производные индолона в виде рацемата или оптически активного изомера или их фармацевтически приемлемые аддитивные соли кислоты и кетопроизводные индолона

Формула изобретения

1. Производные индолона общей формулы



где X обозначает





или



где A является группой формулы B





n 0 или 1;

m 0 или целым числом от 1 до 6;

R, R₁ и R₂ каждый независимо является водородом или C₁ C₃ алкилом;

R₃ и R₄ взятые отдельно каждый является водородом или взятые вместе являются этиленом;

X₁ является водородом, C₁ C₃ алкоксигруппой или C₁ C₃-алкокси-карбонилом;

Y CH₂ или кислород;

Z и Z^" каждый независимо является водородом, C₁ - C₃-алкилом, C₁ C₃-алкоксигруппой, фтором, хлором или бромом,

в виде рацемата или оптически активного изомера или их фармацевтически приемлемые аддитивные соли кислоты.

2. Соединение по п. 1, отличающееся тем, что m равно 0 или 1, Z и Z^" каждый является водородом, а R₂ метил или водород.

3. Соединение по п.2, отличающееся тем, что R₂ является метилом и имеет относительную стереохимическую формулу



4. Соединение по п.3, отличающееся тем, что R₃ и R₄, взятые отдельно, и каждый представляет водород.

5. Соединение по п.4, отличающееся тем, что M 0.

6. Соединение по п. 3, отличающееся тем, что R₃ и R₄ вместе образуют этилен.

7. Соединение формулы II по п.1, отличающееся тем, что Z является водородом, а Z^" является водородом или хлором, R₂ метил.

8. Соединение по п.7, отличающееся тем, что имеет относительную стереохимическую формулу



где R и R₁ каждый является водородом, а Y является CH₂.

9. Соединение по п.1, отличающееся тем, что Z и Z^" каждый является водородом или метилом, m 0 или 1.

10. Кетопроизводные индолона общей формулы



где X представляет собой группу формулы







A является группой формул





n 0 или 1;

m 0 или целое число от 1 до 6;

R, R₁ и R₂ каждый независимо является водородом или C₁ C₃-алкилом;

R₃ и R₄ рассматриваются отдельно и каждый является водородом или R₃ и R₄ рассматриваются вместе и являются этиленом;

X₁ является водородом, C₁ C₃-алкоксигруппой или C₁ C₃-алкоксикарбонилом;

Y является CH₂ или кислородом;

Z и Z^" каждый независимо является водородом, C₁ - C₃-алкилом, C₁ C₃-алкоксигруппой, фтором, хлором или бромом.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к нейрозащитным (противоишемическим и блокирующим возбуждаемого аминокислотой рецептора) аналогам 5-(1-окси-2-пиперидинопропил)-2-(1Н, 3Н)-индола, определяемым формулами (I), (II) и (III), представленными ниже; их фармацевтически приемлемым солям; способу использования этих соединений при лечении приступа, черепно-мозговой травмы или дегенеративных болезней ЦНС (центральной нервной системы), таких как болезнь Алзгеймера, старческое слабоумие Алзгеймеровского типа, болезнь Хантингтона и болезнь Паркинсона; и к некоторым их интермедиатам.

Ифенпродил является рацемическим, так называемым dI-эритросоединением, имеющим соответствующую стереохимическую формулу:

(A)

который продается в качестве гипотензивного средства, полезность, распределяемая на ряд ближайших аналогов. Ифенпродил, как показано, обладает также противоишемической активностью и активностью блокировать возбуждаемый аминокислотой рецептор.

Цель изобретения обнаружение соединений, обладающих таким нейрозащитным действием в надлежащей степени, в то же самое время имеющих пониженное или несущественное гипотензивное действие.

Некоторые структурно родственные 1-фенил-3-(4-арил-4-ацилоксипиперидино)-1-пропанолы являются полезными в качестве аналгетиков, 1-[4-(амино- и окси-алкил)-фенил]-2-(4-окси-4-толилпиперазино)-1-алканолы и алканоны, обладают аналгетической, гипотензивной, психотропной или противовоспалительной активностью.

в которой R^a и R^b каждый независимо является водородом или (С₁-C₄)алкилом,

R^c является бензилом, фенокси-, бензилокси-группой или феноксиметилом, а

Z^a является СН₂, C(CH₃)₂ или СH₂CH₂, имеют активность нейрозащитного типа.

Изобретение относится к рацемическим или оптически активным соединениям формулы:

,

где







в которых

А является группой формул:







или

n является 0 или 1;

m является 0 или целым числом от 1 до 6;

R, R¹ и R² каждый независимо является водородом или (С₁-C₃)-алкилом;

R³ и R⁴, взятые отдельно, каждый является водородом, или

R³ и R⁴, взятые вместе, являются этиленом;

Х является водородом, (С₁-C₃)-алкокси-группой или (С₁-C₃)-алкокси-карбонилом;

Y является СН₂ или кислородом;

Z и Z¹ каждый независимо является водородом, (С₁-C₃)-алкилом, (С₁-C₃)-алкокси-группой, фтором, хлором или бромом; и их фармацевтически приемлемые соли при присоединении кислот.

Предпочтительные соединения изобретения в большинстве случаев имеют R² в виде водорода или метила, наиболее предпочтительно в виде метила, имеющего относительную стереохимию в 1-оксипропиловой боковой цепи, изображаемую в виде формулы



и который обозначается либо как (1S^*, 2S^*), либо как (1R^*, 2R^*).

Предпочтительными значениями А являются в большинстве случаев

(образуя 2(1Н,3Н)-индолон или оксиндол);

(образуя 3,4-дигидро-2(1Н)-хинолон);

(образуя индол);

и

(образуя 2(3Н)-бинзоксазолон).

Изобретение относится также к промежуточным соединениям формулы

(IV)

(V)

(VI)

в которых переменные группы имеют определенные выше значения.

Изобретение относится, кроме того, к фармацевтическим композициям, включающим соединение формулы (I), (II) или (III), и к способу лечения приступа, черепно-мозговой травмы или дегенеративной болезни ЦНС с помощью соединения формулы (I), (II) или (III).

Выражение "фармацевтически приемлемые соли при присоединении кислоты" предназначается для включения, но не для ограничения таких солей, как хлоргидрат, бромгидрат, йодгидрат, нитрат, гидросульфат, дигидрофосфат, мезилат, малеат и сукцинат. Такие соли обычно получаются реакцией свободной основной формы соединения (I), (II) или (III) с соответствующей кислотой, обычно один молярный эквивалент, и в растворителе. Те соли, которые не выпадают в осадок непосредственно, в большинстве случаев выделяются путем концентрирования растворителя и/или добавлением не-растворителя (вещества, не вызывающего растворение).

Соединения формулы (I) (VI), которые в центральной части молекулы являются 1-алканолами, обладают асимметрическим С-1 атомом углерода, тогда как те соединения, в которых R не является водородом, обладают вторым асимметрическим центром при С-2 атоме углерода алканола. Подобным образом в соединениях формул (IV) (VI), которые являются 1-алканонами, в которых R не является водородом, обладают С-2 асимметрическим атомом углерода. Такие соединения могут быть расщеплены на оптические изомеры, показывающим равное, но противоположное вращение плоскополяризованного света. Например, все эти соединения потенциально расщепляются путем фракционированной кристаллизации их диастереомерных солей при присоединении оптически активной кислоты, как это приводится примером ниже в описании. Спирты также потенциально расщепляются с помощью хроматографии или фракционированной кристаллизации сложных эфиров или уретанов, полученных по реакции с активированными формами оптически активных кислот или с оптически активными изоцианатами, как это также приводится примером ниже в описании. Таким образом, изобретение не должно истолковываться как ограниченное рацемическими формами соединений изобретения.

Соединения изобретения, имеющие формулу (I), (II) и (III), получаются легко.

