способ выявления повреждения мембран эритроцитов

Формула изобретения

Способ выявления повреждения мембран эритроцитов путем воздействия на исследуемую пробу крови физического фактора, отличающийся тем, что анализируемую пробу крови подвергают воздействию калиброванного импульсного электрического поля с пробойной напряженностью 1800 В/см и длительностью импульса 5-6 мс и при увеличении скорости гемолиза по сравнению с нормой выявляют повреждение мембран эритроцитов.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, в частности к гематологии, к лабораторным способам выявления степени скрытого повреждения эритроцитов и изучения физико-химического состояния консервированных эритроцитов.

Наиболее известным способом изучения состояния мембраны эритроцитов является способ осмотической резистентности эритроцитов в средах с нарастающей гипотоничностью (Физиология человека /Под ред. Р.Шмидта и Г.Тевса, том 2, стр.425). Измеряют степень гемолиза (фотометрическим методом) в зависимости от концентрации раствора хлористого натрия. У здорового человека 50% эритроцитов гемолизируются при концентрации хлористого натрия 4,3 г/л. При нарушениях структуры мембраны, обусловленных той или иной патологией организма, происходит отклонение от этого значения.

Недостатками способа являются его длительность и сложность, т.к. необходимо брать 10-20 проб и следить за их гемолизом, который может длиться до нескольких суток.

Другой известный способ определения степени повреждения эритроцитов в качестве повреждающего агента вместо хлористого натрия используют мочевину (А.С. №1220636 МПК G 01 N 33/49, 1986).

Указанный способ имеет те же самые недостатки, что и вышеуказанный.

Известен способ определения степени повреждения мембран эритроцитов, включающий центрифугирование исследуемой суспензии эритроцитов и определение концентрации гемоглобина в надосадочной жидкости (А.С. №1663549 МПК G 01 N 33/49, 1991).

В контрольном (нативном) образце суспензии эритроцитов определяют распределение клеток по объему. Осадок, полученный после центрифугирования, ресуспендируют в плазме и определяют в нем количество клеток, распределение которых идентично распределению клеток в контрольном образце. Степень повреждения в процентном выражении определяют как разность по отношению к образцу полностью лизированных клеток при - 196°С (повреждающий агент). Недостатками способа является его длительность и визуальный подсчет клеток.

Задачей изобретения является сокращение длительности способа и исключение визуального подсчета клеток.

Поставленная задача решается способом, заключающимся в том, что анализируемую пробу крови подвергают воздействию калиброванного пробойного импульсного электрического тока напряженностью 1800 В/см² и длительностью импульса 5-6 мс и при увеличении скорости гемолиза по сравнению с нормой выявляют повреждение мембран эритроцитов.

В качестве повреждающего агента используют калиброванный электрический импульс, вызывающий электропорацию эритроцитов, с напряженностью 1800 В/см² и длительностью импульса 5-6 мс. Пробойному калиброванному электрическому воздействию подвергают как контрольную суспензию (нативную), так и исследуемую (повергшуюся действию физико-химических факторов или измененную в результате заболевания) суспензию.

При проведении исследования в стандартных условиях, в частности при комнатной температуре (20-25°С), нет необходимости каждый раз определять электропорацию контрольной суспензии, можно сразу определять электропорацию исследуемой суспензии.

Оценку степени повреждения эритроцитов проводят на основе вычисления скорости уменьшения числа эритроцитов

Пример 1.

В качестве иллюстрации нами выбрана модель воздействия диэтилового эфира (концентрация эфира 0,1 мл эфира на 1 мл суспензии).

На фиг.1 представлены кинетические кривые уменьшения численности эритроцитов в результате гемолиза после воздействия калиброванного импульсного электрического поля.

Как следует из анализа этих кривых, в случае суспензии крови, контактировавшей с эфиром гемолиз происходит существенно быстрее.

На фиг.2 представлена диаграмма относительной скорости уменьшения численности эритроцитов в результате калиброванного электрического воздействия. В каждой серии из четырех опытов столбец слева - скорость гемолиза в контрольной суспензии (без добавления эфира). Данная скорость принята за единицу. Справа - скорость гемолиза в суспензии с эфиром относительно этой скорости.

Пример 2.

Больной В.В., 40 лет, наследственный сфероцитоз. Пробу крови 1 мл подвергают калиброванному воздействию. Анализируются кривые для суспензии крови больного и здорового человека (норма). В норме в результате гемолиза погибло 11% эритроцитов, в пробе крови больного 42%, что позволило выявить повреждение мембран эритроцитов у данного больного.