4,4'-сульфонилбис-(n,n'-диметиламмониометиленанилин)-хлорид, 6-метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидин-5-сульфонат, фармацевтическая композиция на его основе

Формула изобретения

1. 4,4'-Сульфонилбис-(N,N'-диметиламмониометиленанилин)-хлорид, 6-метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидин-5-сульфонат формулы (I)

2. Сульфонат формулы (I) по п.1, проявляющий антибактериальную, антимикобактериальную и иммунотропную активности.

3. Фармацевтическая композиция, обладающая антибактериальной, антимикобактериальной и иммунотропной активностью, включающая активное вещество и целевые добавки, отличающаяся тем, что в качестве активного вещества она содержит 4,4'-сульфонилбис-(N,N'-диметиламмониометиленанилин)-хлорид, 6-метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидин-5-сульфонат формулы (I) по п.1 в эффективном количестве.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области биологически активных веществ, в частности к 4,4'-сульфонилбис-(N,N'-диметиламмониометиленанилин)-хлорид, 6-метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидин-5-сульфонату, которые обладают антибактериальной, антимикобактериальной и иммунотропной активностью и могут быть использованы в качестве иммуномодулятора и антимикобактериальных средств, а также к фармацевтической композиции на их основе.

Известен пара-пара-(2,4-диоксо-6-метилпиримидинил-5-сульфонамино)-дифенилсульфон формулы (А) -диуцифон

обладающий противолепрозной и иммуномодулирующей активностью (М.Д.Машковский, Лекарственные средства, Москва, OOO "Новая волна", издатель С.Б.Дивов, 2002 г., 14-е изд., т.2, стр.321). Токсичность диуцифона составляет 2600 мг/кг (перорально). Однако указанное вещество плохо или совсем не растворяется в воде, что снижает его биологическую доступность и, следовательно, биологическую активность. В связи с этим лечебные дозы лекарственных препаратов на основе диуцифона должны быть достаточно высокими. Плохая растворимость и низкая биологическая доступность диуцифона не позволяет ему протекать через клеточную мембрану, где, как правило, расположены возбудители микобактериозов, и участвовать в их жизнедеятельности.

В основу изобретения положена задача - изыскание новых близких по структуре соединений, обладающих более высокой активностью, более низкой токсичностью и не имеющих вышеперечисленных недостатков.

Задача решается предложенным 4,4'-сульфонилбис-(N,N'-диметил-аммониометиленанилин)-хлорид, 6-метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидин-5-сульфонатом формулы (I)

4,4'-Сульфонилбис-(N,N'-диметиламмониометиленанилин)-хлорид, 6-метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидин-5-сульфонат формулы (I) представляет собой аморфный порошок от бледно-желтого до зеленовато-желтого цвета с температурой плавления Т_пл =200-205°С (с разложением). Растворим в воде, диметилсульфоксиде, диметилформамиде, органических растворителях.

Предложенное соединение получают путем взаимодействия N-диметиламинометилен-N'-диметиламмониометилен-4,4'-сульфонилбис-анилин, 6-метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидин-5-сульфоната с хлористым водородом в растворителе.

Соединения формулы (I) обладают антибактериальной, антимикобактериальной и иммунотропной активностью.

Задача также решается предложенной фармацевтической композицией, включающей активное вещество и целевые добавки, отличие которой состоит в том, что в качестве активного вещества она содержит 4,4'-сульфонилбис-(N,N'-диметиламмониометиленанилин)-хлорид, 6-метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидин-5-сульфонат формулы (1) в эффективном количестве.

Дозировка зависит от возраста, состояния и веса пациента, а также от вида введения. Согласно изобретению, предлагаемая фармацевтическая композиция содержит активного вещества в количестве от 100 до 400 мг. Токсичность предложенных соединений была определена путем введения в желудок (перорально) мышам. Исследуемое соединение вводили в виде раствора белым мышам массой 19-21 грамм (питомник РАМН, отделение "Крюково"). Показателем токсичности служили гибель животных и выраженность клинической картины отравления. По результатам опытов расчетным путем определялась величина среднесмертельной дозы (LD₅₀ ) при введении предложенного соединения группам из 6-12 животных. Расчет проводился статистическими методами, рекомендованными Государственной Фармакопеей СССР XI издания. На основании LD ₅₀ определялась принадлежность исследуемого вещества к определенному классу токсичности по Hodge & Sterner.

