способ получения комплексного препарата с иммунометаболической и антгельминтной активностью

Формула изобретения

Способ получения комплексного препарата с иммунометаболической и антгельминтной активностью, включающий добавление в деминерализованную воду левамизола, янтарной кислоты, отличающийся тем, что дополнительно в состав препарата вводят лимонную кислоту при следующем соотношении, мас.%:

Левамизол - 7,5;

Янтарная кислота - 1,0;

Лимонная кислота - 0,1;

Вода - остальное,

препарат предназначен для парентерального введения, в дозе 1 мл на 10 кг массы тела животного.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к способам получения иммунометаболических препаратов.

В настоящее время актуальнейшими проблемами ветеринарной медицины являются приобретенные иммунодефициты и глубокие нарушения обменных процессов, обусловленные множеством факторов, в том числе нарушением питания и содержания, инфекционными и инвазионными заболеваниями животных, сопровождающимися явлениями окислительного стресса. В этой связи возникает необходимость применения препаратов, обладающих сочетанным антиоксидантным, метаболическим и иммуностимулирующим действием.

Решение концептуальной задачи по одновременной коррекции оксидантного, метаболического и иммунного статуса животных возможно на основе разработки комбинированных препаратов.

Известен иммунометаболический антгельминтный препарат (патент РФ № 2411944 от 20 февраля 2011 г.)

Данный препарат получают добавлением в стандартный раствор 7,5% антигельминтика левамизола, порошка янтарной кислоты из расчета 10 мг/ мл и растворением при нагревании до 38-40°С.

Препарат обеспечивает высокую антгельминтную и гепатопротекторную активность. Однако, как свидетельствуют наблюдения, он недостаточно эффективен при состояниях, сопровождающихся явлениями окислительного стресса.

Задачей изобретения является разработка комплексного препарата, обладающего повышенным антиоксидантным, иммунометаболическим и антигельминтным действием, введение которого вызывало бы системный лечебно-профилактический эффект, направленный на нормализацию энергетических, обменных и иммунных процессов, а также антигельминтной активностью.

Для усиления метаболической активности янтарной кислоты и повышения факторов естественной резистентности организма животных может быть использована лимонная кислота.

Лимонная кислота является активатором янтарной кислоты в цикле трикарбоновых кислот Кребса. Комплексное соединение янтарной и лимонной кислот нашло применение в хорошо известном таблетированном препарате Лимонтар (патент РФ № 2039556).

Механизм действия комплекса янтарной и лимонной кислот заключается в их способности связывать свободные радикалы, оказывающее повреждающее действие на белки, липиды и биомембраны клеток, что является базисным в патогенезе многих заболеваний, а также в процессе старения клеток и тканей организма.

На основании биохимических исследований установлено, что добавление лимонной кислоты к янтарной в соотношении 1:10-15 позволяет выражено усилить метаболическую активность.

В качестве антгельминтика и иммуномодулятора в состав комплексного препарата включен левамизол.

Левамизол - высокоэффективный антгельминтик и иммуномодулятор преимущественно клеточной системы иммунитета. Однако обладает выраженным побочным, преимущественно судорожным действием на организм, в связи с чем его неохотно используют в клинике лечения больных животных.

Предложенный иммунометаболический антгельминтный препарат в качестве антгельминтика и иммуностимулятора содержит левамизол, а в качестве метаболических корректоров и антиоксидантов - янтарную (ЯК) и лимонную (ЛК) кислоты, при этом компоненты, входящие в его состав, взяты в следующем соотношении (мас.%):

Левамизол - 7,5

Янтарная кислота - 1,0

Лимонная кислота - 0,1

Вода - остальное.

Получили комплексный препарат путем добавления в деминерализованную воду порошка левамизола - 75 мг/мл; порошка янтарной кислоты - 10 мг/ мл и лимонной кислоты 1 мг/мл. При нагревании до 38-40°С и постоянном перемешивании указанные компоненты растворились. Полученный раствор был прозрачен. Добавлением 10% раствора гидроокиси натрия довели рН до 4-4,5. Полученный препарат расфасовали по флаконам емкостью 50,0 мл и подвергли стерилизации автоклавированием в режиме 1-1,1 атм в течение 20 минут. Стерилизация автоклавированием не изменила физико-химических свойств комплексного препарата.

