способ получения клавулановой кислоты или ее фармацевтически приемлемых солей или эфиров

Формула изобретения

1. Способ получения клавулановой кислоты или ее фармацевтически приемлемых солей или эфиров контактированием неочищенной клавулановой кислоты в органическом растворителе с треталкиламином, выделением соли клавулановой кислоты, образованной с треталкиламином, превращением образованной таким образом соли в клавулановую кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль или эфир, отличающийся тем, что в качестве треталкиламина используют третоктиламин, который контактируют с неочищенной клавулановой кислотой или ее лабильным производным.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве лабильного производного клавулановой кислоты используют соль щелочного металла.

3. Способ по п.2, отличающийся тем, что в качестве соли щелочного металла используют натриевую или литиевую соль.

4. Способ по любому из пп. 1 3, отличающийся тем, что используют по существу осушенный органический растворитель.

5. Способ по п.4, отличающийся тем, что используют органический растворитель, содержащий менее 6 г/л воды.

6. Способ по п.4, отличающийся тем, что используют органический растворитель, содержащий от 0,25 до 0,6 г/л воды.

7. Способ по любому из пп.4 6, отличающийся тем, что органический растворитель осушают обезвоживанием растворителя центрифугированием.

8. Способ по любому из пп.1 7, отличающийся тем, что неочищенную клавулановую кислоту получают ферментацией микроорганизма, образующего клавулановую кислоту.

9. Способ по п.8, отличающийся тем, что по крайней мере некоторые суспендированные в бульоне неочищенной клавулановой кислоты твердые вещества удаляют.

10. Способ по п.9, отличающийся тем, что твердые вещества удаляют фильтрацией.

11. Способ по любому из пп.8 10, отличающийся тем, что водный раствор клавулановой кислоты, полученный ферментацией, предварительно концентрируют перед экстракцией.

12. Способ по п.11, отличающийся тем, что водный раствор клавулановой кислоты предварительно концентрируют до концентрации 10 100 мг/мл.

13. Способ по п.11, отличающийся тем, что водный раствор клавулановой кислоты предварительно концентрируют до концентрации 10 40 мг/мл.

14. Способ по п.11, отличающийся тем, что водный раствор клавулановой кислоты предварительно концентрируют до концентрации 10 25 мг/мл.

15. Способ по любому из пп.1 14, отличающийся тем, что процесс предварительного концентрирования осуществляют абсорбцией клавулановой кислоты на ионообменную смолу с последующим элюированием клавулановой кислоты из смолы водным раствором электролита.

16. Способ по п.15, отличающийся тем, что в качестве электролита используют хлорид натрия.

17. Способ по п.15 или 16, отличающийся тем, что полученный концентрат обессоливают.

18. Способ по любому из пп.8 17, отличающийся тем, что бульон или водный раствор клавулановой кислоты подкисляют перед экстракцией растворителем.

19. Способ по п.18, отличающийся тем, что бульон или водный раствор клавулановой кислоты подкисляют до pH 1 3.

20. Способ по п.18, отличающийся тем, что водный раствор клавулановой кислоты подкисляют до рН 1,5 2,5.

21. Способ по любому из пп.1 20, отличающийся тем, что экстракцию неочищенной клавулановой кислоты или ее лабильного производного органическим растворителем проводят при 5 15^oС.

22. Способ по любому из пп.1 21, отличающийся тем, что в качестве органического растворителя, используемого для экстракции неочищенной клавулановой кислоты или ее лабильного производного, используют растворитель, выбранный из группы, состоящей из углеводородных растворителей, простых эфирных растворителей, галогенированных растворителей и кетонных растворителей.

23. Способ по п.22, отличающийся тем, что растворитель выбирают из группы, состоящей из толуола, гексана, тетрагидрофурана, диоксана, диэтилового эфира, дихлорметана, хлороформа, ацетона, метилизобутилкетона и этилацетата.

24. Способ по любому из пп.1 23, отличающийся тем, что соль клавулановой кислоты и третоктиламина получают обработкой клавулановой кислоты или ее лабильного производного в органическом растворителе одним эквивалентом на моль клавулановой кислоты или небольшим избытком третоктиламина.