Кетоны-предшественники в большинстве случаев получаются путем нуклеофильного замещения соответствующе замещенного 2-галоид, 2-алкансульфонилокси- или 2-арилсульфонилокси-1-алканона с помощью соответствующего замещенного производного пиперидина, например



в которой Х является обычно хлором, бромом, мезилокси- или тозилокси-группой. Эта реакция проводится при условиях, типичных для нуклеофильных замещений. Когда два реагирующих вещества находятся примерно в эквивалентном количестве, могут быть использованы по существу количества, близкие к молярным эквивалентам; хотя, когда один из реагентов является более легко доступным, обычно предпочитается использовать этот реагент в избытке для того, чтобы ускорить завершение этой бимолекулярной реакции за более короткий период времени. Реакция в большинстве случаев проводится в присутствии по меньшей мере 1 молярного эквивалента основания, самого производного пиперидина, если он является легкодоступным, но более обычно третичного амина, который по меньшей мере сравним по основной силе с нуклеофильным пиперидином; и в растворителе, инертном к реакции, таком как этанол. При необходимости реакция катализируется добавлением вплоть до одного молярного эквивалента или больше йодистой соли (например, NaI, KI). Температура не является решающим фактором, но в большинстве случаев она будет относительно повышена для того, чтобы ускорить завершение реакции в течение более короткого периода времени, но не настолько высоко, чтобы приводить к чрезмерному разложению. Температура в пределах 50 120^oС в большинстве случаев является удовлетворительной. Желательно, когда температура является температурой кипения реакционной смеси с обратным стеканием флегмы.

Используемое выражение "инертный в реакции растворитель" относится к любому растворителю, который не взаимодействует с исходными веществами, реагентами, интермедиатами или продуктами реакции до известной степени, при которой неблагоприятно влияет на выход целевого продукта реакции.

Получающиеся промежуточные кетоны удобным образом превращаются в соответствующие спирты путем обычного восстановления с помощью NaBH₄, обычно в избытке, в протонном растворителе, таком как метанол или этанол, в большинстве случает при температуре в пределах примерно 15 45^oС.

Исходные вещества и реагенты, требуемые для синтеза соединений изобретения, являются легкодоступными, либо коммерчески, согласно литературным способам, либо по способам, которые приводятся примером ниже в разделе Полученный (Препарат).

Соединения изобретения формулы (I), (II) и (III) обладают селективной нейрозащитной активностью, основанной на их противоишемической активности и способности блокировать возбуждаемые аминокислотой рецепторы, в то же время большей частью имеющих пониженную или незначительную гипотензивную активность. Противоишемическая активность соединений изобретения определяется по одному или более способам, которые детально рассмотрены ранее Готти и др. и Картером и др. процитированных выше, или по подобным способам (методам). Способность соединений изобретения блокировать возбуждаемые аминокислотами рецепторы доказывается по их способности блокировать индуцируемые N-метил-D-аспарагиновой кислотой (NМДК) повышения (элевации) сG МР в мозжечках новорожденных крысят по следующей методике. Мозжечки от десяти крыс Вистара 8 14 дневного возраста быстро вырезаются и помещаются при 4^oС в Кребс/бикарбонатный буфер, pН 7,4, а затем разрезаются на части размером 0,5 х 0,5 мм, используя тканевой нож МакИлвейна (Никл Лебаротори Инжиниринг Корп. Гомшэлл, Сари, Англия). Полученные кусочки мозжечка переносятся в 100 мл Кребс/бикарбонатного буфера при 37^oС, который непрерывно уравновешивается с помощью 95: 5 смеси О₂/CO₂. Кусочки мозжечка инкубируются таким путем в течение 90 мин с тремя изменениями буфера. Затем буфер декантируется, ткань центрифугируется (1 мин, 3200 об/мин) и ткань повторно суспендируется в 20 мл Кребс/бикарбонатного буфера. Затем извлекают 250 мкл аликвотных проб (приблизительно 2 мг) и помещают в маленькие (microfuge) пробирки объемом 1,5 мл. В эти пробирки добавляются 10 мкл исследуемого соединения из основного раствора, за которым следует, после 10-минутного периода инкубации, добавление 10 мкл 2,5 мМ раствора NMDK, чтобы запустить реакцию. Конечная концентрация NMDK составляет 10 мкМ. Контрольные образцы не имеют добавленной NMDK. Пробирки инкубируются в течение 1 мин при 37^oС во встряхиваемой водяной бане, а затем добавляется 750 мкл 50 мМ Трис-С1, 5 мМ раствора ЭДТК (этилендиаминтетрауксусной кислоты), чтобы остановить реакцию. Пробирки помещаются немедленно в кипящую водяную баню в течение 5 мин. Содержимое каждой пробирки разрушается затем ультразвуком в течение 15 с, используя установку ультразвукового воздействия на пробы при уровне мощности три. Извлекаются 10 мкл образца, и белок определяется по методу Лоури, Ana I. Biochem. 100: 201 220 (1979). Пробирки затем центрифугируются (5 мин, 10.000 хg), извлекается 100 мкл надосадочной жидкости, и уровень циклического G МР (сG МР) анализируется путем использования радиоиммуноанализа сG МР Нью Ингленд Нуклеар (Бостон, Массачусетс) согласно методу производителя. Данные сообщаются в виде пмоля сG МР, генерируемого на мг белка. Нежелательная гипотензивная активность также определяется по известным методам, например, по методам Кэррона и др. также процитированного выше.

Такие селективные нейрозащитные противоишемические активности и активности блокировать возбуждаемые аминокислотами рецепторы отражают ценную полезность соединений изобретения при лечении приступа, черепно-мозговой травмы и дегенеративных заболеваний ЦНС (центральной нервной системы), таких как болезнь Алзгеймера, старческое слабоумие Алзгеймеровского типа, болезнь Паркинсона и болезнь Хантингтона, без значительной способности на параллельное излишнее падение кровяного давления. При систематическом лечении таких болезней с помощью нейрозащитного количества соединений формулы (I), (II) или (III), дозировка обычно составляет примерно 0,02 10 мг/кг/день (1 500 мг/день для обычного человека весом 50 кг) в разовой (однократной) или разделенных (небольших) дозах, независимо от способа приема. В зависимости от требуемого соединения и конкретной природы отдельного заболевания, дозы вне этого предела могут быть прописаны лечащим врачом. Оральный путь приема предпочитается в большинстве случаев. Однако, если пациент неспособен проглатывать, или оральное поглощение в других случаях вредит, то предпочтительным способом приема будет парентеральный (внутримышечно, внутривенно) или наружный способ назначения.

Соединения изобретения в большинстве случаев назначаются в форме фармацевтических композиций, включающих по меньшей мере одно из соединений формулы (I), (II) или (III), вместе с фармацевтически приемлемым наполнителем или разбавителем. Такие композиции в большинстве случаев составляются обычным путем, используя твердые или жидкие наполнители или разбавители, которые соответствуют способу конкретного назначения: для орального приема в форме таблеток, жестких или мягких желатиновых капсул, суспензий, гранул, порошков и т.п. для парентерального назначения в форме инъецируемых растворов или суспензий и т.п. и для наружного назначения в форме растворов, лосьонов, мазей, целебных мазей и тому подобных.

Пример 1.

5-[2-(4-Бензил-4-оксипиперидино)-пропионил]-2(1Н,3Н)-индолон

5-(2-Хлорпропионил)-2-(1Н, 3Н)-индолон (2,5 г, 11,2 ммоль), 4-окси-4-бензилпиперидин (2,1 г, 11,2 ммоль) и триэтиламин (1,56 мл, 11,2 ммоль) смешивают в этаноле и кипятят с обратным холодильником в течение ночи. Смесь охлаждают до комнатной температуры и концентрируют при пониженном давлении. Остаток разделяют на части между этилацетатом и водой и фазы разделяют. Водный слой экстрагируют этилацетатом и объединенную органическую фазу промывают солевым раствором, высушивают над сульфатом кальция и концентрируют. Неочищенный продукт реакции подвергают флеш-хроматографии на силикагеле, элюируя сначала непрореагировавший 5-(2-хлорпропионил)-2-(1Н,3Н)-индолон с помощью 1: 1 смеси этилацетата: гексана. Дальнейшее элюирование с помощью этилацетата дает 3,6 г продукта реакции в виде светло-коричневого пенистого вещества. Перекристаллизация из этилацетата/гексана дает 1,23 г очищенного названного выше продукта реакции. Менее чистые фракции из колонки и маточники из перекристаллизации повторно хроматографируют вышеуказанным образом с помощью 1: 1 смеси, а затем 3:1 смеси этилацетата:гексана. Фракции продукта реакции растирают в порошок с помощью эфира/гексана, чтобы получить 0,2 г дополнительного продукта реакции для общего выхода 1,43 г, 34 т.пл. 188 192^oС.

