способ лечения поврежденных тканей

Формула изобретения

Способ лечения поврежденных тканей, включающий нанесение на очаг поражения лекарственного средства, стимулирующего репаративные процессы, полученного путем измельчения конечностей цыплят в возрасте не более 9 недель, обработку сырья при комнатной температуре 1%-ным раствором уксусной кислоты при соотношении 1 1, отделение надосадочной жидкости, промывку водой, повторную обработку 1%-ным раствором уксусной кислоты в течение 30 мин, отделение целевого продукта центрифугированием с последующим фильтрованием и сушкой, отличающийся тем, что после измельчения сырья замораживают при температуре не выше минус 18^oС.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для лечения поврежденных тканей, в частности ран, ожогов, трофических язв и прочих повреждений кожи и слизистых.

Известен способ лечения ран, ожогов, трофических язв, включающий использование белкового гидролиза для заживления травмированных участков, получаемого путем измельчения сырья животного происхождения (в качестве которого используют ноги свежезабитых бройлеров или другие источники белка незрелых свежезабитых животных, не обладающих антигенными свойствами), растворения его белков с помощью слабой органической кислоты, удаления жира и извлечения растворенного белка и минеральных соединений как белкового гидролиза (патент США N 4455302, кл. А 61 К 37/00 / 007; 7/00, 1984).

Для повышения эффективности лечения поврежденных слизистых и кожи наносят лекарственное средство с увеличенным селективным выходом растворенного белка на 30% для чего сырье животного происхождения (свежезабитые цыплята-бройлеры) измельчают до размеров частиц 4 10 мм и полученную массу замораживают при температуре не выше минус 18^oC на срок 10 -90 суток, размораживают, обрабатывают слабой органической кислотой, извлекая при этом растворенные активные пептиды, аминокислоты и минеральные соединения. Затем производятцентрифугирование, удаление жира и фильтрацию раствора. Готовую форму в виде геля или порошка наносят на поврежденную поверхность. При обработке раневых поверхностей используют пропитанные гелем марлевые салфетки; при обработке ожоговых ран наносят 1 2 мм слой порошка и закрывают сухими марлевыми салфетками.

Способ осуществляют следующим образом. Для нанесения на поврежденную поверхность кожи или слизистой используют лекарственное средство, содержащее растворенные активные пептиды, аминокислоты и минеральные соединения, полученное путем замораживания измельченного сырья животного происхождения при температуре не выше минус 18^oC на срок 10 -90 суток. После этого сырье размораживают и погружают на 1%-ный водный раствор ледяной уксусной кислоты в соотношении 1:1 по весу на 8 12 ч при 18 25^oC и периодическом перемешивании. После этого с массы сливают раствор и промывают ее до чистой воды. Полученную массу вновь обрабатывают слабой органической кислотой при 54 60^oC, имеющей рН 4,6 4,8, в соотношении 1 1 по массе в течение 30 - 40 мин, извлекая при этом растворенные активные пептиды, аминокислоты и минеральные соединения. Затем производят центрифугирование, удаление жира и фильтрацию раствора. Полученный субстрат размораживают, обрабатывают слабой органической кислотой, извлекают растворенные активные пептиды, аминокислоты и минеральные соединения, центрифугируют, удаляют жир и фильтруют. Полученный субстрат используют в виде геля, либо подвергают высушиванию в лиофильных либо распылительных сушилках и применяют в виде порошка. При обработке pаневых поверхностей используют пропитанные гелем марлевые салфетки: при обработке ожоговых ран наносят 1 2 мм слой порошка и закрывают сухими марлевыми салфетками.

Применение предварительного замораживания измельченных ног цыплят-бройлеров позволяет увеличить выход растворимого белка на 30% в субстрат без повышения температуры и увеличения продолжительности обработки; в свою очередь увеличение выхода растворимого белка позволяет ускорить заживления раны на 7 сутки по сравнению с незамороженным образцом. Экономически более целесообразны транспортировка и хранение замороженного измельченного сырья с позиций использования специализированных предприятий по выработке медицинской продукции для получения препарата.

