производные бензоилмочевины или их фармацевтически приемлемые соли, обладающие противоопухолевой активностью

Формула изобретения

Производные бензоилмочевины общей формулы



где R₁ - водород или галоген,

R₂ и R₃ - каждый водород, C₁ - C₄-алкильная группа, - CO(C₁ - C₈)-алкильная группа или группа - SO₂(C₁ - C₄)-алкил или R₂ и R₃ вместе с соседним атомом азота могут образовывать пиперидиновое или морфолиновое кольцо;

R₄ - галоген, C₁ - C₄-алкильная группа, трифторметильная группа, C₁- C₄-алкоксигруппа или нитрогруппа,

R₅ - галоген,

или их фармацевтически приемлемые соли, обладающие противоопухолевой активностью.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к новым биологически активным соединениям - производным бензоилмочевины или их фармацевтически приемлемым солям, обладающим противоопухолевой активностью, которые могут найти применение в медицине.

Известны производные бензоилмочевины [1[, содержащие в своей структуре фенильное кольцо, непосредственно связанное с группой мочевины. Однако они обладают недостаточно высокой противоопухолевой активностью.

Известны производные бензоилмочевины [2], имеющие заместители при атоме углерода или азота, цепочки карбонилмочевины; эти соединения обладают высокой противоопухолевой активностью, но недостаточно хорошо растворимы в неполярных растворителях.

Цель изобретения - поиск в ряду производных бензоилмочевины, обладающих высокой противоопухолевой активностью, а также хорошей растворимостью в неполярных растворителях.

Поставленная цель достигается описываемыми производными бензоилмочевины общей формулы I

в которой R₁ - атом водорода или галогена, каждый из R₂ и R₃ представляет собой атом водорода, (С₁-С₄) - алкильную группу, -СО)С₁-С₈) алкильную группу или группу -SO₂(C₁-C₄) алкил, или R₂ и R₃ вместе с соседним атомом азота могут образовывать пиперидиновое или морфолиновое кольцо, R₄ - атом галогена, (С₁-С₄) алкильная группа, трифторметильная группа, (С₁-С₄) алкоксигруппа или нитрогруппа, R₅ - атом галогена, или их фармацевтически приемлемые соли, обладающие противоопухолевой активностью. Ниже описаны примеры получения производных бензоилмочевины.

Препаративный пример 1.

Получение N-(4-(5-бром-2-пиримидинилокси)-3-метилфенил)-(2- (диметиламино)бензоил)мочевины (в последующем описано как соединение I).

Раствор смеси, включающей 3,73 г 4-(5-бром-2-пиримидинилокси)-3- метилфенил-изоцианата, 2,0 г (диметиламино) бензамида и 45 мл толуола, кипятят с обратным холодильником в течение 4 ч.

После завершения реакции смесь охлаждают, и нерастворимые соединения удаляют посредством фильтрации. Полученный при этом фильтрат концентрируют и чистят хроматографически на колонке с силикагелем (проявляющий растворитель - смесь н-гексан: этилацетат = 6:4), получают 3,9 г целевого продукта с температурой плавления 98-104^оС (в последующем описан как соединение 1).

Препаративный пример 2.

Получение N-(4-(5-бром-2-пиримидинилокси) -3-метилфенил)-N^"- (2-(диметиламино)бензоил)мочевинагидрохлорида (в последующем описан как соединение 2).

Полученный в примере 1 целевой продукт (1,5 г соединения 1) растворяют в 20 мл диэтилового эфира и 50 мл хлористого метилена, в раствор пропускают газообразный хлористый водород до насыщения. После этого насыщенный раствор перемешивают в течение 1 ч и затем охлаждают, выпавшие кристаллы собирают фильтрацией. Полученные таким образом кристаллы промывают диэтиловым эфиром, получают 1,55 г целевого продукта с температурой плавления 98-104^оС (в последующем описан как соединение 2).

Препаративный пример 3.

Получение N-(2-аминобензоил-N^"-(4-(5-бром-2-пиримидинилокси)- 3-хлорфенил)-мочевины (в последующем описано как соединение 26).

Смесь, включающую 1,0 г N-(4-(5-бром-2-пиримидинилокси)-3-хлорфенил)-N"-(2- (нитробензоил)мочевины и 30 мл ледяной уксусной кислоты, нагревают до 80^оС и туда же постепенно добавляют при перемешивании 0,57 г восстановленного железа. После этого смесь перемешивают и дают ей прореагировать при той же температуре в течение 30 мин.

