оксимкарбаматы и оксимкарбонаты

Формула изобретения

ОКСИМКАРБАМАТЫ И ОКСИМКАРБОНАТЫ общей формулы I



где R С₃ С₅-алкил, С₃ С₇-циклоалкил, бициклогептил или группа формулы



n 1 4;

R₁ низший алкил или групппа формулы



R₂ амино-, фениламино-, низший алкиламино-, низший алкокси-, фенилокси;

q 1 4.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к новым оксимкарбаматам и оксимкарбонатам, обладающим бронхолитическим (бронхорасширяющим) и противовоспалительным действием и используемым для лечения астмы.

Астма представляет собой болезнь, при которой респираторный дистресс-синдром является результатом сужения дыхательных путей. Это сужение вызывается главным образом: 1) острым сокращением гладких респираторных мышц, окружающих дыхательные пути; 2) хроническим воспалительным процессом в легких. Средства, которые снимают бронхоспазм и предотвращают воспаление легких, являются эффективными для успокоения симптомов астмы.

Одним из подходов к снятию бронхоспазма и ингибирования воспаления является увеличение внутриклеточной концентрации аденозин-циклического 3":5"-монофосфата (цАМФ) в клетках гладких респираторных мышц и в клетках воспаления соответственно. Средства, повышающие концентрацию цАМФ в гладких мышцах, вызывают быстрый бронхолитический эффект и ингибируют выделение воспалительных медиаторов из активированных лейкоцитов (см; Хардман, в "Гладкая мускулатура; Оценка современных знаний", Издание Техасского университета (1981); Ньельсон и дp. American Review of Respiratory Diease, 1988, 137, 25). Благодаря двойственному механизму своего действия эти соединения должны быть высокоэффективными противоастматическими лекарствами.

Концентрация цАМФ в живой клетке определяется, с одной стороны, скоростью его синтеза под действием аденилатциклазы, и, с другой стороны, скоростью его разложения фосфодиэстеразами (ФДЭ-ферменты). Таким образом, или стимулиpуя активность аденилатциклазы, или ингибируя ФДЭ-ферменты в легочных тканях, можно добиться противоастматической активности. Изобретение относится к соединениям, ингибирующим специфический ФДЭ, часто именуемый ФДЭ IV, который селективно метаболизирует цАМФ и является нечувствительным к модуляторным воздействиям гуанозинциклического 3":5"-монофосфата (цГМФ) и кальция. Этот ФДЭ найден и в клетках гладких респираторных мышц, и в клетках воспаления, и показано, что он является главным регулятором цАМФ в этих тканях (см. Торфи и Цезлински Molecular Pharmacology, 1990, 37,206; Дент и др. British Journal of Pharmacology, 1990, 90, 183R). Следовательно, предлагаемые соединения являются бронхолитическими и противовоспалительными средствами, и проявляют активность в лечении аллергической и неаллергической астмы у модельных животных. Поскольку не было обнаружено, что предлагаемые соединения ингибируют другие формы ФДЭ, можно ожидать, что они являются более селективными и безопасными противоастматическими средствами, чем неселективные ингибиторы ФДЭ, в настоящее время используемые для лечения астмы, такие, как теофиллин.

Изобретение относится к карбаматам и карбонатам оксимов 1-[3-(заместитель)окси-4-метоксифенил]алканонов (низших), обладающим бронхолитической и противовоспалительной активностью формулы

где R С₃-С₅-алкил, С₃-С₇-циклоалкил, бициклогептил или заместитель формулы



R₁ низший алкил или заместитель формулы

(CH₂)_q-

R₂ амино-, фениламино- или низшая алкиламиногруппа, низшая алкокси- или фенилоксигруппа;

n принимает значения 1-4;

q принимает значения 1-4.

Термины "низший алкил", "низший алкокси", или "низший алканоил" относятся к фрагментам, содержащим от 1 до 6 атомов углерода в углеродной цепи. Термин "арил" относится к ароматическим фрагментам, содержащим 6-10 атомов углерода. Термин "галоген" означает фтор, хлор и бром.

При испытаниях на крысах в течение 6 мес. в дозах 100 мг/кг/день соединение в соответствии с изобретением с названием (Е)-О-(аминокарбонил)оксим 1-[3-(циклопентилокси-4-метоксифенил] этанона не проявило ни макро-, ни микротоксического действия. При этой дозе не наблюдалось летального эффекта. Так как для этого соединения бронхолитическая ЕД₅₀ для крыс равняется приблизительно 1 мг/кг (орально), то терапевтический индекс может быть проэкстраполирован и составляет >100:1.

Предлагаемые соединения могут быть получены в результате основной последовательности реакций, в которой на начальной стадии изованилин реагирует с производными, содержащими необходимый заместитель R, давая изованилиновый интермедиат, содержащий необходимым образом замещенную гидроксигруппу





Затем проводят реакцию полученного производного с соединением R₁или с соответствующим реактивом Гриньяра, с последующим окислением бихроматом пиридина или двуокисью марганца с получением соответствующего кетона







Затем проводят реакцию этого кетона с солянокислым гидроксиламидом, получая соответствующий оксим



Затем проводят реакцию этого кетона с соответствующими реагентами, получая требуемый конечный продукт оксимкарбамат или оксимкарбонат. Так, для того чтобы получить N-незамещенный оксимкарбамат, можно провести реакцию промежуточного оксима с:

1) хлорсульфонилизоцианатом в среде сухого тетрагидрофурана, или:

2) трихлорацетилизоцианатом в сухом тетрагидрофуране с последующей реакцией с аммиаком, или:

3) цианатом натрия и трифторуксусной кислотой в среде хлористого метилена, или:

4) цианатом натрия, уксусной кислотой и водой



Аналогичным путем можно получить N-замещенные карбаматы, используя соответствующим образом замещенный алкил- или арилизоцианат в среде сухого тетрагидрофурана:



Наконец, оксимкарбонаты можно получить реакцией промежуточного оксима с соответствующим алкил- или арилхлорформиатом в среде пиридина и хлористого метилена



Для получения предлагаемых соединений могут быть использованы другие известные методы.

Исходные вещества, используемые в описанных способах, производятся в промышленных масштабах или могут быть приготовлены согласно методикам, описанным в химической литературе.

Поскольку соединения по изобретению содержат двойную связь, они обладают цис-транс-изомерной, и, следовательно, в круг соединений, соответствующих изобретению, входят не только смеси геометрических изомеров, но и индивидуальные изомеры. Изомеры обозначаются в соответствии с системой Е/Z с использованием правила следования.

Вследствие своей способности ингибировать ФДЭ IV, соединения по изобретению являются бронхолитическими и противовоспалительными средствами, и могут быть использованы для лечения острой и хронической бронхиальной астмы и связанной с ней патологии.

При использовании соединений по изобретению для лечения острой или хронической бронхиальной астмы на их основе могут быть приготовлены дозировочные формы для орального применения, такие, как, напримеp, таблетки, капсулы и др. Соединения можно применять одно или в сочетании с известными и часто употребляемыми носителями, такими, как карбонат магния, стеарат магния, тальк, сахар, лактоза, пектин, декстрин, крахмал, желатин, трагакант, метилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза натрия, низкоплавкий воск, масло какао и др. Могут быть также использованы разбавители, корригенты, солюбилизаторы, смазывающие вещества, суспендирующие агенты, связующие вещества, дезинтеграторы для таблеток и аналогичные компоненты. Соединения можно также вводить парэнтерально, в этом случае их используют в виде стерильных растворов, содержащих другие растворенные компоненты, например, физиологический раствор или глюкозу, роль которых состоит в том, чтобы сделать раствор изотоническим. Для введения методом ингаляции или инсуффляции на основе настоящих соединений можно приготовить водные или частично водные растворы, которые затем использовать в форме аэрозолей.

Требования к дозировкам варьируются в зависимости от того, какая конкретно композиция применяется, какой путь введения выбран, какова тяжесть наблюдаемых симптомов, а также от индивидуальных особенностей пациента, подлежащего лечению. Обычно лечение начинают с малых дозировок, которые меньше оптимальных для данного соединения. Затем дозировку увеличивают до тех пор, пока не будет достигнут оптимальный для данных условий результат. Как правило, наиболее желательно использовать такие концентрации соединений по изобретению, которые дают хорошие результаты без вызывания вредных или нежелательных побочных эффектов. Предлагаемые соединения можно вводить одной дозой или (если это желательно) можно разделить эту дозу на меньшие и вводить их в нужные моменты времени на протяжении всего дня.

Свойственная соединениям по изобретению способность ингибировать ФДЭ IV может быть продемонстрирована с помощью стандартной фармакологических методик, которые более полно описаны в следующих примерах. Эти методики иллюстрируют способность предлагаемых соединений ингибировать ФДЭ IV, выделенный из трахеи собаки.

Примеры иллюстрируют получение и фармакологическое тестирование соединений по изобретению.

П р и м е р 1. 1-[3-(циклопентокси)-4-метоксифенил]этанон-(Е)-О-(аминокарбонил)- оксим

А. 3-циклопентокси-4-метоксибензальдегид.

