замещенные 3-(пиридиниламино)-индолы или -бензо(в)тиофены и способ их получения

Формула изобретения

1. Замещенные 3-(пиридиниламино)-индолы или -бензо(b)-тиофены общей формулы



где R₁ водород, низший алкил, низший алкилкарбонил;

-X-Y= группа R₂>N-CH= или -S-CH=

R₂ водород или низший алкил;

W водород, галоген;

Z водород, галоген, низший алкил,

или их фармацевтически приемлемые соли с кислотами.

2. Соединение по п. 1, отличающееся тем, что W водород или фтор, Z - водород или фтор.

3. Соединение по п. 2, отличающееся тем, что его выбирают из группы, включающей 3-(4-пиридиниламино)-1H-индол, N-(1H-индол-3-ил)-N-(4-пиридинил)пропанамид, 3-(3-фтор-4-пиридиниламино)-1H-индол, 6-фтор-3-(4-пиридиниламино)бензо(b)тиофен или 6-фтор-3-(пропил-4-пиридиниламино)бензо(b)тиофен или их фармацевтически приемлемые соли с кислотами.

4. Способ получения замещенных 3-(пиридиниламино)-индолов или -бензо(b)-тиофенов общей формулы



где R₁ водород, низший алкил, низший алкилкарбонил;

-X Y= группа R₂>N-CH= или -S CH=

R₂ водород или низший алкил;

W водород или галоген;

Z водород, галоген, низший алкил,

отличающийся тем, что соединение общей формулы



где Z водород, галоген, низший алкил,

подвергают взаимодействию с соединением общей формулы



где группа -X Y= W имеют указанные значения,

с последующим выделением целевого продукта в свободном виде или в виде соли, или, в случае необходимости, полученное соединение, где R₁ - водород, подвергают взаимодействию с алкилгалогенидом, или ангидридом, или галоидангидридом соответствующей кислоты.

5. Соединения по п. 1, проявляющие психотропную активность.

Описание изобретения к патенту

Предметом изобретения являются соединения формулы I

W (I) в которой R₁ представляет водород, низший алкил, низший алкилкарбонил, группа -X-Y представляет N-C, S__C или N__N при этом R₂ и R₃ независимо друг от друга представляют водород или низший алкил;

W представляет водород, галоген, Z представляет водород, галоген, низший алкил, которые являются полезными для лечения нарушений функций памяти, таких как болезнь Альцгеймера, и для использования в качестве модуляторов функции нейромедиаторов, например серотонергических и адренергических, при этом они представляют эффективные антидепрессанты, транквилизаторы, нетипичные противопсихозные средства, противорвотные средства и позволяют лечить изменения личности, такие как навязчивые компульсивные состояния.

В описании изобретения и в прилагаемой формуле изобретения используются следующие определения, если нет специального указания.

Термин "низший алкил" означает алкильную группу с прямой или разветвленной цепью, имеющую от 1 до 6 атомов углерода. Примерами указанного низшего алкила являются метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, а также пентил и гексил с прямой и разветвленной цепью.

Термин "галоген" означает фтор, хлор, бром или иод.

Термин "арил" означает фенильную группу, замещенную 0, 1 или 2 заместителями, которые независимо друг от друга представляют низший алкил, низший алкокси, галоген или трифторметил.

В описании изобретения и в прилагаемой формуле изобретения приведенная химическая формула или название включают все стерео-, оптические и таутомерные формы, которые могут иметь такие изомеры.

Соединения по изобретению получают путем осуществления одной или нескольких стадий синтеза, описываемых ниже.

При описании стадий синтеза обозначения с R₁ по R₆, W, X, Y и Z имеют соответствующие значения, указанные выше, если нет специального указания, а другие обозначения имеют значения, указанные при их первом появлении в тексте.

Исходные 3-аминоиндолы формулы II можно получить известными способами, например путем восстановления 3-нитрозоиндолов с помощью Na₂S₂O₄ (см. Индолы, часть II, под ред. В.Дж.Хоулихана, Вилей-интерсайенс, Нью-Йорк, 1972 г.)

W (II)

Исходные 3-аминобензо(b)тиофены формулы III также можно получить известными способами (Д. Е.Босвелл и др. J. Heterocyclic Chem 5, 69 (1968) и Хейлброн. Справочник органических соединений, с. 151).

W (III)

Исходные 3-аминоиндазолы формулы IV также можно получить известными способами.

W (IV)

Например, в статье Вирона и др. J.Heterocyclic Chem. 16, 783 (1989) описывается реакция, представленная ниже, при осуществлении которой R₂ представляет водород или метил.

___

Стадия А. Соединение II подвергают взаимодействию с хлорпиридингидрохлоридом формулы V, в результате чего образуется соединение формулы VI.

+

Указанную реакцию обычно осуществляют в эфирном растворителе, таком как простой бис-(2-метоксиэтиловый) эфир, простой диэтиловый эфир, диметоксиэтил, диоксан или тетрагидрофуран, либо в полярном апротонном растворителе, таком как диметилформамид, диметилацетамид, N-метил-2-пирролидон, гексаметилфосфорамид или диметилсульфоксид, либо в протонном растворителе, таком как этанол или изопропанол, при температуре от 20 до 150^оС.

Аналогичным образом соединение III подвергают взаимодействию с соединением V так же, как описывалось выше, в результате чего образуется соединение формулы VII.

(III) + (V) ____ W__Z

Стадия В. Соединение VI подвергают взаимодействию с (низший алкил) хлорформиатом формулы Cl-CO-OR₇, где R₇ представляет низший алкил, в результате чего образуется соединение формулы VIII.

(VI) + ClOR₇ ___ W

Указанную реакцию обычно осуществляют в приемлемом растворителе, таком как дихлорметан, в присутствии приемлемого основания, такого как бикарбонат натрия или триэтиламин, при температуре 20-60^оС.

Стадия С. Соединение VIII подвергают взаимодействию с (низший алкил) галогенидом формулы R₂-HaI, в которой R₂ представляет низший алкил, а HaI хлор или бром, с ди(низший алкил)сульфатом формулы (R₂O)₂SO₂ в соответствии с известной схемой, в результате чего образуется соединение формулы IX.

(VIII) +

Указанную реакцию обычно осуществляют в приемлемом растворителе, таком как диметилформамид или тетрагидрофуран, в присутствии приемлемого основания, такого как гидрид натрия или калия либо третбутоксид калия, при температуре 0-120^оС.

Стадия D. Соединение IX подвергают гидролизу, в результате чего образуется соединение формулы X

(IX) + OH ____ W

Указанный гидролиз обычно осуществляют путем перемешивания смеси, включающей соединение IX, гидроксид щелочного металла, такой как гидроксид натрия, и приемлемую среду, такую как этанол или другой низший алканол, вместе с водой при температуре 20-100^оС.

