способ моделирования паразитарной инвазии

Формула изобретения

Способ моделирования паразитарной инвазии введением в организм хозяина жизнеспособных метацеркарий описторхов, отличающийся тем, что метацеркарии вводят в пузырный проток, на который дистально накладывают лигатуру.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в области экспериментальной паразитологии для изучения непосредственного влияния продуктов жизнедеятельности паразитов при их острой или хронической инвазии в организм.

В настоящее время способы моделирования паразитарной инвазии известны и широко используются при изучении воздействия паразитов на организм хозяина. Для этого обычно используют подопытных животных, в которых паразитов вводят перорально, скармливая их в составе пищи или питья. Это - естественный способ введения паразитов, он моделирует природный механизм заражения человека или животных. Однако известные способы имеют недостатки, так как не дают возможность создать контролируемые условия.

Например, известен способ моделирования описторхозной инвазии, который реализуется путем перорального заражения золотистых хомячков (организма хозяина) жизнеспособными метацеркариями описторхов [1]. Однако данная экспериментальная модель не позволяет оценить непосредственного влияния на организм хозяина продуктов жизнедеятельности описторхов, которое сочетается с прямым повреждающим действием данного паразита на ткани животного. Кроме того, этот способ позволяет доставить паразитов в область инвазии только если они живые. Попав в желудочно-кишечный тракт, описторхи сами забираются в желчный проток, чтобы начать там размножаться. Обычно каждому животному скармливают строго определенное количество описторхов (50 штук) и считают, что все они попадут в желчный проток и дадут одинаковый эффект у разных животных. Но гарантировать, что все они достигнут области инвазии, невозможно, так как часть из них может погибнуть в желудке, а часть будет вынесена мимо протока пищевыми массами. То есть трудно получить сравнимые условия, а это затрудняет обработку полученных результатов.

Приходится заражать много животных, набирать статистику, чтобы свести к минимуму влияние посторонних факторов. Это удорожает эксперименты и удлиняет сроки получения достоверного результата. Иногда для получения сравниваемых результатов необходимо вводить мертвых паразитов или отдельные фрагменты, в таких случаях известные методы непригодны, так как этот паразитарный материал невозможно доставить в нужное место - он, не задерживаясь, проходит мимо желчного протока и выходит с перевариваемыми массами.

Наиболее близким техническим решением данной проблемы является способ моделирования острого описторхоза путем введения паразитарного материала через жесткий зонд в желудочно-кишечный тракт животного [2]. Но этот способ не решает проблемы дифференцированной оценки прямого повреждающего действия паразита на ткани организма хозяина и воздействия продуктов его жизнедеятельности. Паразитарный материал доставляется в нужное место, но если живые описторхи закрепляются и остаются там, то мертвые паразиты или их фрагменты выгоняются из желчного протока выходящей желчью и не успевают оказать воздействия.

Целью настоящего изобретения является создание сравниваемых условий для проведения моделирования и повышения достоверности результата.

Указанные цели достигаются тем, что в известном способе моделирования паразитарной инвазии путем введения в организм хозяина паразитарного материала, последний вводят в область инвазии с последующим изолированием этой области лигированием.

Теоретическое обоснование способа. Данное обоснование сформулировано на примере описторхозной инвазии, но способ применим без дополнительной доработки и для других видов паразитарной инвазии.

Общая принципиальная методика экспериментального описторхоза моделирует паразитарную инвазию, которая является многокомпонентной и отражает прямое повреждающее действие паразита на ткани печени и косвенное опосредованное действие. Описторхозный антиген поступает в кровоток, усиливая сенсибилизацию и создавая общий аллергический фон. Повреждение базальной мембраны внутрипеченочных желчных протоков может способствовать поступлению продуктов метаболизма гельминтов из просвета желчных путей в их стенку и окружающие ткани. Это приводит к нарушению иммунологического гомеостаза и быстрому нарастанию числа сенсибилизированных лимфоцитов и лимфобластов, отличающихся высокой активностью кислой фосфатазы. По литературным данным классическая модель описторхозной инвазии приводит к развитию следующих морфологических изменений. Одним из первых проявлений структурных нарушений считается пролиферация эпителия выстилки желчных протоков. При гистологическом исследовании в просветах желчных протоков содержались пласты слущенного эпителия слизистой, скопления описторхов, их яиц, слепки желчных пигментов, слизь, эритроциты. Стенки желчных протоков резко утолщены за счет кольцевидного разрастания вокруг них грубых коллагеновых и аргирофильных волокон, а на границе с паренхимой печени соединительная ткань более рыхлая и содержала значительное количество лимфоцитов, эозинофилов и фибробластов. Ядра клеток отличаются увеличенными размерами, гиперхромностью с неравномерно распределенным хроматином.