ЯМР 8,22 (синглет, 1Н), 8,08 (дублет, J 8 Гц, 2Н), 7,99 (синглет, 1Н), 7,31 7,13 (мультиплет, 5Н), 6,89 (дублет, J 8 Гц, 1Н), 4,03 (квартет, J 6,8 Гц, 1Н), 3,57 (синглет, 2Н), 2,72 (синглет, 2Н), 2,72 2,58 (мультиплет, 3Н), 2,46 (искаженный триплет, 1Н), 1,75 1,40 (мультиплет, 4Н), 1,26 (дублет, J 6,8 Гц, 3Н), 1,23 1,19 (мультиплет, 1Н).

Вычислено для С₂₃H₂₆N₂O₃, C 72,99; Н 6,92; N 7,40.

Найдено, С 72,68; Н 6,77; N 7,28.

Пример 2.

5-[2S^*-(4-Бензил-4-оксипиперидино)-1S^*-оксипропил] -2(1Н,3Н)-индолон

Продукт реакции из примера 1 (0,75 г, 1,98 ммоль) растворяют в 50 мл горячего этанола и оставляют охлаждаться. Раствор добавляют в течение 1 2 мин к шламу борогидрата натрия (0,113 г, 2,98 ммоль) в этаноле (50 мл) вместе с 25 мл этанола для промывки. Смесь перемешивают в течение ночи. Добавляют воду (2 мл) и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток разделяют на части между слоями этилацетата и воды. Отметим, что незначительное количество детионита добавляют ко всем водным промывкам, чтобы предотвратить окисление воздухом продуктов реакции. Органический слой отделяют, промывают солевым раствором, высушивают над сульфатом кальция и концентрируют до получения белого твердого вещества. Это вещество перекристаллизовывают из этанола, чтобы получить 0,24 г продукта реакции. Маточники подвергают флеш-хроматографии на силикагеле с помощью элюирования этилацетатом, чтобы получить 0,19 г дополнительного количества продукта реакции с общим выходом 0,43 г, 57 т.пл. 228 229^oС.

ЯМР 7,66 (уширенный синглет, 1Н), 7,31 7,10 (мультиплет, 7Н), 6,77 (дублет, J 8 Гц, 1Н), 4,17 (дублет, J 10 Гц, 1Н), 3,49 (синглет, 2Н), 2,84 (дублет и триплет, J 2,5 и 11 Гц, 1Н), 2,76 (синглет, 2Н), 2,65 2,40 (мультиплет, 4Н), 1,86 1,50 (мультиплет, 5Н), 1,15 (синглет, 1Н), 0,76 (дублет, J 6,5 Гц, 3Н).

Анализ, вычислено для С₂₃H₂₈N₂O₃, С 72,61; Н 7,42; N 7,36.

Найдено, С 73,04; Н 7,50; N 7,35.

Пример 3.

5-[2S^*-(4-Окси-4-фенилпиперидино)-1S^*-оксипропил] -2(1Н,3Н)-индолон

По методикам примеров 1 и 2 4-окси-4-фенилпиперидин превращают до представленного в названии продукта реакции с 38-ным общим выходом. Продукт реакции очищают флеш-хроматографией на силикагеле и растирают в порошок с помощью этилацетата; т.пл. 216 218^oС.

ЯМР 7,51 (дублет, J 9 Гц, 3Н имеет NН протон в этом синглете), 7,36 (триплет, J 7,5 Гц, 2Н), 7,24 (дублет и триплет, J 1,2 и 7,5 Гц, 2Н), 7,17 (два дублета, J 1,2 и 7,5 Гц, 1Н), 6,78 (дублет, J 8 Гц, 1Н), 4,22 (дублет, J 10 Гц, 1Н), 3,51 (синглет, 2Н), 3,08 (дублет и триплет, J 2 и 11 Гц, 1Н), 2,7 2,48 (мультиплет, 5Н), 2,24 1,98 (мультиплет, 2Н), 1,83 - 1,70 (уширенный дублет, 2Н), 1,49 (синглет, 1Н), 0,82 (дублет, J 7 Гц, 3Н).

Анализ, вычислено для С₂₂H₂₆N₂O₃, C 72,11; Н 7,15; N 7,64.

Найдено, С 72,23; Н 7,30; N 7,30.

Пример 4.

5-[2S^*-(4-Окси-4-фенилпиперидино)-1S^*-оксипропил] -3-метил-2(1Н,3Н)-индолон

По методу примеров 1 и 2 превращают 5-(2-хлорпропионил)-3-метил-2(1Н, 3Н)-индолон и 4-окси-4-фенилпиперидин до представленного выше в названии продукта реакции с 24-ным входом: т.пл. 219 220^oС (из этилацетата).

Пример 5.

5-[2-(4-Окси-4-фенилпиперидино)-пропионил] -1-(пара-толуол-сульфонил)-индол

5-(2-Бромпропионил)-1-(пара-толуолсульфонил)-индол (1,67 г, 3,37 ммоль, 83 -ной чистоты) растворяют в горячем этаноле (100 мл) и добавляют 4-окси-4-фенилпиперидин (0,6 г, 3,39 ммоль) и триэтиламин (0,94 мл, 6,74 ммоль). Смесь кипятят с обратным холодильником в течение ночи. Реакционную смесь охлаждают и концентрируют непосредственно на силикагеле и подвергают флеш-хроматографии. Элюирование 1:3 смесью этилацетата:гексана удаляет 0,1 г не подвергнутого бромированию кетона. Последовательное элюирование 1:1 смесью этилацетата: гексана дает 1,47 г 87 названного выше продукта реакции в виде стеклообразного оранжевого твердого вещества.

ЯМР 8,34 (синглет, 1Н), 8,09 (дублет, J 9 Гц, 1Н), 8,00 (дублет, J 8,5 Гц, 1Н), 7,77 (дублет, J 8,5 Гц, 2Н), 7,61 (дублет, J 3,5 Гц, 1Н), 7,45 (дублет, J 9 Гц, 2Н), 7,33 7,29 (мультиплет, 2Н), 7,24 7,21 (мультиплет, 4Н), 6,72 (дублет, J 3,5 Гц, 1Н), 4,8 (квартет, J 7 Гц, 1Н), 2,88 2,84 (мультиплет, 2Н), 2,73 2,62 (мультиплет, 2Н), 2,32 (синглет, 3Н), 2,18 2,06 (мультиплет, 1Н), 2,05 1,97 (мультиплет, 1Н), 1,77 1,66 (мультиплет, 1Н), 1,59 1,54 (мультиплет, 1Н), 1,31 (дублет, J 7 Гц, 3Н).

ИК 1679, 1605, 1375, 1289, 1260, 1169, 1126, 994.

FAB HRMS вычислено для С₂₉H₃₁N₂O₄S (MH⁺): 503, 2006.

Наблюдаемое м/е: 503, 2023.

Пример 6.

5-[2-(4-Окси-4-фенилпиперидино)-пропионил]-индол

Продукт реакции из предыдущего примера (1,3 г, 2,75 ммоль) растворяют в метаноле (50 мл) и всю гидроокись калия (0,324 г, 5,79 ммоль) добавляют в один прием. Смесь кипятят с обратным стеканием флегмы в течение 6 ч, затем охлаждают и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток разделяют на части между слоями этилацетата и воды. Фазы отделяют и водный слой экстрагируют этилацетатом. Объединенный органический слой промывают солевым раствором, высушивают над сульфатом кальция и концентрируют. Остаток подвергают флеш-хроматографии на силикагеле с помощью 1:1 смеси этилацетата: гексана путем элюирования, чтобы получить 0,719 г, 75 представленного выше продукта реакции в виде стеклообразного твердого вещества: т.пл. 60 70^oС.

ЯМР 8,52 (синглет, 1Н), 8,49 (уширенный синглет, 1Н), 8,00 (два дублета, J 1,5 и 8,5 Гц, 1Н), 7,49 7,41 (мультиплет, 3Н), 7,35 7,21 (мультиплет, 4Н), 6,67 (синглет, 1Н), 4,30 (квартет, J 6,5 Гц, 1Н), 2,89 2,85 (мультиплет, 3Н), 2,66 (триплет, J 9,5 Гц, 1Н), 2,23 2,07 (мультиплет, 2Н), 1,77 1,65 (мультиплет, 2Н), 1,38 (дублет, J 6,5 Гц, 3Н).

ИК (СНСl₃): 3470, 2924, 1673, 1613, 1412, 1348, 1323, 1276, 1224, 1115.