Стадия Е. Соединение Х подвергают взаимодействию с галогенидом формулы R₈-HaI, в которой R₈ представляет низший алкил, низший алкенил, низший алкинил или арил-низший алкил, при температуре -10-80^оС, предпочтительно 0-25^оС, в результате чего образуется соединение формулы XI

(X) + R₈-Hal __ W_

Указанную реакцию обычно осуществляют в приемлемом растворителе, таком как диметилформамид, диметилсульфоксид, эфирные растворители или ароматический углеводородный растворитель, в присутствии приемлемого основания, такого как гидрид натрия или калия либо трет-бутоксид калия.

Соединение Х подвергают взаимодействию с соединением формулы

N _ Alk Hal

в котором Alk представляет низшую алкиленовую группу, а HaI-Cl или Br, в соответствии с известной схемой, в результате чего образуется соединение формулы XII. После этого соединение XII обрабатывают гидразином или метиламином в соответствии с известной схемой, в результате чего образуется соединение формулы XIII.

W

Соединение X подвергают взаимодействию с дигалоид-низшим алканом формулы Hal-Alk-Hal в соответствии с известной схемой, в результате чего образуется соединение формулы XIV, после чего полученное соединение подвергают взаимодействию с соединением формулы R"NH₂, в которой R" представляет водород или низший алкил, в соответствии с известной схемой, в результате чего образуется соединение формулы XV

_

Стадия F. Соединение Х (в котором R₂ может представлять водород так же, как в соединении VI) подвергают взаимодейст-

O

вию с галоидангидридом формулы R₉-C-Hal, в которой R₉ представляет низший алкил, в соответствии с известной схемой, в результате чего образуется соединение формулы XVI

(X) + R₉ Hal ___ W_

В качестве альтернативы вышеуказанному соединению, в котором R₉представляет водород или низший алкил, можно использовать ангидрид кислоты формулы R₉-CO-O-CO-R₉, который подвергают взаимодействию в соответствии с известной схемой, позволяющей достичь той же цели.

Соединение Х подвергают взаимодей- ствию с соединением формулы

RO NH Alk Hal, в которой R представляет трет-бутил или бензил, в соответствии с известной схемой, в результате чего образуется соединение формулы XVII, после чего полученное соединение подвергают гидролизу или каталитическому гидрогенолизу в соответствии с известной схемой, в результате чего образуется соединение формулы XVIII

(XHal

В качестве альтернативы указанному соединению используют соединение Х, которое подвергают взаимодействию с карбоновой кислотой формулы XIX в присутствии дициклогексилкарбодиимида, в результате чего образуется соединение формулы XVII

(X) + RO -NH -NCN

Стадия G. Соединение формулы XVIa, полученное на стадии F, восстанавливают с помощью LiAIH₄ или других приемлемых восстановителей в соответствии с известной схемой, в результате чего образуется соединение формулы XX



Стадия Н. Соединение формулы VII подвергают взаимодействию с (низший алкил) хлорформиатом формулы Cl-CO-OR₇ так же, как на стадии В, в результате чего образуется соединение формулы XXI

(VII) + Cl--OR₇___ W_

Стадия I. Соединение VII подвергают взаимодействию с галогенидом формулы R₈-HaI так же, как на стадии Е, в результате чего образуется соединение формулы XXII

(VII) + R₈__ Hal ___ W__Z

Соединение VII подвергают взаимодействию с соединением формулы

N _ Alk в результате чего образуется соединение формулы XXIII, после чего полученный продукт обрабатывают гидразином или метиламином так же, как на стадии Е, в результате чего образуется соединение формулы XXIV

W

Соединение VII подвергают взаимодействию с соединением формулы Hal-Alk-Hal, в результате чего образуется соединение формулы XXV, после чего полученный продукт подвергают взаимодействию с соединением формулы R"NH₂ так же, как на стадии Е, в результате чего образуется соединение формулы XXVI

+W__Z

Стадия J. Соединение VII подвергают взаимодействию с галоидангидридом формулы R₉- Hal так же, как на стадии F, в результате чего образуется соединение формулы XXVII

(VII) + R₉- Hal _____ W__Z

Соединение формулы VII подвергают взаимодействию с соединением формулы RO NH Alk Hal в результате чего образуется соединение формулы XXVIII, после чего полученный продукт подвергают гидролизу или каталитическому гидрогенолизу так же, как на стадии F, в результате чего образуется соединение формулы XXIX.

(V H

Соединение VII подвергают взаимодействию с соединением XIX в присутствии дициклогексилкарбодиимида так же, как на стадии F, в результате чего образуется соединение XXVIII.

(VII) + (XIX) + NCN ____ (XXVIII)

Стадия К. Соединение IV подвергают взаимодействию с соединением V так же, как на стадии А, в результате чего образуется соединение формулы XXX.

(IV) + (V) _____ W__Z

Стадия L. Соединение XXX подвергают взаимодействию с (низший алкил) хлорформиатом формулы Cl-CO-OR₇ так же, как на стадии В, в результате чего образуется соединение формулы XXXI.

(XXX) + Cl _ OR₇ _____ W__Z

Стадия М. Соединение XXX подвергают взаимодействию с галогенидом формулы R₈-Hal так же, как на стадии Е, в результате чего образуется соединение формулы XXXII.

(XXX) + R₈- Hal__

Соединение XXX подвергают взаимодействию с соединением формулы N _ Alk Hal в результате чего образуется соединение формулы XXXIII, после чего полученный продукт обрабатывают гидразином или метиламином так же, как на стадии Е, с образованием соединения формулы XXXIV.

W

Соединение XXX подвергают взаимодействию с соединением формулы Hal-Alk-Hal с образованием соединения формулы XXXV, после чего этот продукт подвергают взаимодействию с соединением формулы R"NH₂ так же, как на стадии Е, в результате чего образуется соединение формулы XXXVI.

+__Z

Стадия N. Соединение XXX подвергают взаимодействию с галоидангидридом формулы R₉ Hal так же, как на стадии F, в результате чего образуется соединение формулы XXXVII.

(XXX) + R₉- Hal

Соединение XXX подвергают взаимодействию с соединением формулы RO NH Alk Hal, в результате чего образуется соединение формулы XXXVIII, которое затем подвергают гидролизу так же, как на стадии F, что позволяет получить соединение формулы XXXIX.

(XX- Ha

Соединение XXX подвергают взаимодействию с соединением XIX в присутствии дициклогексилкарбодиимида так же, как на стадии F, в результате чего образуется соединение XXXVIII.

