средство, обладающее иммуномоделирующим действием

Формула изобретения

Применение надземных частей растения черемухи Грея в качестве средства, обладающего иммуномодулирующим действием.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине и фармакологии, а именно к получению лечебных препаратов растительного происхождения, обладающих иммуномодулирующим действием.

Известен ряд неспецифических стимуляторов иммунитета (синтетического, бактериального, растительного происхождения), различающихся по структуре и механизмам действия. Наиболее известным в медицине средством, повышающим резистентность организма к инфекции, а также эффективность химиотерапии, является левамизол. Однако практическое использование иммуностимулирующих свойств левамизола тормозится его весьма высокой токсичностью (ЛД₅₀ для мышей при подкожном введении 12 мг/кг, при введении внутрь 285 мг/кг), отсутствием оптимальных схем назначения и частыми побочными реакциями, которые ставят под сомнение возможность широкого использования препарата, особенно в педиатрии (Renoux d. Renoux M. 1978; Д.Н.Лазарева, Е.К.Алехин, 1985; С.В.Сибиряк, 1990).

Из известных препаратов растительного происхождения иммуномодулирующие свойства наиболее изучены у препаратов элеутерококка и женьшеня. Однако, данные об иммунотропном действии этих препаратов отличаются большой противоречивостью. Немаловажным является также и то, что ареалами распространения элеутерококка колючего и женьшеня являются лишь Дальний Восток, Приморский край и Южный Сахалин, а женьшень и его препараты преимущественно импортируются (А.Д.Турова, Э.Н.Сапожникова, 1982; Д.Н.Лазарева, Е.К.Алехин, 1985).

С целью расширения арсенала средств, обладающих иммуномодулирующим действием и расширения сырьевой базы, предлагается использовать водный экстракт из надземных частей растения Padus Grajana Maxim (Alfred. Manual of Cultivated Tress and Shruks. New-Jork. The Macmillan Compani, 1949, 479-480).

Черемуха Грея (Padus Grajana Maxim) естественно растет на юге Японии. В условиях города Бишкека дерево высотой до 10 м, с шаровидной кроной и почти черной корой. Листья темно-зеленые, длиной до 8 см, эллиптические с оттянутой вершиной. Цветки в кистях до 10 см, бело-желтые.

Набухание почек отмечается, после временного потепления, во второй половине января и первых числах февраля.

Цветет в апреле, раньше всех остальных видов черемухи на 5-7 дней. Плоды черная костянка.

Химический состав растения изучен мало. Известно, что в листьях, плодах и коре содержание синильной кислоты значительно ниже, чем у черемухи обыкновенной и составляет 0,011-0,02% В черемухе обыкновенной ее содержание колеблется в пределах 0,05-0,09%

Данных об использовании черемухи Грея в народной и научной медицине не имеется.

В условиях Чуйской долины растения ее зимостойки, в летний же период нуждаются в регулярном орошении. Черемуха Грея легко размножается путем посева семян, тем самым создается возможность организации промышленных плантаций для заготовки лекарственного сырья.

Водный экстракт из надземных частей растения Padus Grajana Maxim готовится фармакопейным способом в соотношении сырья к извлекателю 1:30. Лекарственное сырье измельчается до частиц размером 3-5 мм, навеска сырья помещается в колбу, заливается расчетным количеством кипящей воды и нагревается при Т^о 100^оС в течение 5 мин, после чего настаивается в течение 45 мин. Затем водную вытяжку процеживают в подставку, отжимая сырье.

Пример: в колбу поместили 6 г измельченных надземных частей черемухи Грея, добавили 192 мл кипящей воды (с учетом коэффициента водопоглощения, К_в 2) и нагревали при температуре 100^оС в течение 5 мин, затем оставили настаиваться на 45 мин, после чего процедили в подставку, отжимая сырье.

Изучение иммунотропного действия водного экстракта черемухи Грея у мышей с воспроизведенной генерализованной стафилококковой инфекцией показано, что заявляемый препарат обладает отчетливым иммуномодулирующим действием, что проявилось в нормализации ряда иммунологических показателей у подопытных животных. Так, происходило снижение уровня стафилококковой чувствительности (по тестам ППЛ-К и ЦТЭ). Имело место достоверное увеличение количества Т-клеток (22,7 2,20% против 14,2 2,8%), а также выраженное возрастание количества В-клеток (32,3 3,4 против 7,5 1,2% при Р < 0,001) (см. испытаний иммуномодулирующего действия, стр.3).

Сравнительное изучение иммуностимулирующих свойств водного экстракта черемухи Грея, левамизола (аналог) и экстракта элеутерококка (прототип) показало, что под влиянием заявляемого препарата наблюдается повышение киллерной активности лимфоцитов к стафилококкам по тесту ЦТЭ в 2 раза более выраженное, чем под влиянием левамизола и экстракта элеутерококка (9,5 1,3 при лечении заявляемым препаратом против 4,1 0,4 при лечении животных левамизолом и 4,6 0,73 при лечении экстрактом элеутерококка).

Увеличение количества В-клеток, наблюдаемое под действием водного экстракта черемухи Грея, было в 3,5 раза более выраженное, чем под влиянием левамизола и экстракта элеутерококка (32,3 3,4% при лечении заявляемым препаратом против 9,0 1,15 при лечении левамизолом и 9,0 1,71% при лечении экстрактом элеутерококка) (см. акт биологических испытаний иммуномодулирующей активности, стр.3, табл.1).

