способ диагностики хронического эндометрита у женщин в постменопаузальном периоде

Формула изобретения

Способ диагностики хронического эндометрита у женщин в постменопаузальном периоде путем иммунологического исследования субпопуляций иммунокомпетентных клеток в биологическом материале, отличающийся тем, что в периферической венозной крови определяют относительное содержание CD95L+моноцитов и при его значении равном или меньшем 22,0% диагностируют хронический эндометрит.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использовано для диагностики хронического эндометрита у женщин постменопаузального периода.

Актуальность разработки способа определяется высокой частотой встречаемости хронического эндометрита у женщин постменопаузального периода [1], который неблагоприятно влияет на состояние ее здоровья и качество жизни [2]. Большинство хронических эндометритов протекают латентно, клиническая картина характеризуется малосимптомностью и «стертостью» клинических проявлений, что не всегда отражает истинную тяжесть состояния и способствует пролонгации процесса [3]. Диагностика хронического эндометрита у женщин постменопаузального периода нередко бывает затруднена вследствие не всегда четкой и ясной картины соматических симптомов [1], субъективности в оценке данных гистологического исследования биоптатов эндометрия [4], сложности проведения микрокюретажа из-за возникающей в постменопаузе атрезии шейки матки, которая, вероятно, является одним из признаков часто встречающейся в постменопаузе урогенитальной атрофии [4.]. Кроме того, используемые в диагностике патологических процессов матки гистероскопия и диагностическое выскабливание являются высокоинвазивными методами, отличаются высокой экономической стоимостью и требуют проведения анестезиологического пособия. Поэтому разработка способа диагностики хронического эндометрита у женщин постменопаузального периода является актуальной. Способ позволит диагностировать хронический эндометрит у женщин постменопаузального периода, своевременно назначить адекватную терапию и предупредить пролонгацию процесса.

Известен способ диагностики хронического эндометрита путем определения в менструальной крови уровня растворимого антигена лейкоцитов-2 (РАЛ-2). При уровне РАЛ-2, равном или выше 640 мкг/мл, диагностируют хронический эндометрит (Патент № 2108750 Российская Федерация. Способ диагностики хронического эндометрита / Посисеева Л.В., Бойко Е.Л., Борзова Н.Ю., Малышкина А.И., Шехлова Н.В. // Изобретения. - 1998. - № 11, Ч.II. - С.161).

Недостатки способа

1. Возраст подлежащих обследованию пациенток ограничивается только лишь женщинами фертильного периода.

2. Недостаточно высокая точность способа - 76,9%.

Известен способ диагностики хронического эндометрита путем определения уровня иммуноглобулинов классов М, G и A в эндометриальном секрете и при его увеличении относительно нормы диагностируют хронический эндометрит (Авторское свидетельство № 1725838, СССР, Способ диагностики хронического эндометрита / Попова Т.В., Ляхов В.В., Сухих Г.Т., Сметник В.П. // Изобретения. - 1992. - № 4. - С.11).

Недостатки способа

1. Инвазивность метода.

2. Для проведения данного метода требуется больше времени (72 часа), чем для заявляемого способа.

3. Точность данного способа неизвестна.

Известен способ диагностики хронического эндометрита путем микроскопии биоптатов эндометриальной ткани. Биоптаты эндометрия получают с помощью микрокюретажа, гистероскопии или диагностического выскабливания. Полученный материал фиксируют в 15% растворе формалина, окрашивают гемотоксилин-эозином. Хронический эндометрит выявляется на основании наличия плазматических клеток и наклонности к преимущественно очаговому скоплению мелкоклеточного инфильтрата [5].

Недостатки способа

1. Высокая инвазивность способа, поскольку для его осуществления требуется осуществление тотального соскоба эндометрия (точность метода в этом случае 90,1-95%). При биопсии (локальном заборе) эндометрия точность способа не превышает 64%, кроме того, у женщин в постменопаузе наблюдается атрофия эндометрия [4], что существенно затрудняет взятие достаточного объема эндометриальной ткани необходимого для изготовления качественных гистологических срезов.

2. Тотальный соскоб и биопсия эндометрия производятся в специально оборудованном кабинете для малых гинекологических операций. Женщина освобождается от работы, что связано с экономическим ущербом.