(XXX) + (XIX) + NCN ____ (XXVIII)

В приведенном описании стадий синтеза в тех случаях, когда желательно получить соединение, в котором группа -Z представляет -NH₂, такое соединение может быть создано путем восстановления соответствующего соединения, в котором группа -Z представляет -NO₂, соответствующим восстановителем, таким как цинк и хлористоводородная кислота, либо каталитическим способом с помощью водорода в присутствии катализатора на основе соответствующего благородного металла, такого как палладий или платина, в соответствии с известной схемой. Соединения формулы I по изобретению являются полезными для лечения различных нарушений функции памяти, таких как болезнь Альцгеймера, и могут использоваться в качестве модуляторов функции нейромедиаторов, например серотонергических и адренергических, при этом они служат эффективными антидепрессантами, транквилизаторами, нетипичными противопсихозными средствами, противорвотными средствами и позволяют лечить изменения личности, такие как навязчивые компульсивные состояния.

Связывание (³Н)-8-гидрокси-2-(ди-н-пропиламино)тетралина (³Н/ДРАТ) с серотонергическими рецепторами (5НТ_IA).

Цель. Целью этого анализа является определение сродства испытуемых соединений к рецептору 5НТ_IA в мозгу. Этот анализ считается полезным для выявления соединений с серотонергическими свойствами, которые делают возможным их применение в качестве новых транквилизаторов, нетипичных противопсихозных средств или для лечения изменений личности, таких как навязчивое компульсивное состояние.

Введение. Существование двух популяций рецепторов 5НТ в мозгу крыс было продемонстрировано различной чувствительностью к спироперидолу [1] Чувствительные к спироперидолу рецепторы определялись как подтип 5НТ_IA, а невосприимчивые рецепторы обозначались как подтип 5НТ_IB [2] Другие места связывания 5НТ (5НТ_IC, 5НТ_IC, 5НТ_IД и 5НТ₃) затем идентифицировались у различных видов исходя из дифференциальной чувствительности к антагонистам 5НТ [3] Значительный прогресс в классификации рецепторов 5НТ произошел тогда, когда был найден селективный лиганд для рецептора 5НТ_IA, (³Н)ДРАТ [4] Авторы этой работы сообщили, что (³Н)ДРАТ позволяет метить ауторецепторы. Исследования поражений позволяют предположить, что рецепторы, меченые (³Н) ДРАТ, не являются конечными ауторецепторами, а могут быть соматодендритными ауторецепторами [5] Хотя ДРАТ уменьшает воспалительный процесс в ядре сращения и задерживает высвобождение 5НТ, его фактическое местонахождение и действие являются несколько противоречивыми [6] Эти исследования, а также чувствительность к связыванию (³Н)ДРАТ с гуаниннуклеотидами и воздействие на аденилатциклазу позволяют предположить, что ДРАТ является агонистом рецептора 5НТ_IA [7]

Методика I.

А. Реагенты.

1. Трис-буферы, рН 7,7

(а) 57,2 г трис-HCl, 16,2 г трис-основания.

Доведите объем до 1 л дистиллированной водой (0,5 М раствор трис-буфера, рН 7,7, буфер 1а).

(b) Произведите разбавление деионизированной водой в соотношении 1:10 (0,05 М раствор трис-буфера, рН 7,7 буфер 1b).

(с) 0,05 М раствор трис-буфера, рН 7,7, содержащий 10 мкмоль паргилина, 4 ммоль CaCl₂ и 0,1% аскорбиновой кислоты (буфер 1с).

0,49 мг паргилина HCl, 111 мг CaCl₂, 250 мг аскорбиновой кислоты.

Доведите объем до 250 мл, используя 0,05 М раствор трис-буфера, рН 7,7 (реагент 1b).

2. 8-Гидрокси (³Н)-ДРАТ [2-[N,N-ди(2,3)н(-³Н)пропиламино]-8- гидрокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин] (106-206 Ci/ммоль) получали из фирмы "Амершам".

Для определений IC₅₀ (50%-ная концентрация ингибирования): получают 10 нмоль основного раствора, после чего в каждую пробирку вводят 50 мкл этого раствора (конечная концентрация 0,5 нмоль).

3. Серотонин-креатининсульфат. Готовят 0,5 ммоль основного раствора в 0,01 н. растворе HCl, после чего в 3 пробирки вводят 20 мкл этого раствора для определения неспецифического связывания (конечная концентрация 10 мкмоль).

4. Испытуемые соединения. Для выполнения большинства анализов готовят 1 ммоль основного раствора в приемлемом растворителе, который последовательно разбавляют так, чтобы конечная концентрация в исследуемой пробе предпочтительно составляла от 2 х 10^-5 до 2 х 10^-8моль. В каждом анализе используют семь концентраций. Исходя из активности лекарственного средства могут применяться более высокие или более низкие концентрации.

В. Тканевый препарат.

Самцов крыс "Вистар" умерщвляют путем обезглавливания. Удаляют у них гиппокамп, взвешивают и гомогенизируют в 20 объемах 0,05 М раствора трис-буфера, рН 7,7. Гомогенат центрифугируют с 48000 градиентом в течение 10 мин, после чего надосадочную жидкость сливают. Полученную каплю вновь суспендируют в равном объеме 0,05 М раствора трис-буфера, выдерживают при температуре 37^оС в течение 10 мин и повторно центрифугируют с 48000 градиентом в течение 10 мим. Конечную каплю мембраны вновь суспендируют в 0,05 М растворе трис-буфера, содержащего 4 ммоль CaCl₂, 0,1% аскорбиновой кислоты и 10 мкмоль паргилина.

С. Анализ.

800 мкл ткани, 130 мкл 0,05 М раствора трис-буфера + CaCl₂ + паргилин + аскорбиновая кислота, 20 мкл носителя (5НТ) лекарственное средство и 50 мкл (³Н)ДРАТ.

Пробирки выдерживают в течение 15 мин при температуре 25^оС. Анализ заканчивают вакуумным фильтрованием через ватманские фильтры GF/B, которые затем дважды промывают 5 мл охлажденного льдом 0,05 М раствора трис-буфера. Эти фильтры затем помещают в сцинтилляционные пробирки, содержащие 10 мл сцинтилляционной смеси "Ликвисцинт", и производят подсчет.

Вычисление. Специфическое связывание определяют в виде разности между общим связыванием и связыванием в присутствии 10 мкмоль 5НТ. Величины IC₅₀ высчитывают исходя из процентного значения специфического связывания при каждой концентрации лекарственного средства.

Методика II.

А. Реагенты.

1. Трис-буферы, рН 7,7, (а) 57,2 г трис-HCl, 16,2 г трис-основания. Доведите объем до 1 л дистиллированной водой (0,5 М раствор трис-буфера, рН 7,7, буфер 1а).

(b) Произведите разбавление в соотношении 1:10 дистиллированной водой (0,05 М раствор трис-буфера, рН 7,7 при температуре 25^оС, буфер 1b).