После завершения реакции реакционную смесь выливают в воду, и нерастворимый продукт собирают путем фильтрации. Собранный нерастворимый продукт сушат в вакууме и чистят хроматографически на колонке с силикагелем (проявляющий растворитель-смесь н-гексан: этилацетат = 7:3), чтобы получить 0,4 г целевого продукта с температурой плавления 196-200^оС (в последующем описан как соединение 26).

Препаративный пример 4.

Получение N-(4-(5-бром-2-пиримидинилокси)-3-метилфенил)-N^"- (2-морфолинобензоил)мочевины (в последующем описан как соединение 34).

!. В автоклаве при 100^оС в течение 18 ч реагируют 5 г 2-фторбензамиды и 25 мл морфолина. После окончания реакции продукт охлаждают и отгоняют избыток морфолина. Остаток чистят хроматографически на колонке с силикагелем (проявляющий растворитель - смесь н-гексан: этилацет = 3:7), получают 2,8 г 2-морфолинбензамида с температурой плавления 112-119^оС.

2) Раствор, полученный при растворении 3,28 г 4-(5-бром-2-пиримидинилокси)3-3-метилфенил)-изоцианата в 30 мл толуола, по каплям добавляют при перемешивании к 2,21 г 2-морфолинбензамида, полученному на предыдущей стадии 1. Смесь выдерживают 3 ч при 100^оС.

По окончании реакции отгоняют толуол и остаток чистят хроматографически на колонке с силикагелем (проявляющий растворитель - смесь н-гексан: этилацетат = 1:1), получают 1,25 г целевого аморфного продукта с температурой плавления 67-70^ос (в последующем описано как соединение 34).

Препаративный пример 5.

Получение N-(4-(5-хлор-2-пиримидинилокси)-3-метилфенил)-N^"-(2- (диметиламино)бензоил)мочевины (в последующем описано как соединение 11).

Раствор смеси, включающей 3,33 г 4-(5-бром-2-пиримидинилокси)- 3-метилфенил)-изоцианата, 2,1 г 2-(диметиламина) бензамида и 30 мл толуола, выдерживают 4 ч при 100^оС.

После завершения реакции раствор охлаждают и нерастворимые вещества удаляют фильтрацией. Полученный при этом фильтрат концентрируют и чистят хроматографически на колонке с силикагелем (проявляющий растворитель - смесь н-гексан: этилацетат = 6:1), получают 2,84 г целевого продукта с температурой плавления 48-52^оС.

Препаративный пример 6.

Получение N-(4-(5-бром-2-пиримидинилокси)-3-метилфенил)-(2-(диэтиламино)бензоил)мочеви ны )в последующем описано как соединение 33).

Раствор смеси, содержащей 3,27 г (4-(5-бром-2-пиримидинилокси)-3-метилфенил)-изоцианата, 2,05 г 2-(диэтиламино)-бензамида и 30 мл толуола, выдерживают 3 ч при 100^оС.

После завершения реакции раствор смеси охлаждают и нерастворимые вещества удаляют фильтрацией. Полученный при этом фильтрат концентрируют и чистят хроматографически на колонке с силикагелем (проявляющий растворитель - смесь н-гексан: этилацетат = 7: 3), чтобы получить 1,45 г целевого аморфного продукта с температурой плавления 39-43^оС.

Препаративный пример 7.

Приготовление N-(2-ацетиламино)-бензоил)-N^"-(4-(5-бром-2-пиримидини- локси)-3- метилфенил)-N^"(2-(диэтиламино)-бензоил)мочевины (в последующем описано как соединение 49).

К 30 мл пиридина добавляют 1,3 г N-(2-(амино)бензоил)-N^I-(4-(5-бром-2-пиримидинилокси)-3-метилфенил)-мочевины (в последующем описано как соединение 27), приготовленной в соответствии с препаративным примером 3, туда же добавляют по каплям при охлаждении льдом 0,25 мл хлористого ацетила. Смесь перемешивают при комнатной температуре 2 ч 30 мин. Затем пиридин отгоняют и остаток чистят хроматографически на колонке с силикагелем (проявляющий растворитель - смесь хлористый метилен : этилацетат = 7:3), получают 1,18 г целевого продукта с температурой плавления 186-191^оС (в последующем описано как соединение 49).

Типичные примеры соединений формулы (I), полученные описанным способом, сведены в табл.1.

Соль бензоилмочевинового соединения по изобретению может быть любой солью, если она является фармацевтически приемлемой. Например, она может быть солью галогеноводорода, такого как хлористоводородная кислота или бромистоводородная кислота, или солью щелочного металла, такого как натрий или калий, или щелочно-земельного металла, такого как магний или кальций.

Проведены биологические испытания соединений по изобретению.

(1-1) Противоопухолевая активность.

