Получение мутаций или генная инженерия, ДНК или РНК, связанные с генной инженерией, векторы, например плазмиды или их выделение, получение или очистка, использование их хозяев: .....для дрожжей – C12N 15/81

Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа синтеза целевого секретируемого белка человека в клетках дрожжей Saccharomyces cerevisiae. Способ включает культивирование в подходящих условиях дрожжей Saccharomyces cerevisiae и секрецию целевого белка, причем секреция направлена лидерным полипептидом, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO1 и представляющим собой вариант про-области лидерного полипептида белка PpPIR1 Pichia pastoris. Представленное изобретение расширяет арсенал способов получения целевого белка в дрожжах Saccharomyces cerevisiae и увеличивает возможности для эффективного синтеза таких белков. 2 ил., 4 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии и вирусологии. В настоящем изобретении раскрывается кодон-оптимизированный ген, кодирующий главный капсидный белок L1 вируса папилломы человека, который способен, после трансдукции в клетку дрожжей, к эффективной экспрессии главного капсидного белка L1 вируса папилломы человека. Описана также иммуногенная макромолекула, которая преимущественно образуется при экспрессии указанного кодон-оптимизированного гена, кодирующего главный капсидный белок L1 вируса папилломы человека в клетке дрожжей. Также раскрывается применение указанной иммуногенной макромолекулы и композиции, включающей указанную иммуногенную макромолекулу. Предложенная группа изобретений может быть использована в медицине для вакцинации против вируса папилломы человека. 8 н. и 7 з.п. ф-лы, 21 ил., 11 табл., 22 пр.

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Культивируют микроорганизм-продуцент в подходящей питательной среде с последующим выделением и очисткой целевого белка. При этом в качестве продуцента используют дрожжи Saccharomyces cerevisiae, трансформированные вектором экспрессии, который содержит область инициации репликации эндогенной 2-мкм плазмиды дрожжей Saccharomyces cerevisiae, а также промотор GAL1 дрожжей, контролирующий экспрессию гена, включающего последовательность ДНК SEQ ID NO:1, кодирующую слитый белок, составными частями которого являются аминокислотные последовательности белка E7-PISP70 и белка убиквитина дрожжей Saccharomyces cerevisiae, занимающего в составе слитого белка N-концевое положение, заканчивающегося сайтом процессинга, отделяющим его от последовательности белка E7-HSP70 и распознаваемым природными убиквитин-специфичными протеиназами дрожжей. Штамм дрожжей Saccharomyces cerevisiae ВКПМ Y-3853 - продуцент белка E7-HSP70 - получают путем трансформации вектором экспрессии pPDX3U-E7-HSP70 штамма дрожжей Saccharomyces cerevisiae D702. Группа изобретений обеспечивает высокий уровень биосинтеза и выход очищенного белка E7-HSP70, получение водорастворимого корректно процессированного белка E7-HSP70, принципиальное отсутствие в препаратах белка E7-HSP70 токсичного и пирогенного ЛПС бактерий. 2 н.п. ф-лы, 4 ил., 12 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии и генной инженерии. Получен штамм дрожжей Saccharomyces cerevisiae, способный продуцировать секретируемый соматотропин человека. Данный штамм содержит под контролем промотора последовательность ДНК, кодирующую зрелый соматотропин человека, слитый в одной рамке считывания с лидерным пептидом. Лидерный пептид включает удвоенную про-область -фактора дрожжей Saccharomyces cerevisiae. Он также может содержать утроенную про-область -фактора дрожжей Saccharomyces cerevisiae, или удвоенную про-область белка HSP150 дрожжей Saccharomyces cerevisiae, или комбинацию указанных про-областей. Способ получения соматотропина человека предусматривает культивирование штамма-продуцента соматотропина человека. Применение изобретения обеспечивает повышение выхода целевого продукта. 2 н.п. ф-лы, 1 ил., 8 пр.