К перемешиваемому на магнитной мешалке раствору изованилина (0,557 ммоль, 85,0 г) в сухом диметилформамиде (500 мл) при комнатной температуре одной порцией добавляют порошкообразный карбонат калия (0,558 моль, 77,1 г), после чего по каплям добавляют чистый циклопентил-бромид (0,614 моль 91,5 г, 65,9 мл). Полученную суспензию нагревают до 60^оС и следят за протеканием реакции методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) до тех пор, пока реакция не пройдет до конца. После завершения реакции смесь охлаждают до комнатной температуры и в вакууме удаляют диметилформамид. Полученный остаток разделяют между водой и этилацетатом, водную фазу экстрагируют этилацетатом, и объединенные органические слои промывают водой. Затем органические слои сушат над сульфатом натрия и концентрируют в вакууме, получая алкилированный продукт (0,317 ммоль, 70,1 г, 57%) в виде вязкого масла, которое имеет достаточную чистоту для того, чтобы его можно было использовать далее без дополнительной очистки.

ЯМР(ДМСО-d₆, 300 МГц) 9,83 (с, 1Н), 7,52 (дд, J 8,5; 2,0 Гц, 1Н), 7,36 (д, J 2,0 Гц, 1Н), 7,16 (д, J 8,5 Гц, 1Н), 4,84 (м, 1Н), 3,83 (с, 3Н), 1,70 (м, 8Н).

Б. -метил-3-циклопентилокси-4-метоксибензиловый спирт.

К перемешиваемому магнитной мешалкой раствору 3-циклопентокси-4-метоксибензальдегида (59,0 ммоль, 13,0 г) в сухом тетрагидрофуране (500 мл) при -78^оС по каплям в течение 30 мин добавляют метиллитий (100 ммоль, 90,0 мл 1,4 М раствора в этиловом эфире). Перемешивают полученный раствор при -78^оС в течение 30 мин и гасят реакцию при этой температуре, быстро добавляя насыщенный водный раствор хлористого аммония (140 мл). После нагревания до комнатной температуры добавляют воду для растворения твердых продуктов и в вакууме добавляют тетрагидрофуран. Остаток делят между водой (500 мл) и этилацетатом (500 мл), водную фазу экстрагируют этилацетатом (500 мл), и объединенные органические слои промывают водой (500 мл). Органическую фазу сушат над сульфатом натрия и концентрируют в вакууме, получая целевой продукт в виде легкого масла желтого цвета (58,3 ммоль, 13,7 г, 99%). ТСХ и ЯМР показывают, что чистота продукта достаточна для того, чтобы использовать его без дополнительной очистки.

ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц) : 6,91 (д, 1Н), 6,84 (м, 2Н), 5,00 (д, 1Н), 4,76 (м, 1Н), 3,70 (с, 3Н), 1,70 (м, 8Н), 1,27 (д, 3Н).

В. 3-циклопентилокси-4-метоксиацетофенон.

К перемешиваемому магнитной мешалкой раствору -метил-3-циклопентилокси-4-метоксибензилового спирта (58,3 ммоль, 13,7 г) в сухом хлористом метилене (400 мл) при комнатной температуре одной порцией добавляют бихромат пиридина (87,3 ммоль, 32,8 г). Полученный гетерогенный раствор перемешивают при комнатной температуре в течение ночи, после чего ТСХ показывает, что произошло полное превращение в вещество, которое дает быстрое движущееся, активное в УФ-области пятно. Реакционную смесь разбавляют таким же количеством эфира и перемешивают в течение 1 ч. Смесь фильтруют через Celite и отфильтрованный осадок промывают этиловым эфиром (300 мл) и этилацетатом (300 мл). Фильтрат, имеющий коричневую окраску, концентрируют в вакууме и очищают фильтрованием через силикагель (элюент хлористый метилен). Органический растворитель удаляют в вакууме, получив целевое соединение в виде легкого твердого вещества желтого цвета (58,3 ммоль, 13,6 г, 100%).

ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц) : 7,59 (дд, J 8,5 Гц; 2,0 Гц, 1Н), 7,40 (д, J 2,0 Гц, 1Н), 7,03 (д, J 8,5 Гц, 1Н), 4,82 (м, 1Н), 3,80 (с, 3Н), 2,50 (с, 3Н), 1,70 (м, 8Н).

Г. 3-циклопентокси-4-метоксиацетофеноноксим.

К перемешиваемому магнитной мешалкой раствору 3-циклопентокси-4-метоксиацетофенона (58,3 ммоль, 13,6 г) в сухом пиридине (300 мл) при комнатной температуре одной порцией добавляют солянокислый гидроксиламин (64,0 ммоль, 4,45 г). Полученная суспензия медленно становится гомогенной, и полученный раствор перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. В вакууме удаляют пиридин и остаток делят между этилацетатом (500 мл) и водой (500 мл). Водную фазу экстрагируют водой (400 мл). Органическую фазу сушат над сульфатом натрия и концентрируют в вакууме, получая целевое соединение в виде твердого вещества желтовато-коричневого цвета (56,5 ммоль, 14,1 г, 97%). ТСХ и ЯМР показывают, что этот продукт обладает достаточной чистотой для того, чтобы далее использовать его без дополнительной очистки.

ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц) : 11,0 (с, 1Н), 7,24 (д, J 2,0 Гц, 1Н), 7,13, (дд, J 8,5; 2,0 Гц, 1Н), 6,94 (д, J 8,5 Гц, 1Н), 4,77 (м, 1Н), 3,75 (с, 3Н), 2,10 (с, 3Н), 1,80 (м, 8Н).

Д. 1-[3-(циклопентилокси)-4-метоксифенил]этанон(Е)-О-(аминокарбонил)оксим.

К медленно перемешиваемой суспензии NaOCN (160 ммоль, 10,4 г) в хлористом метилене (30 мл) при комнатной температуре по каплям в течение 10 мин добавляют трифторуксусную кислоту (80,0 ммоль, 9,12 г, 6,16 мл), и реакционный сосуд неплотно закрывают пластмассовой пробкой. Суспензия медленно густеет с образованием желеобразной массы, которую периодически перемешивают, осторожно встряхивая вручную. Через 2 ч нахождения при комнатной температуре, одной порцией добавляют 3-циклопентилокси-4-метоксиацетофенон-оксим (20,0 ммоль, 4,98 г) в хлористом метилене (5 мл), и реакционный сосуд снова закрывают. Реакционную смесь периодически перемешивают вручную в течение 30 мин, и затем выливают в насыщенный раствор бикарбоната натрия (250 мл) и экстрагируют хлористым метиленом (2 раза по 200 мл). Органическую фазу промывают водой (200 мл), сушат над сульфатом натрия и концентрируют в вакууме, получая бесцветное масло. Это масло очищают импульсной хроматографией (силикагель; элюент: 1) 1,25% этилацетата в хлористом метилене; 2) 5% этилацетата в хлористом метилене), растирают со смесью этиловый эфир/гексан и сушат в вакууме при 50^оС, получая аналитически чистое целевое соединение в виде твердого вещества белого цвета (11,5 ммоль, 3,37 г, 58%).

ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц) : 7,39 (д, J 2,0 Гц, 1Н), 7,35 (дд, J 8,5; 2,0 Гц, 1Н), 7,08 (шс, 2Н), 6,85 (д, J 2,0 Гц, 1Н), 4,92 (м, 1Н), 3,78 (с, 3Н), 2,29 (с, 3Н), 1,71 (м, 8Н).

ИК (КВr) (см^-1) 3460, 3250, 2960, 1715, 1600, 1522, 1375, 1265, 1225, 1143, 993, 978.

Масс-спектрометрия(МС)(EI,m/е,) 292/M⁺,10/, 249 (18), 181(100), 164(20), 124(20).

C₁₅H₂₀N₂O₄

Вычислено, С 61,63; Н 6,90; N 9,58.

Найдено, С 61,66; Н 7,06; N 9,60.

Ниже приведена методика, альтернативная стадии Д: 1-[3-(циклопентилокси)-4-метоксифенил]этанон(Е)-О-(аминокарбонил)оксим.

К перемешиваемому магнитной мешалкой раствору 3-циклопентилокси-4-метоксиацетофеноноксима (23,4 ммоль, 5,83 г) в сухом тетрагидрофуране (200 мл) при 0^оС по каплям в течение 5 мин добавляют хлорсульфонилизоцианат (35,1 ммоль, 4,97 г, 3,06 мл). Полученный раствор желтого цвета перемешивают при 0^оС в течение 15 мин, тетрагидрофуран удаляют в вакууме, и полученный остаток делят между этилацетатом (200 мл) и водой (200 мл). Водную фазу экстрагируют этилацетатом (200 мл), и объединенные органические слои промывают водой (200 мл) и насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (200 мл). Органическую фазу сушат над сульфатом натрия и концентрируют в вакууме, получая темное масло. Это вещество очищают импульсной хроматографией (силикагель; элюент: 5% этилацетата/хлористый метилен), получая легкое твердое вещество желтого цвета, которое затем растирают с минимальным количеством смеси этиловый эфир/гексан и собирают отсасыванием, получая целевое соединение в виде твердого вещества белого цвета. Это твердое вещество сушат в вакууме при 50^оС в течение ночи, получая аналитически чистый материал (13,6 ммоль, 3,97 г, 58%).

ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц) : 7,39 (д, J 2,0 Гц, 1Н), 7,35 (дд, J 8,5; 2,0 Гц, 1Н), 7,08 (шс, 2Н), 6,85 (д, J 2,0 Гц, 1Н), 4,92 (м, 1Н), 3,78 (с, 3Н), 2,29 (с, 3Н), 1,71 (м, 8Н).

