средство для лечения алкогольных поражений внутренних органов

Формула изобретения

Применение 3-(2,2,2-триметилгидразиний)пропионата (милдроната) для лечения алкогольных поражений внутренних органов.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии.

Известно применение для лечения алкогольных поражений внутренних органов витаминотерапии, проведение дезинтоксикационного и симптоматического лечения.

К недостаткам витаминотерапии следует отнести ее низкую эффективность и наличие целого ряда противопоказаний: тяжелые болезни печени, наклонность к аллергическим реакциям, повышение свертываемости крови, тромбофлебиты, язвенная болезнь.

Дезинтоксикационная терапия имеет важное значение для купирования абстинентного синдрома и нормализации общего состояния больного. Однако при этом не наблюдается полного восстановления обменных процессов, что приводит в конечном итоге к дальнейшему прогрессированию поражений внутренних органов.

Симптоматическое лечение не соответствует этиопатогенетическому принципу и направлено не на устранение причины, вызвавшей заболевание, а лишь ее последствий.

Цель изобретения - коррекция алкогольных висцеропатий.

Указанная цель достигается применением для коррекции алкогольных поражений внутренних органов известного химического соединения - 3-(2,2,2-триметилгидразиний) пропионата (милдроната). Являясь структурным аналогом естественного метаболита, участвующего в окислительно-восстановительных процессах, милдронат оказывает стимулирующее действие на энергетические и синтетические процессы в клетке при гипоксии. Это вещество обладает низкой токсичностью (ЛД₅₀ 23000 мг/кг при пероральном введении белым мышам), не обладает мутагенными, канцерогенными, эмбриотоксическими или тератогенными свойствами.

Применение милдроната для коррекции алкогольных висцеропатий позволяет наряду с нормализацией биоэнергетических и синтетических процессов стабилизировать клеточные мембраны, повреждение которых является ведущим механизмом в патогенезе алкогольных поражений внутренних органов.

Данный лекарственный препарат впервые применяется для коррекции алкогольных поражений внутренних органов, что соответствует критерию "новизна".

Известно применение милдроната в качестве лекарственного средства, обладающего антиишемическим действием и повышающего физическую активность.

В изобретении милдронат наряду с ранее известными свойствами нормализовать окислительно-восстановительные процессы в клетке в условиях гипоксии и стимулировать репаративный и репликативный синтез ДНК, проявляет новое - мембранопротекторное свойство. Это позволяет сделать вывод о соответствии изобретения критерию "существенные отличия".

Пример конкретного выполнения. Опыты проводились на 250 белых крысах линии "Вистар" массой 180-250 г. Животные находились в условиях стационарного вивария на стандартной диете.

Оценка эффективности применения милдроната проводилась в 2-х сериях экспериментов. Животные каждой серии опытов разбивались на 4 группы.

I серия - изучение влияния милдроната на развитие алкогольных поражений внутренних органов при однократном в/ж введении 48% -ного раствора этанола в дозе 7 г/кг; 1-ю группу составили нелеченные животные; крысам 2-й группы через 10 мин после введения этанола и/п вводился милдронат в дозе 50 мг/кг; 3-ю группу - животные, которым и/п вводился 0,85% -ный раствор хлорида натрия и 4 группа - интактные животные.

II серия - изучение влияния милдроната на восстановление алкогольных поражений внутренних органов после 65 дневного в/ж введения 48% -ного раствора этанола в дозе 4 г/кг, на фоне ингибирования альдегиддегидрогеназы тетурамом: 1-ю группу составили животные, забитые сразу по окончании хронической алкоголизации; крысы 2-й группы забивались на 15 и 30 сутки после отмены этанола и ежедневного в/ж введения водопроводной воды; в 3-й группе животным в течение 15 и 30 дней после 65-дневной алкоголизации вводили в/ж милдронат в виде водного раствора из расчета 50 мг/кг и 4-я группа - контроль.

Животные забивались путем декапитации. Материал фиксировался в растворе нейтрального формалина, заливался в парафин, из части материала готовились замороженные срезы. Парафиновые срезы окрашивались гематоксилин-эозином, по Ван-Гизону и по Ли. Использовались люминесцентно-микроскопические методы на кальций и липиды. Проводилась морфометрическая оценка состояния сердечной мышцы по результатам реакции гистохимического выявления у сукцинатдегидрогеназы (СДГ), с последующим определением показателя сохранности миокарда (ПС), который характеризует распространенность клеток не содержащих гранулярный диформазан (ГД), и показатели повреждения (ПП), который учитывает распространенность и глубину процесса, сопровождающегося выпадением ГД. Кариометрия проводилась с помощью окулярмикрометра после вычисления объемов ядер, определялся модальный класс, средние данные которого логарифмировались и сравнивались между собой в разных опытных группах.

