитометры) |
Автор(ы): | Слепых Н.И., Стадников А.А., Третьяков А.А. |
Патентообладатель(и): | Оренбургская государственная медицинская академия, Слепых Николай Иванович, Стадников Александр Абрамович, Третьяков Анатолий Андреевич |
Приоритеты: |
подача заявки:
2002-03-11 публикация патента:
20.03.2004 |
Изобретение относится к медицине, в частности к клинической медицине, и может быть использовано при лечении операционных ран, заживающих вторичным натяжением. Способ заключается в заборе исследуемого материала в исследуемой ране, при этом на третьи сутки после разведения краев операционной раны определяют синтез ДНК фибробластов и адвентициальных клеток и при их показателях соответственно менее (0,140,015)%о и адвентициальных клеток менее (0,130,011)%о прогнозируют замедление репаративной регенерации и осложненное течение раневого процесса. Технический результат: повышение точности прогнозирования репаративной регенерации и инфекционных осложнений в ране.
Формула изобретения
Способ прогнозирования репаративной регенерации при заживлении операционной раны вторичным натяжением путем забора исследуемого материала в исследуемой ране, отличающийся тем, что на третьи сутки после разведения краев операционной раны определяют синтез ДНК фибробластов и адвентициальных клеток и при их показателях соответственно менее 0,140,015 и адвентициальных клеток менее 0,130,011 прогнозируют замедление репаративной регенерации и осложненное течение раневого процесса.Описание изобретения к патенту
Изобретение относится к медицине, в частности к клинической хирургии и может быть использовано при лечении операционных ран, заживающих вторичным натяжением. По данным ряда авторов (Гостищев В.К. и Омельяновский В.В. Пути и возможности профилактики инфекционных осложнений в хирургии//Хирургия. - 1997. - №8. - с.11-15; Акимкин В.Г. Структура внутрибольничных инфекций в крупных госпиталях //Военно-медицинский журнал. - 1997. - №2. - с.42-46; Яковлев С.В. Схемы антибактериальной профилактики инфекционных осложнений в хирургии//Клиническая антимикробная химиотерапия. - 1999. - №1. - с.32-34; Mayhall С.G.Surgical infections including bums, in Wenzel R.P., ed. Prevention and control of nosocomial infections, 2nd ed, - Baltimore, MD: Williams and Wilkins. - 1993. - P.614-644) у 1,5-40% пациентов, оперированных по поводу различных хирургических заболеваний, развиваются гнойные осложнения операционных ран, приводящие к длительному стационарному и амбулаторному лечению, удлинению сроков временной нетрудоспособности и значительным моральным и экономическим потерям (Ерюхин И.А. Инфекция в хирургии. Старая проблема накануне нового тысячелетия (часть I)//Вестн.хир. - 1998. - №1. - с.85-91; Шевченко Ю.Л., Гришанин В.А., Матвеев С.А., Мазашвили К.В. Госпитальная инфекция и некоторые аспекты ее иммунопрофилактики//Вестн.хир. - 1996. - №5. - с.104-106).Основными критериями оценки течения раневого процесса являются многие клинические характеристики: самочувствие, температура тела пациента, динамика изменений морфологического анализа крови и др.; местные симптомы: гиперемия, отечность и инфильтрация тканей в области раны, количество и характер отделяемого, однако они в большой степени субъективны и нередко трактуются специалистами произвольно.Кроме этого, значительным недостатком при лечении операционных ран, заживляющих вторичным натяжением, является отсутствие надежных методов прогнозирования течения раневого процесса, что часто не позволяет своевременно корригировать проводимое лечение и осуществлять более раннее наложение вторичных швов на рану. Тем более, что при заживлении вторичным натяжением практически всегда в ране присутствуют в том или ином количестве микробные тела (Кузин М.И. и Костюченок Б.М. Раны и раневая инфекция. 2-е изд. - М.: Медицина, 1990. – 592 с.).Известен способ прогнозирования течения раневого процесса, разработанный Loeble E.C., Marvin J.A., Heck E.L. et al. The method of guantitative burn-Wound biopsy cultures and its routine use in the care of burned patients// Amer. J.Clin. Path. - 1974. - Vol.61. - P.20-24) и модифицированный И.И.Колкером и соавт. в 1980 году (Кузин М.И., Колкер И.И., Костюченок Б.М. - Опубл. в журнале Хирургия. - 1980. с.3-7).Сущность методики заключается в определении количества бактерий в 1 г биоптата ткани. Наличие в 1 г ткани менее 105 микробных тел не приводит к клинически выраженному инфекционному процессу, так как организм справляется с этим бактериальным загрязнением. При показателе, превышающем 105 микробных тел в 1 г ткани, приводит к развитию местной или генерализованной инфекции.