ИК (КВr) (см^-1) 3460, 3250, 2960, 1715, 1600, 1522, 1375, 1265, 1225, 1143, 993, 978.

МС (EI, m/e,) 292(М⁺,16), 224(18), 182(78), 180(100), 164(35), 140(20) 124(26).

C₁₅H₂₀N₂O₄

Вычислено, С 61,63; Н 6,90; N 9,58.

Найдено, С 61,50; Н 6,88; N 9,54.

П р и м е р 2. 1-[3-(бутокси)-4-метоксифенил]этанон(Е)-О-(аминокарбонил)оксим.

А. 3-бутокси-4-метоксибензальдегид

По методике примера 1А из изованилина (0,557 моль, 85,0 г), порошкообразного карбоната калия (0,558 моль, 77,1 г) и н-бутилбромида (0,559 моль, 76,6 г, 60,0 мл) в среде сухого диметилформамида (500 мл) получают алкилированный продукт (0,557 моль, 118 г, 100%) в виде твердого вещества белого цвета с чистотой, достаточной для дальнейшего использования без дополнительной очистки.

ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц) 9,83 (с, 1Н), 7,54 (дд, J 8,5; 2,0 Гц, 1Н), 7,38 (д, J 2,0 Гц, 1Н), 7,16 (д, J 8,5 Гц, 1Н), 4,0 (т, 2Н), 3,85 (с, 3Н), 1,70 (м, 2Н), 1,43 (м, 2Н), 0,92 (т, 3Н).

Б. -метил-3-бутокси-4-метоксибензиловый спирт.

По методике примера 1Б из 3-бутокси-4-метоксибензальдегида (24 ммоль, 5,0 г), и метиллития (26,4 ммоль, 18,9 мл 1,4 М раствора в этиловом эфире) в среде сухого тетрагидрофурана (150 мл) получают спирт (23,0 ммоль, 5,15 г, 96% ); полученный продукт согласно данным ЯМР имеет чистоту 93% Продукт используют далее без дополнительной очистки.

ЯМР (CDCl₃, МГц) : 6,94 (д, J 2,5 Гц, 1Н), 8,85 (м, 2Н), 4,82 (к, 1Н), 4,01 (т, 2Н), 3,85 (с, 3Н), 1,82 (р, 2Н), 1,50 (м, 3Н), 0,97 (т, 2Н).

В. 3-бутокси-4-метоксиацетофенон.

По методике примера 1В из -метил-3-бутокси-4-метоксибензилового спирта (23 ммоль, 5,15 г) и бихромата пиридина (34,4 ммоль, 12,95 г) в сухом хлористом метилене (150 мл) получают кетон (21,6 ммоль, 4,81 г, 94%) в виде твердого вещества желтого цвета, чистота которого достаточна для дальнейшего использования без дополнительной очистки.

ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) 7,52 (дд, J 8,5 Гц; 2,0 Гц, 1Н), 7,51 (д, J 2,0 Гц, 1Н), 6,86 (д, J 8,5 Гц, 1Н), 4,05 (к, 2Н), 3,90 (с, 3Н), 2,55 (с, 3Н), 1,83 (м, 2Н), 1,48 (м, 2Н), 0,95 (т, 3Н).

Г. 3-бутокси-4-метоксиацетофеноноксим.

По методике примера 1Г из 3-бутокси-4-метоксиацетофенона (15 ммоль, 3,33 г) и солянокислого гидроксиламина (16,5 ммоль, 1,15 г) в среде сухого пиридина (100 мл) получают ацетофеноноксим в виде легкого твердого вещества желтого цвета (13,17 ммоль, 3,12 г, 88%), чистота которого достаточна для того, чтобы использовать его далее без дополнительной очистки.

ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) : 11,0 (с, 1Н), 7,24 (д, J 2,0 Гц, 1Н), 7,13 (дд, J 8,5; 2,0 Гц, 1Н), 4,03 (т, J 7,0 Гц, 2Н), 3,86 (с, 3Н), 2,30 (с, 3Н), 1,82 (м, 2Н), 1,47 (м, 2Н), 0,96 (т, J 7,0 Гц, 3Н).

Д. 1-[3-(бутокси)-4-метоксифенил]этанон(Е)-О-аминокарбонил)оксим.

По методике примера 1Д из 3-бутокси-4-метоксиацетофеноноксима (8,73 ммоль, 1,94 г) и хлорсульфонилизоцианата (4,63 ммоль, 0,655 г, 0,403 мл) в среде сухого тетрагидрофурана (40 мл) получают масло желтого цвета, которое очищают импульсной хроматографией (силикагель: 1) хлористый метилен; 2) 2% этилацетата/хлористый метилен; 3) 5% этилацетата/хлористый метилен). Полученный остаток растирают с минимальным количеством смеси этиловый эфир/гексан и собирают отсасыванием, получая целевое соединение в виде твердого вещества белого цвета. Это твердое вещество сушат в вакууме при 50^оС в течение ночи, получая аналитически чистый продукт (1,14 ммоль, 0,306 г, 13%).

ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц) : 7,42 (д, J 2,0 Гц, 1Н), 7,34 (дд, J 8,5; 2,0 Гц, 1Н), 7,10 (с, 2Н), 6,98 (д, J 8,5 Гц, 1Н), 4,01 (т, 2Н), 3,79 (с, 3Н), 2,29 (с, 3Н), 1,69 (м, 2Н), 1,43 (м, 2Н), 0,53 (т, 3Н).

ИК (КBr) (см^-1) 3445, 3250, 2970, 1734, 1517, 1370, 1257, 1156, 1023, 975.

МС (EI,m/e,) 280(14, М⁺), 237(100), 181(99), 164(65), 150(48), 125(37), 124(94), 79(30).

C₁₄H₂₀N₂O₄

Вычислено, С 59,99; Н 7,19; N 9,99.

Найдено, С 59,97; Н 7,10; N 9,87.

П р и м е р 3. 1-[4-метокси-3-(3-феноксипропокси)фенил]этанон(Е)-О-аминокарбонилоксим.

А. 4-метокси-3-(3-феноксипропокси)-бензальдегид.

По методике примера 1А из изованилина (20 ммоль, 3,04 г), порошкообразного карбоната калия (22 ммоль, 3,04 г) и 3-феноксипропилбромида (22 ммоль, 4,73 г, 3,47 мл) в среде сухого диметилформамида (100 мл) получают алкилированный продукт (20,0 ммоль, 5,75 г, 100%) в виде твердого вещества желтовато-коричневого цвета, чистота которого достаточна для дальнейшего использования без дополнительной очистки.

ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц) 9,84 (с, 1Н), 7,56 (дд, J 8,5; 2,0 Гц, 1Н), 7,44 (д, J 2,0 Гц, 1Н), 7,28 (м, 2Н), 7,18 (д, J 8,5 Гц, 1Н), 6,94 (м, 3Н), 4,20 (т, J 7,0 Гц, 2Н), 4,13 (т, J 7,0 Гц, 2Н), 3,66 (с, 3Н), 2,20 (м, 2Н).

Б. -метил-4-метокси-3-(3-феноксипропокси)-бензиловый спирт.

По методике примера 1Б из 4-метокси-3-(3-феноксипропокси)бензальдегида (8,03 ммоль, 2,30 г) и метиллития (12,05 ммоль, 8,61 мл 1,4 М раствора в этиловом эфире) в среде сухого тетрагидрофурана 100 мл) получили целевое соединение ( 7,57 ммоль, 2,29 г, 94%) в виде твердого вещества желтовато-коричневого цвета.

ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц) : 7,30 (м, 2Н), 6,90 (м, 6Н), 5,02 (д, 1Н), 4,63 (м, 1Н), 4,12 (т, J 7,0 Гц, 2Н), 4,09 (т, J 7,0 Гц, 2Н), 3,70 (с, 3Н), 2,15 (р, 2Н), 1,27 (д, 3Н).

В. 4-метокси-3-(3-феноксипропокси)ацетофенон.

По методике примера 1В из -метил-4-метокси-3-(3-феноксипропокси)бензилово-го спирта (7,51 ммоль, 2,27 г) и бихромата пиридина (11,26 ммоль, 4,23 г) в среде сухого хлористого метилена (75 мл) получили целевое соединение (7,06 ммоль, 2,12 г, 94%) в виде легкого твердого вещества желтого цвета, чистота которого достаточна для того, чтобы использовать его для дальнейшего превращения непосредственно.

ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц) : 7,61 (дд, J 8,5; 2,0 Гц, 1Н), 7,46 (д, J 8,5 Гц, 1Н), 7,27 (м, 2Н), 7,05 (л, 1Н), 6,93 (м, 3Н), 4,15 (т, J 7,0 Гц, 2Н), 4,10 (т, J 7,0 Гц, 2Н), 3,80 (с, 3Н), 2,48 (с, 3Н), 2,18 (м, 2Н).

Г. 4-метокси-3-(3-феноксипропокси)ацетофеноноксим.

По методике примера 1Г из 4-метокси-3-(3-феноксипропокси)ацетофенона (7,06 ммоль, 2,12 г) и солянокислого гидроксиламина (7,76 ммоль, 540 мг) в среде сухого пиридина (70 мл) получают целевое соединение в виде беловатого твердого вещества (6,60 ммоль, 2,08 г, 93%), чистота которого достаточна для того, чтобы использовать его в дальнейшем превращении без дополнительной очистки.

