питательная среда для дифференциации бактерий рода morganella от других энтеробактерий

Формула изобретения

Питательная среда для дифференциации бактерий рода Morganella от других энтеробактерий, содержащая дрожжевой экстракт, хлорид натрия, гидрофосфат натрия, агар, фенилаланин и дистиллированную воду, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит гистидин при следующем количественном соотношении компонентов, г/л:

Дрожжевой экстракт 2 3

Хлорид натрия 4 5

Гидрофосфат натрия 0,5 1,0

Фенилаланин 1,5 2,0

Агар 30 40

Гистидин 9 10

Дистиллированная вода 1 л

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области биотехнологии и медицинской микробиологии и может быть использовано для дифференциации бактерий рода Morganellа от других энтеробактерий при лабораторной диагностике вызываемых ими заболеваний.

Известна питательная среда для дифференциации бактерий рода Proteus и Providencia от других энтеробактерий, содержащая дрожжевой экстракт жидкий (сухой) 100 мл (3 г), хлорид натрия 5 г, натрий гидрофосфат 1 г, L-фенилаланин (LD-фенилаланин) 1 г (2 г), агар 12 г, вода дистиллированная до 1 л (Энтеробактерии. Руководство для врачей. Под ред. Покровского В.И. М. Медицина, 1985, с. 277 278).

Принцип действия среды основан на способности указанных микроорганизмов расщеплять аминокислоту фенилаланин до фенилпировиноградной кислоты и аммиака. Кислота эта бесцветна и для ее обнаружения применяют тест-реактив, содержащий хлорид железа, который присоединяется к фенилпировиноградной кислоте, вызывая зеленое окрашивание.

Недостатком известной среды является невозможность использования ее для непосредственного высева материала от больного (необходима только чистая культура) и отсутствие возможности дифференциации бактерий рода Proteus и Providencia от морганелл.

Технической задачей изобретения является создание питательной среды для дифференциации бактерий родов Proteus, Providencia от морганелл и других энтеробактерий.

Технический результат изобретения заключается в возможности использования предлагаемой среды для непосредственного высева материала больного и ее способности дифференциации бактерий рода Morganella от бактерий родов Proteus, Providencia и других энтеробактерий.

Питательную среду для дифференциации бактерий рода Morganella от других энтеробактерий готовят путем внесения и размешивания в 1 л холодной дистиллированной воды дрожжевого экстракта 2 3 г, хлорида натрия 4 5 г, гидрофосфата натрия 0,5 1 г и агара 30 40 г, доводят до кипения и профильтровывают. Добавляют L-фенилаланин 1 2 г, гистидин 9 10 г. Стерилизуют при 112^oC 30 мин. Среда имеет розово-фиолетовую окраску. Срок хранения при 4^oC 1 2 недели.

Способ применения данной среды заключается в том, что высевают исследуемый материал или подозрительные колонии, выросшие на дифференциально-диагностических средах, в чашу Петри с предлагаемой средой, равномерно растирая круговыми движениями по поверхности агара, инкубируют посевы при 37^oC в течение 18 24 ч. Через сутки на чашку наносят 5 10 капель 10% водного раствора хлорида железа (трехвалентного). При этом колонии Morganellа окрашиваются в желтый цвет, колонии Proteus и Providencia в темно-зеленый, другие виды энтеробактерий не окрашиваются.

Пример 1. Готовят среду по прописи: в 1 л холодной дистиллированной воды дрожжевого экстракта 2 г, хлорида натрия 4 г, гидрофосфата натрия 0,5 г, агара 30 г, доводят до кипения и профильтровывают. Добавляют L-фенилаланин 1 г, гистидин 9 г. Стерилизуют при 112^oC 30 мин. Среда имеет розово-фиолетовую окраску.

Проводят высев 60 штаммов Morganella morganii методом бляшек. Инкубируют сутки при 37^oC. После нанесения тест-реактива (хлорид железа) установлено появление желтого окрашивания.

Пример 2. Готовят среду по прописи: в 1 л холодной дистиллированной воды вносят дрожжевой экстракт 3 г, хлорида натрия 5 г, гидрофосфата натрия - 1,0 г, агара 40 г, доводят до кипения и профильтровывают. Добавляют L-фенилаланин 2 г, гистидин 10 г, стерилизуют при 112^oC 30 мин. Среда имеет розово-фиолетовую окраску.

Проводят высев 117 штаммов различных видов Enterobacteriaceae. После нанесения культур, инкубации в течение суток при 37^oC и внесения тест-реактива установлено появление желтого окрашивания над колониями Morganella, темно-зеленого над колониями Proteus и Providencia, отсутствие изменения цвета над колониями других энтеробактерий. При этом наличие колоний видов Enterobacteriaceae, помимо Proteus и Providencia, не сказывалось на результатах опытов, поскольку у них отсутствует способность продуцировать фенилаланиндезаминазу.