способ размножения растений in vitro

Формула изобретения

Способ размножения растений in vitro, включающий получение боковых побегов на среде размножения, их разделение и высадку на укоренение, последующую акклиматизацию укорененных растений в нестерильных условиях, отличающийся тем, что разделенные боковые побеги для начального укоренения высаживают в сосуды без дна, заполненные агаризованной средой, а затем помещают для дальнейшего развития корневой системы в емкость, заполненную перлитом, пропитанным жидкой стерильной средой.

Описание изобретения к патенту

Предлагаемое изобретение относится к области сельского хозяйства и может быть использовано для размножения растений in vitro.

Известен способ размножения растений in vitro, предусматривающий получение боковых побегов на среде, содержащей цитокинины, разделения побегов и их укоренение на среде, содержащей ауксины, пересадку укорененных растений в нестерильные условия с высокой влажностью воздуха для их акклиматизации (Деменко В.И. Микроклональное размножение плодовых и ягодных культур. М.: Издательство МСХА 1997 г.). Однако при таком способе размножения отмечают большой процент гибели растений, что объясняется плохой работой корневой системы растений, полученных in vitro. По существующей методике укоренения побеги три недели находятся на питательной среде, содержащей 1-2 мг/л ИМК. Такая концентрация благоприятна для заложения корней, но ингибирует их развитие. Пересадка неукорененных побегов после 7-10 дней нахождения на среде СИМК на среду без ИМК не всегда дает положительные результаты, увеличивает затраты труда и расход питательной среды, особенно агара. Агар придает определенную твердость среде, что не дает побегам тонуть. Кроме того, он абсорбирует вещества, выделяемые из побегов, но на среде, содержащей 5-8 г/л агара, плохо развиваются корни второго порядка и никогда не развиваются корневые волоски. При уменьшенном содержании агара в среде развиваются "стекловидные" растения, которые при пересадке в нестерильные условия погибают.

Наиболее близким техническим решением к заявленному изобретению относится способ выращивания (АС №1683582), который предусматривает введение в агар перлита. Однако такая среда способствует хорошему укоренению земляники, малины; древесные укореняются плохо. Очень важно соблюсти соотношение и величину слоя перлита. При таком способе перлит, пропитанный агаром, после автоклавирования сосредоточен в верхней части среды; нижняя часть представлена агаром с вкраплениями частиц перлита. В тоже время агар благоприятно влияет на начальный этап укоренения. Заявляемое решение направлено на решение задачи увеличить укореняемость древесных растений in vitro и провести акклиматизацию корневой системы до пересадки in vivo, т.е. создать условия, при которых индукция и инициализация корнеобразования происходит на агаризованной среде, а развитие корневой системы в условиях, близких к нестерильным, без дополнительных затрат на пересадку.

Пример выполнения способа.

1. Сосуды без дна (капиллярные трубки) длиной 1-1,5 см и шириной 1-1,5 см плотно размещали в сосудах с дном объемом 250-500 мл и заливали расплавленной питательной средой для укоренения (1/2 МС + 1,5 мг/л ИМК + 20 г/л сахароза + 6 г/л агар). Большие сосуды герметично закрывали и автоклавировали. После автоклавирования среда в сосудах без дна застывала.

2. В другие большие сосуды насыпали перлит слоем 2-2,5 см и пропитывали жидкой средой (1/2 МС без регуляторов роста и сахарозы), герметично закрывали и автоклавировали.

3. Подвои яблони 62-396 размножали на питательной среде Мурасига и Скуга с добавлением 2 мг/л 6 БАП. После шестого пассажа проводили укоренение побегов.

4. В ламинар-боксе конгломерат побегов разделяли, побеги сажали в сосуды без дна и переносили в сосуд с перлитом. После укоренения побегов в среде с агаром и развитием корней в перлите растения пересаживали в нестерильные условия.

Предлагаемое решение позволяет иметь две несмешивающиеся среды в одном сосуде, что позволяет создать необходимые условия для отдельных этапов корнеобразования и повысить приживаемость растений в нестерильных условиях. Кроме того, ускоряет процесс заполнения сосудов для укоренения в 10-20 раз по сравнению с использованием для этих целей пробирок.

Результаты опытов представлены в таблице.

Таблица
Влияние среды на укореняемость и приживаемость подвоя яблони 62-396
Среда	Укоренение, %	Приживаемость в нестерильных условиях, %
1/2 MC агар	75	62
1/2 MC агар + перлит	52	71
Предлагаемый способ	73	95

Таким образом, предлагаемое изобретение позволяет получать достаточное укоренение побегов и повысить на 33% приживаемость растений в нестерильных условиях.