способ получения основного ингибитора протеиназ из органов крупного рогатого скота
Классы МПК: | A61K35/39 поджелудочная железа A61K35/42 легкие A61K35/55 железы, не отнесенные ни к одной из предшествующих подгрупп этой группы |
Автор(ы): | Донецкий Игорь Алексеевич, Балабушевич Надежда Георгиевна, Казанская Новелла Федоровна, Ларионова Наталья Ивановна, Макаревич Ирина Анатольевна |
Патентообладатель(и): | Донецкий Игорь Алексеевич, Балабушевич Надежда Георгиевна, Казанская Новелла Федоровна, Ларионова Наталья Ивановна, Макаревич Ирина Анатольевна |
Приоритеты: |
подача заявки:
1993-03-19 публикация патента:
20.10.1996 |
Изобретение относится к биотехнологии, а именно к технологии получения основного ингибитора протеиназ из органов крупного рогатого скота. Технический результат от применения изобретения состоит в увеличении удельной активности и чистоты препарата основного ингибитора протеиназ, что делает возможность его медицинское использование. Предлагаемый способ получения включает измельчение сырья, экстракцию в кислой среде, обработку экстракта, хроматографию на сульфокатионите, обработку элюата с катионита соляной кислотой до рН 1 - 3 и отделение осадка, обработку супернатанта трихлоруксусной кислотой до ее концентрации 2,5-7,0%, удаление примесных белков, высаливание целевого продукта и его очистку хроматографией, осаждение или лиофильную сушку препарата.
Формула изобретения
Способ получения основного ингибитора протеиназ из органов крупного рогатого скота путем измельчения сырья, экстракции в кислой среде, удаления осадка, хроматографии с последующей очисткой целевого продукта ацетоном и его высушиванием, отличающийся тем, что хроматографию проводят на сульфокатионите, элюат обрабатывают соляной кислотой до рН 1 3, отделяют осадок, надосадочную жидкость обрабатывают трихлоруксусной кислотой до концентрации 2,5 7,0% удаляют выпавшие белки, а из надосадочной жидкости высаливают целевой продукт, очищают хроматографией и лиофилизуют.Описание изобретения к патенту
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к технологии получения основного ингибитора протеиназ (типа Кунитца) из органов крупного рогатого скота, и может быть использовано в медицинской промышленности для приготовления лекарственных препаратов, используемых для лечения заболеваний, связанных с дисбалансом систем протеолиза организма. Известен способ получения основного ингибитора протеиназ из животного сырья путем экстракции, фильтрования, термической обработки, многократного высаливания и лиофильной сушки. Однако он технологически сложен, а активность выделяемого препарата мала. Ближайшим техническим решением является способ получения ингибитора протеиназ из органов крупного рогатого скота, который заключается в том, что сырье измельчают, проводят экстракцию в кислой среде, обрабатывают экстракт, после удаления осадка целевой продукт выделяют из экстракта хроматографией на адсорбенте силикатного типа и осаждают из элюата органическими растворителями. По указанному способу удается выделить продукт с активностью 500-1500 КИЕ/мг, не отвечающий требованиям, предъявляемым к медицинским препаратам ингибитора протеиназ. Для приготовления лекарственных форм основного ингибитора протеиназ. Для приготовления лекарственных форм основного ингибитора протеиназ требуется его дополнительная очистка. Ожидаемый технический результат от предлагаемого способа состоит в увеличении удельной активности и чистоты выделяемого препарата основного ингибитора протеиназ, что необходимо для его медицинского применения. Предлагаемый способ получения основного ингибитора протеиназ заключается в том, что органы крупного рогатого скота, содержащие ингибитор (легкие, поджелудочная железа, слюнные железы), измельчают, экстрагируют в кислой среде, отделяют жмых, обрабатывают экстракт для удаления липидов и белков, основной ингибитор протеиназ хроматографируют на сульфокатионите, из элюата с ионита после обработки соляной кислотой до рН 1 3 удаляют балластные белки, супернатант обрабатывают трихлоруксусной кислотой до ее концентрации 2,5 7,0% удаляют примесные белки, высаливают основной ингибитор протеиназ, отделяют высокомолекулярные белки и пигменты хроматографией, а затем выделяют препарат осаждением ацетоном или лиофильной сушкой. Получают апирогенный препарат, активность которого не менее 5000 КИЕ/мг. По данный электрофореза в 12,5% полиакриламидном геле (рН 4,5) препарат гомогенен по белковому составу (Rf 0,74). Дополнительная оценка качества продукта с помощью аминокислотного анализа и высокоэффективной жидкостной хроматографии показала его идентичность основному ингибитору протеиназ Кунитца (апротинин ("Novo", Дания)). Отличительными признаками предлагаемого способа является ионообменная хроматография на сульфокатионите, обработка элюата соляной кислотой до рН 13, отделение осадка, обработка супернатанта трихлоруксусной кислотой до ее концентрации 2,5 7,0% удаление примесных белков, высаливание основного ингибитора протеиназ, отделение высокомолекулярных белков и пигментов хроматографией и лиофильная сушка препарата. П р и м е р 1. Один кг замороженной поджелудочной железы крупного рогатого скота измельчают на мясорубке. Проводят экстракцию железы 65% водным раствором этилового спирта при значении рН 3,0, которое поддерживают с помощью фосфорной кислоты. После отделения жмыха экстракт подвергают вакуумной дистилляции до содержания этанола 20% и охлаждают до температуры 5oC. Образовавшийся осадок отделяют сифонированием, а экстракт фильтруют. Прозрачный экстракт пропускают через макропористый сульфокатионит КУ-23 в Н-форме (2
![способ получения основного ингибитора протеиназ из органов крупного рогатого скота, патент № 2067868](/images/patents/405/2067003/183.gif)
![способ получения основного ингибитора протеиназ из органов крупного рогатого скота, патент № 2067868](/images/patents/405/2067003/183.gif)
![способ получения основного ингибитора протеиназ из органов крупного рогатого скота, патент № 2067868](/images/patents/405/2067003/183.gif)
![способ получения основного ингибитора протеиназ из органов крупного рогатого скота, патент № 2067868](/images/patents/405/2067003/183.gif)
![способ получения основного ингибитора протеиназ из органов крупного рогатого скота, патент № 2067868](/images/patents/405/2067003/183.gif)
![способ получения основного ингибитора протеиназ из органов крупного рогатого скота, патент № 2067868](/images/patents/405/2067003/183.gif)
Класс A61K35/39 поджелудочная железа
Класс A61K35/55 железы, не отнесенные ни к одной из предшествующих подгрупп этой группы