способ диагностики онкологического заболевания

Формула изобретения

СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ОНКОЛОГИЧЕСКОГО ЗАБОЛЕВАНИЯ, включающий исследование биологического материала, отличающийся тем, что в плазме крови пациента одновременно определяют концентрацию витаминов A, E, диеновых коньюгатов, диенкетонов, шиффовых оснований и при значении первого показателя менее 2,0 мкмоль/л, второго - менее 18,9 мкмоль/л, третьего - более 1,4, четвертого - более 0,4, пятого - более 7,0 усл.ед/мл плазмы соответственно диагностируют онкологическое заболевание.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической биохимии, используемой преимущественно в онкологии.

Известен способ диагностики злокачественных новообразований путем определения в суточной моче больного содержания копропорфиринов III и при значении этого показателя 25 мкг/сут и менее диагностируют заболевание [1] Однако известный способ не обеспечивает высокой диагностической чувствительности и не позволяет судить о нарушении структуры и функции клеточных мембран, повреждение которых является важным диагностическим критерием на ранних стадиях заболевания.

Задача повысить информативность и чувствительность диагностики патологического процесса (в том числе злокачественных новообразований) у пациентов.

Достигается это тем, что проводят одновременное определение в плазме крови (0,2 мл) пациента концентрации витаминов А, Е, диеновых конъюгатов, диенкетонов, оснований Шиффа и по значениям полученных показателей судят о наличии в организме патологического процесса.

Способ осуществляют следующим образом. К 0,2 мл сыворотки (плазмы) крови добавляют 1,0 мл бидистиллированной воды и пробы встряхивают в течение 30 с. После этого добавляют 1,0 мл этилового спирта, снова встряхивают 30 с. Добавляют 5,0 мл гексана, образец в стандартизованном режиме встряхивают в течение 40 мин, после чего пробы центрифугируют 10 мин при 1500 об/мин, отбирают гексановый слой для флюориметрического определения L-токоферола (витамин Е) и ретинола (витамин А). Для постановки стандартных проб вместо сыворотки (плазмы) используют 0,2 мл рабочего стандартного этанольного раствора, содержащего L-токоферолацетат (20 мкмоль/л) и ретинолацетат (2,5 мкмоль/л). Контрольные пробы ставят как опытные, но вместо сыворотки берут 0,2 мл бидистиллированной воды. Спектрофлюориметрию L-токоферола проводят при длине волны возбуждения 295 нм и флюоресценции 320 нм, ретинола соответственно при 335 нм и 460 нм. Концентрацию витаминов в исследуемом биологическом материале определяют по формуле:

C_обр.= C_ст. где С_обр. концентрация исследуемого образца;

Ф_обр. интенсивность флюорисценции образцов сыворотки крови;

Ф_ст. интенсивность флюорисценции стандартов (витаминов);

С_ст. концентрация вещества в стандартном растворе.

В дальнейшем объем гексанового экстракта выпаривают досуха при температуре 65^оС, к сухому остатку добавляют 4,0 мл хлороформа и после растворения в нем экстракта липидов замеряют интенсивность свечения при длине волны 435 нм под влиянием возбуждающего флюоресценцию светового потока с длиной волны 365 нм. За единицу флюоресценции принимают люминесценцию, создаваемую в указанных условиях фотометрии стандартным раствором флюоресцеина. По завершении исследования основания Шиффа, хлороформный экстракт выпаривают при 65^оС, а липидный экстракт извлекают смесью гептан: изопропанол (1:1) в присутствии HCl (pH 2,0). После встряхивания отбирают верхний гептановый слой, в котором определяют содержание диеновых конъюгатов (ДК) путем измерения оптической плотности раствора при длине волны 233 нм и диенкетоны (Д) при длине волны 278 нм. Расчет содержания ДК, Д производят в относительных единицах с пересчетом на 1,0 мл плазмы по формуле

D _233(278) (Э/П) 20 D_233(278) где D₂₃₃ значение оптической плотности опытной пробы при 233 нм;

D₂₇₈ значение оптической плотности опытной пробы при 278 нм;

Э 4 мл конечный объем гептанового экстракта;

П 0,2 мл объем взятой плазмы (сыворотки).

Проведена сравнительная оценка содержания продуктов ПОЛ и АОС в крови 190 практически здоровых лиц и 200 онкологических больных описанным способом.

Результаты представлены в таблице.

Как показывают результаты исследования, концентрация витаминов А, Е, диеновых конъюгатов, диенкетонов, оснований Шиффа в плазме крови больных онкологическими заболеваниями отличается от таковой у практически здоровых лиц.

Предлагаемый способ позволяет выявить патологический процесс в организме и дает возможность осуществлять профилактику, а так же коррекцию метаболических расстройств, выявленных у лиц, проживающих на территориях, загрязненных радионуклидами (прежде всего вследствие Чернобыльской катастрофы).