ЯМР (ДМСО-d₆ 300 МГц) : 10,95 (с, 1Н), 7,25 (м, 3Н), 7,16 (д, J 2,0 Гц, 1Н), 6,93 (м, 4Н), 4,12 (т, J 7,5 Гц, 2Н), 4,09 (т, J 7,5 Гц, 2Н), 3,77 (с, 3Н), 2,15 (м, 2Н), 2,10 (с, 3Н).

Д. 1-[4-метокси-3-(3-феноксипропокси)фенил]этанон(Е)-О-аминокарбонилоксим.

По методике примера 1Д к медленно перемешиваемой суспензии изоцианата натрия (19,02 ммоль, 1,24 г) в сухом хлористом метилене (20 мл) добавляют безводную трифторуксусную кислоту (38,05 ммоль, 4,34 г, 2,93 мл) и раствор 4-метокси-3-3-феноксипропоксиацетофеноноксима (4,76 ммоль, 1,50 г) в хлористом метилене (6 мл), получая масло желтого цвета, которое очищают импульсной хроматографией (силикагель: 1) 5% этилацетата/хлористый метилен; 2) 8% этилацетата/хлористый метилен; 3) 10% этилацетата/хлористый метилен). Полученное твердое вещество белого цвета сушат в вакууме, получая аналитически чистое целевое соединение (3,12 ммоль, 1,12 г, 66%).

ЯМР (ДМСО-d₆ 300 МГц) : 7,47 (д, J 2,0 Гц, 1Н), 7,36 (дд, J 8,5; 2,0 Гц, 1Н), 7,27 (м, 2Н), 7,11 (с, 2Н), 6,95 (м, 4Н), 4,19 (т, J 7,0 Гц, 2Н), 4,12 (т, J 7,0 Гц, 2Н), 3,78 (с, 3Н), 2,28 (с, 3Н), 2,16 (т, 2Н).

ИК (КВr) (см^-1) 3470, 3250, 2940, 1730, 1605, 1590, 1520, 1370, 1258, 1152, 975, 758.

МС (EI,m/e,) 358 (M⁺, 0,6), 315(55), 164(23), 107(100), 77(75).

C₁₉H₂₂N₂O₅

Вычислено, С 63,67; Н 6,19; N 7,82.

Найдено, С 64,01; Н 6,08; N 7,71.

П р и м е р 4. 1-(3-циклопентилокси-4-метоксифенил)-2- фенилэтанон(Е)-О-(аминокарбонил)оксим

А. 1-(3-циклопентилокси-4-метоксифенил)-2-фенилэтан-1-ол

К перемешиваемому магнитной мешалкой раствору свежеразмолотых молниевых стружек (36,54 ммоль, 0,888 г) в безводном этиловом эфире (20 мл) при комнатной температуре по каплям из капельной воронки добавляют раствор бромистого бензила (36,54 ммоль, 4,35 мл) в безводном этиловом эфире (15 мл). Вначале добавление осуществляют медленно, добавляют лишь 2-3 мл реагента, и реакционную смесь нагревают до тех пор, пока не начнется выделение газа. В этот момент снова начинают по каплям добавлять бромистый бензил, и реакционную смесь разбавляют этиловым эфиром, предотвращая димеризацию реактива Гриньяра. По окончании добавления бромистого бензила реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч, и затем при этой же температуре по каплям добавляют раствор 3-циклопентилокси-4-метоксибензальдегида (30,0 ммоль, 6,61 г) в безводном этиловом эфире (30 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин, и затем выливают в ледяную воду (500 мл), содержащую концентрированную серную кислоту (7 мл). Водную смесь экстрагируют этилацетатом (2 раза по 300 мл) и объединенные органические слои промывают насыщенным раствором бикарбоната натрия (300 мл). Органический слой сушат над сульфатом натрия и концентрируют в вакууме, получая целевое соединение в виде твердого вещества белого цвета (25,97 ммоль, 8,06 г, 86%), чистота которого достаточна для того, чтобы далее использовать его непосредственно.

Б. 1-(3-циклопентилокси-4-метоксифенил)-2-фенилэтанон.

По методике примера 1В из 1-(3-циклопентилокси-4-метоксифенил)-2-фенилэтан-1-ола (10,0 ммоль, 3,12 г) и бихромата пиридина (15,0 ммоль, 5,64 г) в среде сухого хлористого метилена (100 мл) получают кетон в виде легкого твердого вещества желтоватого цвета (9,05 ммоль, 2,81 г, 90% чистота которого достаточна для того, чтобы использовать его на следующей стадии без дополнительной очистки.

ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) 7,63 (дд, J 8,5 Гц; 2,0 Гц, 1Н), 7,54 (д, J 2,0 Гц, 1Н), 7,28 (м, 5Н), 6,86 (д, J 8,5 Гц, 1Н), 4,80 (м,1H), 4,22 (c, 2H), 3,89 (c, 3H), 1,80 (м, 8H).

В. 1-(3-циклопентилокси-4-метоксифенил)-2-фенилэтаноноксим.

По методике примера 1Г из 1-(3-циклопентилокси-4-метоксифенил)-2-фенилэта-нона (5,0 ммоль, 1,55 г) и солянокислого гидроксиламина (5,50 ммоль, 0,382 г) в среде сухого пиридина (25 мл) получают целевое соединение в виде твердого вещества желтого цвета (4,61 ммоль, 1,50 г, 93%), чистота которого достаточна для того, чтобы использовать его далее без дополнительной очистки.

ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц) : 11,27 (с, 1Н), 7,20 (м, 7Н), 6,89 (м, 8Н), 4,70 (м, 1Н), 4,12 (с, 2Н), 3,70 (с, 3Н), 1,65 (м, 8Н).

Г. 1-(3-циклопентилокси-4-метоксифенил)-2-фенилэтанон(Е)-О-(аминокарбонил)оксим

К перемешиваемому магнитной мешалкой раствору 1-3-циклопентилокси-4-метоксифенил-2-фенилэтаноноксима (4,51 ммоль, 1,48 г ) в сухом тетрагидрофуране (45 мл) при 0^оС по каплям в течение 2 мин добавляют трихлорацетилизоцианат (5,00 ммоль, 0,943 мг, 0,596 мл), и полученный раствор перемешивают, в то время как температура в течение ночи медленно поднимается от 0^оС до комнатной. Затем реакционную смесь охлаждают до 0^оС и по каплям добавляют к ней насыщенный раствор аммиака в ацетонитриле (25 мл; получен пробулькиванием газообразного аммиака через ацетонитрил при комнатной температуре в течение 1 ч). Раствор перемешивают, в то время как он медленно нагревается от 0^оС до комнатной температуры. Спустя 1,5 ч тетрагидрофуран удаляют в вакууме, и остаток делят между хлористым метиленом (200 мл) и водой (200 мл). Водную фазу экстрагируют этилацетатом (200 мл) и соединенные органические слои промывают водой, сушат над сульфатом натрия и концентрируют в вакууме, получая смесь продукта и оксима (примерно 1:1). Полученный остаток очищают импульсной хроматографией (силикагель; 1) 2% этилацетата/хлористый метилен; 2) 5% этилацетата/хлористый метилен; 3)7% этилацетата/хлористый метилен), получая твердое вещество белого цвета, которое растирают со смесью эфир/гексан и сушат в вакууме при 50^оС, получая аналитически чистое целевое соединение (1,22 ммоль, 0,450 г, 27%).

ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц) : 7,38 (м, 2Н), 7,24 (м, 2Н), 7,17 (м, 5Н), 6,94 (д, J 8,5 Гц, 1Н), 4,84 (м, 1Н), 4,23 (с, 2Н), 3,74 (с, 3Н), 1,65 (м, 8Н).

ИК (КВr) (см^-1) 3925, 3815, 3240, 2950, 2920, 1710, 1588, 1511, 1358, 1252, 1222, 1130, 960, 898.

МС (FAB, m/e,) 391(22,М⁺Na⁺), 368 (21,М⁺), 310 (100), 30 (866), 91 (85).

C₂₁H₂₄N₂O₄

Вычислено, С 68,46, Н 6,57; N 7,60.

Найдено, C 68,42; Н 6,71; N 7,48.

П р и м е р 5. 1-(3-циклопентилокси-4-метоксифенил)-3-фенилпропанон(Е)- О-(аминокарбонил)оксим. А. 1-(3-циклопентилокси-4-метоксифенил)-3-фенилпропан-1-ол.

По методике примера 4А из магниевыных стружек (32,42 ммоль, 0,788 г), 2-бромэтилбензола (32,42 ммоль, 6,0 г), 3-циклопентилокси-4-метоксибензальдегида (32,42 ммоль, 7,14 г), полученного в примере 1А, и безводного этилового эфира (300 мл) получают целевое соединение в виде твердого вещества белого цвета (3,4 ммоль, 9,60 г, 91%), чистота которого достаточна для дальнейшего использования без дополнительной очистки.

ЯМР (ДМСО-d₆, 300 СГц) 7,21 (м, 5Н), 6,89 (д, J 2,0 Гц, 1Н), 6,87 (д, J 8,5 Гц, 1Н), 6,80 (дд,J 8,5; 2,0 Гц, 1Н), 5,12 (д, 1Н), 4,76 (м, 1Н), 4,42 (м, 1Н), 3,70 (с, 3Н), 2,58 (м, 2Н), 2,73 (м, 10Н).

Б. 1-(3-циклопентилокси-4-метоксифенил)-3-фенилпропанон.

