4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-c][1,2,4]триазин-7-он

Классы МПК:C07D487/04 орто-конденсированные системы
A61P31/12 противовирусные средства
Автор(ы):, , , , , , , , ,
Патентообладатель(и):ГОУ ВПО Уральский государственный технический университет-УПИ (RU),
Институт органического синтеза им. И.Я. Постовского УрО РАН (RU)
Приоритеты:
подача заявки:
2007-02-16
публикация патента:

Описывается 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-он формулы (1), обладающий противовирусным действием,

4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-c][1,2,4]триазин-7-он, патент № 2345080

который может найти применение в медицине и сельском хозяйстве. 1 табл.

Формула изобретения

4-(4'-Гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-он

4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-c][1,2,4]триазин-7-он, патент № 2345080

Описание изобретения к патенту

1. Область техники, к которой относится изобретение.

Изобретение относится к области биологически активных соединений и касается 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она, обладающего противовирусным действием, предназначенного для лечения и профилактики инфекционных заболеваний человека и животных вирусной природы. Изобретение может быть использовано в лечебных учреждениях, научно-исследовательских лабораториях, а также в животноводстве и птицеводстве.

2. Уровень техники.

Актуальность проблемы противовирусной терапии в условиях мутации вирусов, выявления новых возбудителей опасных и медленных вирусных инфекций, вызывает потребность в новых эффективных противовирусных средствах. В настоящее время наиболее перспективной группой противовирусных препаратов, эффективных в отношении вирусов герпеса, гепатитов и проч. являются ациклические нуклеозиды - АЦИКЛОВИР, ГАНЦИКЛОВИР, ФАМЦИКЛОВИР и проч. (Машковский М.Д. Лекарственные средства: в 2-х т. 14-е изд. М.: Новая волна. 2000. Т.1, 2.; Регистр лекарственных средств России. Энциклопедия лекарств. Под ред. Г.Л.Вышковского. М.: ООО РЛС-2004. 2004. 1503 с.), являющиеся структурными аналогами природных нуклеозидов пуринового ряда и ингибиторами ферментов синтеза нуклеиновых кислот.

4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-c][1,2,4]триазин-7-он, патент № 2345080 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-c][1,2,4]триазин-7-он, патент № 2345080 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-c][1,2,4]триазин-7-он, патент № 2345080

В то же время, имеются данные о противовирусном действии 6-нитро-1,2,4-триазоло[5,1-с]-1,2,4-триазин-7(4Н)-онов (Синтез и противовирусная активность 6-нитро-7-оксо-4,7-дигидроазоло [5,1-с][1,2,4]триазинов. В.Л.Русинов, Е.Н.Уломский, О.Н.Чупахин, М.М.Зубаиров, А.Б.Капустин, Н.И.Митин и др. / Химико-фармацевтический журнал. №9, 1990, с.41-44), являющихся структурными аналогами пуринов.

4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-c][1,2,4]триазин-7-он, патент № 2345080

Данные о противовирусной активности ациклических нуклеозидов на основе азоло[5,1-с]-1,2,4-триазинов отсутствуют.

3. Сущность изобретения.

Сущность изобретения составляет 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-он формулы (1),

4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-c][1,2,4]триазин-7-он, патент № 2345080

4. Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения.

4.1. Синтез 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-c][1,2,4]триазин-7-она (1)

4-(4'-Гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-он (1) синтезируют в соответствии со следующей схемой (схема 1).

4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-c][1,2,4]триазин-7-он, патент № 2345080

Исходным соединением для синтеза 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (1) является 6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-он (3). Действием карбоната натрия на соединение (3) получают натриевую соль 6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (3), которую затем алкилируют 4-бромбутилацетатом в диметилформамиде (ДМФА) с образованием 4-(4'-ацетоксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (2). Обработка соединения (2) раствором метилата натрия в метаноле приводит к гидролизу ацетоксильной группы с образованием заявляемого соединения (1).

4.2. Биологическое действие 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло|5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (1)

Для исследования противовирусной активности 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (1) использовался вирус простого герпеса 1-го типа (ВПГ-1) штамм ЕС, полученный из коллекции вирусов НИИ вирусологии им. Ивановского и культура клеток почки зеленой мартышки - Vero, полученная из Банка клеточных культур НИИ гриппа РАМН.

В качестве контрольного препарата использовали ацикловир в концентрации 50 мкг/мл, который полностью ингибировал развитие вирусного цитопатического действия (ЦПД) во всех разведениях на протяжении всего эксперимента.

Пример 1. Синтез 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (1).

