способ контроля биологической неэквивалентности лекарственных препаратов 2-диметиламиноэтилового эфира п- бутиламинобензойной кислоты (дикаина)

Формула изобретения

Способ контроля биологической неэквивалентности лекарственных препаратов гидрохлорида 2-диметиламиноэтилового эфира п-бутиламинобензойной кислоты (дикаина), включающий приготовление растворов испытуемого и стандартного образцов дикаина, отличающийся тем, что каждый из полученных растворов смешивают с раствором фосфорно-вольфрамовой кислоты в соотношении 1:40 100 соответственно, фиксируют скорость осаждения образовавшейся взвеси, наличие разности в скоростях осаждения свидетельствует об биологической неэквивалентности образцов.

Описание изобретения к патенту

Настоящее изобретение относится к фармацеи, в частности к способу контроля биологической неэквивалентности химически идентичных лекарственных веществ, и может быть использовано при контроле качества лекарственных препаратов дикаина (тетракаина).

Известно, что химически идентичные лекарственные средства разных изготовителей, а часто разные партии одного изготовителя, могут проявлять неодинаковые физико-химические, биофармацевтические (in vivo, in vitro) и терапевтические свойства. Это явление получило название биологической неэквивалентности [1]

Основной причиной бионеэквивалентности лекарственных средств при одинаковом химическом составе и чистоте являются кристаллические и конформационные изменения лекарственного вещества.

Кристаллическое и конформационное состояние молекул лекарственных веществ связано с технологическими процессами их получения. Незначительные специфические отклонения от стандартной технологии или условий хранения могут привести к изменению молекулярного состояния лекарственных веществ и, как следствие, к отклонению их биологической активности от биологической активности идентичных стандартных лекарственных веществ (за стандартное лекарственное вещество принимают лекарственное вещество, полученное по стандартной технологии, обладающее определенной биологической активностью) [2]

Анализ качества бионеэквивалентных лекарственных средств, осуществляемый согласно стандартным методикам, часто показывает полное соответствие предъявляемым к ним требованиям. Это свидетельствует о том, что известные методы контроля не гарантируют надлежащего качества препаратов, соответствующего стандарту. Биологическая неэквивалентность лекарственных средств приводит к тому, что препарат, отвечая всем требованиям соответствующей нормативно-технической документации, проявляет или снижение терапевтического эффекта или гиперэффект.

В частности, невыявленная существующими стандартными методами анализа биологическая неэквивалентность препаратов дикаина может привести при их стандартном применении, учитывая высокую токсичность дикаина, к тяжелейшим последствиям, вплоть до летательных исходов [3]

В связи с вышеизложенным необходимость разработки надежных экспрессных методов выявления биологической неэквивалентности, в частности лекарственных препаратов дикаина, является чрезвычайно актуальной.

В настоящее время известен способ определения биологической неэквивалентности идентичных лекарственных средств с помощью биологического объекта [4]

Известный способ характеризуется сложностью и многостадийностью методики (приведение ряда последовательных операций, контрольных измерений, расчетов), длительностью, необходимостью использования биологических объектов (подопытных животных).

В основу заявляемого изобретения положена задача разработать способ контроля, позволяющий упростить методику, сократить ее многостадийность и длительность, исключить использование биологических объектов.

Задача решена тем, что в способе контроля биологической неэквивалентности лекарственных препаратов гидрохлорида 2-диаметиламиноэтилового эфира n-бутиламинобензойной кислоты (дикаина), согласно изобретению, готовят растворы испытываемого и стандартного образцов дикаина, каждый из полученных растворов смешивают с раствором фосфорно-вольфрамовой кислоты в соотношении 1 (40 100) соответственно, фиксируют скорость осаждения образующейся взвеси и по наличию разности в скоростях осаждения судят о биологической неэквивалентности образцов.

Заявленный способ основан на впервые выявленной авторами взаимосвязи между скоростью осаждения фосфорно-вольфрамового комплекса, образованного при взаимодействии фосфорно-вольфрамовой кислоты с дикаином (химической реакционной способностью дикаина) биологической активностью последнего. Установлено, что скорость осаждения фосфорно-вольфрамового комплекса с разными образцами дикаина различны при биологической неэквивалентности этих образцов.

Заявленный способ позволяет значительно упростить и ускорить существующий, исключить использование биологического объекта.

Существенными признаками заявляемого способа является приготовление растворов стандартного и испытуемого образцов дикаина, смешивание каждого из полученных растворов с фосфорно-вольфрамовой кислотой в соотношении 1 (40 - 100) соответственно, фиксирование скорости осаждения образовавшейся взвеси и сравнении скоростей осаждения, при этом наличие различий в скоростях осаждения свидетельствует о биологической неэквивалентности образцов.

Подобранный реактив и его соотношение с дикаином позволяют повысить качество, чувствительность, точность методики при контроле биологической неэквивалентности лекарственных препаратов дикаина.

Соотношение ниже 1 40 (например, 1 39) из-за недостаточного количества реактива не создает четкой границы между взвесью и раствором, что не позволяет зафиксировать скорость осаждения взвеси. Соотношение выше 1 100 (например, 1 101) затрудняет фиксацию скорости осаждения в связи с тем, что переизбыток фосфорно-вольфрамовой кислоты мешает нормальному процессу осаждения (комплексообразования).

Заявляемый способ контроля биологической неэквивалентности может быть использован как для контроля дикаина в субстанции, так и в лекарственных формах, например глазных каплях.

Заявляемый способ осуществляют следующим образом.