По методике примера 1В из 1-(3-циклопентилокси-4-метоксифенил)-3-фенилпро-пан-1-ола (29,41 ммоль, 9,60 г) и бихромата пиридина (44,12 ммоль, 16,59 г) в среде сухого хлористого метилена (120 мл) получают кетон в виде легкого твердого вещества желтого цвета, которое, как показывает ТСХ-анализ, содержит небольшое количество 3-циклопентилокси-4-метоксибензальдегида. Полученное вещество разделяют между насыщенным водным раствором гидросульфита натрия (500 мл) и этилацетатом (500 мл) для удаления следов альдегида, оставшихся после проведения реакции Гриньяра. Водную фазу промывают этилацетатом (500 мл), органические слои объединяют, сушат над сульфатом натрия и концентрируют в вакууме, получая целевое соединение в виде твердого вещества белого цвета (23,74 ммоль, 7,70 г, 89%), чистота которого достаточна для дальнейшего использования без дополнительной очистки.

ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц) 7,64 (дд, J 8,5 Гц; 2,0 Гц, 1Н), 7,43 (д, J 2,0 Гц, 1Н), 7,28 (с, 2Н), 7,18 (с, 1Н), 7,04 (д, J 8,5 Гц, 1Н), 4,82 (м, 1Н), 3,80 (с, 3Н), 3,30 (т, J 7,0 Гц, 2Н), 2,90 (т, J 7,0 Гц, 2Н), 1,70 (м, 8Н).

В. 1-(3-циклопентилокси-4-метоксифенил)-3-фенилпропаноноксим.

По методике примера 1Г, из 1-(3-циклопентилокси-4-метоксифенил)-3-фенилпро-панона (9,25 ммоль, 3,00 г) и солянокислого гидроксиламина (10,17 ммоль, 0,707 г) в среде безводного пиридина (90 мл) получают оксим в виде легкого твердого вещества желтого цвета (8,54 ммоль, 2,90 г, 92%), чистота которого достаточна для дальнейшего использования без дополнительной очистки.

ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц) : 11,07 (с,1Н), 7,22 (м, 7Н), 6,94 (д, J8,5 Гц, 1Н), 4,75 (м, 1Н), 3,75 (с, 3Н), 2,94 (т, 2Н), 1,70 (м, 8Н).

Г. 1-(3-циклопентилокси-4-метоксифенил)-3-фенилпропанон(Е)- О-(аминокарбонил)оксим.

По методике, альтернативной методике примера 1Д, из 1-(3-циклопентилокси-4-метоксифенил)-3-фенилпропаноноксима (8,54 ммоль, 2,90 г) и хлорсульфонилизоцианата (12,82 моль, 1,81 г, 1,12 мл) в среде сухого тетрагидрофурана (80 мл) получают масло желтого цвета, которое очищают импульсной хроматографией (силикагель; 1) хлористый метилен; 2) 2% этилацетата/хлористый метилен; 3) 5% этилацетата/хлористый метилен; 4)10% этилацетата/хлористый метилен). Полученный остаток растирают с минимальным количеством смеси этиловый эфир/гексан и собирают отсасыванием, получая целевое соединение в виде твердого вещества белого цвета. Это твердое вещество сушат в вакууме при 50^оС в течение ночи, получая аналитически чистый продукт (2,53 ммоль, 0,969 г, 30%).

ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц) : 7,26 (м, 7Н), 7,07 (с, 2Н), 6,99 (д, J 2,0 Гц, 1Н), 4,86 (м, 1Н), 3,78 (с, 3Н), 3,07 (т, 2Н), 2,78 (т, 2Н), 1,7 (м, 8Н).

ИК (КВr) (см^-1) 3480, 3310, 3260, 2940, 1710, 1550, 1515, 1357, 1266, 1218, 1125, 1015, 975, 695.

МС (EI,m/e) 382 (0,5 М⁺), 339(24), 254(60), 213(22), 150(100), 149(31), 105(20), 91(50).

С₂₂Н₂₆N₂О₄

Вычислено, С 69,09; Н 6,85; N 7,33.

Найдено, C 68,81; Н 6,82; N 7,04.

П р и м е р 6. 1-[3-циклопентилокси)-4-метоксифенил]-3-метилбутанон(Е)- О-(аминокарбонил)оксим.

А. 1-(3-циклопентилокси-4-метоксифенил)-3-метилбутан-1-ол.

К перемешиваемому магнитной мешалкой раствору 3-циклопентилокси-4-метоксибензальдегида (25,0 ммоль, 5,50 г), полученного в примере 1А, в безводном этиловом эфире (250 мл) при 0^оС по каплям в течение 20 мин добавляют изобутилмагнийхлорид (30 ммоль, 15 мл 2,0 М раствора в этиловом эфире). Реакционную смесь перемешивают, в то время как она медленно нагревается до комнатной температуры в течение 1 ч. Затем выливают смесь в 1 н.HCl (250 мл) и разделяют ее между раствором кислоты и этиловым эфиром (200 мл). Водную фазу экстрагируют этиловым эфиром (200 мл), соединенные органические фазы промывают насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (200 мл), насыщенным водным раствором хлористого натрия (200 мл) и сушат над сульфатом магния. Концентрирование в вакууме дает масло желтого цвета, которое очищают импульсной хроматографией (силикагель; 1) хлористый метилен; 2) 2% этилацетата/хлористый метилен; 3) 5% этилацетата/хлористый метилен), получая целевое соединение в виде твердого вещества белого цвета (21,5 ммоль, 5,98 г, 86%).

ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц) : 6,82 (м, 3Н), 4,93 (д, 1Н), 4,76 (м, 1Н), 4,43 (м, 1Н), 3,68 (с, 3Н), 1,60 (м, 8Н), 1,30 (м, 2Н), 0,85 (д, 6Н).

Б. 1-(3-циклопентилокси-4-метоксифенил)-3-метилбутанон.

По методике примера 1В из 1-(3-циклопентилокси-4-метоксифенил)-3-метилбутан-1-ола (21,5 ммоль, 5,98 г) и бихромата пиридина (33,0 ммоль, 12,4 г) в среде сухого хлористого метилена (125 мл) получают кетон в виде легкого масла желтого цвета (21,0 ммоль, 5,80 г, 98%), чистота которого достаточна для дальнейшего использования без дополнительной очистки.

ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц) : 7,56 (дд, J 8,5; 2,0 Гц, 1Н), 7,53 (д, J 2,0 Гц, 1Н), 6,87 (д, J 8,5 Гц, 1Н), 4,85 (м, 1Н), 3,93 (с, 3Н), 2,79 (д, 2Н), 2,30 (м, 1Н), 1,80 (м, 8Н), 1,00 (д, 6Н).

В. 1-(3-циклопентилокси-4-метоксифенил)-3-метилбутаноноксим.

По методике примера 1Г из 1-(3-циклопентилокси-4-метоксифенил)-3-метилбута-нона (10,0 ммоль, 2,76 г) и солянокислого гидроксиламина (11,0 ммоль, 0,765 г) в среде сухого пиридина (50 мл) получают целевое соединение в виде бесцветного масла, которое затвердевает при стоянии (9,51 ммоль, 2,77 г, 95%). Степень чистоты полученного продукта позволяет использовать его для последующего превращения без дополнительной очистки.

ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц) 10,92 (с, 1Н), 7,20 (д, J 2,0 Гц, 1Н), 7,13 (дд, J 8,5; 2,0 Гц, 1Н), 6,94 (д, J 8,5 Гц, 1Н), 4,78 (м, 1Н), 3,73 (с, 3Н), 2,60 (д, 2Н), 1,70 (м, 8Н), 0,84 (д, 6Н).

Г. 1-[3-(циклопентилокси)-4-метоксифенил] -3-метилбутанон(Е)-О-(аминокарбонил)-о ксим.

Следуя методике примера 1Д, к медленно перемешиваемой суспензии изоцианата натрия (32,0 ммоль, 2,08 г) в сухом хлористом метилене (30 мл) добавляют безводную трифторуксусную кислоту (16,0 ммоль, 1,82 г, 1,12 мл) и раствор 1-(3-циклопентилокси-4-метоксифенил)-3-метилбутаноноксима (4,0 ммоль, 1,16 г) в хлористом метилене (10 мл); получают масло желтого цвета, которое очищают импульсной хроматографией (силикагель; 1) хлористый метилен; 2) 1% этилацетата/хлористый метилен; 3) 3% этилацетата/хлористый метилен; 4) 6% этилацетата/хлористый метилен). Полученный остаток растирают со смесью этиловый эфир/гексан и сушат в вакууме при 50^оС, получая аналитически чистое целевое соединение в виде твердого вещества белого цвета (2,40 ммоль, 0,802 г, 60%).

ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц) : 7,35 (м, 2Н), 7,05 (с, 2Н), 6,98 (м, 1Н), 4,90, (м, 1Н), 3,78 (с, 3Н), 2,74 (д, 2Н), 1,72 (м, 9Н), 0,86 (д, 6Н).

ИК (КВr) (см^-1) 3440, 3310, 3200, 2956, 2874, 1722, 1618, 1515, 1360, 1260, 990.

МС (EI, m/e,) 334(М⁺,4), 291(11), 223(13), 206(100), 165(52), 150(65), 149(66).

С₁₈Н₂₆N₂O₄

Вычислено, С 64,64; Н 7,84; N 8,38.

Найдено, С 64,97; Н 7,85; N 8,36.