В плазме крови исследовалось содержание общих липидов (ОЛ), триглицеридов (ТГ), неэстерифицированных жирных кислот (НЭЖК) и изоферментов сердечной фракции креатинфосфокиназы (КК-МВ). Использовались готовые наборы фирм "Бюрингер", "Хемапол", отечественные реактивы, определение биохимических показателей проводилось на СФ-26.

Полученные результаты исследования были подвергнуты статистической обработке. Для оценки достоверности различий сравниваемых средних использовались данные специальной таблицы критерия Т (Стьюданта).

Морфологическая оценка влияния милдроната на развитие и восстановление алкогольных поражений внутренних органов проводилась на двух органах - печени и сердце. Выбор данных органов объясняется тем, что печень наиболее восприимчива к повреждающему действию алкоголя и является поэтому своеобразным эталоном при проведении различных экспериментов, связанных с изучением вопросов патогенеза, профилактики и лечения алкогольных поражений внутренних органов, а повреждения миокарда, в свою очередь, наиболее устойчивы к существующим методам их фармакологической коррекции.

В первой серии экспериментов, в миокарде животных, забитых через 5 ч после введения этанола, отмечается выраженное полнокровие, явления интерстициального отека, неравномерная сорбция красителя мышечными волокнами. При окраске по Ли выявляется большое количество кардиомиоцитов с тотальной или сегментарной фуксионофилией. При поляризационной микроскопии наблюдаются сегментарные контрактурные повреждения. Использование люминесцентно-микроскопических методов с примулином, 3,4-бензпиреном и морином выявляет большое количество мышечных волокон с положительной реакцией на продукты распада липопротеидов, свободные липиды и кальций. В плазме крови отмечается резко выраженное повышение концентрации ОЛ, ТГ, НЭЖК и КК-МВ.

Таким образом, результаты гистологического, люминесцентно-микроскопического и биохимического исследования однозначно свидетельствуют о развитии дистрофических и некробиотических изменений в кардиомиоцитах. Ведущим патогенетическим механизмом данного процесса является повреждение клеточных мембран, которое приводит к накоплению в клетке продуктов деградации липопротеидов, свободных липидов, нарушению транспорта электролитов, в частности кальция, и выходу в кровоток не встречающихся в норме изоферментов сердечной фракции креатинфосфокиназы.

В группе животных, получавших милдронат, выраженность всех описанных изменений значительно меньше. Морфометрическая оценка состояния сердечной мышцы по реакции гистохимического выявления СДГ показала статистически достоверное увеличение ПС и уменьшение ПП по сравнению с нелеченными животными (табл. 1). Имеет место статистически достоверное отличие ядерных объемов. У животных, получавших милдронат, объем клеточных ядер больше (1 = 2,497 0,006), чем у просто подвергнутых острой алкоголизации (1 = 2,387 0,006; р < 0,01).

Наряду с этим отмечается мембранопротекторное действие милдроната, о чем свидетельствует значительное уменьшение мышечных волокон с положительной реакцией на продукты распада липопротеидов и кальций, а также статистически достоверное снижение в плазме крови концентрации КК-МВ. Нормализующее действие милдроната наблюдается и при сравнении биохимических показателей жирового обмена (табл. 2).

В группе животных с в/б введением 0,85% раствора хлорида натрия, структурные изменения миокарда не отличаются от таковых, встречающихся у нелеченных животных.

Во второй серии эксперимента в печени животных, забитых после 65-дневной алкоголизации, отмечаются дистрофические и некробиотические изменения гепатоцитов. Встречаются множественные мелкие очаги некроза с лизисом ядер, явлениями дискомплексации и гепатоциты с жировой дистрофией. Наряду с этим наблюдаются большие поля с тяжелой белковой дистрофией типа "баллонная", а также явления склероза и инфильтрации портальных трактов.