25. Способ по п.24, отличающийся тем, что соль клавулановой кислоты и третоктиламина получают при 0 15^oС.

26. Способ по п.24 или 25, отличающийся тем, что третоктиламин вводят, примешивая его к потоку клавулановой кислоты в органическом растворителе.

27. Способ по любому из пп.1 26, отличающийся тем, что выделение соли клавулановой кислоты и третоктиламина проводят экстракцией органического растворителя, содержащего соль третоктиламина, водой для того, чтобы экстрагировать соль, и далее превращают соль третоктиламина в клавулановую кислоту или ее фармацевтически приемлемые соль или эфир.

28. Способ по любому из пп.1 27, отличающийся тем, что соль клавулановой кислоты и третоктиламина перекристаллизовывают.

29. Способ по п.28, отличающийся тем, что соль клавулановой кислоты и третоктиламина перекристаллизовывают, используя водный раствор ацетона.

30. Способ по любому из пп.1 29, отличающийся тем, что соль клавулановой кислоты и третоктиламина превращают в ее фармацевтически приемлемую соль ионным замещением.

31. Способ по п.30, отличающийся тем, что ионное замещение осуществляют пропусканием раствора соли третоктиламина через слой катионно-обменной смолы в натриевой, калиевой или кальциевой форме.

32. Способ по п.30, отличающийся тем, что ионное замещение проводят реакцией протонирования катиона третоктиламина с солью-предшественником.

33. Способ по п.32, отличающийся тем, что в качестве соли-предшественника используют этилгексаноат калия.

34. Способ по любому из пп. 30 33, отличающийся тем, что в качестве растворителя используют органический растворитель, воду или смесь воды и органического растворителя.

35. Способ по любому из пп.30 33, отличающийся тем, что реакцию проводят при температуре ниже температуры окружающей среды.

36. Способ по п.35, отличающийся тем, что реакцию проводят при температуре от 0 до 10^oС.

37. Способ по п. 36, отличающийся тем, что реакцию проводят при 0 - 0,5^oС.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к новому способу получения клавулановой кислоты (1)



и ее фармацевтически приемлемых солей и эфиров.

Клавулановую кислоту обычно получают ферментацией микроорганизма, выделяющего клавулановую кислоту, например, различных микроорганизмов, принадлежащих к различным разновидностям Streptomyces, например, S.clavuligerus NRRL 3585, S. jumoninensis NRRL 5741, S.Katsurahamanus 1FO 13716 и Streptomyces P 6621 FERM P 2804 и т.д. как описано в патенте Японии Kokai 80-162993. Получающийся водный бульон может быть подвергнут стандартным процессам очистки и концентрирования, включая например, фильтрование и хроматографическую очистку, в соответствии с описанным в патенте Великобритании N 1508977 и патенте Японии Kokai 80-62993, перед экстракцией водного раствора органическим растворителем для получения раствора неочищенной клавулановой кислоты в органическом растворителе.

Соли клавулановой кислоты можно получить, абсорбируя клавуланат анион в фильтрованном бульоне на анионообменную смолу, элюируя его со смолы при помощи электролита, обессоливая получающийся раствор, пропуская обессоленный раствор через дополнительную анионообменную смолу, хроматографически элюируя его со смолы при помощи электролита, обессоливая получающийся раствор с последующим удалением растворителя (патент Великобритании N 1508977). Этот способ может быть использован с получением приемлемых выходов чистого вещества, но использование колонок со смолой предполагает значительные затраты, а они могут создать ограничения при осуществлении крупномасштабного производства. Поэтому было бы желательно иметь альтернативную методику, которая включала бы несколько стадий утилизации смолы.

Известен способ получения солей клавулановой кислоты через осаждение клавуланата лития (патент Великобритании N 1543563). В качестве фармацевтических соединений могут применяться различные аминные соли клавулановой кислоты (патент Великобритании N 1578739).