П р и м е р 7. 1-[3-(циклопентилокси)-4-метоксифенил]этанон(Е)-О-[(метиламино)карбонил]окси м.

К перемешиваемому магнитной мешалкой раствору 3-циклопентилокси-4-метоксиацетофеноноксима (2,0 ммоль, 0,5 г), полученного в примере 1Г, в сухом тетрагидрофуране (20 мл) при 0^оС по каплям в течение 1 мин добавляют метилизоцианат (2,20 ммоль, 0,126 г, 0,130 мл), и затем каталитическое количество 4-диметиламинопиридина (4-ДМАП). Реакционную смесь перемешивают, в то время как она в течение 4 ч медленно нагревается от 0^оС до комнатной температуры; в течение этого времени за протеканием реакции следят с помощью ТСХ-анализа. Спустя 4 ч добавляют еще один эквивалент метилизоцианата (0,13 мл) при комнатной температуре, и реакционную смесь перемешивают в течение ночи. Тетрагидрофуран удаляют в вакууме, и остаток разделяют между хлористым метиленом (100 мл) и водой (100 мл). Водную фазу экстрагируют хлористым метиленом (100 мл), соединенные органические фазы промывают водой (100 мл), сушат над сульфатом натрия и концентрируют в вакууме. Остаток очищают импульсной хроматографией (силикагель: 1) хлористый метилен; 2) 2% этилацетата/хлористый метилен; 3) 5% этилацетата/хлористый метилен) и растирают с гексаном, получая целевое соединение в виде твердого вещества белого цвета, которое сушат в вакууме при 50^оС в течение ночи, получая аналитически чистый продукт (1,58 ммоль, 0,493 г, 80%).

ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц) 7,39 (дд, J 8,5; 2,0 Гц, 1Н), 7,37 (д, J 2,0 Гц; 1Н), 6,99 (д, J 8,5 Гц, 1Н), 4,90 (м, 1Н), 3,77 (с, 3Н), 2,70 (д, 2Н), 2,29 (с, 3Н), 1,70 (м, 8Н).

ИК (КВr) (см^-1) 3575, 3408, 2960, 1714, 1500, 1427, 1280, 1253, 1233, 1150, 958.

МС (EI, m/e,) 306(20,М⁺), 249(9), 216(19), 185(19), 181(100), 164(20), 86(43), 84(65).

C₁₆H₂₂N₂O₄

Вычислено, С 62,73; Н 7,24; N 9,14.

Найдено, С 62,60; Н 7,28; N 9,15.

П р и м е р 8. 1-(3-бутокси-4-метоксифенил)этанон(Е)-О-[(метиламино)карбонил]оксим.

По методике примера 7 из 3-бутокси-4-метоксиацетофеноксима (2,10 ммоль, 0,498 г), полученного в примере 2Г, и метилизоцианата (3,46 ммоль, 0,198 г, 0,204 мл) в среде сухого тетрагидрофурана (20 мл), содержащего каталитическое количество 4-диметиламинопиридина, получают масло желтого цвета, которое очищают импульсной хроматографией (силикагель: 1) хлористый метилен; 2) 2% этилацетата/хлористый метилен). Растирание с гексаном и собирание отсасыванием дает целевое соединение в виде твердого вещества белого цвета, которое сушат в вакууме при 50^оС в течение ночи, получая аналитически чистый продукт (1,46 ммоль, 0,430 г, 70%).

ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц) : 7,40 (м, 3Н), 6,99 (д, J 8,5 Гц, 1Н), 4,04 (т, 2Н), 3,79 (с, 3Н), 2,70 (д, J 3,5 Гц, 2Н), 2,30 (с, 3Н), 1,69 (м, 2Н), 1,42 (м, 2Н), 0,93 (т, 3Н).

ИК (КВr) (см^-1) 3355, 2970, 2950, 2883, 1717, 1520, 1464, 1332, 1266, 1234, 1152, 1033, 960.

МС (EI, m/e,) 294(31,М⁺), 150(56), 149(30), 148(23), 237(100), 181(79), 180(30), 165(40), 164(48), 140(42), 135(29), 125(30), 124(56), 79(34).

С₁₅Н₂₂N₂O₄

Вычислено, С 61,21; Н 7,53; N 9,52.

Найдено, С 60,58; Н 7,56; NB 9,41.

П р и м е р 9. 1-(3-бутокси-4-метоксифенил)этанон(Е)-О-[(фениламино)карбонил]оксим.

По методике примера 7 из 3-бутокси-4-метоксиацетофеноноксима (1,50 ммоль, 0,356 г), полученного в примере 2Г, и фенилизоцианата (1,65 ммоль, 0,196 г, 0,179 мл) в среде сухого тетрагидрофурана (15 мл), содержащего каталитическое количество 4-диметиламинопиридина, получают масло желтого цвета, которое очищают импульсной хроматографией (силикагель: 1) хлористый метилен/гексан 2:1; 2) хлористый метилен). Растирание с гексаном дает твердое вещество белого цвета, которое собирают отсасыванием и сушат в вакууме при 50^оС в течение ночи, получая аналитически чистое целевое соединение (0,97 ммоль, 0,347 г, 65%).

ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц) 9,78 (с, 1Н), 7,53 (дд, J 8,5; 2,0 Гц, 2Н), 7,34 (м, 4Н), 7,04 (м, 2Н), 4,00 (т, 2Н), 3,81 (с, 3Н), 2,48 (с, 3Н), 1,70 (м, 2Н), 1,44 (м, 2Н), 0,93 (т, 3Н).

ИК (КВr) (см-1) 3270, 3140, 3080, 2985, 2965, 1734, 1600, 1552, 1517, 1444, 1320, 1250, 1230, 1210, 1165, 1015, 765.

МС (F AB, m/e, ) 356 (20, М⁺), 328(7), 312(21), 222(52), 220(100), 164(5), 123(8).

C₂₀H₂₄N₂O₄

Вычислено, С 67,40; Н 6,79; N 7,86.

Найдено, С 67,53; Н 6,59; N 7,96.

П р и м е р 10. 1-[3-(циклопентилокси)-4-метоксифенил]этанон(Е)-О-(метоксикарбонил)оксим.

К перемешиваемому магнитной мешалкой раствору 3-циклопентилокси-4-метоксиацетофеноноксима (190 ммоль, 0,474 г), полученного в примере 1Г, в сухом хлористом метилене (20 мл) при 0^оС добавляют пиридин (3,42 ммоль, 0,271 г, 0,277 мл), и затем по каплям метилхлорформиат (2,28 ммоль, 0,215 г, 0,176 мл). Полученный раствор желтого цвета перемешивают, в то время как он в течение 5 ч медленно нагревается до комнатной температуры. Реакционную смесь разбавляют хлористым метиленом (100 мл) и делят между органическим растворителем и водой (100 мл). Водную фазу экстрагируют хлористым метиленом (100 мл) и соединенные органические слои промывают водой (100 мл). Органическую фазу сушат над сульфатом натрия и концентрируют в вакууме, получая твердое вещество желтого цвета, которое далее растирают с минимумом смеси этиловый эфир/гексан и собирают отсасыванием, получая целевое соединение в виде твердого вещества белого цвета. Твердое вещество сушат в вакууме при 50^оС в течение ночи, получая аналитически чистый продукт (1,19 ммоль, 0,365 г, 62,5%).

ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц) : 7,30 (дд, J 8,5; 2,0 Гц, 1Н), 7,28 (д, J 2,0 Гц, 1Н), 7,02 (д, J 8,5 Гц, 1Н), 4,80 (м, 1Н), 3,81 (с, 3Н), 3,78 (с, 3Н), 2,30 (с, 3Н), 1,70 (м, 8Н).

ИК (КВr) (см^-1) 2970, 1790, 1580, 1510, 1540, 1525, 1248, 1150, 1020, 988, 844, 778.

МС (EI m/e,) 307 (27, М⁺), 239(54), 165(35), 164(81), 148(100), 123(32), 122(55).

C₁₆H₂₁NO₅

Вычислено, С 62,52; Н 6,89; N 4,56

Найдено, С 62,49; Н 6,72; N 4,49.

П р и м е р 11. 1-(3-бутокси-4-метоксифенил)этанон(Е)-О-(метоксикарбонил)ок- сим.

По методике примера 10 из 3-бутокси-4-метоксиацетофеноноксима (1,80 ммоль, 0,427 г), полученного в примере 2Г, пиридина (2,0 ммоль, 0,158 г, 0,162 мл) и метилхлорформиата (2,0 ммоль, 0,189 г, 0,154 мл) в среде сухого хлористого метилена (20 мл) получают твердое вещество беловатой окраски, которое очищают импульсной хроматографией (силикагель: 1) хлористый метилен/гексан 2: 1; 2) хлористый метилен/гексан 4:1; 3) хлористый метилен). Полученное вещество сушат в вакууме при 50^оС в течение ночи, получая аналитически чистое целевое соединение в виде твердого вещества белого цвета (1,59 ммоль, 0,470 г, 88%).

ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц) : 7,30 (дд, J 8,5: 2,0 Гц, 1Н), 7,38 (д, J 2,0 Гц, 1Н), 7,02 (д, J 8,5 Гц, 1Н), 3,87 (т, 2Н), 3,81 (с, 3Н), 3,80 (с, 3Н), 2,31 (с, 3Н), 1,70 (м, 2Н), 1,44 (м, 2Н), 0,93 (м, 3Н).