FAB HRMS вычислено для C₂₂H₂₅N₂O₄ (MH⁺): 349, 1918.

Наблюдаемое м/е: 349, 1930.

Пример 7.

5-[2S_*(4-Окси-4-фенилпиперидино)-1S_*-оксипропил]-индол

Продукт реакции из предыдущего примера восстанавливают по методике примера 2. Представленный вышеназванный продукт реакции получают в виде пушистого белого твердого вещества с 15-ным выходом после хроматографии на силикагеле и перекристаллизации из этанола: т.пл. 220,5 221^oС.

ЯМР 8,15 (уширенный синглет, 1Н), 7,63 (синглет, 1Н), 7,54 (дублет, J 8,5 Гц, 2Н), 7,38 (триплет, J 7,5 Гц, 3Н), 7,30 7,19 (мультиплет, 3Н), 6,53 (синглет, 1Н), 4,39 (дублет, J 10 Гц, 1Н), 3,08 (дублет и триплет, J 2 и 11,5 Гц, 1Н), 2,90 2,62 (мультиплет, 4Н), 2,35 2,10 (мультиплет, 2Н), 1,90 1,80 (мультиплет, 2Н), 0,82 (дублет, J 6,5 Гц, 3Н).

ИК (СНСl₃): 3475, 2922, 1731, 1376, 1250, 1201, 1038.

Анализ, вычислено для C₂₂H₂₆N₂O₂, С 75,40; Н 7,48; N 7,99.

Найдено, С 74,99; Н 7,47; N 7,91.

Пример 8.

5-[2-(4-Бензил-4-оксипиперидино)-ацетил]-2(1Н,3Н)-индолон

Смесь 5-(хлорацетил)-2(1Н,3Н)-индолона (2,05 г, 9,78 ммоль), 4-окси-4-бензилпиперидина (1,87 г, 9,78 ммоль), карбоната калия (2,97 г, 21,49 ммоль) и йодистого калия (0,08 г, 0,48 ммоль) в ацетонитриле (200 мл) кипятят с обратным стеканием флегмы в течение ночи. Реакционную смесь охлаждают и фильтруют через слой целита. Фильтрат концентрируют, чтобы получить оранжевое пенообразное вещество, которое подвергают флеш-хроматографии на силикагеле путем элюирования этилацетатом. Это приводит к 0,79 г маслообразного желтого твердого продукта реакции.

ЯМР 9,41 (уширенный синглет, 1Н), 7,91 (дублет, J 8 Гц, 1Н), 7,86 (синглет, 1Н), 7,28 7,14 (мультиплет, 5Н), 6,90 (дублет, J 8 гц, 1Н), 3,76 (синглет, 2Н), 2,52 (синглет, 2Н), 2,78 2,73 (мультиплет, 4Н), 2,43 (триплет, J 10,5 Гц, 2Н), 1,86 1,76 (мультиплет, 2Н), 1,50 (уширенный дублет, J 12 Гц, 2Н), 1,36 (уширенный синглет, 1Н).

ИК (KBr): 2920; 2815, 1710, 1685, 1615, 1240, 1115.

FAB HRMS вычислено для С₂₂H₂₅N₂O₃ (MH⁺): 365, 1867.

Наблюдаемое м/е: 365, 1883.

Пример 9.

5-[2-(4-Бензил-4-оксипиперидино)-1-оксиэтил]-2(1Н,3Н)-индолон

Восстановление проводят с продуктом реакции из предыдущего примера по методике примера 2. Продукт очищают с помощью флеш-хроматографии и перекристаллизации из этилацетата, чтобы получить представленный в названии продукт реакции в виде рыжевато-коричневого твердого вещества с 18-ным выходом: т.пл. 168,5 169,5^oС.

ЯМР 8,40 (уширенный синглет, 1Н), 7,35 7,17 (мультиплет, 7Н), 6,80 (дублет, J 8 Гц, 1Н), 4,66 (два дублета, J 3,5 и 10 Гц, 1Н), 3,50 (синглет, 2Н), 2,89 (уширенный дублет, J 11 Гц, 1Н), 2,77 (синглет, 2Н), 2,68 2,33 (мультиплет, 6Н), 1,83 1,67 (мультиплет, 2Н), 1,59 1,52 (мультиплет, 2Н), 1,27 (уширенный синглет, 1Н).

ИК (КBr): 3420, 3170, 2945, 1820, 1705, 1625, 1490, 1320, 1115, 830, 707.

FAB HRMS вычислено для С₂₂H₂₇N₂O₃ (MH⁺): 367,2023.

Наблюдаемое м/е: 367, 2061.

Пример 10.

5-[2-(4-Окси-4-фенилпиперидино)-1-оксиэтил]-2(1Н,3Н)-индолон

По методике примеров 8 и 2, 4-окси-4-фенилпиперидин превращают в представленный в названии продукт реакции с 5-ным выходом после флеш-хроматографии и повторной перекристаллизации из смеси хлористого метилена/эфира: т.пл. 192 194^oС.

ИК (КBr): 3410, 3180, 2930, 2825, 1715, 1490, 705.

Анализ, вычислено для С₂₁H₂₄N₂O₃ 0,5 Н₂O, С 69,79; Н 6,96; N 7,75.

Найдено, С 69,77; Н 6,52; N 7,60.

Пример 11.

6-[2-(4-Окси-4-фенилпиперидино)-1-оксиэтил]-2(3Н)-бензоксазолон

По методике примеров 8 и 2, 6-(2-хлорацетил)-2(1Н)-бензоксазолон и 4-окси-4-фенилпиперидино превращают в представленный в названии продукт реакции с 25-ным выходом после перекристаллизации из смеси этанола/эфира: т. пл. 175 177^oС.

ЯМР (метанол-Д₄): 7,51 (два дублета, J 1,5 и 8,5 Гц, 2Н), 7,35 - 7,29 (мультиплет, 3Н), 7,24 7,19 (мультиплет, 2Н), 7,05 (дублет, J 8 Гц, 1Н), 4,94 4,90 (мультиплет, 1Н становится двойным дублетом J 3 и 8,5 Гц при промывке с Д₂), 2,96 2,90 (мультиплет, 2Н), 2,80 2,57 (мультиплет, 4Н), 2,19 (дублет и квартет, J 4,5 и 13 Гц, 2Н), 1,74 (уширенный дублет, J 14,5 Гц, 2Н).

ИК (КBr): 3320, 3115, 2920, 2830, 1785, 1750.

Пример 12.

6-[2S^*-(4-Окси-4-фенилпиперидино)-1S^* -оксипропил] -3,4-дигидро-2(1Н)-хинолон

По методикам примеров 1 и 2, 5-(2-хлорпропионил)-3,4-дигидро-2(1Н)-хинолон и 4-окси-4-фенилпиперидин превращают в представленный в названии продукт реакции, получаемый в виде белого твердого вещества с 28-ным выходом после флеш-хроматографии и перекристаллизации из этилацетата: т.пл. 218 219^oC.

ЯМР 7,92 (синглет, 1Н): 7,52 (триплет, частично скрытый сигналом ЯМР растворителя, J 7 Гц, 1Н), 7,20 (синглет, 1Н), 7,14 (дублет, J 8 Гц, 1Н), 6,70 (дублет, J 8 Гц, 1Н), 5,27 (уширенный синглет, 1Н), 4,22 (дублет, J 10 Гц, 1Н), 3,09 (триплет, J 11 Гц, 1Н), 2,96 (триплет, J 7 Гц, 2Н), 2,73 2,58 (мультиплет, 6Н), 2,32 2,05 (мультиплет, 2Н), 1,86 (уширенный дублет, J 14 Гц, 2Н), 1,57 (синглет, 1Н), 0,84 (дублет, J 6,5 Гц, 3Н).

Анализ, вычимлено для C₂₃H₂₈N₂O₃, С 72,60; Н 7,42; N 7,36.

Найдено, С 72,16; Н 7,34; N 7,29

Пример 13.

5-[2S_*-(3-(4-Хлорфенилтио)-8-азабицикло[3.2.1]-окт -8-ил)-1S_*-оксипропил]-2(1Н,3Н)-индолон

По методикам примеров 1 и 2 превращают 3-(4-хлорфенилтио)-8-азабицикло[3.2.1] -октан в представленный в названии и растертый в порошок с помощью эфира продукт реакции с 7-ным выходом в виде 1:1 смеси с соответствующим 1R^*, 2R^*-изомером: т.пл. 146 - 158^oС.

