способ получения белкового гидролизата
Классы МПК: | C12N1/20 бактерии; питательные среды для них C12P21/06 гидролизом пептидной связи, например белковых гидролизатов |
Автор(ы): | Ковтун А.Л., Сапрыкин В.М., Фирсов В.К., Рогожин А.З., Черкасов Н.А., Кузнецов В.Г. |
Патентообладатель(и): | Научно-исследовательский институт микробиологии Министерства обороны РФ |
Приоритеты: |
подача заявки:
1994-05-10 публикация патента:
27.05.1996 |
Использование: в микробиологии при получении основных питательных сред для накопления и культивирования микроорганизмов бактериальной природы. Сущность изобретения: белковый субстрат подвергают гидролизу панкреатином при pH 7,5-7,8, температуре 48-52oС в течение 4-5 ч в соотношении субстрат: фермент, равном 1,0:0,075. 9 табл.
Формула изобретения
Способ получения белкового гидролизата, включающий ферментативный гидролиз белкового субстрата, отличающийся тем, что гидролиз проводят панкреатином в течение 4 5 ч в соотношении субстрат панкреатин 1,0 0,075.Описание изобретения к патенту
Изобретение относится к медицинской микробиологии, а именно к способам получения белковых гидролизатов, и может быть использовано при получении основных питательных сред для накопления и культивирования микроорганизмов бактериальной природы. Известен способ получения белкового гидролизата (Пригода А.С. и др. Биотехнология. 1990, N 2, с.35-39), состоящий в том, что гидролиз казеина проводят при температуре 40оС, при pH 8,0 в течение 2-20 ч. При этом соотношение субстрат (казеин) фермент (панкреатин) составляет 10:1. По завершении процесса фермент инактивируют при 75оС в течение 10 мин и гидролизат осветляют центрифугированием. Для отделения гидролизата от непрореагировавшего белка и остатков фермента супернатант смешивают с активным углем из расчета 30 г сорбента на 1 л гидролизата с экспозицией 30 мин. По окончании сорбции гидролизат последовательно фильтруют через картон марки "КФО", фильтровальную бумагу и стерилизующие мембраны "Millipore" с диаметром пор 0,22 мкм. Полученный таким образом белковый гидролизат представляет собой главным образом смесь аминокислот и пептидов с молекулярной массой от 200 до 5000 Д и используется в качестве заменителя сыворотки в питательных средах для культивирования клеток эукариот. Однако полученный гидролизат используется только при конструировании бессывороточных питательных сред для суспензионного культивирования клеток млекопитающих, а не как основа микробиологических сред (Пригода А.С. и др. Биотехнология, 1990, N 2, с.35-39). Использование гидролизата для приготовления бактериологических питательных сред не повышает их ростовых свойств, так как содержит мало низкомолекулярных пептидов. Повышение ростовых свойств питательных сред данным способом путем изменения только температуры гидролизата, или модуля загрузки, или pH реакционной смеси не происходит. Известен способ получения гидролизата путем кислотного гидролиза казеина с последующей деминерализацией его (авт. св. СССР N 738583). Гидролиз проводят в две стадии, на первой из них процесс ведут соляной или серной кислотой в течение 25-35 мин при 100-102оС, а также протеолитическим ферментом-пепсидном при pH 1,0-2,0 до перевода в растворимое состояние гликопептидов с последующим удалением надосадочной жидкости, а на второй стадии гидролиз проводят с соляной или серной кислотой до глубины расщепления белка 45-50% Затем осуществляют деминерализацию смеси электродиализом. К недостаткам этого способа следует отнести продолжительность и двухстадийность процесса гидролиза, обязательную деминерализацию смеси белкового гидролизата, что увеличивает себестоимость питательной основы. Невозможность получения требуемого технического результата обусловлена тем, что в известном способе используются три гидролизующих агента, замена или исключение одного из них приводит к снижению себестоимости, но не повышает ростовых свойств питательных сред. Наиболее близким к предлагаемому является способ получения белкового гидролизата по Хоттингеру (Козлов Ю.