Изобретение относится к генной инженерии и микробиологической промышленности и касается генетической конструкции для экспозиции белка на поверхности клеточной стенки Yarrowia lipolytica. Представленная конструкция содержит промотор, терминатор, сигнальную последовательность, селективный маркер, нуклеотидную последовательность, кодирующую иммобилизируемый белок, и нуклеотидную последовательность, кодирующую аминокислотную последовательность, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы последовательностей, приведенных в списке последовательностей под номером SEQ ID NO:1 или SEQ ID NO:2, или SEQ ID NO:3, или SEQ ID NO:4, или SEQ ID NO:5, или SEQ ID NO:6. Представленное изобретение позволяет упростить процесс очистки продуцируемого клеткой белка и может быть использовано для микробиологического получения белков. 7 ил., 11 пр., 1 табл.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа получения рекомбинантных белков паутины паука-кругопряда в клетках дрожжей, слитых белков, содержащих последовательности рекомбинантных белков паутины паука-кругопряда, рекомбинантных ДНК, кодирующих слитые белки, клеток-хозяев дрожжей и векторов экспрессии, используемых для осуществления способа, а также штаммов - продуцентов рекомбинантных белков паутины паука-кругопряда. Способ включает конструирование вектора экспрессии, содержащего последовательность ДНК, кодирующую рекомбинантный белок паутины паука-кругопряда, слитую с последовательностью, кодирующую убиквитин или убиквитин-подобный белок SUMO дрожжей Saccharomyces cerevisiae, которая занимает в составе слитого белка N-концевое положение по отношению к рекомбинантному белку паутины, трансформацию клеток дрожжей полученным вектором экспрессии и экспрессию в трансформированных клетках белка паутины паука-кругопряда. Представленный способ позволяет увеличить продукцию рекомбинантного белка паутины при накоплении последнего в клетках дрожжей в водонерастворимой фракции в виде белка, не содержащего гибридный компонент. 7 н. и 17 з.п. ф-лы, 6 ил., 12 пр.

Изобретение относится к биотехнологии, к способу получения полиненасыщенных жирных кислот в семени трансгенного растения. Способ включает введение в растительный организм нуклеиновых кислот, последовательности которых кодируют ферменты с активностью -6-дезатуразы, -6-элонгазы, -5-дезатуразы, -5-элонгазы, -4-дезатуразы и -12-дезатуразы. Способ позволяет увеличить содержание жирных полиненасыщенных кислот в семени трансгенного растения. 18 з.п. ф-лы, 33 ил., 24 табл., 61 пр.

Изобретение относится к биотехнологии. Описана дрожжевая клетка, включающая интерференционную конструкцию ДНК. Конструкция включает: ген-репортер, находящийся под контролем первого промотора; один или несколько индуцируемый(ых) промотор(ов), так называемый(ых) промотор(ов) интерференции, выбираемый(ых) и фиксированный(ых) таким образом, что его(их) активация вызывает транскрипционную интерференцию первого промотора, приводящую к поддающемуся обнаружению уменьшению экспрессии гена-репортера. При этом клетка экспрессирует: первый химерный белок (Y-AD), образованный доменом активации транскрипции (AD), слитый с белком Y, способным взаимодействовать по меньшей мере с белком-партнером X; второй химерный белок (X-DBD), образованный первым, ДНК-связывающим доменом (DBD), слитым со вторым доменом, образованным белком X, способным взаимодействовать с белком Y, причем взаимодействие двух химерных белков X-DBD и Y-AD приводит к конструкции функционального фактора транскрипции, активирующего промотор или промоторы интерференции. Преложен способ идентификации соединения, ингибирующего взаимодействие первого белка X со вторым белком Y. Изобретение позволяет осуществлять детектирование прерывания взаимодействия белок-белок, а также осуществлять идентификацию дефицитных аллелей на уровне взаимодействия белков, принимающих участие во взаимодействиях белок-белок. 5 н. и 22 з.п. ф-лы, 32 ил., 4 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой штамм дрожжей Pichia pastoris PS108 (pChIG) - продуцент гамма-интерферона цыпленка, трансформированный плазмидой pChIG. Такая плазмида pChIG, обеспечивающая биосинтез гамма-интерферона цыпленка, имеет размер 8,19 т.п.о. и состоит из следующих элементов:

- EcoRI-BamHI - фрагмента плазмидной ДНК бифункционального бактериально-дрожжевого вектора pPIC9 размером 7,75 т.п.о.,

- BglII-EcoRI - фрагмента размером 0,44 т.п.о., содержащего кодирующую часть гена гамма-интерферона цыпленка, за исключением области, кодирующей сигнальный пептид. Причем ген гамма-интерферона цыпленка получен способом обратной ПЦР-реакции, матрицей для которой служит РНК, полученная из мононуклеаров периферической крови курицы, индуцированных рекомбинантным интерлейкином-2 человека "Ронколейкин"®. Изобретение позволяет получать гамма-интерферон цыпленка с высокой степенью эффективности. 3 н.п. ф-лы, 2 ил.