Определение эффективности лекарственного препарата, полученного по предлагаемому способу (препарат N 2) и способу-прототипу (препарат N1), проведено в серии экспериментов на животных (крысы). При проведении опытов экспериментаторам были даны два препарата без указания способа их получения.

Так как процессы ранозаживления в основном регламентированы состоянием и развитием грануляционной ткани важнейшего показателя репаративной функции соединительной ткани, предпринято комплексное исследование грануляционной ткани в динамике, сопоставление изменения ее биохимического состава с морфологическими и другими характеристиками ранозаживления.

Проведен сравнительный морфологический анализ влияния препаратов N 1 и N 2 на заживление хирургической раны, определение функциональной активности фагоцитов в ткани (факторов иммунной защиты непосредственно в зоне очага) и изучение изменения функциональной активности факторов гуморального механизма неспецифической защиты организма под действием препаратов.

Работа проведена на крысах-самцах массой 150 170 г с экспериментальными ранами: полнослойная кожная вырезанная рана 2,5 х 2 см под повязкой и полнослойная кожная вырезанная рана в области спины со вшиванием тефлонового кольца диаметром 2,5 см по Слуцкому Л. И.

Определяли содержание в клетках гликозаминогликанов (ГАГ), рибонуклеопротеидов (РНП), активность щелочных фосфатов в фибробластах и лейкоцитах, активность сукцинатдегидрогеназы (СДГ) и фибробластах и макрофазах, содержание нуклеиновых кислот (ДНК и РНК) и коллагена в грануляционно ткани в процессе заживления. Отмечено очищение раны от наложений фибрина, эритроцитов и лейкоцитов на 3 5 сутки лечения, максимально выражено развитие грануляций: количество активных макрофагов с высокой активностью СДГ в цитоплазме, пролиферация кровеносных капилляров и увеличение числа функционирующих их форм, дальнейшая дифференциация клеточных элементов грануляций с увеличением числа зрелых активных фибробластов с высокой активностью ЩФ в цитоплазме и высокими содержанием РНП, СДГ, а впромежуточной ткани накапливаются ГАГ и начинается фибриллогенез в виде тонких нитей коллагена при применении препарата N 2 значительно превышает таковое в группе, леченных препаратом N 1. К 10 суткам эксперимента процесс очищения ран полностью завершен, причем процесс проходил более быстро при препарате и 2, что обуславливает уменьшение количества макрофагов, обеспечивает более эффективное созревание фибропластов и, как следствие, усиление фибриллогенеза. Таким образом, по отношению к уровню коллагена в грануляционной ткани препарат N 2 более активен, чем препарат N 1.

При определении активности факторов иммунной защиты в зоне очага под влиянием препаратов 1 и 2 в качестве объекта исследования использовали гомогенат ткани из области поражения и изучали интенсивность миграции нейтрофилов и уровень хемилюминесцентного ответа. При этом выявлена наибольшая эффективность препарата N 2: уровень функциональной активности фагоцитов был достоверно выше в образцах с препаратом N 1 22,8 + 0,3 мВ/с/г, с сепаратором N 2 10,7 + 0,09 мВ/с/г (Р < 0,05). Миграция нейтрофилов была соответственно 1,9 х 10 кл/г ткани, что говорит о замене клеточного состава ткани при использовании препарата N 2 и соответственно лучшей регенерации раны.

Изучена эффективность лечения препаратами, полученными по способу-прототипу, и при замораживании измельченного сырья при местном лечении ожогов в эксперименте на крысах (Отчет Института хирургии им. А. В. Вишневского РАМН). При этом установлено, что наиболее заметное влияние на очищение, регенерацию, заживление ран оказывает порошкообразный препарат N 2 (из замороженного измельченного сырья), который активизирует образование рубца и значительно снижает себестоимость ран микроорганизмами. При гистологическом контроле заживления ожоговых ран наблюдается резкое снижение выраженности лейкоцитарной инфильтрации, уменьшение глубины или отсутствие наркоза. То есть, препарат обладает выраженными сорбционными и дегидрационными свойствами.

Таким образом, доказаны высокая биологическая активность и лечебный эффект при использовании препарата по заявленному способу при лечении ран, ожогов, трофических язв.