Известно использование трет-бутиламинной соли клавулановой кислоты в качестве полезного промежуточного вещества для получения клавулановой кислоты (европейский патент N 0026044). Соль описана в патенте Бельгии N 862211, но только в качестве приемлемого компонента для фармацевтических препаратов.

Известно использование три-(низший алкил) аминных солей и диметиланилиновых солей клавулановой кислоты в способе очистки клавулановой кислоты, в котором образуется триэтиламинная соль клавулановой кислоты, а затем переводится в силил диэфир клавулановой кислоты (патент Португалии N 94908). Способ очистки клавулановой кислоты, в котором органические амины могут быть использованы для образования промежуточной аминной соли с клавулановой кислотой в неочищенном растворе, описывается в (европейском патенте N 0887178А).

Изобретение предусматривает использование соли клавулановой кислоты с трет.октиламином (то есть 2-амино-2,4,4-триметилпентан) в качестве промежуточного вещества для способа получения клавулановой кислоты или ее фармацевтически приемлемых солей и эфиров.

Аспектом настоящего изобретения является способ получения и/или очистки клавулановой кислоты или ее фармацевтически приемлемых соли или эфира, причем этот способ включает контактирование неочищенной клавулановой кислоты или ее лабильного производного в растворе в органическом растворителе с трет-октиламином или его лабильным производным: выделение соли клавулановой кислоты, образованной с трет-октиламином, и превращение образованной таким образом соли в клавулановую кислоту или в ее фармацевтически приемлемые соль или эфир.

В способе по изобретению соль клавулановой кислоты и трет-октиламина можно использовать для очистки неочищенной клавулановой кислоты во время ее получения. Поэтому соль можно получить в растворе клавулановой кислоты или ее лабильного производного, содержащем примеси, выделяя соль в виде отдельной фазы, например, в виде твердого осадка, из раствора, содержащего остаточные примеси, затем повторно образовывая клавулановую кислоту или образовывая ее фармацевтически приемлемые соль или эфир.

Приемлемые лабильные производные клавулановой кислоты включают соли, например, соли щелочных металлов, такие как клавуланаты лития или натрия или эфиры, например силилэфиры. Приемлемые лабильные производные трет-октиламина включают соли, например, фосфат, борат, хлорид, хлорат, перхлорат, бромид, толуолсульфонат или алканоаты, такие как ацетат или этилгексаноат. Обычно трет-октиламин приводят в контакт с неочищенной клавулановой кислотой в растворе в органическом растворителе.

Вышеописанный способ в соответствии с изобретением осуществляют в органическом растворителе, в качестве растворителя для клавулановой кислоты и трет-октиламина этот растворитель предпочтителен по сухой, например, содержащий менее 6 г/л, например, 0,25-0,6 г/л воды. Приемлемая степень сухости может быть достигнута посредством стандартных способов обезвоживания, например, центрифугированием. Вода, присутствующая в растворителе, может быть растворена или находиться в виде капель отдельной фазы.

Раствор клавулановой кислоты в органическом растворителе может быть получен посредством экстракции подкисленного водного раствора клавулановой кислоты, например, вышеупомянутой ферментационной жидкости. Если начальным источником клавулановой кислоты является бульон, получающийся при ферментации микроорганизма, образующего клавулановую кислоту, такого, например, как вышеупомянутые, тогда для получения экстракта в растворителе с приемлемой концентрацией клавулановой кислоты для использования в настоящем способе желательно не экстрагировать бульон как таковой, а по меньшей мере удалить некоторые суспендированные в бульоне твердые вещества, например, посредством фильтрования, предшествующего экстракции. Кроме того, желательно предварительно концентрировать водный раствор клавулановой кислоты, полученный при ферментации так, чтобы, например, водный раствор клавулановой кислоты был в несколько раз концентрированнее по клавулановой кислоте, чем исходный бульон, например, предварительно концентрировать до концентрации, составляющей приблизительно 10-100 мг/мл, например, 10-40 мг/мл или 10-25 мг/л клавулановой кислоты.