В результате проведенных исследований установлено, что острая токсичность LD₅₀ перорально составляет 3700 мг/кг, т.е. по Hodge & Sterner относится к классу "Малотоксичные соединения". Таким образом, токсичность предложенного соединения формулы (I) значительно ниже токсичности ранее известного соединения формулы (А) - диуцифона.

Определение иммунотропной активности предложенного соединения

За основу для определения иммунотропной активности предложенного соединения была взята методика, основанная на отношении числа зон гемолиза эритроцитов вокруг антителообразующих клеток в опыте к числу зон гемолиза в контроле.

В эксперименте было использовано 130 мышей линии Fl (CBA×C57 BL). Животные, используемые в эксперименте, содержались в помещении вивария в соответствии с действующими правилами и получали корма в соответствии с утвержденными рационами питания. Все животные поступали из питомника РАМН, отделение "Крюково".

Определение иммунотропной активности предложенного соединения было проведено в четырех опытах.

Для уточнения пика иммунотропной активности предложенного соединения и подсчета антителообразующих клеток в опытной и контрольной группах эксперименты проводили не только на четвертые и пятые сутки после иммунизации, но и на третьи сутки.

Результаты экспериментов представлены в таблицах 1, 2, 3, 4.

Таблица 1. (третьи сутки после иммунизации)
Разведение комплемента 1:15	Число антителообразующих клеток
	контроль					опыт
	10,7			n=13		20,2					n=13
	Индекс стимуляции иммунного ответа = 1,9
Таблица 2. (четвертые сутки после иммунизации)
Разведение комплемента 1:15	Число антителообразующих клеток
	контроль						опыт
	10,1		n=10				48,7			n=9
	Индекс стимуляции иммунного ответа = 4,1
Таблица 3. (четвертые сутки после иммунизации)
Разведение комплемента 1:15		Число антителообразующих клеток
		контроль			опыт
		7		n=12	37,4			n=11
		Индекс стимуляции иммунного ответа = 5,3
Таблица 4. (пятые сутки после иммунизации)
Разведение комплемента 1:15		Число антителообразующих клеток
		контроль			опыт
		71		n=12	145,5				n=16
		Индекс стимуляции иммунного ответа = 2,1

Полученные в проведенных опытах результаты наглядно демонстрируют зависимость развития иммунного ответа на введение предложенного соединения формулы (I) в разные сроки после иммунизации. На третьи сутки от начала введения предложенного соединения иммунный ответ в опытной группе отличался от контрольной незначительно (Индекс стимуляции (ИС) = 1,9). На четвертые сутки индекс стимуляции в среднем увеличился в 2,8 раза, что свидетельствует о высокой степени иммунотропной активности предложенного соединения. На пятые сутки индекс стимуляции оказался значительно ниже, чем на четвертые, что, вероятно, объясняется снижением пика иммунотропной активности предложенного соединения к этому времени.

Проведенные исследования показали, что индекс стимуляции иммунного ответа предложенного соединения составил 4,7, что свидетельствует о достаточно высокой иммунотропной активности предложенного соединения.

Определение противолепрозной активности предложенного соединения

Противолепрозная активность предложенного соединения формулы (I) изучалась в сравнении с диуцифоном на мышах-гибридах СВА×C₅₇Bl, зараженных лабораторным штаммом К-1 микобактерий лепры.

Под наблюдением было три группы мышей по 20 мышей в каждой группе, все они содержались в одинаковых условиях. Контрольная группа в течение 6 месяцев один раз в неделю через зонд получала 0,5 мл крахмальной суспензии. Основная группа получала в течение всего срока препарат диуцифон и предложенное соединение в дозе 50 мкг в 0,5 мл крахмальной суспензии 5 раз в неделю. По истечении 6 месяцев животные были забиты цервикальным смещением позвоночника.

При бактериоскопическом исследовании места заражения лапку растирали в двух мл 0,1% раствора альбумина, из 0,01 мл суспензии делали мазок, окрашивали по Циль-Нильсену, подсчитывали количество микобактерий лепры в 60-ти полях зрения и определяли количество микобакгерий на 1 мышь в каждой группе.

Результаты исследования представлены в таблице 5.

Таблица 5. Влияние соединения (А) - диуцифона и предложенного соединения формулы (I) на количество микобактерий в лапке зараженных животных
	Количество мышей в группе	Количество микобактерий в лапке ×106	Процент инфицированных животных	Р относительно контроля
Контроль	20	1,37±0,103	100
Диуцифон	20	0,435±0,110	80	<0,001
предложенное соединение	20	0,08±0,003	50	<0,001

Согласно приведенным данным соединение формулы (I) обладает высокой бактериостатической активностью относительно микобактерий лепры, значительно превосходящей антимикобактериальную активность известного соединения формулы (А).

