способ производства вакцины для профилактики холеры
Классы МПК: | A61K39/00 Лекарственные препараты, содержащие антигены или антитела |
Автор(ы): | Анисимов П.И., Адамов А.К., Джапаридзе М.Н., Наумов А.В., Никитина Г.П. |
Патентообладатель(и): | Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" |
Приоритеты: |
подача заявки:
1988-10-28 публикация патента:
27.05.1997 |
Использование: медицина, вакцинопрофилактика. Сущность изобретения: способ производственного получения О-антигена Огава, при котором проводят глубинное культивирование вибрионов в реакторе, обезвреживание, сепарирование микробных тел, выделение и очистку О-антигена из культуральной жидкости, диализ, лиофильное высушивание, добавление к компонентам оральной вакцины, таблетирование и покрытие ацидорезистентной оболочкой. О-антиген Огава получают из культуральной жидкости, выдержанной в течение 20-30 дн при 10-12oC с 0,2-0,3% формалина, путем осаждения сульфатом аммония при 0,5 насыщении при pH 7,0
0,3 и фракционирование между 0,3-0,4 насыщения при pH 6,8
0,1 и концентрации белка 1,0
0,2% с последующей лиафилизацией и обогащением полученным антигеном Огава препарата. 1 з.п. ф-лы, 2 ил., 3 табл.
Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6
![способ производства вакцины для профилактики холеры, патент № 2080121](/images/patents/392/2080027/177.gif)
![способ производства вакцины для профилактики холеры, патент № 2080121](/images/patents/392/2080027/177.gif)
![способ производства вакцины для профилактики холеры, патент № 2080121](/images/patents/392/2080027/177.gif)
Формула изобретения
1. Способ производства вакцины для профилактики холеры, включающий культивирование холерного вибриона штамма 569В Инаба, его инактивацию, выделение и очистку, отличающийся тем, что, с целью повышения специфической активности и эффективности защиты от заражения штаммами Огава, в препарат дополнительно вводят О-антиген Огава, выделение и очистку которого проводят из культуральной жидкости типичного по свойствам штамма Vibrio cholerae Ogawa 41 или М41 осаждением сернокислым аммонием при 0,5 насыщения при pН 7,0![способ производства вакцины для профилактики холеры, патент № 2080121](/images/patents/392/2080027/177.gif)
![способ производства вакцины для профилактики холеры, патент № 2080121](/images/patents/392/2080027/177.gif)
![способ производства вакцины для профилактики холеры, патент № 2080121](/images/patents/392/2080027/177.gif)
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что, с целью снижения токсичности О-антигена Огава, культуральную жидкость, содержащую 0,2 0,3% формалина, выдерживают в течение 20 30 дней при 10 12oC.
Описание изобретения к патенту
Изобретение относится к области медицины, точнее к специфической профилактике инфекционных болезней, а именно холеры, методом пероральной вакцинации, и является усовершенствованием известного способа. Описан способ выделения обезвреженного формальдегидом анатоксина и соматического О-антигена из культуральной жидкости штамма 569 B холерного вибриона серовара Инаба путем осаждения сульфатом аммония между 0,2-0,8 насыщения, что обеспечивает возможность включения в вакцинный препарат двух компонентов, ответственных за формирование антитоксического и антибактериального иммунитета к вибрионам серовара Инаба, повышению содержания О-антигена Инаба в рецептуре и увеличению выхода целевого продукта. Вакцину изготавливают в виде таблеток с ацидорезистентным покрытием, что обеспечивает возможность орального применения препарата. Недостатком известного способа является то, что полученная вакцина не может обеспечить защиту людей от заражения вибрионами двух сероваров Инаба и Огава, которые существуют в природе, так как в ней отсутствует О-антиген серовара Огава. Полноценная холерная вакцина по рекомендациям ВОЗ, сделанных на основании результатов неоднократных полевых испытаний (Бангладеш, Филиппины), должна включать антигены обоих сероваров, так как не подтверждена возможность создания перекрестного иммунитета