(с) 0,05 М раствор трис-буфера, рН 7,7, содержащий 10 мкмоль паргилина, 4 ммоль CaCl₂ и 0,1% аскорбиновой кислоты (буфер 1с). 0,49 мг паргилина HCl, 110,99 мг CaCl₂, 250 мг аскорбиновой кислоты. Доведите объем до 250 мл, используя 0,05 М раствор трис-буфера, рН 7,7 (буфер 1).

2. 8-Гидрокси (³Н)-ДРАТ [2-[N,N-ди(2,3)н(-³Н)пропиламино]-8- гидрокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин] (160-206 Ci/ммоль) получали из фирмы "Амершам".

Для определения IC₅₀: концентрацию ³Н-ДРАТ доводят до 3,3 нмоль в трис-буфере (1с) так, чтобы при добавлении в каждую пробирку 150 мкл раствора конечная концентрация в 1 мл пробе достигала 0,5 нмоль.

3. Серотинин-креатининсульфат получали из фирмы "Сигма кемикэл компани". Концентрацию серотинин-креатинина доводят до 100 мкмоль в трис-буфере (1с). Для определения неспецифического связывания в каждую из 3 пробирок добавляют одну сотую мклитра раствора (это позволяет получить конечную концентрацию, равную 10 мкмоль, в 1 мл пробе).

4. Испытуемые соединения. Для выполнения большинства анализов готовят 100 мкмоль основного раствора в приемлемом растворителе и последовательно разбавляют его трис-буфером (1с) так, чтобы при соединении 100 мкл лекарственного средства с общей 1 мл пробой достигалась конечная концентрация в интервале от 10^-5 до 10^-8 моль. В каждом анализе исследуют семь концентраций, однако можно использовать более высокие или более низкие концентрации в зависимости от активности лекарственного средства.

В. Тканевый препарат.

Самцов крыс "Вистар" умерщвляют путем обезглавливания, удаляют у них гиппокамп и гомогенизируют его в 20 объемах охлажденного льдом 0,05 М раствора трис-буфера, рН 7,7 (1b). Гомогенат центрифугируют с 28000 градиентом в течение 10 мин при температуре 4^оС. Полученную каплю вновь гомогенизируют в свежем трис-буфере (1b), выдерживают при температуре 37^оС в течение 10 мин и повторно центрифугируют с 48000 градиентом в течение 10 мин. Конечную каплю мембран вновь суспендируют в 0,05 М растворе трис-буфера (1с), содержащем 4 ммоль CaCl₂, 0,1% аскорбиновой кислоты и 10 мкмоль паргилина. Специфическое связывание составляет примерно 90% от всего связанного лиганда.

С. Анализ. 750 мкл ткани, 150 мкл (³Н)ДРАТ и 100 мкл носителя (для общего связывания) или 100 мкмоль серотонин-креатининсульфата (для неспецифического связывания) либо соответствующая концентрация лекарственного средства.

Пробирки выдерживают в течение 15 мин при температуре 25^оС. Анализ заканчивают вакуумным фильтрованием через ватманские фильтры CF/B, которые затем дважды промывают 5 мл охлажденного льдом 0,05 М раствора трис-буфера (1b). Эти фильтры помещают в сцинтилляционные пробирки, содержащие 10 мл сцинтилляционной смеси "Ликвисцинт", и производят подсчет.

Специфическое связывание определяют в виде разности между общим связыванием в отсутствии или присутствии 10 мкмоль серотонинкреатининсульфата. Величины IC₅₀ высчитывают исходя из процентного значения специфического связывания при каждой концентрации лекарственного средства.

Было установлено, что значение K_D для связывания (³Н)ДРАТ равняется 1,3 нмоль при определении с помощью анализа Скатчарда насыщения рецептора. Значение K_i также можно высчитать из уравнения Ченга-Прусоффа:

K_i IC₅₀(I + L)K_D

Ссылочные материалы:

1. Педиго Н. В. Яммамура Г.И. и Нельсон Д.Л. Выявление нескольких мест связывания (³Н)5-гидрокситриптамина нейролептическим спипероном в мозгу крыс. J. Neurochem 36:220-226 (1981).

2. Мидлмисс Д.Н. и Фозард Дж.Р. Выявление с помощью 8-гидрокси-2- (ди-н-пропиламино)тетралина различных подтипов места распознавания 5НТ₁. Eur. J. Pharmacol 90:151-152 (1983).

3. Пероутка С.Дж. Фармакологическая дифференциация и идентификация мест связывания 5-НТ_IA, 5-HT_IB и 5-HT_IС в коре лобной части головного мозга. J. Neurochem 47: 529-540 (1986).

4. Пероутка С.Дж. Подтипы 5-гидрокситриптаминорецепторов: молекулярная, биохимическая и физиологическая идентификация, TINS 11: 496-500 (1988).

5. Гозлан Г. и др. Идентификация пресинаптических серотонергических ауторецепторов с помощью нового лиганда: ³H-ДРАТ. Nature 305: 140-142 (1983).

6. Верг Д. и др. Количественная радиоавтография нескольких подтипов рецепторов 5-НТ_I в мозгу контрольных крыс и крыс, получавших 5,7-дигидрокситриптамин. J.Neurosci 6: 3474-3482 (1986).

7. Шлегель Р. и Пероутка С.Дж. Взаимодействие нуклеотидов с местами связывания 5-НТ_IA, мечеными (³Н)-8-гидрокси-2-(ди-н-пропиламино)тетралином [(3)-8-ОН-ДРАТ] Biochem Pharmacol 35 1943-1949 (1986).

Связывание ³Н-GR 65630 с кортикальными оболочками внутри носа у крыс: анализ связывания рецепторов 5НТ₃.

Цель. Целью этого анализа является определение сродства испытуемых соединений к месту связывания 5НТ₃ в мозгу. Считается, что этот анализ является полезным для прогнозирования активности соединений в точки зрения противорвотных, успокаивающих или нетипичных противопсихозных свойств.

