способ оценки сочетанного действия цитостатика и внешнего гамма-облучения в эксперименте

Формула изобретения

Способ оценки иммунодефицита после сочетанного действия цитостатика и внешнего гамма-облучения путем однократного проведения экспериментальным животным разовой внутрибрюшинной инъекции цитостатика, циклофосфана в дозе 4 мг/100 г массы тела животного, с последующим проведением с 5 дня после введения цитостатика общего фракционированного гамма-облучения животных - в разовой дозе 2 Зв, в количестве 3 процедур облучения через день при общей эквивалентной дозе 6 Зв, затем на 4 день после последнего сеанса облучения животных забивают и исследуют у них клеточность селезенки (КС), количество лейкоцитов в крови (ЛК), содержание в сыворотке крови тироксина (Т4) и серотонина (СТ), вычисляют индекс супрессии (ИС) по формуле



и при величине ИС, превышающей 1,57 ед., констатируют наличие иммунодефицита сочетанного генеза.

Описание изобретения к патенту

Известен способ оценки постмедикаментозного иммунодефицита посредством разовой внутрибрюшинной инъекции 0,5 мл цитостатика циклофосфана в дозе 4 мг/100 г массы тела животного с последующим определением клеточности (КС) селезенки. При достоверном уровне этого показателя после введения циклофосфана констатируют наличие постмедикаментозного иммунодефицита (Н.И.Демешко, Ю.М.Гринзайд и др. Микроволны миллиметрового диапазона в профилактике экспериментального постмедикаментозного иммунодефицита цитостатического генеза. // Актуальные вопросы восстановительной медицины, курортологии и физиотерапии: Материалы международного симпозиума «Здравница-2006». Сочи, 30 мая - 2 июня 2006 г. - Сочи, 2006. - С.91-92).

Данный способ имеет ряд недостатков, связанных, в первую очередь, с неравномерностью распределения иммунного ответа на цитостатик по различным показателям в реальной ситуации (уровень одних показателей возрастает, других снижается, и наоборот, в связи с чем бывает трудно распознать истинную иммуносупрессию). Он также не предусматривает возможность оценки иммунодефицита сочетанного генеза - после воздействия цитостатика и гамма-облучения - ситуации, реальной для современной онкологической практики. Предлагаемый способ лишен указанных недостатков.

Технический результат предлагаемого способа заключается в возможности объективной оценки иммунодефицита сочетанного генеза - после воздействия цитостатика и гамма-облучения.

Технический результат достигается следующим образом: оценку сочетанного действия цитостатика и внешнего гамма-облучения в эксперименте осуществляют путем однократного проведения экспериментальным животным, например крысам, разовой внутрибрюшинной инъекции цитостатика, например циклофосфана в дозе 4 мг/100 г массы тела животного, с 5 дня после введения цитостатика начинают общее внешнее фракционированное гамма-облучение животных - в разовой дозе 2 Зв, всего 3 процедуры облучения через день при общей эквивалентной дозе 6 Зв, затем на 4 день после последнего сеанса облучения животных забивают и исследуют у них клеточность селезенки (КС), количество лейкоцитов в крови (ЛК), содержание в сыворотке крови тироксина (Т4) и серотонина (СТ), вычисляют индекс супрессии (ИС) по формуле

и при величине ИС, превышающей 1,57 ед., констатируют наличие иммунодефицита сочетанного генеза.

Способ выполняют следующим образом. Вначале животным проводят разовую внутрибрюшинную инъекцию раствор циклофосфана в дозе 4 мг/100 г массы тела животного. С 5 дня после введения циклофосфана начинают общее внешнее гамма-облучение животных - в разовой дозе 2 Зв, общим количеством 6 Зв (3 процедуры облучения через день). На 4 день после последнего сеанса облучения животных забивают и исследуют у них клеточность селезенки, количество лейкоцитов в крови, содержание в сыворотке крови тироксина и серотонина.

Вычисляют индекс супрессии (ИС) по формуле

и при величине ИС, превышающей 1,57 ед., констатируют наличие иммунодефицита сочетанного (цитостатик и внешнее гамма-облучение) генеза.

Данная формула индекса супрессии включает произведение показателей, характеризующих катаболические процессы, в числителе, и произведение количественных показателей иммунокомпетентных клеток в знаменателе, и поэтому величина ИС возрастает с нарастанием иммуносупрессии.

Способ был апробирован в условиях отдела изучения механизмов действия физических факторов Пятигорского государственного НИИ курортологии. Объектом исследования послужили 19 крыс линии Вистар, разделенные на 2 группы. Интактные крысы 1 группы (9) служили контролем для остальных групп. У 10 животных основной группы проводилось моделирование иммунодефицитных нарушений путем однократной инъекции циклофосфана дозой 4 мг/100 г массы тела животного с последующим (на 5 день после инъекции циклофосфана) фракционированным облучением (3 раза по 2 Гр, через день, суммарная доза 6 Гр). На 4 сутки после последнего сеанса облучения проводились забой животных и лабораторные анализы.

Данные исследований представлены в нижеследующей таблице.