Полученный комплексный препарат представляет собой прозрачный бесцветный стерильный раствор. Качественный и количественный состав предлагаемого препарата, по сравнению с прототипом, позволяет выраженно повысить иммунометаболический и антиоксидантный эффект, сохранив на высоком уровне антигельминтную активность. Качественный и количественный состав предлагаемого препарата обеспечивает достижение синергетического эффекта, что иллюстрируется примерами его экспериментального испытания.

Пример 1. Изучение иммуностимулирующего и метаболического действия комплексного препарата провели на поросятах - гипотрофиках 25-30 дневного возраста. Опытной группе поросят (n=5) внутримышечно инъецировали предлагаемый состав (левамизол + ЯК+ЛК) в дозе 2,0 мл. Контрольной группе (n=5) ввели иммунометаболический антгельминтный препарат (левамизол + ЯК) в той же дозе. Побочного действия на введение препарата не отмечено ни в опытной, ни в контрольной группе.

Контрольные исследования влияния препаратов на иммунобиохимический статус поросят провели на 5 и 14 сутки. Результаты иммунобиохимических исследований представлены в таблице 1.

Из представленных данных видно, что введение комплексного препарата, содержащего ЯК и ЛК, оказывает более выраженное иммунометаболическое действие уже на 5 день после введения и эффект сохраняется до 14 дня.

Пример 2. Изучение действия предлагаемого состава на состояние системы ПОЛ-АОЗ у телят проводили на 27 телятах, больных гастроэнтеритом смешанной вирусно-бактериальной этиологии, с острым течением, сопровождающимся явлениями окислительного стресса, токсикоза и обезвоживания. Все больные были разделены на 3 группы - две опытные и контрольную, по 9 голов в каждой. Контрольную группу составили телята, получавшие традиционный комплекс лечения антибиотиками, принятый в хозяйстве. Для лечения больных первой опытной группы дополнительно включался комплексный испытуемый препарат (левамизол + ЯК+ЛК), один раз в день, в дозе 2 мл, внутримышечно. Для лечения больных второй опытной группы, кроме антибиотикотерапии, дополнительно назначался известный препарат (левамизол и ЯК) в дозе 2 мл на голову, внутримышечно, один раз в день в дозе 2 мл.

Для изучения состояния ПОЛ определяли содержание диеновых конъюгатов (ДК) плазмы крови по методу Гаврилова В.Б., Мишкорудной М.И.,1983. Из антиоксидантных параметров исследовались уровни каталазной активности (КА), методом М.А. Королюк, 1988, и глутатионпероксидазы (ГП) в крови (В.С. Бузлама и др., 1997). Результаты исследований представлены в таблице 2.

Полученные данные показали, что применение комплексного иммунометаболического антигельминтного препарата (левамизол + ЯК) привело к существенным сдвигам всех анализируемых параметров. Отмечено существенное снижение интенсивности ПОЛ по показателям ДК (P₁<0,01). Однако уровня здоровых телят достигнуто не было. Применение препарата оказало положительное влияние на активность АОЗ. Так, наблюдалось нарастание уровня КА и ПА плазмы крови (Р₂<0,01). Тем не менее и эти параметры не поднялись до уровня активности АОЗ у здоровых телят.

Применение препарата, в состав которого включены левамизол, ЯК и ЛК, привело к более выраженным положительным сдвигам в системе "ПОЛ-АОЗ" не только в сравнении с контрольной группой, но и I опытной группой.

Пример 3. Изучение антгельминтной активности. Опыт проведен на поросятах 2-2,5 месячного возраста, спонтанно инвазированных аскаридами. Из подопытных поросят были сформированы три опытные группы. Животным первой группы внутримышечно инъецировали испытуемый препарат (левамизол + ЯК+ЛК) в дозе 1 мл на 10 кг массы тела, поросятам второй группы в той же дозе вводили известный препарат (левамизол + ЯК). Поросятам третьей группы в аналогичном объеме вводился стандартный раствор левамизола.

При клиническом наблюдении за подопытными животными установлено, что в ответ на введение стандартного раствора левамизола, спустя 20-30 минут, у всех животных стали проявляться выраженные симптомы нервного возбуждения и рвота. У поросят первой и второй групп признаков возбуждения не обнаружено. Это свидетельствует о том, что включение ЯК, а также ЯК в сочетании с ЛК, в состав препарата позволило выраженно снизить токсическое действие левамизола на нервную систему организма животных.