Испытательный пример 1 (внутрибрюшинно-трансплантированный - внутрибрюшинно-назначенный).

Мышам ВДГ внутрибрюшинно были трансплантированы 1 млн. клеток лейкемии Р-388. Каждая рецептура была введена внутрибрюшинно на 1 сутки и через 8 суток после трансплантации.

Смертельный исход наблюдали в течение 30 суток. Увеличение длительности жизни каждой группы определяли на таком основании, что среднее время выживания контрольной группы, которой вводился физиологический раствор, принималось равным 0% увеличения длительности жизни (УДЖ). Эти результаты приведены в табл. 2. Среди испытанных рецептур, вещество 2 было сформулировано в соответствии с упомянутым рецептурным примером 9, а остальные были сформулированы в соответствии с упомянутым рецептурным примером 8.

(1-2) Противоопухолевая активность.

Испытательный пример 2 (внутрибрюшинно-трансплантирован -внутривенная инъекция).

Мышам ВДГ₁ внутрибрюшинно были трансплантированы 1 млн. клеток лейкемии Р-388. Каждая рецептура (составлена в соответствии с описанным рецептурным примером 10) вводилась внутривенно от хвоста на первые и 8 сутки после трансплантации.

Смертные исходы наблюдали в течение 30 суток. Увеличение длительности жизни (УДЖ, %) каждой обработанной группы определяли на основании того, что среднее время выживания контрольной группы, которой вводился физиологический раствор, принималось равным 0% увеличения длительности жизни УДЖ. В случаях, когда соединения 1 и 11 вводились при дозе активного компонента в мг/кг/сутки, равной 10 мг/кг, УДЖ в % составило 46 и 27 соответственно. Увеличение длительности жизни рассчитывали таким же образом, как в испытательном примере 1.

(2) Растворимость в неводном растворителе.

Испытательный пример 32.

Магнитную мешалку помещают в колбу емкостью 10 или 100 мл, имеющей форму баклажана и снабженную пробкой, и вводят в нее 50 мг испытуемого соединения. Кроме того, туда же вводят подходящее количество желаемого растворителя и определяют растворимость. Результаты показаны в табл. 3 (температура во время измерения растворимости была от 18 до 20^оС).

(3) Доза и метод назначения.

В качестве метода назначения, в случае животных, медикаменты могут вводиться посредством инъекции, такой как внутрибрюшинная инъекция, внутривенная инъекция или местное назначение, или посредством орального назначения. В случае людей медикаменты могут назначаться посредством инъекции, такой как внутримышечная инъекция в вену или артерию, или местным назначением, или в виде свечи. Доза определяется с учетом результатов на животных и различных условий в таких пределах, чтобы общее количество не превышало определенного значения. Медикаменты могут назначаться непрерывно или с перерывом. Однако дозировка может оптимально изменяться в зависимости от метода назначения, пациента или состояния животного, подлежащего лечению, такого как возраст, вес тела, пол, чувствительность, пища, время назначения, совместно используемого медикамента или состояния пациента или заболевания. Подходящее количество и количество назначений в некоторых условиях должны определяться с помощью определяющего испытания подходящего количества специалистом на основе указанных положений.

Соединение по изобретению может быть составлено в рецептуру таким же образом, как в случае обычных медикаментов. Он формулируется из активного компонента и различных фармацевтически приемлемых вспомогательных средств (адъюванты), таких как инертный разбавитель. Эта рецептура может назначаться перорально или внутривенно, или в виде свечи.

Кроме того, содержание активного компонента в противоопухолевом агенте изобретения изменяется в зависимости от различия различных состояний и не может быть определено в общем виде. Агент может содержать активный компонент таким же образом, как и в случае обычных противоопухолевых агентов. Например, он может содержать по меньшей мере 0,1% активного компонента.