Показатель	группа	N	М	m		Интервал М±
Т4*Серотонин/ЛК*КС Ед.	интактная	7	0,71	0,326	0,86	-0,15	-	1,57
Цф+обл	8	17,4	4,24	12,0	5,0	-	29,4
Т4 нмоль/л	интактная	7	11,6	1,6	4,23	7,37	-	15,83
Цф+обл	8	49,4	9,23	26,1	23,3	-	75,5
Серотонин нг/мл	интактная	7	7,94	1,95	5,16	2.78	-	13,10
Цф+обл	8	5,20	0,91	2,57	2,63	-	7,77
ЛК·109 кл/л	интактная	7	6,43	0,95	2,51	3,92	-	8,94
Цф+обл	8	0,35	0,07	0,200	0,15	-	0,55
КС мг	интактная	7	92,2	37,7	99,72	-7,52	-	191,9
Цф+обл	8	44,2	13,21	37,37	6,83	-	81,57

Нормальные значения ИС, исчисленные согласно методике Л.С.Каминского (1967) как М± , составили по максимуму 0,71+0,86=1,57. Меньшие значения ИС свидетельствовали об отсутствии иммуносупрессии (в частности, в интактной группе), большие, приближающиеся к значениям опытной группы, - ее наличие.

Способ может быть проиллюстрирован следующими примерами.

1. У интактной крысы № 2 не производилось никаких воздействий. В сроки, соответствующие эксперименту в основной группе, проведены ее лабораторные исследования. Уровни в сыворотке крови Т4 составили - 8,89 нмоль/л, серотонина - 1,53 нгмл, количество лейкоцитов крови (ЛК) - 8,5·10 ⁹ кл/л, количество лейкоцитов селезенки - клеточность селезенки (КС) 226,9·10⁶ кл/100 мг массы органа. Индекс супрессии ИС = Т4·Серотонин/ЛК·КС = 0,007.

2. У интактной крысы № 4 также не производилось никаких воздействий. В соответствующие сроки проведены лабораторные исследования. Уровни в сыворотке крови Т4 составили - 1,67 нмоль/л, серотонина - 11,86 нгмл, количество лейкоцитов крови (ЛК) - 5,0·10⁹ кл/л, клеточность селезенки (КС) - 26,6·10⁶ кл/100 мг. Индекс супрессии ИС = Т4·Серотонин/ЛК·КС = 1,33.

3. У крысы № 24 моделировались иммунодефицитные нарушения путем инъекции циклофосфана дозой 4 мг/100 г массы тела животного с последующим (на 5 день после инъекции циклофосфана) фракционированным облучением (3 раза по 2 Гр, через день, суммарная доза 6 Гр). На 4 сутки после последнего сеанса облучения при лабораторном исследовании животного обнаружено следующее. Уровни в сыворотке крови Т4 составили - 79,4 нмоль/л, серотонина - 2,27 нгмл, количество лейкоцитов крови (ЛК) - 0,5·10⁹ кл/л, клеточность селезенки (КС) - 12,7·10⁶ кл/100 мг. Индекс супрессии ИС = T4·Серотонин/ЛК·КС = 28,39.

Результат расценен как иммуносупрессия.

4. У крысы № 29 моделировались иммунодефицитные нарушения путем инъекции циклофосфана дозой 4 мг/100 г массы тела животного с последующим (на 5 день после инъекции циклофосфана) фракционированным облучением (3 раза по 2 Гр, через день, суммарная доза 6 Гр). На 4 сутки после последнего сеанса облучения при лабораторном исследовании животного обнаружено следующее. Уровни в сыворотке крови Т4 составили - 36,1 нмоль/л, серотонина - 4,97 нгмл, количество лейкоцитов крови (ЛК) - 0,7·10 кл/л, клеточность селезенки (КС) - 22,8·10 ⁶ кл/100 мг. Индекс супрессии ИС = T4·Серотонин/ЛК·КС = 11,22.

Результат расценен как иммуносупрессия.

5. У крысы № 27 моделировались иммунодефицитные нарушения путем инъекции циклофосфана дозой 4 мг/100 г массы тела животного с последующим (на 5 день после инъекции циклофосфана) фракционированным облучением (3 раза по 2 Гр, через день, суммарная доза 6 Гр). На 4 сутки после последнего сеанса облучения при лабораторном исследовании животного обнаружено следующее: клеточность селезенки (КС) - 59,4·10⁶ кл/100 мг. Индекс супрессии ИС = Т4·Серотонин/ЛК·КС = 24,65. Результат расценен как иммуносупрессия.

6. У крысы № 30 моделировались иммунодефицитные нарушения путем инъекции циклофосфана дозой 4 мг/100 г массы тела животного с последующим (на 5 день после инъекции циклофосфана) фракционированным облучением (3 раза по 2 Гр, через день, суммарная доза 6 Гр). На 4 сутки после последнего сеанса облучения при лабораторном исследовании животного обнаружено следующее, клеточность селезенки (КС) - 11,2·10⁶ кл/100 мг. Индекс супрессии ИС = Т4·Серотонин/ЛК·КС = 33,60. Результаты расценены как иммуносупрессия.