Для выделения морфологической картины действия на ткань печени продуктов метаболизма описторхов, а также для локального применения различных лечебных мероприятий разработан способ изолированного экспериментального описторхоза, который заключается во введении жизнеспособных метацеркариев описторхов непосредственно в желчный пузырь с последующим его лигированием. В этом случае развитие описторхоза происходит изолированно от печени в желчном пузыре в привычной среде обитания паразита.

Конкретное выполнение. Предлагаемая Лигатура Зуевского как способ моделирования паразитарной инвазии выполняется следующим образом: жизнеспособные метацеркарии описторхов вводятся шприцом или через искусственно созданное соустье в пузырный проток, на который дистально накладывается лигатура для локализации жизнеобитания паразитов и препятствия распространения метацеркариев описторхов во внепеченочные желчные пути. В остром эксперименте шприц удаляется с последующим сохранением лигатуры на пузырном протоке. При хроническом опыте имеющееся соустье позволяет изучать этапы развития паразитов и возможности лечебной коррекции прижизненно. Таким образом создаются условия для изолированного существования описторха в привычной для него среде обитания с последующим изучением влияния продуктов его жизнедеятельности на организм животного-хозяина.

В результате проведенных исследований получены данные свидетельствуют о том, что через 15 суток после создания Лигатуры Зуевского как способа моделирования экспериментального изолированного описторхоза в брюшной полости золотистого хомячка определяется увеличенный желчный пузырь размерами 7 на 5 мм. Желчный пузырь содержал желтую желчь, в которой определялось от 3 до 5 паразитов малых размеров. Определяется полнокровная печень, слегка увеличенная, в целом структура которой была сохранена, поверхность ее была гладкая. При гистологическом анализе среза печени определялась умеренная лимфоцитарная, эозинофильная инфильтрация. В паренхиме печени определялось повышение количества лимфоцитов по сравнению с контролем до 15% и эозинофилов до 20,3% соответственно от общего количества лейкоцитов. Данные клеточные элементы определялись вокруг сосудов печеночных триад. Здесь же определялись плазматические и тучные клетки. Определялись нейтрофилы 1,6% от общего числа клеток. При анализе паренхимы печени отмечались явления умеренной белковой дистрофии. В общем количестве гепатоцитов увеличилось количество диплоидных гепатоцитов, достигая 7,9%, повышалась митотическая активность гепатоцитов до 1,25%. Помимо этого отмечалось увеличение митотического индекса эпителия желчных протоков до 4,32%. Данные явления свидетельствуют, на наш взгляд, о неблагоприятном повреждающем воздействии продуктов жизнедеятельности описторхов. Таким образом, в результате изолированного протекания описторхозной инвазии наблюдаются структурно-клеточные преобразования, которые в целом определяются нами как начальные этапы воспалительной реакции и, соответственно, функциональное развитие данного паразита.

Применение Лигатуры Зуевского как способа моделирования паразитарной инвазии позволяет более четко изучить характер опосредованного действия на организм хозяина продуктов метаболизма паразита, а также оценить эффективность локального применения различных лечебных мероприятий.

Источники информации

1. А.с. №1691867, G09B 23/28, опубл. 15.11.1991 (аналог).

2. Муканов В.В. «Патогенез, морфологические гистохимические изменения печени при остром описторхозе». Автореферат диссертации канд. мед. наук. Л., 1979 (прототип).