Использование: ветеринария. Сущность изобретения: внутриназально или внутритрахеально животным вводят эндонуклеазу Serratia marcescens в разовой дозе 2,0 - 5,0 тыс. ед. активности на 100 кг веса животного в смеси с водорастворимой солью магния, при этом обработку животных осуществляют двукратно с интервалов в 7 - 10 дней. Способ позволяет снизить заболеваемость животных с 70 до 15% . 1 з. п. ф-лы, 2 табл.
1. СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ ВИРУСНЫХ РЕСПИРАТОРНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ЖИВОТНЫХ, включающий эндотрахеальное введение ферментов, отличающийся тем, что из ферментов используют эндонуклеазу Serratia marcescens, которую вводят в дозе 2,0 - 5,0 тыс. ед. активности на 100 кг массы животного двукратно с интервалом 7 - 10 дней в смеси с водорастворимой солью магния. 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что из водорастворимой соли магния используют хлористый магний в концентрации 0,01% .
Описание изобретения к патенту
Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано для снижения заболеваемости животных острыми респираторными вирусными инфекциями. При комплектовании промышленных комплексов по откорму молодняка крупного рогатого скота наиболее актуальной проблемой является профилактика и лечение вирусных респираторных заболеваний животных, которые поражают до 75 % от общего поголовья скота. Вирусные респираторные заболевания вызываются разнообразными вирусами, содержащими ДНК и РНК (риновирус, реовирус, респираторно-синтициальный, инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, аденовирус 12 подгруппы, вирусная диаррея). Переболевшие животные теряют привесы, отстают в росте и развитии, большинство из них приходится сдавать на убой, неся значительные убытки. Известны способы профилактики респираторных заболеваний телят с помощью распыления различных видов лекарственных препаратов, дезинфицирующих воздух животноводческих помещений и санирующих органы дыхания. С этой целью используют йодтриэтиленгликоль, скипидар, молочную кислоту, 3% -ный раствор перекиси водорода, 5% -ный раствор хлорамина, гипохлорид натрия, 1,5-2,0% -ный раствор хлора, резорцин, йодинол. Известны способы профилактики и лечения респираторных заболеваний животных с применением сульфамидных, нитрофурановых препаратов (тилофур, фурмазин, фуразолидон), антибиотиков (стрептомицин, пенициллин), вводимых подкожно, внутримышечно или аэрозольным методом. Основным недостатком этих способов является их недостаточная эффективность в связи с отсутствием у данного вида препаратов прямого противовирусного действия. Применение подобных препаратов наиболее оправдано для лечения респираторных заболеваний невирусной этиологии. Кроме того, аэрозольное распыление антибиотиков "загрязняет" окружающую среду, представляет угрозу здоровью обслуживающего персонала, провоцирует изменение микробного пейзажа на животноводческих фермах. Поэтому существует необходимость в проведении надежных методов по инактивации и нейтрализации "остаточных" аэрозолей. Кроме того, применение растворов антибиотиков высокой концентрации вызывает угнетение или паралич мерцательного эпителия дыхательных путей животных. Известен способ профилактики вирусных респираторных болезней телят, включающий использование антимикробных средств (антибиотиков) и иммунных препаратов (гипериммунная сыворотка, вакцины). Способ предусматривает многократную обработку телят. Основным недостатком известного способа является его низкая эффективность, так как до 48% животных заболевают бронхопневмонией. Недостатком применения гипериммунных сывороток и сывороток реконвалисцентов является также непродолжительный срок пассивного иммунитета (10-14 дней) и трудоемкость метода. Не создают полноценного иммунитета к вирусным заболеваниям и вакцины, во-первых, из-за низкой иммунологической реактивности животных и, во-вторых, ввиду недостатка времени для формирования у телят полноценной иммунологической невосприимчивости к респираторным инфекциям. Наиболее близким к заявляемому способу является способ профилактики и лечения бронхопневмонии телят, заключающийся в следующем. Больных телят в возрасте 2-4 мес подвергают аэрозольной обработке поочередного