способ взятия крови у лабораторных мышей

Формула изобретения

Способ взятия крови у лабораторных мышей для определения концентрации общего белка, включающий забор крови при помощи декапитации животных, пробы которой помещают в микропробирки, пригодные для центрифугирования, отличающийся тем, что кровь собирают от животных, предварительно помещенных в термостат на 2-5 мин при температуре 40-42°С.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к физиологии, а именно к взятию крови с последующим отделением сыворотки при изучении влияния белковых препаратов на показатели естественной резистентности.

Известен способ получения крови лабораторных животных с помощью декапитации, описанный в SU №1296117 А1 «Устройство для забора крови у мелких лабораторных животных», опубликованный 15.03.1987.

Недостатки данного способа заключаются в малых количествах собираемой крови, недостаточных для исследования физиологических показателях крови при влиянии белковых препаратов на организм животного.

Упрощение способа взятия крови у белых мышей и увеличение количественных и качественных показателей собираемой крови и сыворотки достигается тем, что кровь берут у белых мышей: контрольных и опытных (иммунизированных препаратом из костного мозга, белковой природы). Для этого отбирают здоровых животных, находящихся в одной весовой и возрастной категориях и в одном физиологическом состоянии. Формируют группы из контрольных и опытных животных. Животных помещают в одинаковые условия после иммунизации опытных и следят за их физиологическим состоянием до появления первого иммунного ответа на введенный антиген. Препарат для введения в заднюю подушечку мыши получают из костного мозга трубчатых костей диких и сельскохозяйственных животных путем осаждения белков из клеток костного мозга с помощью 10% раствора трихлоруксусной кислоты и последующего диализа белкового раствора.

Взятие крови у мышей обеих групп проводят декапитацией головы животного. Животных предварительно выдерживают в термостате в течение 2-5 минут при температуре 40-42°С (происходит повышение обмена веществ и разжижение крови мышей). Затем животное с помощью пинцета хватают за складку кожи на загривке, фиксируют и отсекают голову стерильными ножницами. Кровь собирают с помощью воронки в тонкие пробирки Уленгута до тех пор, пока происходят предсмертные судорожные конвульсии тела животных, и кровь порциями выбрасывается в воронку.

Кровь после взятия 25-30 мин выдерживают в термостате (35...37°С), затем сгусток ее обводят тонкой металлической палочкой (отделение сгустка от стенок сосуда) и ставят на 16-18 часов в холодильник. Сыворотку отсасывают пипеткой с помощью груши, переносят в стерильный сосуд, закрывают крышкой и хранят в холодильнике. Таким образом, можно получить до 1,5...2 мл крови и 0,5 мл сыворотки.

Пример 1.

Беспородных белых мышей, самцов в одной возрастной категории (4-6 месяцев) массой 18,8±0,3 г иммунизируют препаратом из костного мозга лисиц, содержащим 50,3 г/л общего белка в своем составе (таблица 1), в подушечку задней левой лапки в дозе 0,025 мл на мышь. Через 7-8 дней от животных опытных и контрольных групп собирают кровь для исследования сыворотки на общий белок и его фракции. Проводят декапитацию головы животных, не помещая их предварительно в термостат. Собирают кровь и отделяют сыворотку как описано выше. Таким образом, получают до 0,5±0,04 мл крови.

Таблица 1 Электрофорез костного мозга лисиц в геле агарозы по методике Чекишева В.М. (1977)
Проба	Общий белок (г/л)	Альбумины (г/л)	Глобулины (г/л)					1+ 2	% 1+ 2
			1	2		1	2
1	50,3	6,18	7,06	10,59	11,47	11,47	3,53	15,00	29,82
2	50,3	6,29	7,19	10,78	10,78	10,78	4,48	15,26	30,33
3	50,3	7,06	8,83	11,47	8,83	10,59	3,52	14,11	28,05
4	50,3	6,40	9,15	10,97	9,15	11,89	2,74	14,63	29,09
Средние данные	50,3	6,48±0,2	8,06±0,7	10,95±0,4	10,23±0,7	11,18±0,4	3,57±0,3	14,75±0,3	28,32±0,5

Пример 2.

Иммунизируют лабораторных мышей белковым препаратом из костного мозга лисиц по примеру 1, но перед забором крови методом декапитации животных помещают в термостат на 2-5 минут при температуре 40-42°С. Таким образом, получают 1,7±0,07 мл крови и 0,48±0,01 мл сыворотки. В таблицах 2 и 3 показаны данные исследования крови мышей, полученной заявленным способом, разделенных на две группы: с нормальной температурой тела (контроль) и нагреваемые в термостате, а в таблице 4 - разность средних показателей электрофореза, отобранной сыворотки крови мышей.

Таблица 2 Лейкограмма крови мышей до и после нагревания
Группы		Палочкоядерные нейтроф.	Сегментоядерные нейтроф.	Моноциты	Эозинофилы	Лимфоциты
Контроль	М±m	8,3±0,51	47,9±1,0	2,1±0,04	3,2±0,30	38,2±0,38
	%	100,0	100,0	100,0	100,0	100,0
Нагреваемые животные	М±m	8,3±0,11	48,1±0,16	2,1±0,17	3,3±0,18	38,2±0,20
	%	100,0	100,4	100,0	103,1	100,0

При увеличении температуры тела животных количество и видовой состав лейкоцитов изменились незначительно в сравнении с контрольной группой животных.

Таблица 3 Динамика изменения показателей иммунной защиты мышей, подвергаемых нагреванию
Показатели	Температура тела мышей, °С
	37,5	38,3
1	2	3

Продолжение таблицы 3
Лейкоциты	6,09±0,070	6,15±0,07
Общий белок	83,7±0,45	85,4±1,32
Фагоцитарная активность	25,8±1,57	29,6±1,11

По данным таблицы 3 видно, что показатели клеточной и гуморальной защиты животных с температурой тела 38,3°С изменились незначительно в сторону увеличения. Показатели ФА - на 14,7%, общего белка - на 2,03% в сравнении с контролем.

Таблица 4 Оценка разности средних показателей, двух выборок электрофореза сыворотки крови мышей (контроль-опыт) n=10
Показатели электрофореза г/л		Лабораторные мыши		Разница показателей	Р
		контроль	опыт
Общий белок		49,5±0,91	85,4±1,32	+25,90	<0,001
Альбумины		12,0±0,64	25,0±1,41	+12,93	<0,001
Глобулины	1	7,0±0,40	11,4±0,43	+4,42	<0,001
	2	7,3±0,28	11,7±0,85	+4,44	<0,001
		9,1±0,33	10,3±0,72	+1,21	>0,05
	1	10,3±0,26	20,3±0,73	+10,05	<0,001
	2	3,2±0,13	6,4±0,42	+3,28	<0,001
1+ 2		13,6±0,18	26,8±0,41	+13,2	<0,001
% 1+ 2		27,6±0,43	31,4±0,59	+4,4	<0,001

Отличительным преимуществом предлагаемого способа взятия крови у мышей является доступность предложенного способа, что позволяет повысить выход собираемой крови и сыворотки, не изменяя при этом ее качественные показатели, и изучить влияние иммуностимулирующих препаратов на организм животного. Так, например, у опытных животных, иммунизированных костномозговым препаратом, в 1,7 раз увеличилось содержание общего белка и в 1,9 раз ₁+ ₂ глобулинов в сыворотке крови по сравнению с контролем.