средство, стимулирующее функциональную активность нейтрофильных лейкоцитов

Формула изобретения

Применение глюкуроната натрия в качестве средства, стимулирующего функциональную активность нейтрофильных лейкоцитов.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а конкретно к клинической иммунологии и может быть использовано для фармакологической коррекции нарушений функций нейтрофилов.

Известно, что существенная роль в системе защитных механизмов к возбудителям инфекционных болезней принадлежит фагоцитозу, осуществляемому, в частности, нейтрофильными лейкоцитами. С целью стимуляции фагоцитоза при инфекционных заболеваниях используют полисахариды микробной природы (зимозан, продигиозан, пептидогликан). Однако данные препараты недостаточно эффективны, обладают рядом побочных свойств, ограничивающих их широкое применение. В частности, у больных наблюдается повышение температуры, головные боли, ломота в суставах, рвота. В то же время низкомолекулярные синтетические препараты, способные стимулировать функции нейтрофилов, не известны.

Целью изобретения является повышение функциональной активности нейтрофильных лейкоцитов и снижение токсичности для повышения устойчивости организма к инфекции, в частности к инфекции St. albus (штамм Б-243 получен из Института эпидемиологии и микробиологии им. Н. Ф. Гемалеи АМН СССР).

Цель достигается тем, что в качестве средства, стимулирующего функции нейтрофильных лейкоцитов, применяют глюкуронат натрия.

Известно применение глюкуроната натрия в эксперименте как вещества, снижающего активность 5-нуклеотидазы в микрофагах.

Применение глюкуроната натрия по новому назначению стало возможным благодаря выявленным нами новым свойствам. Впервые показано, что введение глюкуроната натрия стимулирует функцию нейтрофильных лейкоцитов и повышает устойчивость мышей к стафилококковой инфекции.

Свойство глюкуроната натрия стимулировать функции нейтрофильных лейкоцитов и повышать устойчивость мышей к стафилококковой инфекции в литературе не описано.

Экспериментально установлено, что введение глюкуроната натрия трехкратно внутривенно в дозе 50 мг/кг оказывает активирующее действие на нейтрофилы периферической крови мышей СВА. В качестве препарата сравнения использовали препарат продигионаз, используемый в клинике для стимуляции нейтрофилов и макрофагов.

Эксперименты проведены на 200 мышах линии СВА, массой 18-20 г. Животным однократно ежедневно в течение трех суток вводили глюкуронат натрия внутривенно в дозе 50 мг/кг, либо однократно в дозе 150 мг/кг. Продигиозан вводился в оптимальном режиме внутривенно однократно в дозе 0,5 мг/кг. Для оценки реакции восстановления используют тест нитросинего тетразолия (НСТ-тест), рекомендуемый для оценки чувствительности нефтрофилов к стимуляторам. Функциональную активность нейтрофилов оценивали через 6 ч на 1, 2, 3 и 5 сут после последнего введения препаратов. Контрольной группе животных вводили растворитель физиологический раствор в эквивалентном объеме (0,1 мл). В некоторых экспериментах глюкуронат натрия вводился внутрибрюшинно трехкратно в дозе 50 мг/кг. Для исследования влияния глюкуроната натрия на устойчивость к стафилококковой инфекции через сутки после последней инъекции глюкуроната натрия животным вводили внутрибрюшинно 0,5 мл микробной взвеси, содержащей 2010⁹, 1010⁹, 2,510⁹, 1,2510⁹ микробных тел и определяли ЛД₅₀.