3. Требуются специализированные методики и оборудование для патоморфологических подразделений.

4. Для проведения данного метода требуется больше времени, чем для заявляемого способа (гистологическое исследование проводится в течение 5-7 дней).

5. Субъективность в оценке данных биопсии эндометрия. Различными морфологами данные биопсии могут интерпретироваться по-разному, и вероятно частое расхождение диагнозов [4].

Известен способ диагностики хронического эндометрита и характера воспаления, при котором, с помощью иммуногистохимического окрашивания срезов эндометриальной ткани, определяют показатели местного иммунитета: количество лимфоцитов экспрессирующих маркеры естественных киллерных клеток CD56+, CD16+ и маркеры активации HLA-DR(II)+. При количестве клеток, экспрессирующих CD56+, CD16+ и HLA-DR(II)+, от 0 до 10 в поле зрения диагностируют отсутствие эндометрита; при количестве клеток, экспрессирующих CD56+, выше 10 и при количестве клеток, экспрессирующих CD16+ и HLA-DR(II)+, от 0 до 10 в поле зрения диагностируют аутоиммунный хронический эндометрит; при количестве клеток, экспрессирующих CD56+, CD16+ и HLA-DR(II)+, выше 10 в поле зрения диагностируют обострение аутоиммунного хронического эндометрита; при количестве клеток, экспрессирующих CD16+ и HLA-DR(II)+, выше 10 и при количестве клеток, экспрессирующих CD56+, от 0 до 10 в поле зрения диагностируют хронический эндометрит с обострением или острый эндометрит; при количестве клеток, экспрессирующих CD16+ и CD56+, выше 10 и при количестве клеток, экспрессирующих HLA-DR(II)+, от 0 до 10 в поле зрения диагностируют хроническое воспаление с аутоиммунным компонентом, но без активации процесса; при количестве клеток, экспрессирующих CD56+ и HLA-DR(II)+, от 0 до 10 в поле зрения диагностируют хронический эндометрит (Патент № 2236013 Российская Федерация. Способ диагностики хронического эндометрита и характера воспаления / Михнина Е.А., Элиниди В.Н., Калинина Н.М., Давыдова Н.И. // Изобретения. Полезные модели. - 2004. - № 25. - С.537).

Недостатки способа

1. Данный метод является высокоинвазивным.

2. Высокая экономическая стоимость и трудоемкость метода, т.к. для его осуществления требуется иммуногистохимическая окраска срезов эндометриальной ткани и определение нескольких показателей.

3. Субъективность в оценке результатов.

4. Точность данного метода диагностики неизвестна.

Данный способ избран нами в качестве прототипа. Указанные недостатки предлагается устранить в заявляемом способе.

Техническим решением заявляемого способа является диагностика хронического эндометрита у женщин постменопаузального периода путем определения в периферической крови относительного содержания CD95L+ моноцитов, при значении показателя, равного 22,0% или менее, диагностируют хронический эндометрит с точностью 82,6%.

Новизна способа

Впервые предлагается диагностика хронического эндометрита у женщин постменопаузального периода по определению относительного содержания CD95L+ моноцитов в периферической крови. В литературе отсутствуют данные об изменении данного показателя при развитии патологии эндометрия. Нашими исследованиями было установлено, что содержание CD95L-позитивных моноцитов снижается у женщин постменопаузального периода при хроническом эндометрите.

По результатам ранее проводимых исследований, повышенное содержание CD95L-позитивных мононуклеарных клеток наблюдается у больных лепрой [6], усиление экспрессии молекул - CD95L клетками альвеолярного эпителия опосредует развитие бронхопульмонарной дисплазии [7]. Изменение содержания CD95L-позитивных лимфоцитов наблюдается при воспалительных, аутоиммунных и лимфопролиферативных процессах, а экспрессия CD95L молекул опухолевыми клетками приводит к супрессии противоопухолевого иммунного надзора [8, 9].

Известно, что моноциты внутриклеточно содержат высокий уровень FasL, при активации клетки происходит экспрессия молекул - FasL на мембране моноцитов или их реализация во внеклеточное пространство в виде растворимой формы (sFasL) [10]. Популяция моноцитов, экспрессирующих молекулы CD95L, обладает цитотоксическим действием и способна осуществлять элиминацию инфицированных клеток-мишеней [11]. Уменьшение содержания в периферической крови FasL-позитивных моноцитов может приводить к ухудшению реализации цитотоксических реакций, направленных на своевременное удаление инфицированных клеток-мишеней и, таким образом, к снижению противоинфекционной защиты.