Недостатками способа являются:1. Отсутствие оценки состояния макроорганизма (значительная кровопотеря, шок), сопутствующих заболеваний (сахарного диабета, истощения, облучения и др.), его местной и общей реактивности организма, как важного, а порой решающего компонента в развитие инфекционного процесса.2. Не принимается во внимание наличие в ране некротических и нежизнеспособных тканей.3. Не учитывается вирулентность, агрессивность микроорганизмов, их потенциальная возможность вызывать раневую инфекцию в меньшем количестве, чем 105 г ткани биоптата из раны.4. Не оцениваются изменения биологических свойств микрофлоры и рост антибиотикоустойчивости, а также влияние этих факторов на замедление репаративной регенерации в ране.В качестве прототипа авторами взят способ прогнозирования течения раневого процесса, разработанный М.П.Покровской и М.С.Макаровым в 1942 году (Покровская М.П., Макаров М.С. - Опубл. - М. Медгиз, 1942. - 42с.). В настоящее время данный метод относится к наиболее объективным в оценке динамики раневого процесса (Светухин А.М., Матасов В.М. и соавт. Этиопатогенетические принципы хирургического лечения гнойных ран. Хирургия. - 1999. - №1. - с.9-11).Сущность методики заключается в следующем: с поверхности раны предварительно удаляют некротический слой или лекарственные примеси, затем с одного участка делают 2-3 отпечатка. При неоднородной поверхности раны по характеру морфологических изменений (наличие участков некроза и грануляций) отпечатки производятся из разных ее участков. Клеточный состав подсчитывается при помощи микроскопа и выражается в процентах. При оценке цитограммы различают пять ее типов: некротический тип, дегенеративно-воспалительный, воспалительный, воспалительно-регенераторный и регенераторный типы.Недостатки:1. Точное представление о характере раневого процесса возможно только при последовательном сопоставлении цитограмм, то есть необходимо многократное снятие отпечатков в процессе лечения.2. Отдельно взятая цитограмма может ввести в заблуждение - одна и та же картина клеточной реакции в различных фазах раневого процесса свидетельствует о разных тенденциях в репаративном гистогенезе.3. Объективная оценка цитограммы возможна только при сопоставлении с клиникой раневого процесса. Выше было указано на значительный субъективизм.Новизной предлагаемого способа является прогнозирование репаративной регенерации с помощью исследования синтеза ДНК фибробластов и адвентициальных клеток дермы и гиподермы в операционной ране, заживающей вторичным натяжением.Существенные отличия предлагаемого способа состоят в том, что оценивают репаративную регенерацию в операционной ране, заживающей вторичным натяжением. На третьи сутки после разведения краев операционной раны определяют синтез ДНК фибробластов и адвентициальных клеток и при их показателях соответственно менее (0,14±0,015)‰, и менее (0,13±0,011)‰ прогнозируют замедление репаративной регенерации и осложненные течения раневого процесса.Способ осуществляют следующим образом: на третьи сутки после удаления швов, разведения краев, ревизии, удаления некротизированных тканей и дренирования нагноившейся послеоперационной раны с помощью биопсийных щипцов берут участок раневой области массой 10 мг. Биоптат помещают в среду 199, содержащую 10 мк Ки/г 3Н тимидина, и инкубируют в течение 1 ч при 37С. Полученный материал фиксируют в 12%-ном растворе нейтрального формалина, дегидратируют в спиртах возрастающей крепости и заливают в парафиновые блоки, из которых на ротационном микротоме изготавливают срезы толщиной 6 мкм. На гистосрезы после их депарафинирования наносят фотоэмульсию типа “Р” (НИИ химфото) и экспонируют в условиях холодильной камеры (4C) в течение 44 ч. В дальнейшем осуществляют проявление гистопрепаратов в охлажденном амидоловом проявителе и окрашивают гистоавтографы гематоксилином и эозином. Определение уровня ДНК синтетической способности фибробластов и адвентициальных клеток (в промилях) проводят по их количеству, меченных 3Н тимидином, в микроскопе МБИ - 15 (ув.об. 90, ок. 10, анализ не менее 10000 клеток) [в расчет принимаются клетки, содержащие в проекции своих ядер не менее 5 зерен восстановленного серебра].