гидролитическими ферментами (трипсином, дезоксирибонуклеазой) и противомикробными средствами совместно с перекисью водорода. Для этого животных помещают в камеры (20 куб. м) и распыляют трипсин из расчета 25 мг фермента на 1 куб. м камеры в течение 30 мин двукратно через день, а дезоксирибонуклеазу (ДНК-азу) из расчета 25 мг на 1 куб. м камеры однократно между обработками трипсином в течение 30 мин. Трипсин разводят изотоническим раствором натрия хлорида или 1% -ным раствором натрия гидрокарбоната, а дезокстирибонуклеазу растворяют в 0,03% -ном растворе сульфата магния (ионы магния являются коферментом дезоксирибонуклеазы). В эти же дни, через 3 ч после применения ферментов, больных телят обрабатывают аэрозолью 3% -ного раствора перекиси водорода и 0,02% -ного раствора фурацилина. При необходимости животным назначают симптоматическое лечение. Основными недостатками прототипа являются недостаточная эффективность профилактики вирусных респираторных болезней животных, составляющая 22-46% (без применения антибиотиков эффективность еще ниже); используемые в способе трипсин и ДНК-азу получают из дорогостоящего сырья животного происхождения (поджелудочная железа крупного рогатого скота) и выпуск их не удовлетворяет потребностей медицинской практики; большой расход ферментных препаратов ( 1 г) для создания лечебной концентрации в камере для аэрозольной терапии. Целью изобретения является повышение эффективности способа. Цель достигается тем, что животным эндотрахеально вводят бактериальную эндонуклеазу в смеси с водорастворимой солью магния в разовой дозе 2,0-5,0 тыс. ед. акт. на 100 кг массы тела животного двукратно через 7-10 дней. Эндонуклеаза Serratia marcescens представляет собой фермент бактериального происхождения, воздействующий и расщепляющий одномоментно ДНК и РНК вирусов. Она разрушает целостность информации, которую несут полинуклеотиды, нарушает кодирование синтеза новых молекул вирусных нуклеиновых кислот, вирусных белков, тормозит размножение вирусов. Эндонуклеаза выпускается в виде лиофильно высушенного порошка белого цвета с удельной активностью не менее 100000 ед. активности (ед. акт. ) в 1 мг белка, хорошо растворима в воде, нерастворима в органических растворителях, малотоксична, обладает слабовыраженным сенсибилизирующим действием при внутрибрюшинном введении животным, не действует раздражающе на кожу и слизистые оболочки глаз. Препарат эндонуклеазы, упакованный герметично в стеклянный флакон, может храниться без потери активности при 0-25оС в течение двух лет. К флакону с препаратом прилагается второй флакон, содержащий 1 г магния хлористого шестиводного для активации эндонуклеазы. Способ осуществляют следующим образом. Формируют группы животных, например телят, 15-30-дневного возраста средней массы тела около 59 кг, поступающих из различных хозяйств-поставщиков. Препарат перед употреблением растворяют в дистиллированной воде из расчета введения 10 мл с 2,0-5,0 тыс. ед. акт. на 100 кг веса животного. Для активации фермента на 1 флакон препарата (100000-150000 ед. акт. ) добавляют 1,0 г хлористого магния. Внутритрахеальное введение препарата проводят в области 4-6 трахеального кольца через обычную иглу (инъекционную), соединенную резиновым шлангом с аппаратом Шилова. При внутриназальном применении в носовые ходы вводят по 5 мл раствора через каждую ноздpю, при этом голову теленка необходимо приподнять. Для введения используют полиэтиленовую трубочку с множеством мелких отверстий на одном конце, а второй конец ее присоединяю к аппарату Шилова. Первое введение препарата эндонуклеазы осуществляют по мере комплектования групп телят (2-3 дня), повторное введение проводят через 7-10 дней. Преимущественным вариантом использования способа является внутриназальное введение препарата. Следствием профилактического действия эндонуклеазы предлагаемым способом является профилактика (сохранение) респираторных заболеваний в среднем у 85% обработанных животных по сравнению с животными, не получавшими профилактического лечения, и повышение эффективности профилактики в среднем на 30% (с 52,9 до 85% ) по сравнению с животными, получавшими традиционное профилактическое лечение. Определяющим существенным отличием