4-(4'-Ацетоксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-c][1,2,4]триазин-7-она (2). 6-Фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-он (3) 2,13 г (0,01 моль) обрабатывают раствором 1,1 (0,01 моль) г Na 2СО3 в 7 мл воды. Образовавшуюся суспензию фильтруют, осадок соли (4) сушат. Сухую соль (4) растворяют в 10 мл ДМФА, добавляют 1,95 г (0,01 моль) 4-бромбутилацетата и выдерживают 3 ч при температуре 100°С. Реакционную массу охлаждают до комнатной температуры, добавляют 250 мл воды, выпавший осадок отфильтровывают, кристаллизуют из изопропилового спирта и сушат на воздухе. Выход 2,1 г (64%).

4-(4'-Ацетоксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-он (2) имеет следующие характеристики: ТПЛ 74°С; Rf=0,65 (этилацетат 100%), 1Н ЯМР спектр в ДМСО-d6 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-c][1,2,4]триазин-7-он, патент № 2345080 , м.д.: 1,69-1,80 (2Н, м, CH2), 1,96-2,10 (2Н, м, СН2), 1,97 (3Н, с, СОСН 3), 4,06 (2Н, т, ОСН2), 4,46 (2Н, т, NCH2), 7,45-7,49 (3Н, м, C 6H5), 8,00-8,10 (2Н, м, С 6H5), 8,3 (1Н, с, 2-Н). Найдено: С - 58,68, Н - 5,12, N - 21,36%. Брутто-формула - С 16Н17N5O 3. Вычислено: С - 58,71, Н - 5,23, N - 21,39%.

4-(4'-Гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-c] [1,2,4]триазин-7-она (1). К раствору 0,14 г (0,006 моль) металлического натрия в 15 мл абсолютного метанола добавляют 2,1 г (0,006 моль) 4-(4'-ацетоксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (2). Реакционную массу кипятят 0,5 ч, охлаждают до комнатной температуры, добавляют ледяной уксусной кислоты до нейтральной реакции и упаривают в вакууме при 100°С. Остаток хроматографируют на силикагеле марки Kieselgel 60 с использованием этилацетата (100%) в качестве элюента и выделяют 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с] [1,2,4] триазин-7-он (1). Выход 1,27 г (70%).

4-(4'-Гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-он (1) имеет следующие характеристики: ТПЛ 84°C; Rf=0,25 (этилацетат 100%), 1Н ЯМР спектр в ДМСО-d6 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-c][1,2,4]триазин-7-он, патент № 2345080 , м.д.: 1,50-1,61 (2Н, м, СН2), 1,96-2,07 (2Н, м, CH2), 3,46 (2Н, к, ОСН 2), 4,19 (1Н, т, ОН), 4,44 (2Н, т, NCH2 ), 7,44-7,47 (3Н, м, С6Н 5), 8,00-8,10 (2Н, м, С6H 5), 8,25 (1Н, с, 2-Н). Найдено: С - 58,94, Н - 5,33, N - 24,57%. Брутто-формула - С14Н 15N5O2. Вычислено: С - 58,94, Н - 5,30, N - 24,55.

Заявляемое соединение (1) представляет собой бесцветное кристаллическое вещество, растворимое в ацетоне, хлороформе, этилацетате, диметилформамиде, диметилсульфоксиде, малорастворимое в воде, метаноле, этаноле, нерастворимое в бензоле и большинстве апротонных растворителей.

Пример 2. Определение токсичности 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (1).

Определение токсичности 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (1) проводили на культуре клеток MDCK в культуре, которая определялась по состоянию клеточного монослоя в инвертированном микроскопе после 3-суточной инкубации с препаратом. В результате была определена МТД (минимальная токсическая дозы) 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (1). Для исследования противовирусной активности 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (1) использовали половинную концентрацию от МТД.

Пример 3. Определение противовирусной активности 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (1).

1. Клетки Vero и 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-он (1) культивировали в 96-луночных планшетах для клеточных культур при 37°С в атмосфере 5% CO2 до состояния монослоя. Вещество в удвоенной концентрации в объеме 100 мкл/лунка было добавлено к клеткам, через 20 минут был внесен ВПГ-1 в разведения 10-3, 10-4, 10 -5, 10-6 в том же объеме. Клетки инкубировали с вирусом 72 часа, после чего учитывали развитие вирусного ЦПД.

