антиагрегационные средства
Классы МПК: | A61K31/44 не конденсированные пиридины; их гидрированные производные их |
Автор(ы): | Демина О.В., Варфоломеев С.Д., Вржещ П.В., Татаринцев А.В. |
Патентообладатель(и): | Общество с ограниченной ответственностью "Институт прикладных исследований Московского государственного университета" |
Приоритеты: |
подача заявки:
1993-05-26 публикация патента:
27.08.1997 |
Изобретение относится к медицине и ветеринарии, а именно к средствам ингибирования агрегации тромбоцитов. Для этой цели использовали 5-фенил-3-пиридилизоксазолы. Активность указанных соединений сопоставима с активностью индометацина. 1 ил., 6 табл.
Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3
Формула изобретения
Применение 5-фенил-3-пиридилизоксазолов формулы![антиагрегационные средства, патент № 2088229](/images/patents/384/2088229/2088229-3t.gif)
в качестве антиагрегационных средств.
Описание изобретения к патенту
Изобретение относится к химическим соединениям гетероциклического ряда, а именно к 5-фенил-3-(пирид-2-ил)-, 5-фенил-3-(пирид-3-ил)- и 5-фенил- 3-(пирид-4-ил)изоксазолам общей формулы (I)![антиагрегационные средства, патент № 2088229](/images/patents/384/2088229/2088229-2t.gif)
обладающим антиагрегационной активностью, что может быть использовано в клинических медицинских исследованиях. Ближайшими структурными аналогами предлагаемых соединений являются 5-оксиметил-3-(пирид-2-ил)изоксазол (авт. св. N 1624958) и 5-оксиметил-3-(пирид-3-ил)изоксазол (соединение II) /авт. св. N 1746676/. За аналог предлагаемого соединения по биологической активности был выбран также препарат индометацин, используемый в качестве базового объекта [Машковский М. Д. Лекарственные средства. 1984, М. т.1. с.199] Индометацин обладает выраженной антиагрегационной активностью [Biochimica et Biophysica Acta, 1982, v. 175, N 2, pp.246-249,
5-Фенил-3-пиридилизоксазолы были синтезированы ранее с целью изучения региоселективности реакции дикетонов с гидроксиламином для получения изоксазолов [Heterocycles, 1983, N 3, p.501-504]
Данные соединения были получены по реакции 1,3-циклоприсоединения с использованием хлорангидридов пиридилгидроксамовых кислот с терминальными ацетиленами, структура предлагаемых соединений была установлена методами ЯМР- и масс-спектрометрии. Целью изобретения является поиск биологически активных соединений в ряду производных изоксазола, обладающих ярко выраженной антиагрегационной активностью и низкой токсичностью. Цель достигается 5-фенил-3-(пирид-3-ил)изоксазолом (соединение I), который превосходит 5-оксиметил-3-(пирид-3-ил)изоксазол по антиагрегационной активности в 2 раза, а также соединениями 5-фенил-3-(пирид-2-ил)изоксазолом и 5-фенил-3-(пирид-4-ил)изоксазолом, которые превосходят по активности 5-оксиметил-3-(пирид-2-ил)изоксазол. Для соединения I нижняя граница концентрации соединения, при которой наблюдается 100% -ное ингибирование агрегации тромбоцитов (1C100), составляет 20-50 мкМ, а для соединения II 50-100 мкМ. Для 5-фенил-3-(пирид-2-ил)- и 5-фенил-3-(пирид-4-ил)изоксазолов 1C100 составляет менее 200 мкМ. Высокая антиагрегационная активность соединений неочевидна и не вытекает из их структурных формул и, следовательно, предлагаемое техническое решение отвечает критерию изобретения "существенные отличия". Предлагаемые соединения обладают антиагрегационной активностью в концентрациях 10-6-10-3 М, то есть в фармакологически приемлемом диапазоне, и могут являться основой для создания новых лекарственных препаратов. Таким образом, заявляемое техническое решение соответствует критерию изобретения "положительный эффект". Пример 1. Синтез 5-фенил-3-(пирид-3-ил)изоксазола. К раствору 0,62 г гидрохлорида пиридил-3-гидроксамоилхлорида и 1,63 г фенилацетилена в 40 мл абсолютного этилового спирта прибавляют по каплям при перемешивании раствор 0,65 г триэтиламина в 10 мл абсолютного этилового спирта. Реакционную смесь перемешивают 3 ч при комнатной температуре, затем упаривают растворитель в вакууме. Полученный осадок растворяют в бензоле, твердый остаток отделяют. Фильтрат упаривают и перекристаллизовывают из смеси ацетон-вода. Выход 0,27 г (38,0%), т. пл. 142-143oC. ПМР-спектр (ДМСО-d6,