Вещество формулы (1) может быть составлено в рецептуру, например, в свече или в капсуле, посредством непосредственного смешивания соединения с полиэтиленгликолем, или в водной суспензии. Когда вещество формулы (1) составляется в рецептуре в водной суспензии, в качестве метода для составления водной суспензии, которая не содержит фосфолипида, здесь можно упомянуть, например, метод, при котором вещество активного компонента предварительно переводится в мелкий порошок и добавляется в водный раствор, содержащий поверхностно-активное вещество и, в случае необходимости, противопенный агент, затем смесь подвергают влажному распылению, чтобы получить частицы, имеющие размер не более 5 мкм, например, частицы, из которых 80% имеют размер не больше 2 мкм, и, если необходимо, туда же добавляют загуститель. Поверхностно-активное вещество включает, например, отвержденное пилооксиэтиленом касторовое масло, сложный эфир полиоксиэтиленсорбита и жирной кислоты, сложные эфиры сахарозы, блочный сополимер полиоксиэтилен-полиоксипропилен и оксиэтилированный полиарилфенол фосфат. Противопенный агент включает, например, диметилполисилоксан, метилфенилсилоксан, сложный эфир сорбита и жирной кислоты, простой эфир полиоксиэтилен-полиоксипропиленцетила и силикон. Загуститель включает, например, смолу гуавы, аргиновую кислоту, арабскую камедь, пектин, крахмал, ксантановую смолу и желатин. С другой стороны, в качестве метода для составления рецептуры водной суспензии, содержащей фосфолипид, здесь могут быть упомянуты, например, метод, в котором вместо поверхностно-активного вещества используются фосфолипиды, такие как соевый фосфолипид или фосфолипид яичного желтка (в указанном выше методе), а вместо загустителя используется антиоксидант, такой как альфа-токоферол.

Кроме того, эти рецептуры могут формоваться в таблетки, капсулы, таблетки с внешним покрытием, порошки, растворы для инъекций или свечи, с помощью обычных методов, которые обычно применяются в области рецептур.

Вещества по изобретению легко растворимы в фаpмацевтически приемлемых неводных растворителях, таких как триглицерид со средней длиной цепочки, соевое масло, кунжутное масло, оливковое масло, масло цубаки, рапсовое масло, кукурузное масло, масло земляного ореха и хлопковое масло. Соответственно они могут быть легко составлены в рецептуру жировой эмульсии для внутривенной инъекции. В качестве метода для составления рецептуры таких животных эмульсий здесь могут быть упомянуты, например, метод, при котором вещество изобретения и фосфолипид растворяются, если необходимо, вместе с эмульгирующимся вспомогательным агентом и стабилизатором эмульсии в упомянутом неводном растворителе, с последующей гомогенизацией дисперсии с помощью гомогенизатора, чтобы довести размер частиц в среднем до уровня не более чем 1,0 мкм. В качестве эмульгирующегося вспомогательного агента может применяться фармацевтически приемлемая жирная кислота, имеющая от 6 до 22 атомов углерода, или ее соль с щелочным металлом, такая как соль натрия или калия, или соль щелочно-земельного металла, такая как соль кальция. В качестве стабилизатора эмульсии можно упомянуть холестерин или фосфатидовую кислоту. Кроме того, может добавляться изотонический агент, такой как глицерин или глюкоза, для того, чтобы сделать эту жирную суспензию изотонической. Используемый здесь гомогенизатор может быть гомогезизатором типа распыления под давлением или ультразвуковой гомогенизатор.

Ниже описаны конкретные рецептурные примеры противоопухолевого агента по изобретению.

Рецептурный пример 1.

Некристаллический порошок упомянутого соединения 1 (70 мг) тщательно перемешивают с 30 мг лактозы, и смесью заполняют капсулы в количестве 100 мг на капсулу, чтобы получить капсулы для перорального назначения.

Рецептурный пример 2.

Некристаллический порошок упомянутого соединения 3 (86,5 вес.ч.) перемешивают до однородности с 1 вес.ч. глюкозы, 10 вес.ч. кукурузного крахмала и 1,5 вес. ч. раствора 5% -ной кукурузной пасты. Этот раствор формуют в гранулы влажным методом. Затем туда же добавляют 1 вес.ч. стеарата магния, и смесь таблетируют при помощи сжатия, чтобы получить таблетки для орального назначения.

Рецептурный пример 3.

Упомянутое соединение 4 (5 г) растворяют в 5 мл диметилацетамида, туда же добавляют 25 мл масла кокосового ореха, 7 г пегнола НС-17 (зарегистрированный товарный знак, отвержденное касторовое масло, производство фирмы Тохо Кагаку), 6 г Пегнола НО-10М (зарегистрированный товарный знак, эфир сахарозы, производство ф. Тохо Кагаку), чтобы получить эмульсию. К этой эмульсии добавляют небольшое количество стерилизованной дистиллированной воды, и смесь подвергают ультразвуковому перемешиванию в течение 20-30 с, чтобы получить эмульсию.

Рецептурный пример 4.

Упомянутое соединение 26 предварительно измельчают до тонкого порошка с помощью центрифугального распылителя. С другой стороны, 5 вес. ч. отвержденного полиоксиэтиленом (60) касторового масла, 0,2 вес.ч. силикона и 0,3 вес. ч. блочного сополимера полиоксиэтилен-полиоксипропилена добавляют к 79,5 вес. ч. физиологического солевого раствора, чтобы получить водный раствор. К этому водному раствору добавляют 10 вес.ч. мелкого порошка упомянутого соединения 3. Смесь измельчают с помощью песочной мельницы с использованием стеклянных бус (80% частиц имеют размер по максимальной мере 2 мкм). Затем туда же добавляют 5 вес.ч. 2%-ного раствора ксантовой смолы, чтобы получить водную суспензию.