Для диагностики хронического эндометрита в постменопаузальном периоде данный показатель используется впервые.

Отличительные признаки способа

Установлен диагностический параметр относительного содержания CD95L+ моноцитов периферической крови женщин постменопаузального периода, при значении которого, равном 22,0% или менее, диагностируют хронический эндометрит.

Способ осуществляется следующим образом

1. У женщин в постменопаузальном периоде производят забор 5,0 мл периферической венозной крови в пробирку с 0,5 мл разведенного гепарина (1:10).

2. Выделение фракции мононуклеарных клеток из периферической крови осуществляют стандартным методом скоростного центрифугирования в градиенте плотности фиколл-урографина при 1500 об/мин в течение 30 минут [12].

3. В 1 пробирку, содержащую 100 мкл мононуклеарных клеток в концентрации 1×10⁶ кл/мл, добавляют 20 мкл моноклональных анти-CD95L AT, меченных FITC или PE. Клетки инкубируют с моноклональными антителами в течение 30 минут при комнатной температуре в темноте, после чего отмывают 1 раз 1 мл физиологического раствора центрифугированием при 1500 об/мин в течение 2 минут. Клетки в пробирках ресуспендируют в 500 мкл физиологического раствора.

4. Учет реакции проводят на проточном цитометре, определяя в моноцитарном гейте процентное содержание CD95L+ клеток.

5. Способ осуществляется в течение 60 минут.

При значениях показателя, равных или меньших 22,0%, диагностируют хронический эндометрит с точностью 82,6%.

Сущность заявляемого способа поясняется следующими примерами.

Пример 1. Пациентка М., 52 лет, обратилась на прием к врачу гинекологу-климактологу с целью подбора препарата заместительной гормональной терапии. Предъявляла жалобы на периодически возникающие приливы жара, повышение артериального давления. По данным гинекологического анамнеза находится в постменопаузальном периоде в течение 3 лет, наличие экстрагенитальной патологии отрицает, из гинекологических заболеваний - миома матки. Согласно заявляемому методу было проведено исследование содержания в периферической крови CD95L-позитивных моноцитов - 42,2% (свидетельствует об отсутствии хронического эндометрита). По данным УЗИ - тело матки 40×38×44 мм. По задней стенке округлое образование 14 мм; в дне - 10 мм; по пер. стенке 8 мм. М-эхо 4 мм. Заключение: Межмышечная миома матки, малых размеров. Следовательно, признаков хронического эндометрита нет. Заключение гистологического исследования - атрофичный эндометрий.

Таким образом, способ диагностики хронического эндометрита у женщин в постменопаузальном периоде по предложенному методу подтвердился.

Пример 2. Пациентка К., обратилась на прием к врачу гинекологу-климактологу с целью подбора препарата заместительной гормональной терапии, предъявляла жалобы на приливы жара, повышенную потливость. По данным гинекологического анамнеза находится в постменопаузальном периоде в течение 1,5 лет, гинекологические заболевания отрицает, из экстрагенитальной патологии указывает на сахарный диабет II типа. Согласно заявляемому способу в периферической крови проведено исследование содержания CD95L-позитивных моноцитов, по данным иммунологического исследования значение этого показателя составило 15,2%, что предполагает наличие хронического эндометрита. Диагноз был подтвержден данными УЗИ органов малого таза - хронический метроэндометрит, и данными патогистологического исследования - эндометрий гипопластического типа, очаговый эндометрит.

Таким образом, способ диагностики хронического эндометрита у женщин в постменопаузальном периоде по предложенному методу подтвердился.