Оценку антгельминтной активности провели по результатам копрологического исследования на 18 сутки после введения препаратов, результаты которых отражены в таблице 3.

Таким образом, на основании проведенных экспериментальных исследований следует, что комплексный препарат на основе антгельминтика-иммуномодулятора левамизола и естественных метаболиков: янтарной и лимонной кислот при парентеральном введении в дозе 1 мл на 10 кг массы тела животного выраженно снижает токсический эффект на организм животных, обеспечивает более высокую иммунометаболическую, антиоксидантную, в том числе и антгельминтную активность по отношению к ближайшему аналогу и стандартному раствору левамизола.

Таблица 1.
Иммунобиохимические показатели у поросят - гипотрофиков на фоне применения левамизола в комплексе с ЯК и ЯК с ЛК
показатели	Левамизол + ЯК			Левамизол + ЯК+ЛК
	фон	5 сутки	14 сутки	фон	5 сутки	14 сутки
Иммуноглобулины: М мг/мл	2,24±0,17	2,75±0,25	2,14±0,19	2,25±0,21	2,98±0,39	2,36±0,16
G мг/мл	7,02±1,02	9,12±1,39	8,94±1,27	7,24±1,06	9,26±0,98	8,98±1,02
Лейкоциты, тыс/м 3	8,27±0,36	9,42±0,72	9,51±0,46	8,32±0,78	9,76±0,86	9,64±0,42
Т-лимфоциты 10 9/л	2,34±0,42	3,45±0,38	3,97±0,23	2,86±0,24	3,82±0,42	3,96±0,34
В-лимфоциты 10 9/л	1,95±0,18	2,03±0,22	2,48±0,31	2,02±0,12	2,26±0,14	2,58±0,12
Бактерицидная активность сыворотки крови, %	89,0±2,57	93,7±2,60	92,4±2,81	90,4±2,80	97,9±2,85	96,2±2,41
Лизоцимная активность сыворотки крови, мг/мл	1,49±0,16	1,74±0,39	1,92±0,14	1,44±0,13	1,86±0,26	1,93±0,28
Эритроциты, млн/м3	6,4±0,08	7,8±0,07	7,6±0,05	6,6±0,02	7,9±0,05	7,7±0,04
Гемоглобин, г%	8,32±0,56	11,44±0,32	11,46±0,42	8,46±0,24	11,78±0,28	11,71±0,32
Метгемоглобин, г%	1,74±0,38	0,62±0,08	0,73±0,05	1,82±0,24	0,54±0,16	0,62±0,18

Таблица 2.
Уровень ПОЛ и АОЗ крови телят, больных гастроэнтеритом, под влиянием проводимой терапии
Показатель	Здоровые телята	Контрольная группа	1-я опытная группа	2-я опытная группа
ДК232 /мг липидов до лечения	0,14±0,05	0,38±0,05	0,39±0,02	0,37±0,05
после лечения		0,36±0,07	0,14±0,08	0,24±0,07
КА (мкМ Н2О2/л·мин) до лечения	45,05±4,85	28,15±1,73	27,93±2,64	25,75±4,23
после лечения		31,81±2,83	46,45±3,53	35,5±4,72
ГПА(мМGSН/л·мин) до лечения	11,28±0,02	7,32±0,15	6,43±0,52	5,85±0,22
после лечения		8,25±1,72	11,32±2,72	10,42±2,62
				0,37±0,05

Таблица 3.
Антгельминтная активность левамизола + ЯК, левамизола + ЯК+ЛК и стандартного левамизола при аскаридозе
препарат	количество животных	инвазированность
		до введения		через 18 дней
левамизол + ЯК	20	ЭИ - 12 (60%)	ИИ - 8,3±1,0	ЭИ - 4 (20%)	ИИ - 1,0±0,1
левамизол + ЯК+ЛК	20	ЭИ - 12 (60%)	ИИ - 8,5±1,2	ЭИ - 4 (15%)	ИИ - 1,2±0,1
левамизол	20	ЭИ - 10 (50%)	ИИ - 9,1±1,4	ЭИ - 5 (25%)	ИИ - 3,0±1,2