способ моделирования хронического гранулематозного воспаления в печени

Формула изобретения

1. СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ХРОНИЧЕСКОГО ГРАНУЛЕМАТОЗНОГО ВОСПАЛЕНИЯ В ПЕЧЕНИ, включающий однократное внутривенное введение мышам препарата на основе зимозана из Saccharomyces cererisiae, отличающийся тем, что мышам вводят гранулы зимозана, предварительно обработанные 0,1%- или 1%-ным раствором кислого фуксина, в дозе 1 - 2 мг на животное.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что для образования в печени зрелых гранулем вводят 1 мг гранул зимозана, окрашенных 0,1%-ным раствором кислого фуксина.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что для образования зрелых макрофагальных гранулем с выраженной тенденцией к инволюции к 90 суткам вводят 1 мг гранул зимозана, окрашенных 1%-ным раствором кислого фуксина.

4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что для образования зрелых макрофагальных гранулем с признаками фиброза и без тенденции к инволюции к 90 суткам вводят 2 мг гранул зимозана, окрашенных 1%-ным раствором кислого фуксина.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к биологии и медицине, а именно к экспериментальной патоморфологии, и может быть использовано для изучения иммунопатологических механизмов морфогенеза хронического (гранулематозного) воспаления в печени.

Известен способ моделирования воспаления в печени однократным внутривенным введением гранул зимоназа животным. Внутривенное введение зимозановых гранул мышам или крысам в дозе 0,1 мг на 1 г веса животного приводит к развитию у них очаговых, а позднее диффузных мононуклеарных инфильтратов в печени, состоящих главным образом из моноцитов и макрофагов. Индукция зимозаниндуцированного воспаления в печени у мышей лежит в основе одного из методов экспериментальной оценки противовоспалительной активности лечебных препаратов. Однако зимозаниндуцированные мононуклеарные инфильтраты в печени не являются гранулемами, поскольку они не содержат таких типичных для очагов гранулематозного воспаления клеток, как гигантские многоядерные клетки и эпителиоидные клетки.

Цель изобретения моделирование гранулематозного процесса в печени, позволяющего изучать различные этапы его морфогенеза, в том числе стадию обратного развития, для разработки патогенически обоснованных методов лечения грануломатозного воспаления и его последствий.

Разработан способ моделирования хронического (гранулематозного) воспаления в печени путем однократного внутривенного (в/в) введения животным (мышам) гранул зимозана, отличающийся тем, что с целью моделирования различных этапов морфогенеза грануломатозного воспаления в рамках одной экспериментальной системы, используют гранулы зимозана из Saccharomyces cerevisiaе, предварительно обработанные кислым фуксином, и при в/в введении 1 мг гранул зимозана, окрашенных в 0,1%-ном растворе кислого фуксина, в печени формируются зрелые макрофагальные гранулемы, претерпевшие инволюцию в течение 2 мес. при в/в введении 1-2 мг гранул зимозана, окрашенных в 1%-ном растворе кислого фуксина, в печени формируются гранулемы, в клеточный состав которых входят не только макрофаги и моноциты, но их производные гигантские многоядерные клетки типа Пирогова-Лангханса и эпителиоидные клетки, а также лимфоциты и фибробласты, при в/в введении 2 мг гранул зимозана, окрашенных в 1%-ном растворе кислого фуксина, в печени развиваются крупные очаги гранулематозного воспаления, имеющие тенденцию к частичному склерозированию.