Пример 3. Пациентка Л. обратилась на прием к врачу гинекологу-климактологу по поводу подбора адекватной заместительной гормональной терапии. Предъявляла жалобы на боли в мышцах и костях. По данным анамнеза находится в постменопаузе - 2,5 года. Наличие экстрагенитальной патологии отрицает, указывает на перенесенный ранее кольпит. Была обследована согласно заявляемому способу, содержание CD95L-позитивных моноцитов составило 22,0%, что свидетельствует о наличии хронического эндометрита. Заключение врача УЗИ диагностики: тело матки 58×37×54 мм, в нижней трети по передней стенке образование 15 мм × 7 мм. сниженной эхоплотности. М-эхо 5 мм. Следовательно, данных за хронический эндометрит нет. Заключение гистологического исследования соскоба эндометрия - эндометрий гипопластического типа, вялотекущий эндометрит.

Таким образом, способ диагностики хронического эндометрита у женщин в постменопаузальном периоде по предложенному методу подтвердился.

Преимущества способа

1. Возможность малоинвазивной (взятие периферической венозной крови) диагностики хронического эндометрита у женщин в постменопаузальном периоде.

2. Высокая точность - 82,6%.

3. Легкая воспроизводимость.

4. Заявляемый способ прост в исполнении и не требует больших временных затрат (осуществляется за 1 час).

5. Исследуется малый объем периферической венозной крови (5,0 мл).

6. Предлагаемый способ нетравматичен.

Указанным способом обследовано 23 женщины постменопаузального периода.

Результаты исследования представлены в таблице.

Таблица
Результаты исследований
Количество обследованных	23
Истинно положительные результаты	6
Истинно отрицательные результаты	13
Ложно положительные результаты	2
Ложно отрицательные результаты	2
Точность способа	82,60%
Чувствительность способа	75,00%
Специфичность способа	86,67%

Литература

1. Рудакова Е.Б., Лихачев А.В., Лузин А.А., Богданова О.Н. Дифференцированный подход к лечению хронического эндометрита // Журнал российского общества акушеров и гинекологов. - 2007. - № 2. - С.19-20.

2. Бангура А. Качество жизни больных с хроническими воспалительными заболеваниями органов малого таза // Врач-аспирант. - 2006. - № 10. - С.37-42.

3. Дубницкая Л.В., Назаренко Т.А. Хронический эндометрит: возможности диагностики и лечения // Concilium medicum. - Consilium medicum. - 2007. - N 6. - C.25-28.

4. Руководство по климактерию: Руководство для врачей / Под ред. В.П.Сметник, В.И.Кулакова - М.: Медицинское информационное агентство, 2001. - 685 с.

5. Волкова О.В., Елецкий Ю.И. Основы гистологии с гистологической техникой. - М.: Медицина, 1992. - 202 с.

6. Chattree V., Khanna N., Bisht V., Rao D.N. Inhibition of apoptosis, activation of NKT cell and upregulation of CD40 and CD40L mediated by M. leprae antigen(s) combined with Murabutide and Trat peptide in leprosy patients // Mol. Cell. Biochem. - 2008. - Vol.309. - P.87-97.

7. De Paepe M.E., Gundavarapu S., Tantravahi U., Pepperell J.R., Haley S.A., Luks F.I., Mao Q. Fas-ligand-induced apoptosis of respiratory epithelial cells causes disruption of postcanalicular alveolar development // American Journal of Pathology. - 2008. - Vol.173, № 1. - P.42-56.

8. Linkermann A., Qian J., Janssen O. Slowly getting a clue on CD95 ligand biology // Biochem Pharmacol. - 2003. - Vol.15, № 66. - P.1417-1426.

9. Hohlbaum A.M., Мое S., Marshak-Rothstein A. Opposing effects of transmembrane and soluble Fas ligand expression on inflammation and tumor cell survival // J. Exp. Med. - 2000. - Vol.191, № 7. - P.1209-1219.

10. Kiener P.A., Davis P.M., Rankin B.M., Klebanoff S.J., Ledbetter J.A., Starling G.C., Liles W.C. Human monocytic cells contain high levels of intracellular Fas ligand // Of immunology. - 1997. - Vol.159. - P.1594-1598.

11. Фильченков A.A., Степанов Ю.М., Липкин B.M., Кушлинский Н.Е. Участие системы Fas/Fas-лиганд в регуляции гомеостаза и функционирования клеток иммунной системы // Аллергология и иммунология. - 2002. - Т.3, № 1. - С.24-35.

12. Bourn A. Isolation of mononuclear cells and granulocytes from human blood and bone marrow // Scand. J. Clin. Invest. - 1968. - Vol.21, № 97. - P.77.