способ лечения рака толстой кишки

Формула изобретения

Способ лечения рака толстой кишки путем многократного парантерального введения противоопухолевого препарата, отличающийся тем, что в качестве противоопухолевого препарата используют L-лизин-альфа-оксидазу из Trichoderma cf. aureoviride Rifai BKMF-4268D, которую вводят пятикратно ежедневно в суммарной дозе 450-1000 Е/кг, равными долями, либо вводят пятикратно с интервалом в 48 ч в суммарной дозе 450 Е/кг, при этом первичная доза препарата составляет 150 Е/кг, а остальную часть препарата вводят в равных дозах.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а именно к противоопухолевой терапии, оно касается способа лечения рака толстой кишки и может быть использовано самостоятельно или в комбинации с другими способами лечения.

Известен способ лечения рака толстой кишки иринотеканом [Pitot НС, Wender DB, O'Connell MJ, Schroeder G, Goldberg RM, Rubin J, MaiUiard JA, Knost JA, Ghosh C, Kirschling RJ, Levin R, Windschitl HE. Phase II trial of irinotecan in patients with metastatic colorectal carcinoma // J din Oncol. 1997; 15(8): 2910-9]. При лечении диссеминированного рака толстой кишки иринотекан вызывает до 25% объективных эффектов, но его применение сопровождается дозолимитирующей гастроинтестинальной токсичностью [Противоопухолевая химиотерапия /Под ред. Роланда Т. Скила, пер. с англ. М., Гэотар-Медиа, 2011. - 1022 с.]. Сущность упомянутого способа заключается в том, что иринотекан в суммарной дозе 180 мг/кг (3-кратный курс) внутривенно вводили мышам с подкожными ксенографтами одного из штаммов рака толстой кишки человека НСТ-116 у иммунодефицитных мышей Balb/c nude. Терапевтический эффект сопоставляли с контрольной группой без лечения и оценивали в динамике по стандартному показателю Т/С (treatment/control - отношение размера опухоли у животных в опытной группе к контрольной). Критерием эффективности являлось значение T/C 42%. В результате было установлено, что после окончания терапии иринотеканом T/C=39%, т.е. был практически на уровне минимального значения [Sabatino M.A., Colombo Т., Geroni С., Marchini S., Broggini М. Enhancement of in vivo antitumor activity of classical anticancer agents by combination with the new, glutathione-interacting DNA minor groove-binder, brostallicin // Clin Cancer Res. 2003 Nov 1; 9(14): 5402-8].

Таким образом, основным недостатком прототипа с клинически значимой гастроинтестинальной токсичностью был относительно низкий противоопухолевый эффект на экспериментальной модели рака толстой кишки.

Задачей изобретения является создание более эффективного способа лечения рака толстой кишки с помощью менее токсичного агента, который можно применять в схемах традиционного лечения этой патологии.

Поставленная задача решается тем, что в заявляемом способе используется L-лизин-альфа-оксидаза (ЛО) - один из новых ферментов с противоопухолевым эффектом в отношении различных моделей опухолевого роста, выделенная из культуры депонированного во Всероссийской коллекции микроорганизмов ИБФМ РАН гриба Trichoderma cf. aureoviride Rifai BKMF-4268D, которую вводят парентерально многократно в общей дозе 450-1000 E равными дозами, либо доза, применяемая при второй и последующих инъекциях, составляет 50% от первичной дозы. ЛО, применяемую в предлагаемом способе, получают из гриба Trichoderma cf. aweoviride Rifai BKMF-4268D фильтрованием, центрифугированием, обработкой сефадексом QAE-A25, DEAE ToyePearl, сульфатом аммония и хроматографией на колонках с октил-сефарозой и DEAE ToyePearl.

Заявляемый способ лечения осуществляется следующим образом. Животным с подкожными (п/к) ксенографтами перевиваемых опухолей толстой кишки человека (n=8-11) внутрибрюшинно (в/б) или внутривенно (в/в) вводят ЛО с удельной активностью 95 Е/мг многократно в суммарных дозах 450-1000 Е/кг. Лечение начинают через 48 ч после подкожной имплантации опухолевых клеток или трансплантации взвеси опухолевой ткани. Контрольные группы мышей не получают специфического лечения, им вводят 0,9% раствор натрия хлорида в идентичной ЛО схеме. Эффективность лечения оценивают по T/C% [Трещалина Е.М., Жукова О.С., Герасимова Г.К. и др. Методические указания по изучению противоопухолевой активности фармакологических веществ // Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под общей ред. Р.У.Хабриева. М.: Медицина, 2005. С.637-651].

О переносимости лечения ЛО судят по поведению и состоянию мышей во время проведения опыта, а также по результатам аутопсии умерщвленных после окончания наблюдения мышей. Выявляют симптомы (понос) или визуальные признаки гастроинтестинальной токсичности при аутопсии (кровенаполнение и/или признаки нарушения моторики кишечника).

Исследование проводят на иммунодефицитных мышах Balb/c nude, которым подкожно трансплантируют различные штаммы рака толстой кишки человека, в том числе НСТ-116, SW-620 или LS-174T. Методика трансплантации опухолей стандартная [Chabner B.A., Longo D.L. Cancer Chemotherapy and Biotherapy: Principles and Practice. 3rd ed. Philadelphia: Lippincott-Raven, 2001. P.678-699].

Статистическая обработка данных проведена по стандартному методу Стьюдента с использованием доверительных интервалов средних сравниваемых величин, достоверными считали различия при p<0,05.