Способ моделирования осуществляли следующим образом. Гранулы зимозана из Saccharomyces cerevisiae диспергировали ультразвуком в дистиллированной воде на ультразвуковом дезинтеграторе UD-11 в течение 1-2 мин в количестве 1 мг/5 мл. Затем гранулы осаждали центрифугированием при 1500 об/мин, а полученный в осадке зимозан тщательно суспензировали в 0,1%-ном или 1,0%-ном растворе кислого фуксина (Рубин С, мол. формула C₂₀H₁₇N₃O₃Na₂S₃), приготовленном на дистиллированной воде в количестве 1 мг зимозана на 1 мл раствора, и инкубировали в термостате 20 ч при температуре 37^оС. Нагруженные (окрашенные) кислым фуксином гранулы зимозана отмывали центрифугированием в 5-7 объемах дистиллированной воды при 20^оС, а затем 2-3 раза в 0,85%-ном растворе NaCl. Процедуру отмывания гранул проводили до полного исчезновения свободного фуксина из жидкой фазы суспензии. В качестве контроля служили гранулы зимозана, которые диспергировали ультразвуком в дистиллированной воде, инкубировали в термостате 20 ч при 37^оС и после осаждения центрифугированием разводили в 0,85%-ном растворе NaCl. Гранулы зимозана вводили в/в мышам линии ВА В/С весом 20-23 г однократно в 0,45 мл 0,85% NaCl. Печень животных исследовали методом контактной флуоресцентной микроскопии на люминесцетном микроскопе Люмам ИЗ после флуорохромирования срезов печени акридиновым оранжевым и методом световой микроскопии на микроскопе Биолам Л-211 после того, как кусочки печени фиксировали в 10%-ном растворе формалина, заливали в парафин, делали срезы толщиной 5 мкм и окрашивали гематоксилин-эозином и по Ван-Гизону. В срезах печени подсчитывали количество гранулем в 10 полях зрения при увеличении 200. Анализ клеточного состава гранулем проводили при увеличении х900 на световом микроскопе и при увеличении х1050 на люминесцентном микроскопе.

П р и м е р 1. Однократное внутривенное введение 1 мг гранул зимозана, окрашенного 0,1% -ным раствором кислого фуксина, приводит к образованию в печени зрелых макрофагальных гранулем на 7-е сут. которые претерпевают инволюцию к 60 сут.

П р и м е р 2. Однократное внутривенное введение 1 мг гранул зимозана, окрашенного 1%-ным раствором кислого фуксина, приводит к образованию на 7-10-е сут. четко очерченных гранулем, в состав которых входят не только моноциты и макрофаги, но и их производные гигантские многоядерные клетки типа Пирогова-Лангханса с числом ядер 4-8 и эпителиоидные клетки. Такие гранулемы сохраняются у 75% животных к 60 сут после введения гранул. Среднее количество гранулем на одно поле зрения составило при увеличении х200 на 10-е сут 15,63,7, на 60-е сут 5,11,6. Среднее количество клеток в одной гранулеме составило на 10-е сут 55,410,3, на 60-е сут 105,021,5.

П р и м е р 3. Однократное внутривенное введение 2 мг гранул зимозана, окрашенного 1%-ным раствором кислого фуксина, приводит к формированию в печени крупных гранулем с преобладанием мононуклеарных клеток, количество которых в одной плоскости среза печени может достигать 2000-3000 на 90-е сут после введения гранул. При этом в крупных очагах воспаления и на их периферии наблюдается формирование очагов соединительной ткани.

Использование предложенного способа моделирования гранулематозного воспаления в печени для изучения иммунопатологических механизмов морфогенеза хронического воспаления обеспечивает по сравнению с известным способом моделирования воспаления в печени внутривенным введением интактных гранул зимозана следующие преимущества: способ позволяет изучать процессы формирования и обратного развития зрелых макрофагальных гранулам, а также исследовать не только самые ранние этапы морфогенеза гранулематозного воспаления, характеризующиеся появлением небольших очаговых мононуклеарных инфильтратов, но и другие этапы развития хронического воспаления, характеризующиеся появлением зрелых макрофагальных гранулем, в клеточный состав которых входят гигантские многоядерные клетки типа Пирогова-Лангханса, эпителиодные клетки, лимфоциты и фибробласты. Предложенная модель позволяет также изучать механизмы склерозирования органа в очаге хронического воспаления.