Введение. В настоящее время общепризнанным фактом является то, что существуют три различных подтипа рецепторов, чувствительных к серотонину нейромедиатора (5НТ): 5НТ₁, 5НТ₁ и 5НТ₃. Места связывания 5НТ₁ и 5НТ₂были хорошо изучены и далее подразделены на основании данных исследований связывания и функциональной активности [1,2] С другой стороны, изучение места связывания 5НТ₃ было начато сравнительно недавно. Первоначально считалось, что места связывания 5НТ₃ имеются только в периферической нервной системе [3] Однако недавнее появление эффективных и избирательных лекарственных средств, являющихся антагонистами 5НТ₃, таких как GR65630, закоприд, 1С 205930 и MDL 72222, а также данные, полученные в результате исследований связывания, показывают, что места связывания 5НТ₃ также располагаются в определенных зонах мозга [4,5,6] Самое большое число мест связывания 5НТ₃ было обнаружено в лимбической области мозга и в зоне, содержащей допамин (кортикальный слой внутри носа, миндалины, оболочки ядер и обонятельные бугорки) [4] Сообщалось, что помимо избирательного связывания в зонах, богатых допамином, антагонисты 5НТ₃ могут блокировать изменения поведения, связанные с применением определенных наркотиков (никотин и морфин), кроме того, они демонстрируют активность в испытаниях на подавление патологического страха. На основании результатов избирательного зонального связывания и исследования поведения был сделан вывод о том, что антагонисты 5НТ₃ могут оказывать хороший терапевтический эффект при лечении заболеваний, связанных с чрезмерной допаминергической активностью, например, шизофрении и токсикомании.

Методика.

А. Реагенты.

1. 0,05 М раствор буфера Кребса-Гепеса, рН 7,4, 11,92 г реагента Гепеса, 10,52 г NaCl, 0,373 г KCl, 0,277 г CaCl₂, 0,244 г MgCl₂6H₂O. Доведите объем до 1 л дистиллированной водой. Доведите показатель рН до 7,4 (при температуре 4^оС), используя 5 н.раствор NaOH.

2. (³Н)-GR65630 (87,0 Ci/ммоль) получали из фирмы "Нью Ингленд нуклеар". Для определения IC₅₀: концентрацию (³Н)-GR65630 доводят до 1,0 нмоль в буфере Кребса-Гепеса так, чтобы при добавлении в каждую пробирку 100 мкл раствора конечная концентрация в 250 мкл пробе достигала 0,4 нмоль.

3. Закоприд-малеат получали из фирмы "Ресерч биокемикэлз инк". Концентрацию закоприд-малеата доводят до 500 мкмоль в буфере Кребса-Гепеса. Для определения неспецифического связывания в каждую из 3 пробирок добавляют 50 мкл раствора (что позволяет получить в 250 мкл пробе конечную концентрацию, равную 100 мкмоль).

4. Испытуемые соединения. Для выполнения большинства анализов готовят 50 мкмоль основного раствора в соответствующем растворителе и последовательно разбавляют его буфером Кребса-Гепеса так, чтобы при соединении 50 мкл лекарственного средства с 250 мкл пробой достигалась конечная концентрация от 10^-5 до 10^-8. В каждом анализе исследуются семь концентраций; однако можно использовать более высокие или более низкие концентрации в зависимости от активности лекарственного средства.

В. Тканевый препарат.

Самцов крыс "Вистар" (150-200 г) обезглавливают, удаляют у них кортикальный слой внутри носа, взвешивают и гомогенизируют его в 10 объемах охлажденного льдом 0,05 М раствора буфера Кребса-Гепеса, рН 7,4. Гомогенат центрифугируют с градиентом, равным 48000, в течение 15 мин при температуре 4^оС. Полученную каплю вновь гомогенизируют в свежем буфере Кребса-Гепеса и повторно центрифугируют с градиентом, равным 48000, в течение 15 мин при температуре 4^оС. Конечную каплю вновь суспендируют в первоначальном объеме охлажденного льдом буфера Кребса-Гепеса. Это позволяет получить конечную концентрацию ткани, равную 1,2-1,6 мг/мл, при добавлении к пробе 100 мкл буфера. Специфическое связывание составляет примерно 55-65% от всего связанного лиганда.

С. Анализ.

100 мкл суспензии ткани, 100 мкл (³Н)-GR65630 и 50 мкл носителя (для общего связывания) или 500 мкл закоприд-малеата (для неспецифического связывания) либо соответствующая концентрация лекарственного средства.

Пробирки с пробами помещают на лед для выполнения добавлений, затем встряхивают и выдерживают при непрерывном перемешивании и температуре 37^оС в течение 30 мин. В конце выдерживания инкубат разбавляют 5 мл охлажденного льдом буфера Кребса-Гепеса и сразу же фильтруют в условиях вакуума через ватманские фильтры GF/B, после чего производят две промывки 5 мл охлажденного льдом буфера Кребса-Гепеса. Эти фильтры сушат и производят подсчет в 10 мл жидкой сцинтилляционной смеси. Специфическое связывание GR65630 определяют в виде разности между общим связыванием и связыванием в присутствии 100 мкмоль закоприда. Вычисления IC₅₀ производят посредством логарифмического пробит-анализа с использованием ЭВМ.

Ссылочные материалы:

1. Пероутка С.Дж. Подтипы 5-гидрокситриптаминорецепторов: Молекулярная, биохимическая и физиологическая идентификация. Tend in Neuroscience 11: 496-500 (1988).

2. Уотлинг К. Дж. Агонисты и антагонисты рецепторов 5НТ₃. Neurotransmission 3: 1-4 (1989).

3. Костелл Б. Найлор Р.Дж. и Таерс М.Б. Последние достижения в области нейрофармакологии агонистов и антагонистов 5НТ₃. Rev. Neuroscience 2: 41-65 (1988).

4. Килпатрик Дж.Дж. Джоунс Б.П. и Таерс М.Б. Идентификация и распределение рецепторов 5НТ₃ в мозге крыс при помощи связывания радиолигандом. Nature 330: 746-748 (1987).

5. Барнес Н.М. Костелл Б. и Найлор Р.Дж. (³Н) Закоприд: Лиганд для идентификации мест узнавания 5НТ₃. J.Pharm. Pharmacol 40: 548-551 (1988).

6. Уотлинг К.Дж. Асплей С. Свайн К.Дж. и Сондерс Дж. Мечение четвертичным основанием (³Н) ICS 205-930 мест связывания 5НТ₃ в мозгу крыс. Eur. J. Pharmacol 149: 397-398 (1988).

Поглощение ³Н-серотонина синаптосомами всего мозга крыс.

Цель. Этот анализ используется в качестве биохимического сита для соединений, которые блокируют поглощение серотонина (5НТ) и которые могут быть полезны как антидепрессанты и для лечения изменений личности, например навязчивого компульсивного состояния.

Введение. Асберг и его соавторы предположили, что субъекты с серотонеpгической гипофункцией представляют больных с депрессивным синдромом, относящихся к биохимической подгруппе [1] в то время как другие [2] утверждают, что измененная серотонергическая функция определяет изменения настроения, связанные с эффективными расстройствами. Хотя роль 5НТ в этиологии депрессии является неясной, известно, что некоторые антидепрессанты блокируют механизм повторного поглощения 5НТ. Проводимые в лабораторных условиях анализы связывания рецепторов показали, что (³Н)-имипрамин позволяет метить места поглощения 5НТ [10] Тразодон и цимелидин являются клинически эффективными антидепрессантами [3] оказывающими весьма избирательное действие на поглощение 5НТ [4,5] Недавно было продемонстировано, что флуоксетин является как избирательным, так и сильнодействующим ингибитором поглощения 5НТ.