В сердце дистрофические изменения мышечных клеток отличаются выраженным полиморфизмом и носят, как правило, очаговый характер, чередуясь с участками неповрежденной ткани. Они представлены очагами зернистой, вакуольной и мелкокапельной жировой дистрофии. Такие клетки неравномерно воспринимают красители: при окрашивании гематоксилин-эозином или эозинофильны, по Ли фуксинофильны, в них исчезает поперечная исчерченность и при просмотре в поляризационном микроскопе выявляются контрактурные повреждения. Гистохимические реакции на сукцинатдегидрогеназу и липиды свидетельствуют о снижении окислительно-восстановительных процессов в мышечных волокнах и появлении в них свободных липидов. Наряду с этим встречается лизис отдельных сегментов и целых кардиомиоцитов, вокруг которых формируются гранулемы рассасывания. Отмечается оживление стромальной реакции с явлениям периваскулярного и интертициального кардиосклероза. В плазме крови наблюдается статистически достоверное повышение уровня ОЛ, ТГ, НЭЖК (табл. 2).

Все это свидетельствует о значительном нарушении обменных процессов и соответствует морфологическим изменениям внутренних органов у лиц с алкогольными висцеропатиями.

У животных, забитых через 15 дней после прекращения введения этанола, наблюдалась тенденция к восстановлению структуры лечения; очаги некроза захватывали только 5-6 гепатоцитов, не наблюдалось явлений балонной дистрофии, меньше были выражены явления дискомплектации и жировое перерождение гепатоцитов.

В миокарде животных, забитых через 30 сут после прекращения алкоголизации, отмечалось уменьшение количества клеток с фуксинофилией и контактурными повреждениями, практически не наблюдалось явлений некробиоза и вакуольной дистрофии кардиомицитов. Однако морфометрическая оценка состояния миокарда по результатам реакции гистохимического выявления СДГ показала статистически достоверное увеличение ПП и уменьшение ПС по сравнению с контрольными данными (табл. 1).

Наряду с этим наблюдается уменьшение среднего объема ядер кардиомниоцитов, повышение уровня КК-МВ и увеличение содержания ОЛ, ТГ, НЭЖК в плазме крови (табл. 2).

Все это свидетельствует о стойком нарушении структурной организации, липидного обмена, биоэнергетических и синтетических процессов при алкогольных висцеропатиях, даже через длительные сроки после прекращения приема этанола.

Иная картина наблюдалась при применении милдроната. В печени животных, забитых через 15 сут, отмечалась активизация системы купферовских клеток, не наблюдалось некрозов, встречалось много двуядерных клеток и клеток с эозинофильной цитоплазмой, происходило восстановление балочной структуры.

В сердце крыс, забитых на 30 сутки лечения милдронатом, отмечается отчетливое восстановление структурных повреждений. При просмотре препаратов, окрашенных по Ли, выявляются лишь единичные мышечные клетки с фуксинофильной саркоплазмой. О восстановлении синтетических и биоэнергетических процессов в сердечной мышце свидетельствует статистически достоверная нормализация объемов клеточных ядер, уменьшение ПП и увеличение ПС миокарда (табл. 1).

Нормализующее действие милдроната наблюдается и при исследовании биохимических показателей жирового обмена и данных определения КК-МВ (табл. 2). Важным показателем эффективности действия милдроната на восстановление нарушенного обмена служит падение массы животных после отмены этанола. Средняя потеря массы животными за 30 дней после прекращения алкоголизации составила в группе нелеченных животных 49,1 4,14 г, а в группе с введением милдроната 8,2 2,2 г.

Все это свидетельствует о высокой эффективности действия милдроната при применении его для коррекции алкогольных поражений внутренних органов.

Применение милдроната для коррекции алкогольных висцеропатий обеспечивает по сравнению с существующими методами лечения следующие преимущества: при использовании милдроната наблюдается ярко выраженный положительный эффект на процессы восстановления структурных повреждений, а также статистически достоверная нормализация липидного обмена, биоэнергетических и синтетических процессов; милдронат обладает низкой токсичностью и отсутствием противопоказаний для его применения.

При положительном клиническом испытании и дальнейшем использовании милдроната в качестве лекарственного средства для лечения алкогольных висцеропатий изобретение принесет определенный медико-социальный и экономический эффект: снизится смертность и инвалидность от алкогольных висцеропатий, снизятся сроки пребывания больных в стационаре по поводу данного заболевания.