Пример 14.

6-[2S^*-(3-Фенилтио-8-азабицикло[3.2.2] -окт-8-ил)-1S^* -оксипропил]-3,4-дигидро-2(1Н)-хинолон

По методикам примеров 1 и 2 превращают 6-(2-хлорпропионил)-3,4-дигидро-2(1Н)-хинолон и 3-фенилтио-8-азабицикло[3.2.1]-октан в представленный в названии продукт реакции с 15-ным выходом, т.пл. 144 145^oС (из этилацетата).

Пример 15.

5-Хлор-6-[2R^*-(4-окси-4-фенилпиперидино)1S^* -оксипропил]-2(3Н)-бензоксазолон

По методикам примеров 1 и 2 превращают 5-хлор-6-(2-хлорпропионил)-2(1Н)-бензоксазолон и 4-окси-4-фенилпиперидин в представленный выше в названии продукт реакции с 79%-ным выходом: т.пл. 198 - 199^oС (из этанола).

Пример 16.

5-[2S^*-(3-Окси-3-фенил-8-азабицикло[3.2.1] -окт-8-ил) -1S^*-оксипропил]-2(1Н,3Н)-индолон

По методикам примеров 1 и 2 превращают 3-окси-3-фенил-8-азабицикло[3.2.1]-октан в представленный выше в названии продукт реакции.

Пример 17.

5-[2S^*-(3-Бензил-3-окси-8-азабицикло [3.2.1] -окт-8-ил)-1S^*-оксипропил] -2(1Н,3Н)-индолон

По методикам примеров 1 и 2 превращают 3-бензил-3-окси-8-азабицикло[3.2.1]-октан в представленный выше в названии продукт реакции.

Пример 18.

Оптическое разделение 5-[2S^*-(4-окси-4-фенилпиперидино)-1S^* -оксипропил] -2(1Н,3Н)-индолона

Способ А

Смесь (+)-камфорсульфоновой кислоты (232 мг, 1 ммоль) перемешивают с названным выше продуктом реакции примера 3 (366 мг, 1 ммоль) в 25 мл этанола. Образуется почти прозрачный гомогенный раствор прежде, чем соль начинает выпадать в осадок. После стояния при температуре окружающей среды в течение ночи, соль собирают, промывают этанолом и высушивают под током азота. Полученную таким образом 460 мг розовой соли перекристаллизовывают из этанола четырежды. Полученный продукт реакции весит 260 мг и имеет т.пл. 241 - 242,5^oС и []_Na + 19,0^o (c 0,295, метанол), показывая, что он разделен лишь частично.

Способ Б.

К смеси СН₂Сl₂ (25 мл) и ДМФА (1 мл) добавляют названный выше в заголовке продукт реакции примера 3 (0,366 г, 1 ммоль), дициклогексилкарбодиимид (0,266 г, 1,1 ммоль), 1-окси-бензотриазол (0,148 г, 1,1 ммоль), 4-диметиламинопиридин (0,134 г, 1,1 ммоль) и N-трет-бутилоксикарбонил-L-аланин (0,189 г, 1 ммоль). Смесь перемешивают под атмосферой азота в течение ночи. Гомогенный раствор разбавляют этилацетатом (25 мл) и фильтруют через Целит (ТМ), чтобы удалить дициклогексилмочевину. Фильтрат концентрируют и переносят в этилацетат (150 мл). Вторая фильтрация удаляет еще дополнительное количество побочного продукта-мочевины. Фильтрат промывают водным бикарбонатом, водой 1N водным раствором LiCl и солевым раствором. Органическую фазу высушивают над сульфатом кальция и концентрируют до маслянистого пенообразного вещества. Флеш-хроматография на силикагеле (50 х 100 мм (2 х 4 дюймов), заполненном с помощью 50 этилацетата/гексана) дает при элюировании с помощью 75 этилацетата/гексана сначала 0,1 г почти чистого диастереомера аланинового аддукта. Затем следует 0,2 г смеси диастереометров и, наконец, 0,1 г частично обогащенного образца другого диастереомера. Образец весом 0,2 г повторно хроматографируют таким же путем, чтобы получить еще 0,06 г первого чистого диастереомера. Объединенный продукт реакции весом 0,16 г перекристаллизовывают из этилацетата/гексана, чтобы получить 0,094 г аддукта в виде белого твердого вещества; т.пл. 189 190^oС.

ЯМР (СDCl₃): 7,61 (уширенный синглет, 1Н Д₂O размывает сигнал), 7,48 (два дублета, J 1,5 и 8 Гц, 2Н), 7,37 (триплет, J 7,5 Гц, 2Н), 7,34 7,18 (мультиплет, 3Н), 6,83 (дублет, J 8 Гц, 1Н), 5,76 (дублет, J 10 Гц, 1Н), 5,19 (уширенный дублет, J 7 Гц, 1Н), 4,37 (уширенный триплет, J 7 Гц, 1Н), 3,54 (синглет, 2Н), 3,06 2,90 (мультиплет, 2Н), 2,84 2,52 (мультиплет, 3Н), 2,16 1,88 (мультиплет, 2Н), 1,82 1,69 (мультиплет, 2Н), 1,52 (дублет, J 7 Гц, 3Н), 1,40 (синглет, 9Н), 0,78 (дублет, J 7 Гц, 3Н), []_D + 69,5^o (с 0,295 в метаноле).

Анализ, вычисленный для C₃₀H₃₉N₃O₆, С 67,02; Н 7,31; N 7,82.

Найдено, С 66,92; Н 7,46; N 7,80.

Этот трет-бутилоксикарбонил-аланиновый аддукт (0,047 г, 0,087 ммоль) растворяют в 9 мл 0,32 N раствора метоксида натрия (0,15 г Na растворяют в 20 мл метанола). Смесь перемешивают 2 ч и растворитель удаляют при температуре окружающей среды под вакуумом. Остаток растворяют в этилацетате и экстрагируют водным бикарбонатом и солевым раствором. Органическую фазу высушивают над сульфатом кальция и концентрируют. Неочищенный продукт реакции подвергают флеш-хроматографии на силикагеле (1 х 2 дюймов 25 х 50 мм). После промывки колонки с помощью 50 этилацетата/гексана, полностью разделенный правовращающий продукт реакции элюируют с помощью этилацетата: 0,011 г (34).

[]_D + 45,3^o (c 0,19 в метаноле).

Противоположный энантиомер получают подобным образом из N-трет-бутилоксикарбонил-Д-аланина, но в реакции сочетания используют карбонил-диимидазол. Карбонил-диимидазол (0,42 г, 2 ммоль) добавляют сразу в один прием к перемешиваемому раствору N-трет-бутилоксикарбонил-Д-аланина (0,76 г, 2 ммоль)в хлористом метилене (80 мл). Смесь перемешивают в течение 1 ч, затем в один прием добавляют весь названный под заголовком продукт реакции из примера 3 (0,366 г, 1 ммоль) и реакционную смесь перемешивают в течение ночи. Смесь разбавляют хлористым метиленом и экстрагируют водным бикарбонатом. Органическую фазу высушивают, концентрируют и подвергают флеш-хроматографии на силикагеле (2 х 7 дюймов 50 х 175 мм). Элюирование с помощью 25 этилацетата/гексана, за которым следует 50 этилацетата/гексана, дает 0,13 г целевого диастереомера, перекристаллизованного из этилацетата/гексана, чтобы получить 0,077 г очищенного вещества; т.пл. 187 188^oС. []_D - 64,1^o (с 0,17 в метаноле). Это вещество гидролизуют метанольным раствором метоксида натрия, по вышеуказанному способу, чтобы получить представленный в заголовке продукт реакции с 85 -ным выходом: []_D - 40,5^o (c 0,21 в метаноле). Последующее элюирование при вышеприведенной флеш-хроматографии дает другой диастереомер, загрязненный первым продуктом реакции.

Пример 19.

