устройство для исследования образца переживаемой ткани

Формула изобретения

Устройство для исследования образца переживаемой ткани, содержащее культивационную камеру, средства подачи солевого раствора и газовой смеси СО₂ и O₂, нагреватель и микроскоп, отличающееся тем, что оно дополнительно содержит промежуточную емкость с камерой насыщения с входными и выходными патрубками, при этом входные патрубки сообщены соответственно со средствами подачи солевого раствора и газовой смеси СО₂ и О₂, один из выходных патрубков выполнен с возможностью подачи насыщенного солевого раствора в культивационную камеру, а второй выходной патрубок с возможностью подачи газовой смеси в пространство перед объективом микроскопа.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к биологии и медицине, конкретно может быть использовано в нейрофизиологических и нейроморфологических исследованиях. Кратковременное, на период до нескольких часов, культивирование нервной ткани теплокровных животных представляет одну из основных методических проблем современных микроэлектродных электрофизиологических исследований (1). Наряду с выбором состава среды культивирования и скорости ее протока через камеру с образцами ткани (2) существенной задачей является конструкция кюветы, обеспечивающая удобный доступ манипулирования с микроэлектродом под контролем микроскопа, а также сохраняющая стабильными основные параметры (температура, Рн, ламинарность потока, невозмущенность среды, степень оксигенации) культивационной среды. Имеющиеся разработки (3) для аэрации солевых растворов предполагают пропускание смеси 5% CO₂ т 95%O₂ через культивационнную камеру, однако вследствие образования пузырей аэрационной среды возникает возмущенность поверхности в культивационной камере, что затрудняет наблюдение за объектом и тонкие манипуляции с ним.

Целью предлагаемого изобретения является обеспечение стабильности Рн солевого раствора без запотевания фронтальной линзы при снижении расхода аэрационной среды.

Цель достигается тем, что в известное устройство (4), содержащее культивационную камеру, средство подачи солевого раствора и готовой смеси СО₂ и О₂, нагреватель и микроскоп, дополнительно вводится промежуточная емкость с камерой насыщения, входными и выходными патрубками. Устройство схематически представлено на чертеже. Оно содержит культивационную камеру 1, нагреватель 2, микроскоп 3, промежуточную емкость 4 с камерой насыщения 5, входными 6,7 и выходными 8,9 патрубками. При этом входные патрубки сообщены соответственно со средствами подачи солевого раствора и газовой смеси CO₂ и О₂, один из выходных патрубков выполнен с возможностью подачи насыщенного раствора в культивационную камеру, а второй выходной патрубок обеспечивает подачу газовой смеси перед объективом микроскопа.

Аэрированный смесью 5% СО₂ и 95% О₂ солевой раствор Рн 7,4 поступает в емкость нагрева раствора, нагревается в ней, не меняя Рн, (испарения СО₂ и О₂, не происходит, поскольку эта емкость замкнута) и поступает в культивационную камеру. Остатки аэрационной смеси из верхней части промежуточной емкости поступают к поверхности солевого раствора в культивационной камере, обдувая фронтальную линзу объектива, чем препятствуют ее запотеванию, а также создают соответствующую газовую среду над кюветой, что обеспечивает равновесность концентрации СО₂ в солевом растворе, омывающем образец ткани.

ПРИМЕР 1. Крысе массой 250 гр производят декапитацию, быстро вскрывают грудную полость, перерезают крупные присердечные сосуды и извлекают сердце. Сердце переносят в холодный (8^oC) раствор Хэнкса на 10-15 сек, иссекают участок верхней полой вены, прилежащей к правому ушку и, ориентируясь по артерии синусного узла, помещают в кювету предлагаемого устройства. Через 30-60 мин. в зону синоатриального узла микроманипулятором вводят микроэлектрод 0,5 мкм диаметром и сопротивлением кончика не менее 20 МОм. Поиск клеток водителей ритма, истинных и латентных, осуществляется перемещением позиционера манипулятора с одновременным визуальным контролем величины формы потенциала действия на запоминающем осцилографе. Определив зону исходной пейсмекерной активности, в инкубационную среду прибавляют раствор медиатора (норадреналина) в известной концентрации и отмечают величину перемещения доминантного пейсмекерного региона, находя истиннный водитель ритма манипулятором. При последующей отмывке препарата зона доминантного пейсмекинга возвращается в исходное состояние. Процедура электрофизиологического эксперимента может длится 4-6часов, при этом все основные характеристики водителей ритма остаются неизменными, прилегающие к синоатриальному узлу области рабочего миокарда продолжают сокращаться с частотой генерации пейсмекерной зоны.