Способ получения предложенных соединений формулы (I) иллюстрируется следующим примером.

Пример: Получение 4,4'-сульфонилбис-(N,N'-диметиламмониометиленанилин)-хлорид, 6-метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидин-5-сульфоната

К перемешиваемой суспензии 5,65 г (0,01 моля) чистого N-диметиламинометилен-N'-диметиламмониометилен-4,4'-сульфонилбис-анилин, 6-метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидин-5-сульфоната (сульпифона) в абсолютном спирте при охлаждении прикапывают 3,65 г (0,1 моля) раствора газообразного хлористого водорода в абсолютном эфире. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре оптимальное время. Образующийся осадок 4,4'-сульфонилбис-(N,N'-диметиламмониометиленанилин)-хлорид, 6-метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидин-5-сульфоната отфильтровывают, промывают абсолютными спиртом и эфиром. Далее сушат в эксикаторе над хлористым кальцием.

Выход целевого продукта - 4,81 г (80%).

Температура плавления (с разложением) = 200-205°С.

С₂₃Н₂₉ClN₆S₂O ₇

Найдено, %: С 45,66; Н 4,66; Cl 5,76; N 13,92; S 10,57.

Вычислено, %: С 45,66; Н 4,86; Cl 5,90; N 13,98; S 10,67.

ПМР-спектр (ДМСО, , м.д.): 3,20 (12Н, с, ⁺NH(CH₃ )₂; 8,40 (2Н, с, СН=N); 7,85 (4Н, g, Ph); 7,52 (4Н, g, Ph); 2,38 (3Н, с, =С-СН₃); 10,88 (1Н, с, -С(=O)-NH-C(=O)-); 10,62 (1Н, с, -С(=O)-NH-С(СН ₃)=).

ИК-спектр ( , см^-1): 3440 (NH), 3068, 2930 (СН), 2360, 1920 ((CH₃)₂-NH⁺), 1710, 1684 (С=O, С=С), 1616, 1592 (C=N, C=C), 1500, 1480 (С=С), 1340, 1150 (-SO ₂-), 1230, 1210, 1032 (SO₃ ^-).

Примеры рецептур фармацевтических композиций

Капсулы

Активное вещество - соединение формулы (I) в количестве 100 мг, 200 мг. Получают фасованием ручным способом в капсулы №1 и №0 с помощью капсульниц с запорным устройством. Состав: соединение формулы (I) - 100 мг или 200 мг без наполнителя и консервантов. Желатиновые капсулы состоят: хинолин эпу - 0,05%, титана диоксид - 1%, желатин - до 100%. Входящие в состав капсул вещества разрешены к медицинскому применению в России.

Таблетки

Активной вещество - соединение формулы (I) в количестве 100 мг, 200 мг - массовая часть 40%.

Целевые добавки (лактоза, аэросил, стеарат кальция) - массовая часть 60%.

Смешивают основные и вспомогательные вещества в соотношении, указанном в таблице 6 (расчет на массу таблетки).

Таблица 6
Масса таблетки (Мт), г		Массовый состав, %
0,250	0,500
Соединение формулы (I) - 0,1	Соединение формулы (I) - 0,2	40
Лактоза - 0,144	Лактоза - 0,288	57,6
Аэросил - 0,004	Аэросил - 0,008	1,6
Стеарат Са - 0,002	Стеарат Са - 0,004	0,8

Прессование таблеток осуществляют на прессе РТМ-12. На таблетки наносят покрытие на основе ацетилфталилцеллюлозы (АФЦ) на аппарате "Strea-1". Состав покрытия (массовой части): ацетон - 56,4; этиловый спирт 96% - 37,6; касторовое масло - 1,0; АФЦ - 5,0; тропеалин добавляют до светло-коричневой окраски раствора. Расход покрытия: количество покрытия (мл) = 50% от массы таблетки (г).

Инъекции

Соединение формулы (I) для инъекции представляет собой рассыпку порошка, включающего активное вещество, его фармацевтические приемлемые соли в дозировках 100-400 мг.

Таблица 7
Составляющие		Количество, мл
		1	2	3
соединение формулы (I)		100 мг	200 мг	400 мг
Растворитель	бидистиллированная вода	5	-	-
	новакаин 0,5%	-	5	-
	новакаин 0,25%	-	-	5