способ моделирования посттрансплантационных изменений в гистосовместимой почке

Формула изобретения

СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ПОСТТРАНСПЛАНТАЦИОННЫХ ИЗМЕНЕНИЙ В ГИСТОСОВМЕСТИМОЙ ПОЧКЕ, включающий нервную децентрализацию почки, нарушение ее лимфооттока с одновременным удалением контрлатерального интактного органа, отличающийся тем, что вводят в опытный организм с вторых суток после удаления контрлатерального интактного органа с течение недели ежедневно однократно внутримышечно пирогенал в дозе 40 60 МПД/кг.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а именно к патологической физиологии и нефpотрансплантологии, предназначено для воспроизведения и исследования патогенических механизмов повреждения гистосовместимого почечного трансплантата в реципиентном организме с измененной реактивностью.

Тубулоинтерстициальный нефрит (тубулоинтерстициальная нефропатия, интерстициальный нефрит) является самостоятельной нозологической единицей.

Известны способы моделирования тубулоинтерстициального нефрита (ТИН) "неиммунного" генеза. Так, структурно-функциональные проявления ТИН воспроизводятся в почке после пережатия почечной вены. Способ является классической моделью для исследования патогенетических механизмов острой венозной недостаточности в почке, но непригоден для изучения ее неспецифического трансплантационного повреждения в реципиентном организме, когда после восстановления кровотока на нефротрансплантат продолжают оказывать отрицательное влияние длительно действующие неспецифические факторы пересадки абсолютная нервно-лимфатическая децентрализация и функциональная нагрузка.

В этом плане более приемлемой моделью является способ, при котором посттрансплантационные изменения в почке воспроизводят за счет хирургической и электрофоретической нервно-лимфатической децентрализации органа ин ситу без процедуры его пересадки и выключения из кровотока одномоментно с контрлатеральной нефрэктомией. Морфофункциональные изменения, развивающиеся в опытной единственной децентрализованной почке (ЕДП) после нанесенного воздействия соответствуют семиотике ТИН. Это обусловлено изначальным отсутствием лимфокапилляров и нервных элементов в почечных гломерулах и предопределяет последующую непричастность клубочковых структур к патологическим сдвигам, развивающимся в единственной децентрализованной почке (ЕДП) модели трансплантата.

Известен также способ моделирования тубулоинтерстициальных изменений в почке путем более адекватного экспериментального воспроизведения посттрансплантационных проявлений феномена децентрализации. При реализации последнего, кроме абсолютной нервно-лимфатической децентрализации единственной почки ин ситу, дополнительно коагулируют отводящие лимфоколлекторы органа в области ножки и в "люках" фиброзной капсулы. Здесь же для обеспечения возможности последующего динамического исследования "экскреторных" проявлений развивающегося в ЕДП ТИН в методике способа-прототипа параллельно воспроизводят и бесфистульную модель, позволяющую обеспечить непрерывное наружное мочевыделение из опытной почки за счет ликвидации у животного резервуарной функции мочевого пузыря.

Недостатком прототипа является то, что после нанесения на единственную почку-модель трансплантата в последней развивается ТИН со слабо или умеренно выраженными структурно-функциональными проявлениями. Кроме того, способ-прототип не воспроизводит, не раскрывает и не дает возможности исследовать реальный патогенетический механизм посттрансплантационного повреждения гистосовместимой почки длительно действующими факторами пересадки в условиях измененной реактивности реципиентного организма, в частности, в условиях активизации гранулоцитарного пула лейкоцитов. Последнее имеет место в клинической практике у ряда реципиентов в посстрансплантационном периоде как ответная реакция на операционную травму, инфекцию, трансфузии и другие факторы, способные индуцировать лихорадку и гипергранулоцитоз в крови (нейтрофильный лейкоцитоз).

Цель изобретения повышение воспроизводимости проявлений моделируемой нефропатии при исследовании механизмов повреждения децентрализованной почки (гистосовместимой) в условиях активации гранулоцитарного пула лейкоцитов.

Это достигается тем, что после воспроизведения оперативным путем феномена децентрализации почки в опытный организм ежедневно внутримышечно однократно, начиная с вторых суток послеоперационного периода и далее в течение недели, вводят пирогенал по 40-60 МПД/кг (минимальных пирогенных доз), после чего исследуют в динамике и верифицируют развитие ТИН с выраженными проявлениями проведением структурно-функциональных исследований ЕДП.

П р и м е р. У собаки-самца массой 22 кг после недельной его дегельминтизации пиперазином и дронцитом исследовали суточную порцию мочи для исключения исходной патологии почек. Изучив результаты анализов и убедившись в отсутствии в исследованных пробах форменных элементов крови, цилиндров и повышенного содержания белка, животное взяли в эксперимент.