Предлагаемое изобретение иллюстрируется нижеприведенными примерами.

Пример 1. В опыте использованы мыши-самки Balb/c nude с п/к ксенографтами перевиваемого рака толстой кишки SW-620 (ATCC, cat. number CCL-227). ЛО вводили мышам в/б ежедневно 5 раз равными дозами, суммарная доза составила 1000 Е/кг.

В результате после окончания 5-кратного ежедневного курса лечения ЛО в суммарной дозе 1000 Е/кг Т/C=27% (p<0,05) (табл.1), гибели от токсичности и видимых патологических изменений внутренних органов, в том числе со стороны желудочно-кишечного тракта, не наблюдали.

Пример 2. В опыте использованы мыши-самки Balb/c nude с п/к ксенографтами рака толстой кишки LS-174T (ATCC, cat. number CL-188). ЛО вводили мышам в/в 5-кратно с интервалом 48 ч в суммарной дозе 450 Е/кг. Первоначальная инъекция составляла 150 Е/кг, остальную часть ЛО вводили в равных дозах четырехкратно.

В результате после окончания лечения Т/C=37% (p<0,05) (табл.2), переносимость лечения была удовлетворительной. Гибели от токсичности и видимых патологических изменений внутренних органов, в том числе со стороны желудочно-кишечного тракта, не наблюдали.

Пример 3. В опыте использованы мыши-самки Balb/c nude с п/к ксенографтами рака толстой кишки НСТ-116 (ATCC, cat. number CCL-247). ЛО вводили мышам в/б 5-кратно с интервалом 48 ч в суммарной дозе 450 Е/кг. Первоначальная инъекция составляла 150 Е/кг, остальную часть ЛО вводили в равных дозах четырехкратно.

В результате после окончания лечения Т/C=12% (p<0,05) (табл.3), переносимость лечения была удовлетворительной. Гибели от токсичности и видимых патологических изменений внутренних органов, в том числе со стороны желудочно-кишечного тракта, не наблюдали.

Таблица 1
Противоопухолевая активность и переносимость L-лизин-альфа-оксидазы при многократном внутрибрюшинном введении иммунодефицитным мышам Balb/c nude с подкожными ксенографтами рака толстой кишки человека SW-620
Группы	Суммарная доза*	Средний объем опухоли (Vср [÷d] мм3) на сутки после трансплантации		Т/C, % на сутки после окончания лечения
		11	16	4	10
Контроль, 0,9% NaCl	1,0 мл	398 [254÷542]	1219 [78÷1703]	100	100
ЛО	1000 Е/кг	108 [77÷139]	577 [б.разброс]	27**	46
Примечание: n=10; * интервал 24 часа; ** достоверно к контрольной группе, p<0,05

Таблица 2
Результаты изучения эффективности и переносимости L-лизин-альфа-оксидазы при многократном внутривенном введении иммунодефицитным мышам Balb/c nude с подкожными ксенографтами рака толстой кишки человека LS-174T
Группа	Суммарная доза	Средний объем опухоли (Vср [÷d] мм3) на сутки после трансплантации		Т/C, % на сутки после окончания лечения
		12	17	1	6
Контроль, 0,9% NaCl	1,0 мл	284 [205÷363]	419 [157÷681]	100	100
ЛО	450 Е/кг	105 [82÷128]	337 [207÷467]	37**	80
Примечание: n=12; * интервал 48 часов; ** достоверно к контрольной группе, p<0,05

Таблица 3
Результаты изучения эффективности и переносимости L-лизин-альфа-оксидазы при многократном внутрибрюшинном введении иммунодефицитным мышам Balb/c nude с подкожными ксенографтами рака толстой кишки человека НСТ-116
Группа	Суммарная доза	Средний объем опухоли (Vср [÷d] мм3) на сутки после трансплантации		Т/C, % на сутки после окончания лечения
		10	14	1	4
Контроль, 0,9% NaCl	1,0 мл	864 [413÷1315]	2041 [1065÷3017]	100	100
ЛО	450 Е/кг	105 [0÷222]	552 [198÷750]	12**	27**
Примечание: n=10; * интервал 48 часов; ** достоверно к контрольной группе, p<0,05

Технический результат

Технический результат заявляемого способа лечения различных ксенографтов рака толстой кишки состоит в достижении:

- достоверного торможения роста подкожных ксенографтов рака толстой кишки человека НСТ-116 у иммунодефицитных мышей, более высокого по сравнению с прототипом, при удовлетворительной переносимости и отсутствии признаков гастроинтестинальной токсичности,

- достоверного торможения роста подкожных ксенографтов рака толстой кишки SW-620 у иммунодефицитных мышей при удовлетворительной переносимости и отсутствии признаков гастроинтестинальной токсичности,

- достоверного торможения роста подкожных ксенографтов рака толстой кишки человека LS-174T у иммунодефицитных мышей при удовлетворительной переносимости и отсутствии признаков гастроинтестинальной токсичности.

Заявляемый способ лечения рака толстой кишки L-лизин-альфа-оксидазой Trichoderma cf. aureoviride Rifai BKMF-4268D в сравнении с терапией иринотеканом является более эффективным в отношении рака толстой кишки человека НСТ-116 без клинических признаков развития лимитирующей гастроинтестинальной токсичности, а также обеспечивает достоверное торможение роста рака толстой кишки человека LS-174T и SW620.