Для установления наличия биологической неэквивалентности лекарственных препаратов дикаина готовят растворы испытываемого и стандартного образцов дикаина, далее смешивают каждый из полученных растворов с раствором фосфорно-вольфрамовой кислоты в определенном соотношении до образования взвеси (фосфорно-вольфрамового комплекса). При этом условия проведения реакции в контролируемых образцах должны быть идентичны. Затем сопоставляют скорость осаждения взвеси в растворе, содержащем испытуемый образец дикаина, со скорость осаждения взвеси в растворе, содержащем стандартный образец дикаина. В случае фиксации различий в скоростях осаждения сравниваемых проб делают вывод о биологической неэквивалентности анализируемых образцов дикаина. В случае равных скоростей осаждения делают вывод о биологической эквивалентности анализируемых образцов дикаина.

За стандартный образец дикаина принимают дикаин, полученный по стандартной технологии, в данном случае это фармакопейный дикаин (ГФ Х изд. ст. 214), обладающий определенной биологической активностью [5]

Способ иллюстрируется следующими примерами. В примерах контролируемыми образцами служат глазные капли, содержащие действующее вещество дикаин и физиологический раствор.

Пример 1.

Для контроля биологической неэквивалентности берут стандартный и испытываемый образцы 0,3-ные глазные капли лекарственного вещества - гидрохлорида 2-диметиламиноэтилового эфира n-бутиламинобензойной кислоты (дикаина), приготовленные на физиологическом растворе.

Указанное лекарственное вещество, содержащееся в глазных каплях, используемых в качестве испытываемого образца, представляет собой --форму дикаина, полученную по технологии, отличной от стандартной. Справка о регистрации --формы дикаина, как нового химического биологического активного соединения, прилагается.

В качестве стандартного образца используют глазные капли, содержащие фармакопейный дикаин, соответствующий ст. 214 ГФ Х изд. полученный по стандартной технологии, обладающий определенной биологической активностью [5]

Анализ качества глазных капель стандартного и испытываемого образцов, осуществленный согласно стандартным методикам (ГФ Х изд.), показывал полную их идентичность и полное соответствие предъявляемых к ним требованиям.

Заявляемый способ контроля осуществляют следующим образом.

В две пробирки одинакового стекла и диаметра помещают: в первую 0,5 мл 0,3-ного раствора фармакопейного дикаина (стандартный образец), во вторую - 0,5 мл 0,3-ного раствора --формы дикаина (испытываемый образец), затем в каждую пробирку приливают по 4 мл 1,5-ного раствора фосфорно-вольфрамовой кислоты, что соответствует соотношению 1 40, содержимое пробирок взбалтывают в течение 25 с до образования взвеси фосфорно-вольфрамового комплекса.

Сравнивают скорости осаждения взвести в двух пробирках.

В пробирке с раствором --формы дикаина взвесь осела в течение 10 - 15 с, а в пробирке с фармакопейным дикаином за 25 30 с. Скорость осаждения образовавшегося комплекса с --формой дикаина в два раза превышает скорость осаждения комплекса с фармакопейным дикаином.

Пример 2. В две пробирки одинакового стекла и диаметра помещают: в первую 0,2 мл 0,3-ного раствора дикаина фармакопейного (стандартный образец), во вторую 0,2 мл 0,3-ного раствора --формы дикаина (испытываемый раствор), затем в каждую пробирку осторожно приливают по 4 мл 1,5-ного раствора фосфорно-вольфрамовой кислоты (что соответствует соотношению 1 100), одновременно взбалтывают содержимое пробирок в течение 25 с до образования взвеси фосфорно-вольфрамового комплекса. Сравнивают скорости осаждения взвеси в двух пробирках. В пробирке с раствором --формы дикаина взвесь осела в течение 10 с, а в пробирке с фармакопейным дикаином - за 25 с. Скорость осаждения комплекса с --формой дикаина значительно превышает скорость осаждения комплекса с фармакопейным дикаином.

Различие в скоростях осаждения взвеси в пробирках с испытываемым и стандартным образцами указывает на их биологическую неэквивалентность.

Для подтверждения сделанного вывода о биологической неэквивалентности образцов дикаина параллельно проведено изучение местно-анестезирующего действия (специфической активности) этих образцов.

Проводили исследования на 44 кроликах породы шиншилла. Первой группы кроликов (22 шт.) закапывали в глаз по 0,06 мл (2 капли) 0,3-ного раствора фармакопейного дикаина, второй группе кроликов (22 шт.) закапывали по 0,06 мл (2 капли) 0,3-ного раствора --формы дикаина.

Продолжительность анестезии определяли методом касания роговицы глаза.

Длительность определяли по секундомеру.

При закапывании фармакопейного дикаина (стандартный образец) анестезия глаза наступала через 13,4 2,0 с, средняя продолжительность анестезии составила в среднем 15,3 2,0 мин.

При закапывании раствора --формы дикаина (испытываемый образец) анестезия глаза наступала через 8,0 1,5 с, средняя продолжительность анестезии составила в среднем 55,2 1,7 мин.

Результаты свидетельствуют о бионеэквивалентности испытываемого и стандартного образцов дикаина.

Полученные данные доказывают, что отклонение скорости осаждения фосфорно-вольфрамового комплекса испытываемого образца дикаина относительно стандартного свидетельствует о биологической неэквивалентности образцов, что подтверждается большей анестезирующей активностью испытываемого образца относительно стандартного.

Заявляемый способ благодаря простоте и надежности может быть использован в качестве экспресс-метода при контроле качества лекарственных препаратов дикаина в химико-фармацевтической промышленности и медицине.