Проведенные исследования показали, что однократное внутривенное введение продигиозана (табл. 1) повышало количество формазанположительных лейкоцитов в периферической крови мышей уже через 6 ч. Максимум стимулирующего действия продигиозана наблюдался через 1 сут после введения препарата (процент активированных клеток увеличивался в 3 раза). Количество активированных нейтрофилов оставалось увеличенным и на 3 сут после введения препарата (табл. 1). В указанные сроки наблюдения обнаружено увеличение показателя интенсивности реакции примерно в 2 раза от исходного уровня. При исследовании индуцированной реакции нейтрофильных лейкоцитов (в качестве индуктора реакции НСТ ин витро использовался зимозан) было обнаружено снижение показателей инфицированной реакции через 1 сут после введения препарата. Однако в остальные сроки исследования достоверных изменений НСТ-реакции не отмечалось. Так как продигиозан стимулировал спонтанную и не менял индуцированную реакцию нейтрофилов, то наблюдалось снижение показателей фагоцитарного резерва, индекса стимуляции (табл. 1).

При использовании в качестве стимулятора глюкуроната натрия в дозе 150 мг/кг при однократном введении оказалось, что увеличение количества активированных лейкоцитов наблюдается на 1-2 сут после введения препарата. На третьи сутки количество диформазанположительных лейкоцитов не отличалось от контрольного уровня. В эти же сроки (1-2 сут) увеличивался показатель интенсивности реакции. Однако исследуемые показатели не отличались от таковых у мышей, получавших продигиозан. На 5 сут после однократного введения глюкуроната натрия наблюдалось снижение показателей функциональной активности нейтрофилов в НСТ-тесте (табл. 1).

Наиболее выраженные изменения функции нейтрофильных лейкоцитов наблюдались после трехкратного внутривенного введения глюкуроната натрия. Процент диформазанположительных нейтрофилов увеличился уже спустя 6 ч после введения. Через 1 сут количество формазанположительных лейкоцитов возрастало в 5 раз и оставалось повышенным до конца периода наблюдения (5 сут) (табл. 1). Показатель интенсивности реакции на 1-2 сут превышал исходный уровень в 4 раза. Как и в экспериментах с применением продигионаза, достоверных изменений индуцированной НСТ реакции нейтрофилов не наблюдалось, а в расчетные показатели индуцированной реакции: фагоцитарный резерв (ФР), показатель фагоцитарного резерва (ПФР), индекс стимуляции (ИС), показатель интенсивности реакции (ПИР) оказались сниженными в связи с тем, что после применения глюкуроната натрия наблюдается максимально возможная активация нейтрофилов без добавления дополнительных стимуляторов.

Фагоцитарные реакции имеют важное значение в защите организма от инфекций. В связи с этим нами исследовалось влияние глюкуроната натрия на устойчивость мышей СВА и стафилококковой инфекции. Как видно из табл. 2, предварительное трехкратное внутривенное введение глюкуроната натрия значительно повышает устойчивость мышей к стафилококковой инфекции. Так, при введении мышам 210⁹/мш микробных тел в контрольной группе погибли все животные спустя 1 сут, в группе животных, поучавших глюкуронат натрия, к 3 сут погибло 50% животных, остальные остались живы. При дозе 1010⁹/мш в контрольной группе погибло 66% животных, в опытной группе погибла 1 мышь из 6. При расчете ЛД₅₀ оказалось, что ЛД₅₀ в контрольной группе составила 1410⁹ микробных тел/мышь, в опытной группе 28,210⁹ микробных тел/мышь, т. е. предварительное внутривенное введение глюкуроната натрия в 2 раза повышает устойчивость мышей к стафилококковому сепсису.

В другой серии экспериментов использовали внутрибрюшинный способ введения глюкуроната натрия. Как видно из табл. 3, предварительное трехкратное введение препарата в дозе 50 мг/кг увеличивает резистентность животных к стафилококку. ЛД₅₀ для интактных животных составило 17,810⁹ микробных тел, для опытных животных 28,310⁹ микробных тел/мышь.

Таким образом, представленные данные убедительно свидетельствуют о наличии у глюкуроната натрия способности стимулировать нейтрофильные лейкоциты и повышать устойчивость экспериментальных животных. Препарат имеет преимущества перед продигиозаном в том числе, он вызывает стимуляцию функции нейтрофилов более выраженную и продолжительную, а также менее токсичен.