![антиагрегационные средства, патент № 2088229](/images/patents/384/2088006/948.gif)
Вычислено, С 75,68; H 4,51; N 12,62. Пример 3. Синтез 5-фенил-3-(пирид-4-ил)изоксазола. К раствору 0,62 г гидрохлорида пиридил-4-гидроксамоилхлорида и 1,63 г фенилацетилена в 50 мл абсолютного этилового спирта прибавляют по каплям при перемешивании раствор 0,65 г триэтиламина в 10 мл абсолютного этилового спирта при 0oC. Реакционную смесь доводят до комнатной температуры, перемешивают 5 ч. Полученный осадок растворяют в бензоле, твердый остаток отделяют. Фильтрат упаривают и перекристаллизовывают из бензола, промывают холодной водой. Выход 0,19 г (27%), т.пл. 164-165oC. ПМР-спектр (ДМСО-d6, d, м.д.): 8,8 (dd, 2H, 2-H, 3-H); 8,7 (dd, 2H, 5-H, 6-H); 7,94, 7,5 (м, 5Н, фенил); 7,86(dd, 2H, 5-H, 6-H); 7,8 (dd, 2H, 2-H, 3-H); 7,45(c, IH, 4-H изокс.). C14H10N2O. Найдено, С 74,96; H 4,24; N 13,17;
Вычислено, С 75,68; H 4,52; N 12,61. Пример 4. Проведение биологических испытаний 5-фенил-3-пиридилизоксазолов на наличие антиагрегационной активности. Методика проведения эксперимента. Тромбоцитарную плазму получали центрифугированием свежеполученной донорской крови от здоровых мужчин возраста 20-35 лет (антикоагулянт 0,38 цитрат натрия) в течение 15 мин при 200 g при комнатной температуре. Бестромбоцитарную плазму получали центрифугированием тромбоцитарной плазмы 10 мин при 1000 g. В качестве индуктора агрегации использовали свежеприготовленный раствор арахидоновой кислоты (Sigma) в бестромбоцитарной плазме. Агрегацию тромбоцитов проводили в агрегометре, изготовленном в СП "БиоХимМак", Москва. Условия проведения эксперимента по агрегации тромбоцитов: 37oC, объем тромбоцитарной плазмы 0,5 мл, скорость перемешивания 100 об/мин, концентрация арахидоновой кислоты 500 мкМ, время прединкубации с препаратом ингибитора 2 мин, концентрация диметилсульфоксида во всех экспериментах 0,5 об. Количественной характеристикой степени агрегации служило относительное изменение коэффициента светопропускания тромбоцитарной плазмы через 5 мин после добавления индуктора агрегации. В отсутствии ингибитора агрегации эта величина принималась за 100% Длина волны зондируемого светового потока 660 нм. В опытах, где в качестве индуктора агрегации тромбоцитов использовали АДФ, наблюдалось подавление "второй волны агрегации" под действием тех же доз ингибитора, что и в опытах с арахидоновой кислотой. Были проведены эксперименты сравнения свойств веществ. Данные приведены в табл. 1-6 экспериментов. Соединение I 5-фенил-3-(пирид-3-ил)изоксазол; соединение II 5-оксиметил-3-(пирид-3-ил)изоксазол. Во всех этих экспериментах индометацин ингибирует агрегацию в концентрациях от 5 до 25 мкМ. На основании полученных экспериментальных данных строят график зависимости агрегации тромбоцитов от концентрации ингибитора (соединение I, соединение II) /см. чертеж/. На чертеже показаны преимущества соединения I по сравнению с соединением II: одинаковую степень ингибирования соединение I вызывает в меньшей концентрации, чем соединение II. Разброс по IC100 для экспериментов объясняется тем, что в каждом отдельном эксперименте брался индивидуальный образец плазмы поскольку кровь разных доноров отличается по составу, количеству и свойствам форменных элементов крови, статистический разброс по значениям неизбежен. Результаты проведенных экспериментов свидетельствуют о том, что 5-фенил-3-пиридилизоксазолы обладают антитромбоцитарной активностью, причем механизм их действия отличается от механизма действия индометацина - ингибитора циклооксигеназы, что было подтверждено экспериментами по ингибированию циклооксигеназы. Таким образом, 5-фенил-3-пиридилизоксазолы являются мощным антиагрегационными средствами, что может быть использовано в медицине и ветеринарии.
Класс A61K31/44 не конденсированные пиридины; их гидрированные производные их