между двумя сероварами. Целью изобретения является повышение специфической активности и эффективности защиты от заражения штаммами Огавы оральной холерной вакцины включением в нее дополнительного компонента О-антигена серовара Огава. Цель достигается тем, что к специфическим компонентам холерной химической вакцины (анатоксину и О-антигену Инаба), полученной из штампа 569B Инаба, добавляют О-антиген серовара Огава, что обеспечивает создание иммунитета также к штаммам серовара Огава. Получение дополнительного компонента вакцины заключается в выделении О-антигена серовара Огава, которое проводят из культуральной жидкости, выдержанной в течение 20-30 дней при 10-12oC в присутствии формалина (0,2-0,3%), что обеспечивает нативность структуры антигена в антисептических условиях и большой его выход из-за секреции антигена штаммами в среду и низкую его токсичность. Очистку О-антигена Огава от балластных белков проводят легкодоступным, щадящим методом: осаждением сернокислым аммонием при 0,5 насыщения с последующим фракционированием между 0,3-0,4 насыщения, что обеспечивает сохранение структуры антигена и выход гомогенного препарата, содержащего 90% О-антигена Огава (табл. 1). Этот простой метод возможно было применить после обнаружения, что О-антиген Огава по молекулярной массе более чем в 10 раз отличается от всех других компонентов культуральной жидкости (фиг.1, где показана гель-фильтрация через сефарозу 4B культуральной жидкости штамма холерного вибриона серовара Огава. По оси ординат: содержание О-антигена, суммарного белка (сплошная кривая), протеиназы (Пр, в ПЕ/мл), нейраминидазы (НА, в НЕ/мл), фосфолипазы (Фф; в ЛЕ/мл); по оси абсцисс номер проб (фракций) и величина молекулярной массы). Способ получения вакцины холерной химической таблетированной заключает в себе, во-первых, способ, описанный в авт. св. N 102735, использованный для изготовления первого компонента вакцины, и во-вторых, дополнительно, способ получения О-антигена холерного вибриона серовара Огава. Этот дополнительный способ заключается в следующем:В качестве продуцента О-антигена Огава используют штаммы холерного вибриона Vibuo cholerae cholerae, Ogawa (например, NN 41, М41). Штампы серовара Огава должны быть типичными для S=форм по морфологическим культуральным, биохимическим и серологическим свойствам; должны обладать холерогенными, иммуногенными свойствами для лабораторных животных. Холерный вибрион выращивают при 37oC в реакторе 250 л бульона из ферментативного перевара казеина (pH 8,0-8,1, 200 мг% аминного азота, Na2HPO4 - 0,05% NaCl 0,5%), или бульоне Хоттингера в условиях глубинного культивирования с подкормкой глюкозой и аммиаком. В стационарной фазе роста (10-12 ч выращивания), когда концентрация микробных тел, достигнув 80-110 млрд.м.т. в 1 мл, оставалась постоянной в течение 3 ч, выращивание прекращают добавлением 0,6% формалина. Бульонную культуру с формалином перемешивают 15 мин и выдерживают 14-18 ч, убитые формалином микробные тела отделяют в центрифуге СГО-100 при 15000 об/мин, а стерильную надосадочную жидкость, содержащую 0,2-0,3% формалина, выдерживают в течение 20-30 дней при 10-12oC и pH 7,0
![способ производства вакцины для профилактики холеры, патент № 2080121](/images/patents/392/2080027/177.gif)
![способ производства вакцины для профилактики холеры, патент № 2080121](/images/patents/392/2080027/177.gif)
![способ производства вакцины для профилактики холеры, патент № 2080121](/images/patents/392/2080027/177.gif)
![способ производства вакцины для профилактики холеры, патент № 2080121](/images/patents/392/2080027/177.gif)
![способ производства вакцины для профилактики холеры, патент № 2080121](/images/patents/392/2080027/177.gif)
![способ производства вакцины для профилактики холеры, патент № 2080121](/images/patents/392/2080051/183.gif)
![способ производства вакцины для профилактики холеры, патент № 2080121](/images/patents/392/2080051/183.gif)
Класс A61K39/00 Лекарственные препараты, содержащие антигены или антитела