Перенос (³Н)-5НТ был идентифицирован в тканях центральной нервной системы [6,7] при этом было установлено, что он является насыщенным, зависит от воздействия натрия и температуры, ингибируется уабаином, ингибиторами метаболизма, аналогами триптамина [8] и трициклическими антидепрессантами (третичные амины >> вторичные амины) [9] Последние результаты позволяют дифференцировать поглощение 5НТ от поглощения катехоламина. Поглощение (³Н)-5НТ также можно использовать в качестве маркера для нервных окончаний, чувствительных к серотонину.

Методика.

А. Животные: самцы крыс "CR Вистар" (100-125 г).

В. Реагенты.

1. Бикарбонатный буфер Кребса-Хенслейта, рН 7,4 (КНВВ).

Приготовьте однолитровую порцию, содержащую следующие соли:

г/л ммоль

NaCl 6,92 118,4

KCl 0,35 4,7

MgSO₄7H₂O 0,29 1,2

KH₂PO₄ 0,16 2,2

NaHCO₃ 2,10 24,9

CaCl₂ 0,14 1,3

Перед использованием добавьте:

Декстроза 2 мг/мл 11,1

Ипрониазидфосфат 0,30 мг/мл 0,1

Газируйте в течение 60 мин смесью 95% О₂/5% СО₂, проверьте показатель рН 7,4 0,1.

2. 0,32 М раствор сахарозы: 21,9 г сахарозы доведите до 200 мл.

3. Серотонин-креатининсульфат получали из фирмы "Сигнал кемикэл компани". Готовили 0,1 ммоль основного раствора в 0,01 н.растворе HCl. Этот раствор использовали для уменьшения удельной активности меченого радиоактивным изотопом 5НТ.

4. Е-(1,2-³Н(N))-гидрокситриптамин-креатининсульфат (серотонин) с удельной активностью 20-30 Ci/ммоль получали из фирмы "Ньюинглэнд нуклеар".

Конечная концентрация ³Н-5НТ в исследуемой пробе составляет 50 нмоль. Коэффициент разбавления равняется 0,8. Таким образом буфер КНВВ содержит 62,5 нмоль (³Н)-5НТ.

К 100 мл буфера КНВВ необходимо добавить

А) 56,1 мкл 0,1 мМ раствора 5НТ 56,1 нмоль В) 0,64 нмоль ³Н-5НТ 6,4 нмоль

(Добавляемый объем высчитывается исходя из удельной активности ³Н-5НТ).

5. При выполнении большинства анализов готовят 1 ммоль раствора испытуемого соединения в приемлемом растворителе, который последовательно разбавляют так, что конечная концентрация в исследуемой пробе составляла от 2 х 10^-8 до 10^-5 моль. Для каждого анализа используют семь концентраций. Можно применять более высокие или более низкие концентрации в зависимости от активности этого соединения.

С. Тканевый препарат.

Самцов крыс "Вистар" обезглавливают и быстро удаляют мозг. Весь мозг без мозжечка взвешивают и гомогенизируют в 9 объемах охлажденного льдом 0,32 М раствора сахарозы при помощи гомогенизатора Поттера-Элвейгема. Гомогенизацию следует производить за 4-5 ходов вверх и вниз при средних скоростях с тем, чтобы свести до минимума лизис синаптосом. Гомогенат центрифугируют с 1000 градиентом в течение 10 мин при температуре 0-4^оС. Надосадочную жидкость (S₁) сливают и используют для выполнения экспериментов по поглощению.

D. Анализ.

800 мкл буфера КНВВ + (³Н)-5НТ, 20 мкл носителя или соответствующей концентрации лекарственного средства и 100 мкл суспензии ткани.

Пробирки выдерживают при температуре 37^оС в течение 5 мин в атмосфере, состоящей из 95% О₂/5% СО₂. При выполнении каждого анализа 3 пробирки выдерживают вместе с 20 мкл носителя при температуре 0^оС в ледяной бане. После выдерживания все пробирки сразу центрифугируют с 4000 градиентом в течение 10 мин. Надосадочную жидкость отсасывают, а капли растворяют путем добавления 1 мл растворителя (тритон Х-100 + 50% этилового спирта, в объемном соотношении 1: 4). Пробирки сильно встряхивают, сливают из них жидкость в сцинтилляционные пробирки и производят подсчет в 10 мл сцинтилляционной счетной смеси. Активное поглощение определяется в виде разности между числом счетов в минуту при температуре 37^оС и 0^оС. Процентное значение ингибирования при каждой концентрации лекарственного средства является средней величиной трех определений. Значения IC₅₀ выводят с помощью логарифмического пробит-анализа.

Ссылочные материалы:

1. Асберг М. Депрессия, вызываемая серотонином: Биохимическая подгруппа в аффективных расстройствах. Science 191: 478-480 (1975).

2. Де-Монтиги К. Усиление нейропередачи 5НТ при лечении антидепрессантами. J.Physiol (Париж) 77: 455-461 (1980).

3. Фейгнер Дж. П. Клиническая эффективность новых антидепрессантов. J. Clin. Psychopharmacol 1: 235-265 (1981).

4. Огрен С.О. и др. Фармакология цимелидина: Избирательный ингибитор повторного поглощения 5НТ. Acta Psychiat, Scand 290: 127-151 (1981).

5. Клементс-Джюри С. Бобсон П.А. и Чидлей Л.Дж. Биохимические исследования механизма действия тразодона. Neuropharmacol 19: 1165-1173 (1980).

6. Росс С. Б. Нейроперенос 5-гидрокситриптамина. Pharmacol 21: 123-131 (1980).

7. Шаскан Е. Дж. и Снидер С.Г. Кинетика накопления серотонина в срезах мозга крыс: Взаимосвязь с поглощением катехоламина. J.Pharmacol. Exp.Eher. 175: 404-418 (1970).

8. Хорн С.А. Взаимосвязь структурной активности с ингибированием поглощения 5НТ гомогенатами гипоталамуса, вызываемого аналогами серотонина и триптамина. J. Neurochem 21: 883-888 (1973).

9. Хорн А.С. и Трейс Р.К.А.М. Взаимосвязь структурной активности с ингибированием поглощения 5-гидрокситриптамина трициклическим антидепрессантом, характерного для синаптосом серотонергических нейронов в гомогенатах мозга крыс. Bict J. Pharmacol 51: 399-403 (1974).