7-Фтор-5-[2-(4-окси-4-фенилпиперидино)-пропионил]-2-(1Н,3Н)-индолон

Смесь 7-фтор-5-(2-хлорпропионил)-2(1Н,3Н)-индолона (1,0 г, 4,14 ммоль), 4-окси-4-фенилпиперидина (0,74 г, 4,17 ммоль) и триэтиламина (1,2 мл, 8,6 ммоль) в безводном диметилформамиде нагревают до 70 90^oС в течение 3 ч. Смесь сливают в 1 N водный LiCl и экстрагируют двумя порциями этилацетата. Объединенную органическую фазу промывают с 1N НСl, водой и солевым раствором. Органическую фазу высушивают над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют до 1,6 г красноватого твердого вещества. Неочищенный продукт реакции очищают флеш-хроматографией на силикагеле (50 х 100 мм (2 х 4 дюймов), 50-ным этилацетат/гексановым элюатом), чтобы получить 0,58 г целевого продукта реакции. Этот продукт реакции дополнительно очищают перекристаллизацией из смеси ацетонитрил/эфира, чтобы получить 0,2 г светло-желтого вещества: т.пл. 197 199,5^o. ЯМР (ДМСО d₆): 11,25 (синглет, 1Н), 7,90 (дублет, J 11,6 Гц, 1Н), 7,82 (синглет, 1Н), 7,42 (дублет, J 7,2 Гц, 2Н), 7,28 (триплет, J 7,4 Гц, 2Н), 7,17 (триплет, J 7,2 Гц, 1Н), 4,76 (синглет, 1Н), 4,25 (квартет, J 6,6 Гц, 1Н), 3,66 (синглет, 2Н), 2,88 2,63 (мультиплет, 2Н), 2,60 2,55 (мультиплет, 1Н), 2,49 2,38 (мультиплет, 1Н), 1,88 (дублет и триплет, J 12,2 и 4,3 Гц, 1Н), 1,77 1,49 (мультиплет, 3Н), 1,16 (дублет, J 6,6 Гц, 3Н),

Маточники повторно хроматографируют, чтобы получить еще 0,15 г продукта реакции с общим выходом 0,35 г (22).

Анализ, вычисленный для C₂₂H₂₃FN₂O₃, С 69,09; Н 6,06; N 7,32.

Найдено, С 68,36; Н 5,85; N 7,31.

Пример 20.

7-Фтор-5-[2S^*-(4-окси-4-фенилпиперидино)-1S^* -(4-окси-4-фенилпиперидино)-1S^*-оксипропил]-2(1Н,3Н)-индолон

Борогидрид натрия (0,033 г, 0,872 ммоль растворяют в абсолютном этаноле (3 мл) и весь кетонный продукт реакции из вышеуказанной реакции (3,0 г, 0,78 ммоль) добавляют в один прием в виде твердого вещества. Реакционную смесь дополнительно разбавляют с 10 мл этанола. Смесь перемешивают в токе азота в течение 2 ч. Избыток гидрида гасят водой и смесь концентрируют. Остаток разделяют на части между слоями этилацетата и воды. Фазы разделяют и органический слой промывают солевым раствором, высушивают над сульфатом магния и концентрируют до стеклообразного твердого вещества. Это вещество подвергают флеш-хроматографии на силикагеле (1 х 4 дюймов 25 х 100 мм). Элюирование с помощью 50 этилацетата/гексана, а затем 100-ного этилацетата дает 0,2 г белого твердого вещества. Дополнительная очистка путем перекристаллизации из ацетонитрил/этилацетата дает 0,1 г (33) продукта реакции в виде белого порошка: т.пл. 225 227^oС.

ЯМР (ДМСО d₆: 10,83 (уширенный синглет, 1Н), 7,54 (дублет, J 7,3 Гц, 2Н), 7,33 (триплет, J 7,6 Гц, 2Н), 7,21 (триплет, J 7,3 Гц, 1Н), 7,07 (триплет, J 5,3 Гц, 2Н), 5,09 (уширенный синглет, 1Н), 4,82 (синглет, 1Н), 4,26 (дублет, J 9,3 гц, 1Н), 3,56 (синглет, 2Н), 2,97 (триплет, J 10,6 Гц, 1Н), 2,62 2,56 (мультиплет, 4Н), 2,12 1,92 (мультиплет, 2Н), 1,63 (уширенный дублет, J 12,9 Гц, 2Н), 0,74 (дублет, J 6,6 Гц, 3Н).

Анализ, вычисленный для C₂₂H₂₅FN₂O₃, C 68,73; Н 6,55; N 7,29.

Найдено, С 68,53; Н 6,31; N 7,13.

Примеры 21 30.

По методикам предыдущих примеров получают следующие дополнительные соединения (показываются выход в конечной стадии, температура плавления и растворитель, из которого выделяется соединение).

21. 6-[1S^*-Окси-2S^*-(4-окси-4-(4-метилфенил) -пиперидино)-пропил]-3,4-дигидро-2(1Н)-хинолон: 4 т.пл. выше, чем 250^oC (этанол).

22. 6-Хлор-5-[1S^*-окси-2S^*-(4-окси-4 -фенилпиперидино)-пропил] -2(1Н, 3Н)-индолон: 1,7 т.пл. 200 203^oС (эфир).

23. 5-[1S^*-Окси-2S^*-(3-фенилтио-8 -азабицикло[3.2.1]-окт-8-ил)-пропил] -2(1Н,3Н)-индолон: 12 т.пл. 159 - 160^oС (этилацетат/ацетонитрил).

24. 5-[1R^*-Окси-2S^*-(3-фенилтио-8 -азабицикло[3.2.1]-окт-8-ил)-пропил] -2(1Н,3Н)-индолон: 7 т.пл. 211 - 212^oС (этилацетат/ацетонитрил).

25. 7-Фтор-5-[1S^*-окси-2S^*-(4-окси-4 -фенилпиперидино)-пропил] -2(1Н, 3Н)-индолон: 33 т.пл. 225 227^oС (этилацетат/ацетонитрил).

26. 4-Хлор-5-[1S^*-окси-2S^*-(4-окси-4 -фенилпиперидино)-пропил] -2(1Н, 3Н)-индолон: 31 т.пл. 231 233^oС (этанол/эфир).

27. 4-Хлор-5-[1R^*-окси-2S^*-(4-окси-4 -фенилпиперидино)-пропил] -2(1Н, 3Н)-индолон: 14 т.пл. 213,5 218^oС (этанол/эфир).

28. 5-[1S^*-Окси-2S^*-(4-окси-4-фенилпиперидино) -пропил] -7-метил-2(1Н, 3Н)-индолон: 14 т.пл. 227,5 230^oС (этанол/диметилсульфоксид).

29. 5-[1S^*-окси-2S^*-(4-окси-4-фенилпиперидино) -пропил] -4-метил-2(1Н, 3Н)-индолон: 22 т.пл. 241 242^oС (этанол/диметилсульфоксид).

Препарат 1.

5-Циано-1(пара-толуолсульфонил)-индол

Гидрид натрия (8,4 г, 210 ммоль) промывают дважды гексаном, а затем суспендируют в тетрагидрофуране (500 мл). 5-Циано-индол (20 г, 140 ммоль) в тетрагидрофуране (200 мл) добавляют по каплям. Полученную смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение 1 ч, а затем добавляют пара-толуолсульфонил хлористый (26,7 г, 140 ммоль) в тетрагидрофуране (200 мл). Реакционную смесь перемешивают еще 3 ч, за которым следует добавление воды. Фазы отделяют и водную фазу экстрагируют дважды этилацетатом. Объединенную органическую фазу промывают солевым раствором, высушивают над сульфатом кальция и концентрируют. Остаток перекристаллизовывают из эфира, чтобы получить 29,97 г, 72 названного в заголовке продукта реакции: т.пл. 129 131^oС.

ЯМР 9,04 (дублет, J 8,5 Гц, 1Н), 7,85 (дублет, J 1 Гц, 1Н), 7,75 (дублет, J 9 Гц, 2Н), 7,67 (дублет, J 3,5 Гц, 1Н), 7,53 (мультиплет, 1Н), 7,23 (мультиплет, 2Н), 6,68 (дублет, J 3,5 Гц, 1Н), 2,34 (синглет, 3Н).

ИК (СНСl₃ раствор): 2225, 1597, 1453, 1380, 1289, 1266, 1169, 1138, 1123, 1089 (плечо), 990.

FAB HRMS вычислено для C₁₆H₁₃N₂O₂S (MH⁺): 297,0669.

Наблюдаемое м/е: 297,0685.

Препарат 2.