предлагаемого способа является использование для профилактики вирусных респираторных заболеваний животных бактериальной эндонуклеазы в разовой дозе 2,0-5,0 тыс. ед. акт. на 100 кг веса животного в экспериментально подобранном оптимальном режиме (в смеси с хлоридом магния, двукратно с интервалом 7-10 дней), что позволяет существенно повысить эффективность способа за счет одномоментного ингибирования у животных РНК и ДНК-содержащих вирусов. Специфическое действие эндонуклеазы проявляется в ее способности гидролизовать полинуклеотидные цепи РНК и ДНК и тем самым подавлять размножение РНК и ДНК-содержащих вирусов. При использовании эндонуклеазы в дозе менее 2,0 тыс. ед. акт. и уменьшении кратности введения профилактический эффект снижается с 10 до 59% , а при увеличении дозы выше 5,0 тыс. ед. акт. провоцирует появление у животных побочных эффектов (одышку, мышечную дрожь, повышение температуры и др. ). Зависимость эффективности профилактики бронхопневмонии животных от доз используемой эндонуклеазы и режима применения представлена в табл. 1. Из табл. 1 видно, что наиболее оптимальной профилактической разовой дозой является доза эндонуклеазы 2,0-5,0 тыс. ед. акт. на 100 кг веса животного, причем повторное введение препарата необходимо осуществить через 7-10 дней. Испытание предлагаемого способа в производственных условиях осуществляли на промышленных комплексах по выращиванию молодняка крупного рогатого скота Ленинградской и Вологодской областей при вспышке острых респираторных заболеваний (ОРЗ). Эффективность профилактики вирусных респираторных заболеваний животных была проверена на 6002 телят, из них 3602 животных составляли опытную группу, а 2400 телят - контрольную. В опытной группе, получавшей бактериальную эндонуклеазу в дозе 2,0-5,0 тыс. ед. акт. (на 100 кг массы), бронхопневмонией переболело 549 (15,2% ) телят, а в контрольной группе, получавшей традиционную профилактику (антисептики, антимикробные средства и др. ) заболело 1269 или 52,9% телят. Результат производственных испытаний профилактического действия бактериальной эндонуклеазы (доза 2,0-5,0 тыс. ед. акт. , в режиме два раза 7-10 дней) при вирусных респираторных заболеваниях молодняка крупного рогатого скота представлены в табл. 2. В связи с тем, что в известных научно-технических и патентных источниках сведений об использовании бактериальной эндонуклеазы для профилактики и лечения вирусных респираторных заболеваний животных заявителем не обнаружено, можно сделать вывод, что заявленное техническое решение соответствует критерию изобретения "существенные отличия". П р и м е р 1. В совхозе "Искра" Ленинградской области при комплектовании комплекса по откорму молодняка крупного рогатого скота сформировано две группы: опытная - 1120 бычков и контрольная - 1100 бычков. Через 2-3 дня после комплектования бычкам опытной группы внутриназально ввели эндонуклеазу бактериальную в дозе 4,0 тыс. ед. акт. на 100 кг массы животного. Через 7 дней введение повторили в той же дозе. Бычкам контрольной группы проводили профилактику вирусных инфекций с помощью распыления 3% -ной перекиси водорода или 5% -ного раствора хлорамина. В опытной группе переболело бронхопневмонией 34 животных (3% ), преждевременно выбыло с откорма 16 бычков (1,4% ), в то время как в контрольной группе переболело 363 бычка (33% ), а выбраковано 61 животное (5,3% ). В контрольной группе заболевание протекало тяжело, выздоровление наступало на 10-14 день, а в опытной группе заболевание бронхопневмонией протекало в более легкой форме и выздоровление наступало в течение 5 дней. Таким образом, эффективность профилактики увеличена в 10 раз (с 33 до 3% ). П р и м е р 2. В совхозе "Волна" Ленинградской области для испытания профилактического действия эндонуклеазы сформировано две группы молодняка крупного рогатого скота: опытная - 1600, контрольная - 800 бычков. Бычкам опытной группы в период комплектования вводили эндонуклеазу внутриназально в дозе 2,0 тыс. ед. акт. (на 100 кг веса) с последующим повторным введением эндонуклеазы в этой же дозе через 10 дней. Бычки контрольной группы профилактического лечения не получали. В опытной группы переболело 368 бычков (23,7% ), отбраковано 16 бычков (1,0% ), а в