ИК (КВr) (cм^-1) 3400, 2970, 2950, 1785, 1520, 1442, 1430, 1317, 1245, 1152, 1020, 938, 878, 783.

МС (EI, m/e,) 295(51,М⁺⁾, 220(26), 164(64), 149(33), 148(100), 134(34), 123(37), 122(54), 79(34).

C₁₅H₂₁NО₅

Вычислено, С 61,00, Н 7,17; N 4,74.

Найдено, С 60,99; Н 7,23; N 4,76.

П р и м е р 12. 1-(3-бутокси-4-метоксифенил)этанон(E)-О-(феноксикарбонил)оксим.

По методике примера 10 из 3-бутокси-4-метоксиацетофеноноксима (1,50 ммоль, 0,356 г), полученного в примере 2Г, пиридина (1,65 ммоль, 0,130 г, 0,133 мл) и фенилхлорформиата (1,65 ммоль, 0,258 г, 0,207 мл) в среде сухого хлористого метилена (15 мл) получили масло желтого цвета, которое очистили импульсной хроматографией (силикагель: 1) хлористый метилен/гексан 1:1; 2) хлористый метилен/гексан 2: 1). Последующее растирание с минимумом смеси этиловый эфир/гексан дает целевое соединение в виде твердого вещества белого цвета, которое сушат в вакууме при 50^оС в течение ночи, получая аналитически чистый продукт (0,42 ммоль, 0,150 г, 28%).

ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц) : 7,47 (м, 2Н), 7,33 (м, 5Н), 7,05 (д, J 8,5 Гц, 1Н), 3,98 (т, 2Н), 3,81 (с, 3Н), 2,40 (с, 3Н), 1,70 (м, 2Н), 1,43 (м, 2Н), 0,93 (т, 3Н).

ИК (КВr)(см^-1) 3440, 2960, 2930, 2850, 1790, 1600, 1523, 1330, 1260, 1220, 1180, 1140, 1020.

МС (EI, m/е, ) 357 (9,1, М⁺), 221(24), 220(100), 165(19), 150(17), 123(18), 94(19).

C₂₀H₂₃NO₅

Вычислено, С 67,21; Н 6,49; N 3,92

Найдено, С 65,35; Н 6,54; N 3,77.

П р и м е р 13. 1-[3- (бицикло[2.2.1]гепт-2-илокси)-4-метоксифенил] этанон(Е)-О-(аминокарбонил)окси м.

А. 3-(бицикло[2.2.1]гепт-2-илокси)-4-метоксибензальдегид.

К перемешиваемому магнитной мешалкой раствору изованилина (10 ммоль, 1,52 г) в сухом тетрагидрофуране (15 мл) при -10^оС добавляют сначала эндонорборнеол (10 ммоль, 1,12 г), а затем трифенилфосфин (14 ммоль, 3,67 г). Спустя 5 мин при -10^оС по каплям добавляют раствор диэтилазодикарбоксилата (14 ммоль, 2,44 г, 2,22 мл) в сухом тетрагидрофуране (5 мл), и полученному раствору дают нагреваться до комнатной температуры в течение 20 ч. В вакууме удаляют растворитель, и остаток разделяют между этилацетатом и водой. Органическую фазу сушат над сульфатом натрия и концентрируют в вакууме, получая неочищенный продукт. Этот продукт очищают импульсной хроматографией (силикагель: 20% этилацетата/гексан), получая целевое соединение в виде бесцветного масла (4,07 ммоль, 1,00 г, 41%).

ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц) 9,82 (с, 1Н), 55 (дд, J 8,5; 2,0 Гц, 1Н), 7,30 (д, J 2,0 Гц, 1Н), 7,18 (д, J 8,5 Гц, 1Н), 4,30 (д, J 5,0 Гц, 1Н), 3,85 (с, 3Н), 2,38 (д, J 5,0 Гц, 1Н), 2,29 (с, 1Н), 1,80 (м, 1Н), 1,48 (м, 4Н), 1,16 (м, 3Н).

Б. -метил-3-(бицикло[2.2.1]гепт-2-илокси)-4-метоксибензиловый спирт.

По методике примера 1Б из 3-(бицикло- [2.2.1]гепт-2-илокси)-4-метоксибензальде-гида (8,53 ммоль, 2,10 г) и метиллития (25,58 ммоль, 18,28 мл 1,4 М раствора в этиловом эфире) в среде сухого тетрагидрофурана (80 мл) получают неочищенный спирт. Этот продукт очищают хроматографически (силикагель; хлористый метилен), получая целевое соединение в виде бесцветного масла (4,15 ммоль, 1,09 г, 49%).

ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) : 6,85 (м, 3Н), 4,81 (к, 1Н), 4,20 (д, J 5,0 Гц, 1Н), 3,81 (с, 3Н), 2,50 (д, J 5,0 Гц, 1H), 1,75 (м, 3Н), 1,55 (м, 3Н), 1,46 (д, 3Н), 1,15 (м, 3Н).

В. 3-(бицикло[2.2.1]гепт-2-илокси)-4-метоксиацетофенон.

По методике примера 1В из -метил-3-(бицикло[2.2.1]гепт-2-илокси)-4-метоксибензилового спирта (4,15 ммоль, 1,09 г) и бихромата пиридина (6,23 ммоль, 2,34 г) в среде сухого хлористого метилена (50 мл) получают кетон (3,42 ммоль, 0,890 г, 82%) в виде твердого вещества белого цвета, который имеет достаточную чистоту для того, чтобы использовать его далее без дополнительной очистки.

ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц) : 7,60 (дд, J 8,5; 2,0 Гц, 1Н), 7,27 (д, J 2,0 Гц, 1Н), 7,02 (д, J 8,5 Гц, 1Н), 4,25 (д, J 5,0 Гц, 1Н), 3,80 (с, 3Н), 2,50 (с, 3Н), 2,35 (д, J 5,0 Гц, 1Н), 2,25 (с, 1Н), 1,85 (м, 1Н), 1,45 (м, 4Н), 1,13 (м, 3Н).

Г. 3-(бицикло[2.2.1]гепт-2-илокси)-4-метоксиацетофеноноксим.

По методике примера 1Г из 3-(бицикло[2.2.1]гепт-2-илокси)-4-метоксиацетофе-нона (3,42 ммоль, 0,890 г) и солянокислого гидроксиламина (3,76 ммоль, 0,261 г) в среде сухого пиридина (40 мл) получают ацетофеноноксим в виде легкого твердого вещества желтого цвета (3,01 ммоль, 0,830 г, 88%), чистота которого достаточна для его дальнейшего использования без дополнительной очистки.

ЯМР (ДМСO-d₆, 300 МГц) 11,0 (с, 1Н), 7,20 (д, J 2,0 Гц, 1Н), 7,14 (дд, J 8,5; 2,0 Гц, 1Н), 6,93 (д, J 8,5 Гц, 1Н), 4,20 (д, J 5,0 Гц, 1Н), 3,75 (с, 3Н), 2,35 (д, J 5,0 Гц, 1Н), 2,25 (с, 1Н), 2,10 (с, 3Н), 1,71 (м, 1Н), 1,50 (м, 4Н), 1,15 (м, 3Н).

Д. 1-[3-(бицикло[2.2.1] гепт-2-илокси)-4-метоксифенил] этанон(Е)-О-(аминокарбонил )оксим.

Следуя методике примера 1Д, к медленно перемешиваемой суспензии (16,56 ммоль, 1,08 г) в сухом хлористом метилене (20 мл) добавляют безводную трифторуксусную кислоту (33,05 ммоль, 3,78 г, 2,55 мл) и раствор 3-(бицикло[2.2.1] -гепт-2-илокси)-4-метоксиацетофеноноксима (4,14 ммоль, 1,14 г) в хлористом метилене (20 мл), получая масло желтого цвета, которое очищают импульсной хроматографией (силикагель: 1) 5% этилацетата/хлористый метилен; 2) 8% этилацетата/хлористый метилен; 3) 10% этилацетата/хлористый метилен). Полученное твердое вещество белого цвета сушат в вакууме, получая аналитически чистое целевое соединение (0,99 ммоль, 0,316 г, 24%).

ЯМР (ДМСО-d₆, 300 МГц) : 7,35 (дд, J 8,5; 2,0 Гц, 1Н), 7,34 (д, J 2,0 Гц, 1Н), 7,08 (с, 2Н), 6,98 (д, J 8,5 Гц, 1Н), 4,36 (д, J 5,0 Гц, 1Н), 3,79 (с, 3Н), 2,32 (д, J 5,0 Гц, 1Н), 2,29 (с, 3Н), 2,26 (с, 1Н), 1,74 (м, 1Н), 1,59 (д, 1Н), 1,43 (м, 3Н), 1,33 (м, 3Н).

ИК (КВr) (см^-1) 3480, 3280, 3220, 2950, 1750, 1720, 1515, 1350, 1252,1140, 1000, 975.

МС (EI, m/e,) 318 (М⁺,10), 277(17), 276(100), 258(99), 181(14).

C₁₇H₂₂N₂O₄

Вычислено, С 64,13; Н 6,97; N 8,80.

Найдено, С 63,96; Н 6,67; N 8,66.

П р и м е р 14. Анализ для оценки способности предлагаемых соединений ингибировать ФДЭ IV.

Раствор, содержащий ФДЭ IV, готовили из трахеальной мышцы собаки следующим образом.