5-Пропионил-1-(пара-толуолсульфонил)-индол

Продукт реакции из предыдущего препарата (11,4 г, 40 ммоль) растворяют в сухом толуоле (760 мл) и охлаждают до 0^oС. По каплям добавляют этилмагний бромистый (14 мл, 42 ммоль, 3М) в 40 мл сухого толуола. Смесь подогревают до 58^oС в течение 24 ч, охлаждают и гасят водой (60 мл) и 1N НСl (60 мл) при перемешивании в течение 0,5 ч. Фазы отделяют и водный слой экстрагируют трижды этилацетатом. Объединенную органическую фазу промывают солевым раствором, высушивают над сульфатом кальция и концентрируют. Остаток перекристаллизовывают из этилацетата, чтобы получить 6,8 г, 64 представленного в заголовке продукта реакции в виде желтого твердого вещества: т.пл. 162 164^oС.

ЯМР 8,16 (дублет, J 1,5 Гц, 1Н), 8,01 (дублет, J 8,5 Гц, 1Н), 7,94 (два дублета, J 1,5 и 8,5 Гц, 1Н), 7,75 (дублет, J 8,5 Гц, 2Н), 7,62 (дублет, J 3,5 Гц, 1Н), 7,23 (дублет, J 8,5 Гц, 2Н), 6,72 (дублет, J 3,5 Гц, 1Н), 3,02 (квартет, J 7 Гц, 2Н), 2,33 (синглет, 3Н), 1,21 (триплет, J 7 Гц, 3Н).

Препарат 3.

5-(2-Бромпропионил)-1-(пара-толуолсульфонил)-индол

Продукт реакции из предыдущего препарата (2,0 г, 6,12 ммоль) растворяют в хлороформе (60 мл) и добавляют по каплям к суспензии бромистый меди (2) (2,1 г, 9,4 ммоль) в этилацетате (60 мл). Полученную смесь кипятят с обратным холодильником в течение ночи. Реакционную смесь охлаждают и фильтруют через слой целита и концентрируют. Остаток перекристаллизовывают из этилацетат/гексана, чтобы получить 1,70 г, 69 представленного в заглавии продукта реакции в виде коричневого твердого вещества. ЯМР анализ этого вещества показывает, что оно является 83/17 смесью продукта реакции и исходного вещества, которую используют в реакции сочетания без дополнительной очистки.

ЯМР сигналы продукта реакции: 8,22 (дублет, J 1,5 Гц, 1Н), 8,04 7,91 (мультиплет, 2Н), 7,77 7,73 (мультиплет, 2Н), 7,62 (дублет, J 4 Гц, 1Н), 7,24 7,19 (мультиплет, 2Н), 6,73 (дублет, J 4 Гц, 1Н), 5,31 (квартет, J 6,5 Гц, 1Н), 2,32 (синглет, 3Н), 1,87 (дублет, J 6,5 Гц, 3Н).

Препарат 4.

0-Метансульфонилтропин

Тропин (14,2 г, 100 ммоль) растворяют в СН₂Cl₂ (210 мл) и триэтиламин (23 мл, 160 ммоль) добавляют к раствору. Метансульфонил хлористый (9,3 мл, 120 ммоль) добавляют быстро по каплям, что вызывает спокойное кипячение с обратным стеканием флегмы раствора с хлористом метилене. Смесь перемешивают еще один час: затем экстрагируют с холодной 0,5 молярной гидроокисью натрия, водой и солевым раствором, высушивают путем фильтрации через фазу, разделяющую бумагу и концентрируют, чтобы получить 13,8 г (65) названного в заголовке продукта реакции в виде желтого твердого вещества.

ЯМР 4,88 (триплет, J 5 Гц, 1Н), 3,10 3,05 (мультиплет, 2Н), 2,94 (синглет, 3Н), 2,22 (синглет, 3Н), 2,20 2,10 (мультиплет, 2Н), 2,02 1,88 (мультиплет, 6Н).

Препарат 5.

3-Фенилтио-8-метил-8-азабицикло[3.2.1]-октан

NaH (60 в масле: 2,77 г, 60 ммоль) промывают гексаном (трижды), а затем суспендируют в тетрагидрофуране (300 мл). Тиофенол (6,5 мл, 63 ммоль) в тетрагидрофуране (25 мл) добавляют по каплям в течение 5 мин. Молокообразную белую суспензию, которая образуется с выделением водорода, перемешивают в течение 10 мин, а затем добавляют в один прием 0-метансульфонилтропин (13,8 г, 63 ммоль в 25 мл тетрагидрофурана). Смесь кипятят с обратным стеканием флегмы в течение ночи, охлаждают и фильтруют через диатомовую землю с промыванием с помощью эфира. Фильтрат разбавляют этилацетатом и промывают холодной 1М NaOH, водой и солевым раствором, высушивают (СаSO₄) и концентрируют, чтобы получить 11,48 г (78) названного в заглавии продукта реакции в виде желтого твердого вещества.

ЯМР 7,50 7,18 (мультиплет, 5Н), 3,32 3,21 (мультиплет, 1Н), 3,15 - 3,09 (мультиплет, 2Н), 2,25 (синглет, 3Н), 2,02 1,94 (мультиплет, 2Н), 1,79 1,72 (мультиплет, 4Н), 1,60 1,51 (мультиплет, 2Н).

¹³C-ЯМР: 134,8, 132,3, 128,8, 126,9, 61,16, 39,21, 38,38, 37,72, 26,42.

По тому же способу превращают 4-хлортиофенол в 3-(4-хлорфенилтио)-8-метил-8-азабицикло[3.2.1]-октан.

Препарат 6.

3-Фенилтио-8-(2,2,2-трихлорэтоксикарбонил)-8-азабицикло[3.2.1]-октан

Названный в заголовке продукт реакции из предыдущего препарата (11,48 г, 49,3 ммоль) и К₂CO₃ (0,75 г, 5,4 ммоль) смешивают с бензолом (200 мл) и быстро добавляют 2,2,2-трихлорэтиловый эфир хлормуравьиной кислоты (7,5 мл, 54,4 ммоль). Реакционную смесь кипятят с обратным стеканием флегмы в течение 2 ч, охлаждают, фильтруют и концентрируют. Оранжевый маслянистый остаток растворяют в СН₂Cl₂, промывают насыщенным раствором NaHCO₃ и затем солевым раствором, высушивают (СaSO₄) и концентрируют. Остаток очищают с помощью флеш-хроматографии на силикагеле (гексан, а затем 5 этилацетат/гексан используют в качестве элюата), чтобы получить сначала непрореагировавший тиофенол из предыдущей реакции, а затем названный в заголовке продукт реакции в виде желтого масла (13 г, 67).

ЯМР 7,42 7,23 (мультиплет, 5Н), 4,72 (АВ квартет, J 12 Гц, 2Н), 4,35 4,30 (мультиплет, 4Н), 2,73 (гептет, J 6 Гц, 1Н), 2,05 1,68 (мультиплет, 6Н).

Масло затвердевает путем растирания в порошок с помощью гексана; т.пл. 83 84,5^oС.

Анализ:

Вычислено, С 48,47; Н 4,58; N 3,49.

Вычислено, С 48,68; Н 4,69; N 3,55.

По тому же способу превращают 4-хлор-аналог предыдущего препарата в 3-(4-хлорфенилтио)-8-(2,2,2-трихлорэтоксикарбонил)-8-азабицикло[3.2.1]-октан.

Препарат 7.

Названный в заглавии продукт реакции из предыдущего препарата (13,0 г, 33 ммоль) растворяют в уксусной кислоте (400 мл) и добавляют цинковый порошок (11 г, 168 ммоль). Смесь нагревают до 100^oС в течение ночи, затем концентрируют и остаток разделяют на части между слоями СН₂Cl₂ и насыщенного раствора NaHCO₃. Полученную эмульсию осветляют фильтрацией через диатомовую землю. Фазы разделяют и органический слой высушивают при помощи фазуразделяющей фильтровальной бумаги и концентрируют, чтобы получить 6,1 г (84) названного в заголовке продукта реакции в виде желтого масла, которое затвердевает при стоянии: ЯМР 7,38 7,36 (мультиплет, 2Н), 7,29 - 7,20 (мультиплет, 3Н), 3,52 (синглет; 2Н), 3,36 (гептет, J 6 Гц, 1Н), 1,94 - 1,54 (мультиплет, 8Н), ₁₃С-ЯМР 134,0, 132,43, 128,83, 127,06, 54,93, 40,81, 39,01, 28,98.