10. Лангер С.З. и др. Высокое сродство связывания (³Н) имипрамина в гипоталамусе крыс: Ассоциация с поглощением серотонина, а не норэпинефрина. Science 210: 1133-1135 (1980).

Результаты трех методов анализа представлены в таблице для типичного соединения по изобретению.

Эффективные количества соединений по изобретению можно вводить больному любыми способами, например перорально в виде капсулы или таблеток, парентерально в виде стерильных растворов или суспензий, а в некоторых случаях внутривенно в виде стерильных растворов. Конечные продукты, представляющие свободные основания, хотя и являются эффективными сами по себе, могут включаться в составы и вводиться в форме их фармацевтически приемлемых солей присоединения кислоты, что делается с целью достижения стабильности, удобства кристаллизации, более высокой растворимости и подобных характеристик.

Кислоты, используемые для получения фармацевтически приемлемых солей присоединения кислот по изобретению включают неорганические кислоты, такие как хлористоводородная, бромистоводородная, серная, азотная, фосфорная и перхлорная кислоты, а также органические кислоты, такие как винная, лимонная, уксусная, янтарная, малеиновая, фумаровая и щавелевая кислоты.

Активные соединения по изобретению можно вводить перорально, например вместе с инертным разбавителем или с усваиваемым носителем, либо они могут заключаться в желатиновые капсулы или прессоваться в таблетки. С целью перорального введения активные соединения по изобретению могут использоваться вместе с наполнителями и иметь форму таблеток, лепешек, капсул, эликсиров, суспензий, сиропов, облатки, жевательной резинки и подобные формы. Эти составы должны включать, по крайней мере, 0,5% активных соединений, но это количество может изменяться в зависимости от формы лекарственного средства и обычно составляет от 4 до 70% от массы дозированной формы. Количество активного соединения в таких составах соответствует необходимой дозе. Предпочтительные составы и препараты по изобретению готовят таким образом, чтобы лекарственная форма, предназначенная для перорального введения, содержала 1,0-300 мг активного соединения.

Таблетки, драже, капсулы, лепешки и подобные формы также могут включать следующие ингредиенты: связующее вещество, например микрокристаллическую целлюлозу, трагант или желатин; наполнители, такие как крахмал или лактоза; дезинтеграторы, такие как альгиновая кислота, примогель, кукурузный крахмал и подобные вещества; смазывающие вещества, такие как стеарат магния или стеротекс; вещества, улучшающие скольжение, такие как коллоидный диоксид кремния; и подсластители, такие как сахароза или сахарин, или ароматизаторы, такие как мятное масло, метилсалицилат или апельсиновое масло. Если лекарственная форма представляет капсулу, она может содержать помимо веществ указанного типа такой жидкий носитель, как нелетучее жидкое масло. Другие лекарственные формы могут включать другие вещества, которые изменяют физическую форму лекарственного средства, например, покрытия в виде оболочки. Так таблетки или драже могут быть покрыты сахаром, шеллаком или другими энтеросолюбильными оболочками. Сироп может содержать помимо активных соединений сахарозу в качестве подсластителя и определенные консерванты, красители и ароматизаторы. Вещества, используемые для получения этих составов, должны быть фармацевтически чистыми и нетоксичными в применяемых количествах.

В целях парентерального введения активные соединения по изобретению можно включать в раствор или суспензию. Эти препараты должны содержать, по крайней мере, 0,1% активного соединения, но это количество может изменяться от 0,5 до 30% от массы данного состава. Количество активного соединения в таких составах должно быть достаточным для получения необходимой дозы. Предпочтительные составы и препараты по изобретению готовят таким образом, чтобы лекарственная форма, предназначенная для парентерального введения, содержала от 0,5 до 100 мг активного соединения.

Эти растворы или суспензии также могут включать следующие компоненты: стерильный разбавитель, такой как вода для инъекций, солевой раствор, нелетучие масла, полиэтиленгликоли, глицерин, пропиленгликоль или другие синтетические растворители; антибактериальные средства, такие как бензиловый спирт или метилпарабены; антиокислители, такие как аскорбиновая кислота или бисульфит натрия; хелатообразователи, такие как этилендиаминтетрауксусная кислота; такие буферы, как ацетаты, цитраты или фосфаты, и тонизирующие средства, такие как хлорид натрия или декстроза. Препарат для парентерального введения может помещаться в шприцы-тюбики или в стеклянные или пластиковые флаконы, содержащие несколько доз.

Примеры соединений по изобретению включают:

3-(4-пиридиниламино)-1Н-индол;

N-(1Н-индол-3-ил)-N-(4-пиридинил)про- панамид;

3-(4-пиридиниламино)бензо(b)тиофен;

N-[бензо(b)тиофен-3-ил]-N-(4-пириди- нил)пропанамид;

3-(3-фтор-4-пиридиниламино)-1Н-индол;

3-(пропил-4-пиридиниламино)-1Н-ин- дол;

1-метил-3-(4-пиридиниламино)-1Н-ин-дол;

6-фтор-3-(4-пиридиниламино)бензо(b)тиофен;

5-фенилметокси-3-(4-пиридиниламино)-1Н-индол;

5-гидрокси-3-(4-пиридиниламино)-1Н-индол;

6-фтор-3-(пропил-4-пиридиниламино) бензо(b)тиофен;

3-(4-пиридиниламино)бензо(b)тиофен;

3-(4-пиридиниламино)-1Н-индол-5-ил-метилкарбамат;

3-(4-пиридиниламино)-1Н-индол-5-ил-бензилкарбамат;

3-[N-пропил-N-(3-фтор-4-пиридинил) амино]-1Н-индол-5-ил-бензилкарбамат;

3-[N-пропил-N-(3-фтор-4-пиридинил) амино]-1Н-индол;

3-(4-пиридиниламино)-1Н-индазол;

3-[N-пропил-N-(4-пиридинил)амино] 1Н-индазол;

1-метил-3-(4-пиридиниламино)-1-инда-зол;

1-метил-3-(пропил-4-пиридинил)амино-1Н-индазол;

2-амино-N-(1Н-индол-3-ил)-N-(4-пири-динил)ацетамид;

2-амино-N-(1-метил-1Н-индол-3-ил)-N- (4-пиридинил)ацетамид;

2-амино-N-(1-метил-1Н-индазол-3-ил)-N-(4-пиридинил)ацетамид;

2-амино-N-(1Н-индазол-3-ил)-N-(4-пири-динил)ацетамид; и

2-амино-N-[(бензо(b)тиофен-3-ил]-N-(4-пиридинил)ацетамид.

П р и м е р 1. 3-(4-Пиридиниламино)-1Н-индолмалеат.