А. Питательные среды в медицинской микробиологии, М. 1950, с.290-292; Заплатина С.И. и др. Труды Ростовского противочумного института. Ростов-на-Дону, 1959), состоящий в том, что 18 г казеина замачивают в водопроводной воде. Через сутки его отжимают и растворяют в 1 л горячей воды. Раствор подщелачивают 20%-ным раствором NaOH до pH 7,0-7,2 и кипятят в течение 15-20 мин до полного растворения казеина. К охлажденному до 40оС раствору казеина добавляют молотую поджелудочную железу из расчета 50 г на 1 л раствора и 10 мл хлороформа. Готовый раствор помещают в термостат, где поддерживают температуру 37оС. Первые сутки перевар взбалтывают через каждые 15-20 мин, а в последующие дни 2-3 раза в сутки. Гидролиз проводят в течение 4-5 сут до полного прекращения нарастания аминного азота. Белковый гидролизат используют для приготовления питательных сред при культивировании микроорганизмов бактериальной природы. К недостаткам этого способа следует отнести длительность процесса гидролиза (4-5 сут), значительную себестоимость питательной основы и невысокие ростовые свойства питательных сред, приготовленных из нее. Сокращение времени гидролиза приводит к снижению себестоимости питательной основы, но при этом снижаются ее ростовые свойства. Изменение только pH реакционной смеси или модуля загрузки по ферменту не приводит к достижению требуемого технического результата. Задачей изобретения является сокращение процесса получения гидролизата, снижение его себестоимости и повышение ростовых свойств полученных на его основе питательных сред, используемых для выращивания микроорганизмов бактериальной природы. Задача решается тем, что в способе получения белкового гидролизата, включающем ферментативное расщепление белкового субстрата, гидролиз проводят в течение 4-5 ч при температуре 50![способ получения белкового гидролизата, патент № 2061039](/images/patents/411/2061015/177.gif)
![способ получения белкового гидролизата, патент № 2061039](/images/patents/411/2061015/177.gif)
![способ получения белкового гидролизата, патент № 2061039](/images/patents/411/2061015/177.gif)
![способ получения белкового гидролизата, патент № 2061039](/images/patents/411/2061011/729.gif)
![способ получения белкового гидролизата, патент № 2061039](/images/patents/411/2061011/729.gif)
![способ получения белкового гидролизата, патент № 2061039](/images/patents/411/2061011/729.gif)
![способ получения белкового гидролизата, патент № 2061039](/images/patents/411/2061011/729.gif)
![способ получения белкового гидролизата, патент № 2061039](/images/patents/411/2061011/729.gif)
![способ получения белкового гидролизата, патент № 2061039](/images/patents/411/2061011/729.gif)
![способ получения белкового гидролизата, патент № 2061039](/images/patents/411/2061015/177.gif)
![способ получения белкового гидролизата, патент № 2061039](/images/patents/411/2061015/177.gif)
![способ получения белкового гидролизата, патент № 2061039](/images/patents/411/2061015/177.gif)
![способ получения белкового гидролизата, патент № 2061039](/images/patents/411/2061011/729.gif)
![способ получения белкового гидролизата, патент № 2061039](/images/patents/411/2061011/729.gif)
![способ получения белкового гидролизата, патент № 2061039](/images/patents/411/2061011/729.gif)
![способ получения белкового гидролизата, патент № 2061039](/images/patents/411/2061011/729.gif)
![способ получения белкового гидролизата, патент № 2061039](/images/patents/411/2061015/177.gif)
![способ получения белкового гидролизата, патент № 2061039](/images/patents/411/2061011/729.gif)
![способ получения белкового гидролизата, патент № 2061039](/images/patents/411/2061011/729.gif)
Класс C12N1/20 бактерии; питательные среды для них
Класс C12P21/06 гидролизом пептидной связи, например белковых гидролизатов