Премедикацию накануне оперативного вмешательства произвели последовательными внутримышечными инъекциями реланиума, атропина и промедола. Спустя 20-30 мин внутривенно вводили калипсол и дитилин, после чего интубировали трахею, подключая трубку к аппарату "Полинаркон-1". Ингаляционный наркоз осуществляли азеотропной смесью в условиях тотальной миорелаксации и нейролептанальгезии, достигаемой кратными внутривенными введениями фентанила и дроперидола через каждые 30 мин. По достижении IIIБ стадии наркоза производили полную срединную лапаротомию и обнажали левую почку, имеющую более длинную ножку. Последнюю выделяли из окружающей клетчатки на протяжении около 5 см, пересекая все видимые нервные волокна, идущие вдоль артерии, вены и мочеточника. Затем электрокоагулятором ЭС-30 прижигали клетчатку у ворот почки, в которой находились обрывки ее основных лимфоколлекторов. С помощью насадки-электроножа далее саму почку выделяли из забрюшинных тканей, попутно коагулируя все перфорантные сосудисто-нервно-лимфатические микропучки в "люках" фиброзной капсулы. После этого в средних частях почечной артерии и вены, а также в юксталоханочном отделе мочеточника скарифицировали их наружные адвентициальные оболочки, окутывали в этих местах все указанные компоненты почечной ножки снаружи гибкими электродами с прокладками, смоченными нейролитическим раствором и подсоединенными единым микропроводом к аноду аппарата для электрофореза "Поток-1". Пластинку катода фиксировали к коже животного в произвольном месте и задавали параметры гальванического тока из расчета 0,1 мА/см² площади суммарного анода с последующей экспозицией электрофоретического воздействия 5 мин. После реализации абсолютной нервной децентрализации почки и нарушения ее лимфотока опытный орган фиксировали в ортопозицию чрезкапсулярными швами. Контрлатеральную интактную почку удаляли вместе с мочеточником на всю длину. Воспроизведение экспериментальной модели завершали субтотальным резецированием мочевого пузыря и герметичным сшиванием из его оставшихся лоскутов на резиновом катетере узкого канала между устьем мочеточника опытной ЕДП и внутренним отверстием мочеиспускательного канала, в результате чего тотчас устанавливалось беспрепятственное мочевыведение из опытного органа через наружное отверстие висячей части уретры. Операционную рану ушивали наглухо, а катетер извлекали из мочеиспускательного канала.

На следующие сутки и далее в течение недели животному в мышцы бедра ежедневно однократно вводили по 50 МПД/кг пирогенала, каждый раз регистрируя визуально лихорадочную реакцию, длящуюся несколько часов. Из крови, взятой через скакательную вену как на высоте лихорадки, так и вне ее, готовили мазки, окрашиваемые по Романовскому-Гимзе, а также с помощью подсчета форменных элементов в камере Горяева регистрировали гипергранулоцитоз (преимущественно нейрофильный лейкоцитоз). После заживления операционной раны на 8 сут и далее на 10, 20 и 30 сут у животного исследовали проявления моделируемой ТИН. При каждом очередном исследовании осуществляли 5%-ную от массы тела пероральную водную нагрузку, в условиях которой определяли параметры парциальных экскреторных процессов (гломерулярную фильтрацию, реабсорбцию воды и натрия, канальцевую секрецию триомбраста, экскрецию глюкозы). В завершение очередной функциональной пробы на фоне внутривенного введения гексенала (40 мг/кг) с помощью биопсийной иглы ВНИИКиЭХ произвели транскутанные нефробиопсии через поясничную область с последующим проведением светооптических и ультраструктурных исследований тканей нефробиоптатов.

Результаты проведенных исследований в опытной (модель по заявляемому способу, N7) и контрольной группах (модель-прототип, N 6) показали, что при недостоверных различиях величин клубочковой фильтрации (71 9 против 78 7 мл/мин) в опытной серии более выраженно угнетается реабсорбция натрия (99,48 0,04 против 99,680,03%), снижается канальцевая секреция триомбраста (4,61,4 против 7,9 0,5 мг/мин) и интенсивнее спонтанная глюкозурия (11 2 против 6 2 ммоль/ч), что является подтверждением преимущественного и более выраженного, чем в контроле, поражения канальцевой системы ЕДП на фоне гиперэргической реакции после введения пирогенала (приведены данные на 20 сут).

Морфологические исследования подтвердили 100% -ную воспроизводимость нефропатии, основными морфологическими проявлениями которой явились массивная клеточная инвазия стромы лейкоцитами (преимущественно сегментоядерными) в сочетании с отечными изменениями межуточного матрикса и дистрофией канальцевых клеток (см.фиг.1 и 2).

Таким образом, при использовании предложенного способа в единственной децентрализованной почке после недельного введения в опытный организм индуктора гранулоцитов пирогенана в предлагаемом режиме воспроизводится более выраженный, чем в прототипе ТИН.

Способ разработан, апробирован и проверен на 7 беспородных собаках и 30 крысах на кафедре оперативной хирургии с топографической анатомией Донецкого государственного медицинского института.

Предложенная модель ТИН имеет важное научно-прикладное значение для нефротрансплантологии, поскольку убедительно и адекватно демонстрирует реально существующий в клинической практике механизм повреждения пересаженной почки в условиях абсолютной ее гистосовместимости с реципиентным организмом.