Рецептурный пример 5.

40 вес. ч. упомянутого соединения 1 добавляют к водному раствору 6, содержащему 1,5 вес.ч. оксиэтилированного полиарилфено-фосфата и 0,2 вес.ч. силикона, растворенного в 53,3 вес.ч. физиологического раствора. Эту смесь измельчают в сыром виде с помощью песочной мельницы с использованием стеклянных бус (90% частиц имеют размер не более 2 мкм). Затем туда же добавляют 5 вес. ч. раствора ксантановой смолы (2%-ный), чтобы получить водную суспензию.

Рецептурный пример 6.

Упомянутое соединение 4 предварительно измельчают до мелкого порошка с помощью центрифугального измельчителя. Добавляют 5 вес.ч. мелкого порошка соединения 4 к водному раствору, полученному посредством диспергирования и перемешивания 2 вес. ч. фосфолипида яичного желтка, 0,001 вес.ч. альфатокоферола и 92,999 вес. ч. физиологического раствора. Смесь измельчают во влажном состоянии песчаной мельницей с использованием стеклянных бус (частицы на 80% имеют размер не более чем 2 мкм), чтобы получить водную суспензию.

Рецептурный пример 7.

Упомянутое соединение 3 предварительно измельчают до мелкого порошка с помощью центрифугального измельчения. С другой стороны, 5 вес.ч. отвержденного поликосиэтиленом (60) касторового масла добавляют к 60 вес.ч. физиологического раствора, чтобы получить водный раствор. Добавляют к водному раствору 30 вес.ч. мелкого порошка соединения 3. Смесь измельчают песчаной мельницей во влажном состоянии, используя стеклянные бусы (80% частиц имеют размер не больше 2 мкм).Затем туда же добавляют 5 вес.ч. 2%-ного раствора ксантановой смолы, получая водную суспензию.

Рецептурный пример 8.

10 вес. ч. упомянутого соединения 1 добавляют к водному раствору, содержащему 1,5 вес.ч. оксиэтилированного полиарилфосфата, 0,2 вес.ч. силикона и 0,3 вес.ч. блочного сополимера полиоксиэтилен-полиоксипропилена, растворенного в 81 вес.ч. физиологического раствора. Смесь измельчают во влажном состоянии в песчаной мельнице, используя стеклянные бусы (частицы на 90% имеют размер не больше 2 мкм). Затем туда же добавляют 7 вес.ч. 2%-ного раствора ксантановой смолы, получая водную суспензию.

Рецептурный пример 9.

К 1 вес.ч. упомянутого соединения 2 добавляют 100 вес.ч. полиэтиленгликоля N 400 (мол.м. 380-420, производство фирмы Накараи Кагаку Якухин) и растворяют, получая гомогенный раствор.

Рецептурный пример 10.

2,4 вес.ч. фосфолипида яичного желтка и 0,2 вес.ч. упомянутого соединения 1 добавляют к 40 вес.ч. среднецепочечного триглицерида (ОДО, торговый знак, производство Ф.Нисшин Сейю К.К.) и растворяют с помощью гомогенизирующего смесителя. Затем туда же добавляют 57,4 вес.ч. дистиллированной воды. Смесь грубо эмульгируют гомогенизирующим смесителем и затем эмульгируют с помощью ультразвукового гомогенизатора, получая жировую эмульсию, имеющую средний размер частиц 1,0 мкм.

П р и м е р 11.

Способ получения композиции:

10 мас.ч. каждого из упомянутых соединений добавляли к водному раствору, содержащему 1,5 мас.ч. оксиэтилированного полиарилфосфата, 0,2 мас.ч. кремния и 0,3 мас.ч. блок-сополимера полиоксиэтилена и полиоксипропилена, растворенного в 81 мас.ч. физиологического раствора. Полученную смесь распыляли с помощью песочной мельницы, используя стеклянные бусинки (90% которых имел наибольший размер 2 микрона). После чего к этой смеси добавляли 7 мас.ч. 2%-ного раствора ксантановой камеди и получали водную суспензию.

Проведенные испытания показали, что соединения по изобретению обладают высокой противоопухолевой активностью и хорошей растворимостью в неполярых растворителях. К тому же эти соединения малотоксичны (LD₅₀ = 25-500 мг/кг).