Изучение острой токсичности заявляемого препарата показало, что определить ЛД₅₀ водного экстракта черемухи Грея не представляется возможным, так как гибели животных при введении препарата мышам, приготовленного в соотношении сырья к извлекателю 1:30, 1:10, 1:5 перорально и внутрибрюшинно из расчета 1 мл на 1 мышь, не наблюдалось ни в первые сутки после введения препарата ни в последние 6 дней наблюдения (см. акт испытаний на острую токсичность, стр. 1, 2). Это позволяет сделать вывод, что заявляемый препарат является практически нетоксичным.

Таким образом, проведенные нами экспериментальные исследования показали, что водный экстракт черемухи Грея обладает иммуномодулирующей активностью, которая может быть использована с целью стимуляции иммунитета при инфекционных заболеваниях, патогенетически связанных с недостаточностью иммунной системы. Одним из безусловных преимуществ заявляемого препарата перед аналогом (левамизол) и прототипом (экстракт элеутерококка) является его чрезвычайно низкая токсичность.

Предварительная клиническая апробация водного экстракта черемухи Грея проведена на базе кафедры педиатрии Кыргызгосмединститута (см. выписку из протокола заседания Бюро Президиума УМСа Минздрава республики Кыргызстан о разрешении проведения предварительной клинической апробации).

Влияние заявляемого препарата на иммунный статус изучали в спонтанно подобранной группе детей, имеющих в момент обследования течение ОРЗ, бронхита, бронхопневмонии и/или обострение очага хронической инфекции, а также имеющих в анамнезе частые ОРЗ, бpонхиты и пневмонии.

Водный экстракт черемухи Грея готовили в соотношении сырья к извлечению 1: 30 и назначали для приема внутрь в зависимости от возраста пациентов по 1 десертной или 1 столовой ложке 3 раза в день в течение 25 дней.

Как показали проведенные исследования, после терапии заявляемым препаратом у детей с исходно низким содержанием Т-л отмечалось увеличение процентного и абсолютного числа розетко-образующих клеток. У больных с повышенной концентрацией Т-л снижение количества этих клеток до уровня здоровых детей.

Показатели В-л в ходе лечения не претерпевали значимой динамики. Было выявлено достоверное увеличение процентного и абсолютного числа О-лимфоцитов, что свидетельствует о стимуляции низкодифференцированных лимфоцитов.

Динамика Т-л на фоне лечения водным экстрактом черемухи Грея была следующей: значимое увеличение исходно сниженных значений Т_р-л у одних пациентов и снижение показателя до уровня здоровых детей у больных с высоким содержанием Т_р-л. Кроме того отмечено достоверное увеличение Т_т/ч-л, что свидетельствует, хотя и косвенно, о повышении супрессорной функции Т-л (см. акт предварительной клинической апробации, стр.1, 2, рис.1-5).

Таким образом, проведенная клиническая апробация водного экстракта черемухи Грея подтвердила наличие у заявляемого препарата иммуномодулирующих свойств.

П р и м е р. Костя Т. 11 лет (история болезни N 617/91). Адрес: село Аламедин, ул.Чернышевского,7. Жалобы: частые простудные заболевания (ежемесячные). Приступы сухого кашля и удушья. Выделения из носа, чихание. Головные боли, утомляемость. Отек Квинке на лобной области. Наследственность отягощена: у бабушки (по материнской линии) бронхиальная астма, инфаркт миокарда, у дедушки по той же линии аллергический дерматит, бронхиальная астма. У прабабушки и прадедушки по линии матери бронхиальная астма. По отцовской линии у бабушки и дедушки хронический алкоголизм.

Ребенок от 10 беременности (1 бер. ребенок, 2-9 бер. мед аборты), во второй половине беременности- ОРЗ. Роды срочные. Закричал сразу. Вес 3950, длина 54 см. На грудном вскармливании до 2 лет. На 7 сутки жизни ОРЗ, лечение пенициллином 10 дней. На фоне лечения проявились первые признаки аллергического диатеза в виде гиперемии и шелушения на щеках. В возрасте 2 мес. вновь ОРЗ. При первом приеме пенициллина появились кожные проявления по типу экземы на лице и волосистой части головы, которые сохранялись до 2 лет. Гипоаллергенную диету соблюдали. Лечение симптоматическое (антигистаминные препараты и мазевое лечение) без эффекта. С 1 года бронхиты протекают с явлениями обструкции, с 1,5 лет астматический бронхит, с 3 лет бронхиальная астма. Неоднократно лечился в стационаре, получал лечение антибиотиками, бронхолитиками, отхаркивающими средствами, физиолечение.

Состояние при поступлении средней тяжести. Ребенок удовлетворительного питания. Полилимфоадения. Отек мягких тканей правой лобной области. Зев гипертрофирован I-II ст. рыхлый. Болезненность при надавливании в области гайморовых и лобных пазух. В легких дыхание жесткое, сухие хрипы рассеянно. Тоны сердца ритмичные, звучные. Живот мягкий, безболезненный, печень у края реберной дуги.

Клинический диагноз: бронхиальная астма смешанная форма. Хронический гайморит, фронтит, тонзиллит.

При обследовании выявлено: в общем анализе крови эозинофиллия 19% рентгенография грудной клетки легочные поля прозрачны, корни легких структурны, расширены, рентгенография придаточных пазух пристеночное затемнение лобных и гайморовых пазух, посев мазка из носа золотистый стафилококк, кровь на ВИЧ-антитела отрицательно.

Ребенку проведен курс лечения водным экстрактом черемухи Грея, приготовленным в соотношении сырья к извлекателю 1:30, по 1 столовой ложке внутрь 3 раза в день, в течение 26 дней. После лечения состояние стабилизировалось, приступов бронхиальной астмы не было.

В течение 5 мес. после лечения ребенок не болел. Рекомендован второй курс лечения, санациия ЛОР-органов.

Приведенный пример иллюстрирует наличие у заявляемого препарата иммуномодулирующего действия.