контрольной группе переболело бронхопневмонией 588 бычков (73,5% ), преждевременно выбыло с откорма 21 бычок (2,6% ). Одновременно отмечено снижение общей заболеваемости респираторными заболеваниями до 43% , в то время как в контрольной группе она достигала 91% . Таким образом, эффективность профилактики увеличена в 3 раза (с 73,5 до 23,7% ). П р и м е р 3. В совхозе "Искра" для проведения испытания профилактического действия эндонуклеазы сформировано 2 группы телят по 20 голов в каждой. В опытной группе телятам вводили двукратно эндонуклеазу в разовой дозе 5,0 тыс. ед. акт. внутриназально с интервалом в 8 дней. В контрольной группе проводили профилактику с помощью традиционных антимикробных средств. В опытной группе заболел один теленок (5% ), в контpольной - 11 (55% ). Эффективность профилактики повышена в 10 раз (с 55 до 5% ). П р и м е р 4. В ОПХ Ленинградского ветеринарного института для испытания профилактического действия эндонуклеазы сформировано две группы: опытная - 10 бычков, контрольная - 10 бычков. Через 4 дня после укомплектования групп бычкам опытной группы внутриназально ввели эндонуклеазу в дозе 1,0 тыс. ед. акт. (на 100 кг массы животного). Через 7 дней введение препарата повторили в той же дозе. Бычкам контрольной группы проводили профилактику аэрозолью 3% -ного раствора перекиси водорода и 0,02% -ного раствора фурацилина. В опытной группе переболело 4 бычка (40% ), в контрольной - 5 бычков (50% ). Эффективность профилактики увеличена всего на 10% по сравнению с традиционной профилактикой вирусных респираторных заболеваний животных. П р и м е р 5. В ОПХ Ленинградского ветеринарного института для испытания и подбора эффективной дозы бактериальной эндонуклеазы с целью профилактики вирусных респираторных заболеваний животных сформировано две группы: опытная - 20 бычков, контрольная - 15 бычков. Бычкам опытной группы внутриназально двукратно с интервалом в 10 дней вводили эндонуклеазу в дозе 10 тыс. ед. акт. (на 100 кг массы животного). Бычки контрольной группы подвергались традиционной профилактической обработке 5% -ным раствором хлорамина. В опытной группе переболело 3 бычка (15% ), у части животных наблюдалось кратковременное слезотечение, выделение слизи из носа. В контрольной группе переболело 8 бычков (53% ). Таким образом эффективность профилактики повысилась на 40 -% , однако доза эндонуклеазы в 10 тыс. ед. акт. вызывала у животных побочные аллергические реакции. Использование предлагаемого способа позволит по сравнению с прототипом существенно повысить эффективность профилактики с 54-78 до 85% ; сократить дозы вводимых ферментов в 1,8 раз; с 18 до 10 мг на одно животное, а суммарный расход препаратов в 100 раз (с 1 г до 10 мг); исключить из способа дефицитные, дорогостоящие ферменты животного происхождения, имеющие широкое использование в медицинской практике; получить значительный экономический эффект за счет сохранения поголовья животных; исключить необходимость в типировании вирусной инфекции (а это занимает срок 10-14 дней), так как эндонуклеаза обладает ингибирующим действием на РНК и ДНК-содержащие вирусы. Способ прост в осуществлении, не требует больших затрат времени и физических усилий, доступен ветеринарным специалистам средней квалификации. Способ не вызывает "загрязнения" окружающей среды, изменения ее микробиологического пейзажа за счет введения раствора интраназально. Кроме того, эндонуклеаза относится к ферментам, сходным по строению с собственными ферментами животного. После взаимодействия с вирусом эндонуклеаза подвергается автолизу. Использование предлагаемого способа по сравнению с известным позволит впервые в мировой практике откорма молодняка животных применить специфическое средство против вирусных респираторных заболеваний. При этом препарат бактериальной эндонуклеазы доступен для массового использования, поскольку освоен промышленностью (Вышневолоцкий завод ферментных препаратов), производство которого при необходимости может быть значительно увеличено. (56) Драгомир А. В. Профилактика респираторных болезней. Ветеринария, 1980, N 9, с. 10-12. Карпунь И. М. , Севрюк И. З. Аэрозоли лекарственных веществ при лечении бронхопневмоний телят. Ветеринария. 1985, N 9, с. 50-52.