2. По истечении 120 часов количество живых клеток было подсчитано при помощи микротетразолиевого теста (МТТ), характеризующего митохондриальную активность клеток. С этой целью клетки дважды отмывали фосфатно-солевым буфером и в лунки добавляли по 100 мкл раствора (0,2 мг/мл) 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифинилтетразолия бромида в 0,15М NaCl. Клетки инкубировали при 37°С в атмосфере 5% СО2 в течение 2 часов до появления характерного фиолетового осадка и затем трижды отмывали фосфатно-солевым буфером. Осадок растворяли в ДМСО (10 мкл/лунка), после чего измеряли оптическую плотность с помощью спектрофотометра при длине волны 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-c][1,2,4]триазин-7-он, патент № 2345080 =535 нм.

Наблюдение развития цитопатического действия ВПГ-1 показало, что через 72 часа во всех планшетах в контроле вируса в разведении 10-3 более 90% клеток имели характерные изменения, в разведении 10-4 около 60% клеток, в разведении 10-5 - менее 20% и в разведении 10-6 цитопатическое действие вируса не наблюдалось.

Через 120 часов наблюдалась массовая гибель клеток в контроле вируса, что позволило провести МТТ-тест.

Во всех планшетах с добавлением заявляемого соединения (4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-она (1)) наблюдалось снижение цитапатогенного действия ВПГ-1. Так, в эксперименте в разведении вируса в 10-3 75% клеток имели характерные изменения, разведение 10 -4 - 38%, разведение 10-5 - 20% (таблица 1).

Таблица 1
Результаты испытаний противовирусной активности 4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло|5,1-с]{1,2,4]триазин-7-он в отношении вируса простого герпеса. Среднее значения оптической плотности (интенсивности клеточного дыхания) по результатам МТТ-теста.
Препарат Концентрация препарата, мкг/мл Титр вируса, lg (ТЦД50)/мл
10-3 10-410 -510-6
4-(4'-гидроксибутил)-6-фенил-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-7-он 300,124 0,2520,2840,287
Ацикловир50 0,3070,315 0,3160,303
Контроль вируса0,044 0,0750,1520,343
Контроль клеток 0,347

Класс C07D487/04 орто-конденсированные системы

5-метил-6-нитро-7-оксо-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-альфа]пиримидинид l-аргининия моногидрат -  патент 2529487 (27.09.2014)
хиназолиноны как ингибиторы пролилгидроксилазы -  патент 2528412 (20.09.2014)
новое производное пиразол-3-карбоксамида, обладающее антагонистической активностью в отношении рецептора 5-нт2в -  патент 2528406 (20.09.2014)
6-замещенные 3-азолилимидазо[1,2-b][1,2,4,5]тетразины, проявляющие противоопухолевую активность -  патент 2527258 (27.08.2014)
гетероциклические соединения и способы применения -  патент 2525116 (10.08.2014)
соединения азаазулена -  патент 2524202 (27.07.2014)
замещенные пиразоло[1,5-a]пиримидиновые соединения как ингибиторы трк киназы -  патент 2523544 (20.07.2014)
соли производных тетерагидро-имидазо[1,5-a]пиразина, способы их получения и их медицинское применение -  патент 2523543 (20.07.2014)
замещенные аминоинданы и их аналоги, и их применение в фармацевтике -  патент 2522586 (20.07.2014)
способы и композиции для стимулирования нейрогенеза и ингибирования дегенерации нейронов с использованием изотиазолопиримидинонов -  патент 2521333 (27.06.2014)

Класс A61P31/12 противовирусные средства

способ получения алкилбензилдиметиламмонийфторидов, обладающих противовирусным и антибактериальным действием -  патент 2529790 (27.09.2014)
5-метил-6-нитро-7-оксо-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-альфа]пиримидинид l-аргининия моногидрат -  патент 2529487 (27.09.2014)
новое производное пиразол-3-карбоксамида, обладающее антагонистической активностью в отношении рецептора 5-нт2в -  патент 2528406 (20.09.2014)
фармацевтическая композиция и способ получения противовирусных фракций (антивирус-с) -  патент 2526799 (27.08.2014)
средство для снижения репродукции вируса гепатита с -  патент 2526179 (20.08.2014)
применение соли ацетилсалициловой кислоты для лечения вирусных инфекций -  патент 2524304 (27.07.2014)
пептидные производные 1-(1-адамантил)этиламина и их противовирусное действие -  патент 2524216 (27.07.2014)
способ получения противовирусного средства и противовирусное средство -  патент 2522880 (20.07.2014)
способ изготовления вакцины против ящура -  патент 2522868 (20.07.2014)
способ получения антирабической вакцины -  патент 2522866 (20.07.2014)
Наверх