Эксцизивный материал из послеоперационных ран, заживающих вторичным натяжением, исследовали у 17 больных обоих полов в возрасте 21-64 лет, перенесших операции по поводу острого аппендицита, холецистита, кишечной непроходимости, прободной язвы желудка, а также плановых операций при наличии у пациентов дополнительных факторов риска развития воспалительных осложнений послеоперационных ран (сахарный диабет, ожирение и др.). Больных разделили на 2 группы. В первой группе (7 пациентов) наблюдалось клинически нормальное течение заживления раны с уменьшением ее площади на 4-5% за сутки. Измерение скорости заживления раны проводили курвиметром и рассчитывали по формуле, предложенной В.Ф.Хотиняном в 1983 году (Кузин М.И. Костюченок Б.М. Раны и раневая инфекция. - М.: Медицина, 1990). Во второй группе (8 пациентов) имело место замедление темпа репаративной регенерации при наличии признаков обострения раневой инфекции: грануляции в ране были бледными, тусклыми, стекловидными, со значительным уменьшением их кровоточивости, с одновременным увеличением количества гнойного отделяемого. Постоянным клиническим признаком являлась стойкая субфебрильная температура. С помощью вышеизложенной методики определен синтез ДНК фибробластов и адвентициальных клеток. Статистический анализ показателей в сравниваемых группах провели с помощью методики Вилкоксона-Манна-Уитни (Гублер Е.В., Генкин А.А. Применение непараметрических критериев статистики в медико-биологических исследованиях. - Л.: Медицина, 1973). Выявили статистически существенные различия между двумя группами показателей Ри<0,05, что подтверждает вероятность использования данных показателей в качестве прогноза течения раневого процесса.Одновременно в обеих группах пациентов проводили цитологические исследования отпечатков из ран. Статистическая оценка прогноза течения раневого процесса показывает преимущество нового способа на 39% по сравнению с методом отпечатков.Таким образом, при уровне синтеза ДНК фибробластов менее 0,14‰ и синтеза ДНК адвентициальных клеток менее 0,13‰ делают заключение о низкой репаративной регенерации в ране и высокой вероятности дальнейшего осложненного инфекцией течения раневого процесса.Пример № 1. Больной С-ов, 27 лет, находился на лечении по поводу язвенной болезни 12-п/кишки, осложненной перфорацией и фибринозным перитонитом. Выполнена операция верхнесрединная лапаротомия, ушивание перфоративной язвы 12 п/кишки и дренирование брюшной полости. На третьи сутки после операции обнаружено нагноение срединной раны брюшной стенки, сняты швы, проведена ревизия и иссечение некротизированных тканей, дренирование. В последующие дни проводились стандартная терапия антибиотиками, 4 перевязки раны. Через 3 дня после снятия швов и ревизии раны из ее края взят биоптат и исследовался по описанной методике. Уровень ДНК фибробластов составил 0,12‰, уровень синтеза ДНК адвентициальных клеток - 0,10‰, что позволило высказать предположение о низкой репаративной регенерации в ране и дальнейшем осложненном инфекцией течении раневого процесса. На 7-е сутки после операции в области раны усилилась болезненность, наросла припухлость и гиперемия краев раны, увеличилось гнойное отделяемое. Общий анализ крови: Нв - 128 г/л, лейко - 9,0, Э-2%, П - 9%, С - 55%, А - 28%, М - 6%, СОЭ 16 мм/ч. Предположение подтвердилось.Пример № 2. Больная Ф-ва, 38 лет, находилась на лечении с хроническим калькулезным холециститом. Операция - лапаротомия, холецистэктомия. На четвертые сутки после операции диагностировано нагноение раны, сняты швы с большей части операционной раны, иссечены некротизированные ткани, дренирование раны. В последующем проводилось стандартное лечение с антибактериальными препаратами, перевязки и биопсия из края раны на 3-и сутки после удаления швов. Провели определение показателей синтеза ДНК фибробластов и адвентициальных клеток. В данном случае уровень синтеза ДНК фибробластов в 0,17‰ и адвентициальных клеток в 0,15‰ позволил высказать прогноз о благоприятном течении послеоперационного периода, что впоследствии подтвердилось клинико-лабораторными методами. На 9-е сутки после операции температура тела 36,7С, боли в ране уменьшились. Местные проявления воспаления регрессировали. Общий анализ крови: Нв - 120 г/л, лейкоц. - 7,6 г/л, Э - 2%, П - 6%, С - 61%, лимф. - 20%, мон. - 11%, СОЭ - 17 мм/ч. Предположение подтвердилось.Применение способа позволяет повысить точность прогнозирования репаративной регенерации и инфекционных осложнений в ране на 39% по сравнению с известным способом.Класс G01N33/48 биологических материалов, например крови, мочи; приборы для подсчета и измерения клеток крови (гемоцитометры)