Раствор 3-аминоиндола (8 г) и 4-хлорпиридингидрохлорида (12 г) в 150 мл 1-метил-2-пирролидинона перемешивали при температуре 70-75^оС в течение 1 ч, после чего добавляли дополнительное количество 4-хлорпиридингидрохлорида (4 г). После перемешивания, длившегося в общей сложности 2 ч, эту смесь охлаждали, перемешивали с водой, подщелачивали карбонатом натрия и экстрагировали этилацетатом. Органический экстракт последовательно промывали водой и насыщенным раствором хлорида натрия, а затем сушили (безводный сульфат магния), фильтровали и концентрировали до образования 20 г темного масла. Это масло элюировали через диоксид кремния с 20% метанола в дихлорметане при помощи высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC), в результате чего было получено 7 г темного масла. Это масло кристаллизовали из ацетонитрила с образованием 3 г светло-коричневых кристаллов, температура плавления 192-193^оС. 2,8-граммовую порцию превращали в соль малеиновой кислоты в 50% смеси метанола и простого эфира, что позволило получить 3,5 г светлых желтовато-коричневых кристаллов, температура плавления 149-151^оС. Перекристаллизация из 50% смеси метанола и простого эфира привела к образованию 3,4 г светлых желтовато-коричневых кристаллов, температура плавления 149-151^оС.

Анализ.

Высчитано для C₁₇H₁₅N₃O₄, 62,76 С; 4,65 Н; 12,92 N.

Найдено, 62,85 С; 4,70 Н 12,92 N.

П р и м е р 2. N-(1Н-индол-3-ил)-N-(4-пиридинил)пропанамид.

3-(4-Пиридиниламино)-1Н-индол (3 г) добавляли к раствору, полученному из пропионового ангидрида (3 г), 10 мл дихлорметана и 10 мл толуола. Полученный раствор перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре, а затем перемешивали с водой и подщелачивали карбонатом натрия. Этот продукт экстрагировали введением в дихлорметан. Высушенный (безводный сульфат магния) органический слой фильтровали и концентрировали. Остаток элюировали через диоксид кремния с 50% этилацетатом в дихлорметане при помощи испарительной хроматографии на колонках, в результате чего было получено 3,5 г светлого желтовато-коричневого твердого вещества, температура плавления 166-168^оС. 1,5-граммовую порцию перекристаллизовывали из ацетонитрила с образованием 1,3 г светлых желтовато-коричневых кристаллов, температура плавления 168-170^оС.

Анализ.

Высчитано для C₁₆H₁₅N₃O, 72,43 С; 5,70 Н; 15,84 N.

Найдено, 72,06 С; 5,69 Н; 15,94 N.

П р и м е р 3. 3-(3-Фтор-4-пиридиниламино)-1Н-индолгидрохлорид.

Раствор 3-аминоиндола (7 г) и 4-хлор-3-фторпиридингидрохлорида (13 г) в 200 мл 1-метил-2-пирролидинона перемешивали при температуре 75-80^оС в течение 2 ч, после чего в него добавляли дополнительное количество 4-хлор-3-фторпиридингидрохлорида (5 г). После перемешивания, длившегося в общей сложности 3 ч, эту смесь охлаждали, перемешивали с водой, подщелачивали карбонатом натрия и экстрагировали этилацетатом. Высушенный (безводный сульфат магния) органический слой фильтровали и концентрировали до 20 г темного масла. Элюирование через силикагель сначала дихлорметаном, а затем 50% этилацетатом в дихлорметане при помощи испарительной хроматографии на колонках позволило получить 17 г темного масла. Это масло элюировали через диоксид кремния простым эфиром посредством испарительной хроматографии на колонках, в результате чего было получено 10,6 г темного масла. Это масло элюировали через диоксид кремния 20% этилацетатом в дихлорметане при помощи высокоэффективной жидкостной хроматографии с образованием 8 г темного масла. Шестиграммовую порцию превращали в хлористоводородную соль в смеси метанола и простого эфира с образованием 3,5 г твердого вещества, температура плавления > 250^оС. Перекристаллизация из 30% метанола в простом эфире позволила получить 2,7 г кристаллов, температура плавления 256-258^оС (разложение).

Анализ.

Высчитано для C₁₃H₁₁ClFN₃, 59,21 С; 4,20 Н; 15,93 N.

Найдено, 59,06 С; 4,14 Н; 15,49 N.

П р и м е р 4. 6-Фтор-3-(4-пиридиниламино)бензо(b)тиофенмалеат.

Раствор 3-амино-6-фторбензо(b)тиофена (7 г) и 4-хлорпиридингидрохлорида (7 г) в 200 мл 1-метил-2-пирролидинона перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре 80-85^оС, а затем охлаждали, перемешивали с водой, подщелачивали карбонатом натрия и экстрагировали этилацетатом. Органический экстракт последовательно промывали водой и насыщенным раствором хлорида натрия, после чего высушенный (безводный сульфат магния) экстракт фильтровали и концентрировали до 10 г темного масла. Это масло элюировали через диоксид кремния 10% метанола в дихлорметане при помощи высокоэффективной жидкостной хроматографии с образованием 4,7 г коричневого твердого вещества, температура плавления 102-106^оС. Это вещество превращали в соль малеиновой кислоты с использованием 20% метанола в простом эфире и сразу же после этого перекристаллизовывали из 20% метанола в простом эфире, что позволило получить 2,9 г белых кристаллов, температура плавления 172-174^оС (разложение).

Анализ.

Высчитано для C₁₇H₁₃FN₂O₄S, 56,66 С; 3,64 Н;7,78 N.

Найдено, 56,41 С; 3,44 Н; 7,68 N.

П р и м е р 5. 6-Фтор-3-(пропил-4-пиридиниламино)бензо(b)тиофенгидрохлорид.

Раствор 6-фтор-3-(4-пиридиниламино)бензо(b)тиофена (4,2 г) в 20 мл диметилформамида медленно добавляли к суспензии гидрида натрия (0,42 г) в 5 мл диметилформамида. После образования аниона добавляли раствор 1-бромпропана (2,3 г) в 10 мл диметилформамида. Через час реакционную смесь перемешивали с водой и экстрагировали этилацетатом. Органический экстракт последовательно промывали водой и насыщенным раствором хлорида натрия, а затем сушили (безводный сульфат магния), фильтровали и концентрировали до 5 г темного масла. Это масло элюировали через силикагель этилацетатом при помощи испарительной хроматографии на колонках, в результате чего было получено 3,3 г желтого масла. Это масло превращали в хлористоводородную соль с использованием 20% метанола в простом эфире, что позволило получить 3,3 г желтых кристаллов, температура плавления 290-292^оС (разложение).

Анализ.

Высчитано для C₁₆H₁₆ClFN₂S, 59,53 С; 5,00 Н;8,68 N.

Найдено, 59,16 С; 5,00 Н; 8,26 N.