По тому же способу превращают 4-хлор-аналог предыдущего препарата в 3-(4-хлорфенилтио)-8-азабицикло[3.2.1]-октан.

Препарат 8.

8-(2,2,2-Трихлорэтоксикарбонил)-3-эндо-окси-3-экзо -фенил-8-азабицикло[3.2.1]-октан

8-(2,2,2-Трихлорэтоксикарбонил)-3-эндо-окси-3-экзо -фенил-8-азабицикло[3.2.1] -октан-3-он (5,0 г, 16,6 ммоль) растворяют в эфире (450 мл) и по каплям в течение 5 мин при перемешивании добавляют фенилмагний бромистый (7,2 мл, 21,6 ммоль, 3М в эфире). Образуется белый осадок и смесь перемешивают в течение 30 мин. Добавляют насыщенный раствор хлористого аммония и смесь концентрируют. Остаток растворяют в хлористом метилене и экстрагируют солевым раствором. Органическую фазу дополнительно высушивают при помощи фазу-разделяющей фильтровальной бумаги и концентрируют, чтобы получить названный в заголовке продукт реакции в виде густого желтого масла (5,94 г, 94). Это вещество используют в следующей реакции без дополнительной очистки.

Гомологическое 3-экзо-бензильное производное получают подобным путем, заменяя фенилмагний бромистый на бензилмагний бромистый.

Препарат 9.

3-эндо-Окси-3-экзо-фенил-8-азабицикло[3.2.1]-октан

Весь названный в заголовке продукт реакции из предыдущего препарата растворяют в тетрагидрофуране (100 мл) и добавляют к смеси цинкового порошка (45 г, 688 ммоль) и 1М водного монокалийфосфата (КН₂PO₄) (45 мл). Смесь перемешивают в течение 3 дн. Затем добавляют воду (100 мл) и рН доводят примерно до 10 добавлением твердого карбоната натрия. Смесь фильтруют через Целит (ТМ) и концентрируют, чтобы получить 1,85 г (58) представленного в заголовке продукта реакции в виде белого твердого вещества. Интегрирование ЯМР спектра для мостиковых протонов этого продукта реакции показывает, что он состоит из 92: 8 смеси целевого продукта реакции ( 3,6) и его 3-эндофенильного изомера (d 3,85). Эту смесь используют как таковую для реакций сочетания, так как разделение продуктов реакций сочетания является легким.

¹³С-ЯМР (300 МГц, СDCl₃) дельта: 150,42, 128,15, 126,57, 124,52, 73,33, 54,45, 46,62, 29,29.

Второстепенный изомер показывает алифатические ¹³C сигналы при d 54,92, 50,99, 30,33, 30,16.

Гомологическое 3-экзо-бензильное производное получают подобным путем.

Испытания на нейродегенерацию клеточной культуры

Клеточная культура. Гиппокампальные клетки 17 дневного плода крысы (СД, Чалз Ривер) культивировались на культуральных пластинах примария (фирма Фалькон, г. Линкольн, шт. Нью-Джерси, США) в течение 2 3 нед в сыворотке, содержащей культуральную среду (существенно минимальная среда с несущественными аминокислотами, содержащая 2 ммоль глутамина, 21 ммоль глюкозы, пенициллин/стрептомицин (по 5000 единиц каждого), 10 плодной бычьей (1 7 сутки) и лошадиной сывороток (1 21 сутки). Клетки были посеяны на пластинах с 96 лунками микротитров с плотностью 80 тыс. клеток в 1 лунке, либо на пластинах с 24 лунками культур с плотностью 250 тыс. в 1 лунке. Культуры выращивали при 37^oС в увлажненном инкубаторе тканевых культур, содержащем 5 СО₂ и 95 воздуха. Размножение не-нейрональных клеток контролировали добавлением 20 мкмоль уридина и 20 мкмоль 5-фтор-2-деоксиуридина (фирма Сигма Кемикл Ко. Сент-Луис, шт. Миссури) на 6 - 8 сутки культивирования. Культуральную среду заменяли через каждые 2 3 суток на свежую.

Глутаматная токсичность. Культуры оценивали на глутаматную токсичность через 2 3 нед от начала культивирования. Удаляли культуральную среду и культуры дважды промывали контролируемым солевым раствором; хлорид натрия (120 ммоль), хлорид калия (5,4 ммоль), хлорид магния (0,8 ммоль/л), хлорид кальция (1,8 ммоль), глюкоза (15 ммоль); и буфером НEPES (25 ммоль/л, рН 7,4). Затем культуры подвергали воздействию различных концентраций глутамата при 37^oС, 15 мин. После этого инкубирования культуры промывали 3 раза контролируемым солевым раствором без глутамата и 2 раза свежей культуральной средой без сыворотки. Затем культуры выдерживали в течение 20 24 ч в культуральной среде без сыворотки. Медикаменты добавляли за 2 мин до и в течение 15 мин воздействия глутамата. В некоторых экспериментах медикаменты добавляли в различные времена после воздействия глутамата и в течение следующих 20 24 ч.

Выживаемость клеток определялась стандартным образом через 20 24 ч после воздействия экситотоцина, путем измерения активности цитозолического фермента лактат-дегидрогеназы (ЛДГ). Активность ЛДГ определяли для культуральной среды каждой из 96 лунок микротитрованных пластинок. Образец (50 мкл) среды добавляли к равному объему натрий-фосфатного буфера (0,1 ммоль/л, рН 7,4), содержащего 1,32 ммоль/л пирувата натрия и 2,9 ммоль/л АДН. Для каждой из 96 лунок было измерено УФ-поглощение всей реакционной смеси при 340 нм каждые 5 с, в течение 2 мин с помощью автоматизированного спектрофотометрического анализатора микрититрованных пластин (фирма Молекулярные устройства, г. Менло Парк, шт. Калифорния). Степень поглощения рассчитывалась автоматически с использованием программы Ай-Би-Эм СОФТмакс (версия 1,01, фирма Молекулярные устройства), и ее использовали в качестве индекса активность ЛДГ.

Морфологическую оценку нейрональной выживаемости определяли с использованием фазовой контрастной микроскопии. Культуральные пластины с 96 лунками не позволяли получить хорошее фазовоконтрастное изображение, поэтому для этой цели были использованы клетки, культивированные на 24-луночных пластинах. Количественно оба культуральных посева были одинаково чувствительны к глутаматной токсичности и проявляли 2-3-кратное увеличение ЛДГ активности 24 часа после воздействия 0,1 1,0 ммоль/л глутамата.

Реагенты. Празозин был синтезирован фирмой Пфайзер, 1,3-ди-орто-толилгуанидин был поставлен фирмой Алдрич (Милуоки, шт. Висконсия), МК-901, АГ-7, 3-РРР (3-(3-гидроксифенил)-N-пропилпиперидин, и гелоидпердиол были поставлены фирмой Рисерч Байокемиклз Инк. (Натик, шт. Массачусетс). Спермин поставляла фирма Сигма (Сент-Луис, Миссури). Лошадиную и плодную бычью сыворотку поставляла фирма Хайклон (Логан, шт. Ута). Культуральная среда, глутамин, и пенициллин/стрептомицин были поставлены фирмой Гибко Ко. (гранд Айленд, шт. Нью-Йорк).

Анализ данных. Нейротоксичность была охарактеризована количественно измерением активности ЛДГ, присутствующей в культуральной среде 20 24 ч после воздействия глутамата. Наши первоначальные эксперименты подтвердили опубликованные сообщения с указанием на то, что увеличение активности ЛДГ в культуральной среде коррелирует с разрушением и вырождением нейронов. Поскольку фактические уровни ЛДГ отличались для других культур, данные были выражены стандартно относительно обработанных буфером сестринских лунок того же самого культурного посева. Для того, чтобы получить индекс активности ЛДГ для культур, обработанных глутаматом и медикаментом, значения ЛДГ для контрольных культур были вычтены из значений ЛДГ для обработанных групп. Данные для медикаментозных обработок были выражены как процент увеличения ЛДГ, индуцированного 1 ммоль/л глутамата (или NМДА) для каждого эксперимента. Концентрация NМДА-антагонистов, которые требуются для возвращения 50 увеличения ЛДГ, индуцированного экситотоксином (IC₅₀), были рассчитаны с использованием логарифмично-вероятностного анализа из обобщенных результатов трех независимых экспериментов. Различные группы обработки были сопоставлены с использованием двухконцевого критерия t.