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к генной инженерии, и может быть использовано в фармакологии. Предложен способ идентификации и/или проверки ингибиторов рецепторных тирозинкиназ, основанный на использовании новой тест-системы, которая представляет собой дрожжевую клетку-хозяина, содержащую экспрессионный вектор, включающий последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую слитый белок, по существу состоящий из полной цитоплазматической части исследуемой рецепторной тирозинкиназы и домена димеризации и, при необходимости, дополнительно включающий последовательность для «заякоривания» слитого белка в мембране, где экспрессия слитого белка приводит к прекращению пролиферации клеток. Способ предусматривает получение указанных клеток-хозяев, контактирование этих клеток с соединением-кандидатом и идентификацию ингибиторов активности тестируемой тирозинкиназы по результатам их культивирования, исходя из того, что ингибирование активности тирозинкиназы соединением-кандидатом ведет к восстановлению процесса пролиферации. Перспективы применения изобретения связаны с разработкой селективных лекарственных, в том числе противораковых, препаратов. 3 н. и 10 з.п. ф-лы, 3 ил.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к применению трансформированной клетки Saccharomyces cerevisiae, принадлежащей к штамму, применяющемуся в виноделии, способной к увеличенной по сравнению с нетрансформированной клеткой указанного штамма деградации мочевины в условиях ферментации виноградного сусла. Клетка трансформирована рекомбинантной нуклеиновой кислотой, содержащей последовательность, включающую открытую рамку считывания, гомологичную открытой рамке считывания DUR1,2 и кодирующую белок, имеющий мочевино-деградирующую ферментативную активность, и промотор, подходящий для опосредования экспрессии белка, имеющего мочевино-деградирующую ферментативную активность, в условиях ферментации виноградного сусла. Изобретение позволяет получить вино, не отличающееся по своим органолептическим свойствам от вина, полученного с помощью нетрансформированной клетки. 7 н. и 6 з.п. ф-лы, 7 ил., 1 табл.

Изобретение относится к области генной инженерии и биотехнологии и может быть использовано для получения рекомбинантного механозависимого фактора роста человека (MGF). Рекомбинантный механозависимый фактор роста человека получают путем выращивания клеток дрожжей, содержащих плазмиду, которая обеспечивает экспрессию секретируемой формы этого белка, и выделения целевого продукта из культуральной жидкости. Плазмида, обеспечивающая экспрессию секретируемой формы механозависимого фактора роста человека, содержит экспрессионную кассету, включающую промотор гена GAL1 и область терминации транскрипции гена CYC1 дрожжей, пре-про область гена MF 1 и последовательность ДНК, кодирующую целевой белок. Эту плазмиду конструируют на основе плазмиды рКХ. Для получения механозависимого фактора роста человека используют также штамм Saccharomyces cerevisiae YBS618/pKX-MGF - продуцент указанного белка. Применение изобретения позволяет экспрессировать механозависимый фактор роста человека в дрожжах в секретируемой форме. 5 н. и 1 з.п. ф-лы, 2 ил., 1 табл.

Изобретение относится к области биотехнологии и препаративной биохимии и может быть использовано в биофамакологии и медицине. Клетки дрожжей P.pastoris последовательно трансформируют двумя разными генетическими конструкциями, содержащими ген предшественника человеческого сывороточного альбумина (ЧСА). Полученный штамм-продуцент культивируют в питательной среде. Рекомбинантный ЧСА выделяют из культуральной среды путем осветления указанной среды, а также проведения стадий последовательного центрифугирования при 2000 и 10000 g, ультрафильтрации, диализа и катионообменной хроматографии на колонке Source S. Целевой продукт представляет собой элюат, включающий рекомбинантный человеческий сывороточный альбумин, 50-мМ фосфатный буфер, содержащий 400 мМ хлорида натрия, с рН 9. Применение изобретения позволяет расширить арсенал средств, направленных на получение рекомбинантного ЧСА, и получать рекомбинантный ЧСА в виде продукта, который помимо рекомбинантного ЧСА содержит 50-мМ фосфатный буфер, содержащий 400 мМ хлорида натрия, и имеет рН 9. 2 н.п. ф-лы, 6 ил.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается штамма дрожжей Pichia pastoris PS106(pHIG) - продуцент иммунного интерферона человека, рекомбинантной плазмиде, которой трансформирован этот штамм, а также к способу конструирования такой плазмиды. Посредством представленного изобретения может быть получен рекомбинантный гамма-интерферон и может быть секретирован в культуральную среду в производственных масштабах. Преимущество изобретения заключается в разработке плазмиды, способной вырабатывать рекомбинантный гамма-интерферон для крупномасштабного производства. 3 н.п. ф-лы, 2 ил.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для получения препаратов гибридных белков. Штамм дрожжей Pichia pastoris PS99 (his4 pep4::PHO85) трансформируют сконструированной плазмидой pPIC9HAbIL-2 и получают штамм Pichia pastoris PS107 (pPIC9HAbIL-2) - продуцент гибридного белка, состоящего из альбумина плазмы крови человека и ИЛ-2 человека. Изобретение обеспечивает получение высокостабильного гибридного белка альбумина плазмы крови человека и ИЛ-2 человека по упрощенной технологии. 3 н.п. ф-лы, 2 ил.

БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНАЯ ЖИВОТНАЯ ⁵ - ДЕСАТУРАЗА ЖИРНЫХ КИСЛОТ, КОДИРУЮЩАЯ ЕЁ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ ДНК, КЛОНИРУЮЩИЙ И ЭКСПРЕССИРУЮЩИЙ ВЕКТОРЫ, СОДЕРЖАЩИЕ УКАЗАННУЮ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ, СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИНЕНАСЫЩЕННЫХ ЖИРНЫХ КИСЛОТ, СПОСОБ ПРЕВРАЩЕНИЯ ДИГОМО--ЛИНОЛЕНОВОЙ КИСЛОТЫ В АРАХИДОНОВУЮ КИСЛОТУ, ЗОНД (ВАРИАНТЫ) И СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ⁵ - ДЕСАТУРАЗЫ С ЕГО ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к генной инженерии, и может быть использовано в фармацевтической и пищевой промышленности для получения полиненасыщенных жирных кислот. Выделена и охарактеризована последовательность ДНК (1341 п.н.), кодирующая ⁵-десатуразу жирных кислот (447 аминокислотных остатков, 57 кДа) нематоды Caenorhabditis elegans. Путем экспрессии полученной ДНК - последовательности в бактериальных и дрожжевых клетках получена биологически активная рекомбинантная форма фермента, способная катализировать превращение дигомо--линоленовой кислоты в арахидоновую кислоту и эйкозатетраеноата в эйкозапентаеноат. Применение изобретения обеспечивает возможность масштабирования процесса получения полиненасыщенных жирных кислот. 10 с. и 5 з.п. ф-лы, 4 ил.

Изобретение относится к генной инженерии. Клонирование нуклеотидной последовательности в дрожжах позволяет получить белок, обладающий дельта-5,7 стерин, дельта-7 редуктазной активностью. Восстановление стерина в положении С-7 может быть использовано для получения прегненолона и гидрокортизона, а использование соответствующего гибридизационного зонда - для выявления недостаточности в организме человека дельта-5,7 стерин, дельта-7 редуктазы, например его врожденной недостаточности, а также у пациентов, страдающих разнообразными заболеваниями, например с клиническим проявлением синдрома RSH/SLO. 21 н. и 10 з.п. ф-лы, 30 ил., 2 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ экспрессии полипептидов в дрожжах путем культивирования дрожжевого штамма, который не содержит функционального маркерного гена устойчивости к антибиотику. Трансформированные таким образом дрожжевые клетки продуцируют гетерологичный белок с более высоким выходом. 6 ил., 3 табл.

Изобретение относится к биотехнологии. Способ получения эргостерола и его промежуточных продуктов основан на использовании рекомбинантных дрожжей, способных синтезировать увеличенные количества эргостерола, и плазмид для трансформации дрожжей. Предпочтительным видом дрожжей является вид S. cerevisiae. В качестве плазмид используются вектора экспрессии YEpH2, pADL-SAT1 и YDpUHK3, в каждый из которых встроена кассета экспрессии, содержащая средний ADH1-промотор и терминатор TRP. Образующиеся в результате сверхэкспрессии продукты могут быть использованы для различных биотрансформаций. 9 н. и 7 з.п. ф-лы, 4 ил., 5 табл.