Анестезированную нембуталом собаку (доза 33 мг/кг) умерщвляют. Трахеальную мышцу удаляют, очищают от соединительной ткани и тщательно измельчают. 3-4 г ткани гомогенизируют в трис-HCl-буферном растворе (рН 7,8), используя Polytron. Затем гомогенизат подвергают центрифугированию при 25000 (4^оС) в течение 30 мин. Супернатант декантируют, фильтруют через четыре слоя марли и пропускают через колонку, наполненную ДЭАЭ-sepharose (размер колонки: 40 см х 2 см, адсорбент откондиционирован трис-HCl-буферным раствором, pН 7,8). Затем колонку промывают 240 мл буфера для удаления несвязанных белков. ФДЭ элюируют, используя 450 мл трис-HCl-буферного раствора с линейным градиентом Nа-ацетата от 0,0 до 1,0 М (80 мл/ч); собирают 7,5 мл фракции. Каждую фракцию анализируют на метаболизирующую активность ФДЭ в отношении цАМФ и цГМФ. Фракции, вымывающиеся примерно при 0,6 М Na-ацетата и обладающие метаболизирующей активностью в отношении цАМФ, но не в отношении цГМФ, объединяют и используют в качестве маточного раствора ФДЭ для оценки ингибирующего действия, оказываемого предлагаемыми соединениями на ФДЭ IV.

Активность ФДЭ определяют (см. Томпсоном и др. Advanees Cyclic Nucleotide Research, 1979, 10,69) при 30^оС в реакционной смеси, содержащей: 10 мМ трис-HCl (рН 7,8), 5 мМ хлорида магния, 1 мМ -меркаптоэтанола, 1 мкМ ³Н-цАМФ, 10 мкМ Cl-930, маточный раствор ФДЭ IV и тестируемое соединение в желаемой концентрации. Cl-930 выполняет роль ингибитора чувствительного к цГМФ, селективного в отношении цАМФ ФДЭ (ФДЭ III), который присутствует в маточном растворе ФДЭ IV, когда последний приготовляют описанным способом. Способность тестируемого соединения ингибировать ФДЭ IV определяют, измеряя замедление метаболизма цАМФ, вызываемое тестируемым соединением, и выражая его в процентах от замедления, вызываемого 10 мкМ ролипрама сильного ингибитора ФДЭ IV (см. Беаво, Advances in Second Messenger and Phosphoprotein Research, 1988, 22,1). Значения IC₅₀ вычисляют для каждого тестируемого соединения как концентрацию тестируемого соединения, которая ингибирует ФДЭ IV на 50%

Тестирование предлагаемых соединений дало результаты, приведенные в табл.1.

Испытанные указанным образом соединения проявляют высокую активность в ингибировании ФДЭ IV.

Предлагаемые соединения относятся к соединениям, проявляющим среднюю токсичность. Ниже приводятся тесты биологических испытаний.

Функциональный тест на ингибирование фосфодиэстеразы (ФДЭ) III в сравнении с ФДЭ IV в изолированной трахее морской свинки.

Цель.

Функционально достичь селективности ингибирования ФДЭ III в сравнении с ФДЭ IV испытываемым соединением, где ФДЭ III обозначает ФДЭ, ингибируемую ц-ГМФ и селективную к ц-АМФ, а ФДЭ IV обозначает ФДЭ, нечувствительную к ц-ГМФ и селективную к ц-АМФ, которые присутствуют в мягких мышцах трахеи.

Образцы.Используют самцов морской свинки Хартли (350-400 г).

Животные имеют свободный доступ к пище и воде.

Процедура. Морских свинок умерщвляют ударом по голове. Вскрывают шею и вынимают трахею. Трахею содержат в аэрируемом ФСР, очищают от соединительных тканей и жира и разрезают на кольца шириной приблизительно 2 мм (обычно содержащие два хрящевых сегмента на кольцо). Затем через отверстие трахейного кольца пропускают две шелковые шовные нити, которые завязывают вокруг хряща по одной на каждой стороне трахейной мышцы. Затем трахейное кольцо подвешивают на шовных нитях между стеклянным крючком и датчиком силового смещения в ванночке для органов объемом 10 мл для измерения изометрического напряжения.

Ткани содержат при 37^оС в аэрируемом (95% СО₂/5% СО₂) физиологическом солевом растворе (ФСР) следующего состава, мМ: NaCl 118; KH₂PO₄ 1,18; KCl 4,74; CaCl₂ 2, 5; MgSO₄ 7H₂O 1,19; NaHCO₃ 25; декстроза (11,1 мМ), и дополнительно содержащим кокаин и гидрокортизон (3 х 10^-6 М и 1 х 10^-5 М соответственно с целью блокирования механизмов внутривенного и внешненервного поглощения), пропранолол (1х10^-6 М, для блокирования -адреноцепторов), фентоламин (1х10^-5 М, для блокирования -адреноцепторов), индометацин (2,8х10^-6 М, для ингибирования спонтанного возникновения напряжения) и кальций динатрий ЭДТК (2,6х10^-5 М, в качестве антиоксиданта). К каждому образцу ткани прикладывают стационарное напряжение 2 г и выжидают примерно 30 мин (с частым промыванием и регулировкой стационарного напряжения) до стабилизации состояния ткани. После этого стабилизированные ткани сокращают путем добавления карбахола (1х10^-6 М), и образование напряжения измеряют на полиграфе.

По достижении стабильного уровня сокращения (примерно через 30 мин), в ванночку добавляют либо 1х10^-5 М ролипрама (Rolipram, ингибитор ФДЭ IV), либо 1х10^-5 М имазодана (Imazodan, С1914, ингибитор ФДЭ III), после чего ткани инкубируют до стабильного уровня напряжения (обычно 45 мин). Способность испытываемого соединения стимулировать последующую релаксацию ткани определяют путем его добавления с увеличением концентрации и измерения конечной степени релаксации. После завершения такого определения зависимости концентрация отклик каждый образец ткани промывают ФСР и оставляют для релаксации до базового стационарного напряжения.

Измерения.

Релаксацию, стимулированную исследуемым соединением, выражают в процентах от максимальной стимулируемой релаксации. Здесь максимальная стимулируемая релаксация определяется как разность между напряжением в ткани после ее стабилизации в присутствии либо ролипрама, либо имазодана, и окончательным стационарным напряжением после промывания ткани ФСР. Результаты представляют графически в виде зависимости релаксации (%) от log концентрации испытываемого соединения. Величину EС₅₀ (концентрация испытываемого соединения, приводящая к 50% от максимально возможной релаксации) определяют для каждого образца ткани путем линейного регрессионного анализа точек, расположенных в ряду с концентрацией 50% Для испытания каждого соединения используют по меньшей мере три образца ткани, причем каждый из них берется от различных животных.

Поскольку концентрации ц-АМФ из мягких мышц трахеи регулируются как ФДЭ III, так и ФДЭ IV, и поскольку ц-АМФ является мощным релаксирующим агентом для мягких мышц трахеи, ингибиторы ФДЭ III и ФДЭ IV, каждый сам по себе, стимулируют частичную релаксацию препарата трахейного кольца. Когда трахейные кольца предварительно обработаны имазоданом (10^-5 М), ФДЭ III ингибирована, что позволяет изучать ту "часть" напряжения трахеи, которая регулируется ФДЭ IV и является восприимчивой по отношению к ингибиторам ФДЭ IV. Когда кольца обработаны ролипрамом (10^-5М), ингибирована ФДЭ IV, и можно изучать ингибиторы ФДЭ III. Путем сравнения активности соединения по отношению к релаксации трахеи в присутствии имазодана с активностью в присутствии ролипрама, можно определить селективность ингибитора ФДЭ для ФДЭ IV по сравнению с ФДЭ III.

Расчеты.

Процент релаксации рассчитывают по следующей формуле:

релаксации 100

Для каждого соединения величину ЕС₅₀ определяют в присутствии либо ролипрама, либо имазодана. Величина EC₅₀ определяется как доза соединения, вызывающая релаксацию, эквивалентную 50% от максимально возможной релаксации.

Селективность испытываемого соединения на ингибирование ФДЭ IV по сравнению с ФДЭ III рассчитывают так

оиселективности

Отношение селективности значительно меньшее, чем единица, интерпретируется как указание о селективности ингибирования ФДЭ III, в то время как отношение значительно большее, чем единица, свидетельствует о селективности ингибирования ФДЭ IV. Отношение, близкое к единице (обычно 0,2-5) может предполагать либо неселективное ингибирование ФДЭ IV и ФДЭ III, либо протекание релаксации трахеи по механизму без участия ФДЭ.

Последующие действия.

Если обнаружено, что соединение является сильнодействующим (ЕС₅₀< 3х10^-5) или является селективным по отношению либо к ФДЭ III, либо к ФДЭ IV, его можно испытывать in vivo на активность по отношению к дыхательной или сердечно-сосудистой системам.

Требуемое количество соединения 50-100 мг.

При данных испытаниях для соединений по изобретению получены следующие результаты:

Пример Активность (IC₅₀:M)

1 2,8 х 10^-8

2 7,9 х 10^-8

3 5,7 х 10^-7

4 4,1 х 10^-6

5 3,3 х 10^-6

6 3,7 х 10^-6

7 Не исследовалось

8 1,2 х 10^-5

9 1,6 х 10^-5

10 Не исследовалось

11 6,1 х 10^-6

12 1,1 х 10^-5

13 1,3 х 10^-7

Примеры результатов с эталонными соединениями приведены в табл. 2.