Приемлемые способы предварительного концентрирования включают абсорбцию клавулановой кислоты на анионообменную смолу с последующим элюированием клавулановой кислоты со смолы водным раствором электролита, например хлорида натрия и необязательным обессоливанием. Также предпочтительно до экстракции растворителем подкислить водный раствор, например, бульон или предварительно сконцентрированный водный раствор, например, до рН 1-3, например, рН 1,5-2,5. Также предпочтительно высушить или обезводить органический растворитель до формирования соли с трет-октиламином, например, до менее, чем 6 г/л воды. Предпочтительно экстракцию осуществляют при 5-15^oС.

Приемлемые органические растворители, в которых неочищенная клавулановая кислота может контактировать с трет-октиламином, включают углеводородные растворители, такие как толуол и гексан, эфиры, такие как тетрагидрофуран, диоксан, диэтиловый эфир, галогенированные растворители, например, дихлорметан и хлороформ, кетоны, такие как ацетон и метилизобутилкетон и сложные эфиры, например, этилацетат. Растворители, включающие карбонильную группу, например, растворители формулы:



в которых R⁸ представляет собой алкильную группу С_1-6 или алкоксильную группу С_1-6, а R⁹ представляет собой алкильную группу, являются примерами подкласса приемлемых растворителей, например, органические кетоны или органические алканоатные эфиры. Изобретение также предполагает использование смесей таких растворителей.

Более приемлемым органическим растворителем является растворитель, который можно использовать непосредственно для экстракции подкисленного водного раствора, например, органические алкилалканоатные эфиры, кетоны и некоторые алифатические спирты или их смеси, например, этилацетат, метилацетат, пропилацетат, н-бутилацетат, метилэтилкетон, метилизобутилкетон, тетрагидрофуран, бутанол и смеси этих растворителей. Среди них наиболее приемлемыми являются метилизобутилкетон, метилэтилкетон и этилацетат. Приемлемые смеси растворителей включают метилэтилкетон/метилизобутилкетон и тетрагидрофуран/метилизобутилкетон. Предпочтительным растворителем является этилацетат.

Приемлемые растворители для трет-октиламина включают вышеупомянутые растворители, в которых клавулановая кислота может растворяться или экстрагироваться, например, ацетон, этилацетат, метилизобутилкетон и метилэтилкетон.

Желательно включить в систему растворителя кетоны, например, ацетон, поскольку они ингибируют образование соли клавулановой кислоты и трет-октиламина в виде масла.

Как правило, для получения соли клавулановой кислоты используют один эквивалент трет-октиламина на моль клавулановой кислоты или его небольшой избыток. Растворы клавулановой кислоты и трет-октиламина можно, например, медленно смешивать, затем перемешивать смесь в течение некоторого времени после того, как закончено добавление. Реакцию между клавулановой кислотой или ее лабильным производным и трет-октиламином в соответствии с изобретением осуществляют при температуре ниже температуры окружающей среды, например, 0-15^o (0-10^oС, 0-5^oС). Приемлемая концентрация клавулановой кислоты или ее лабильного производного в растворе составляет по крайней мере 1,0 г/л, например, 1,0-4,0 г/л клавулановой кислоты. Может быть полезным дополнительно концентрировать экстракт в растворителе до концентрации, избыточной по отношению к этой, например, выше 20 г/л.

Например, в другой методике трет-октиламин можно вводить, примешивая его к потоку раствора клавулановой кислоты в растворителе, таким образом, что соль образуется в потоке или в растворе в виде частиц или суспендированных капель растворенной соли в суспензии. Трет-октиламин, вводимый этим способом, можно вводить индивидуально или можно вводить в виде раствора в растворителе, например, том же самом органическом растворителе, в котором растворяют клавулановую кислоту.

Желаемую соль клавулановой кислоты и трет-октиламина можно затем выделить. Таким образом соль клавулановой кислоты и трет-октиламина отделяют от большинства или всех примесей. Выделение можно осуществлять стандартным способом, например, посредством центрифугирования или фильтрования.

В альтернативной методике выделения соль клавулановой кислоты и трет-октиламина можно выделить из органического растворителя, если растворитель полностью или частично не смешивается с водой, посредством контактирования растворителя с водой с тем, чтобы экстрагировать соль, которая может находиться в растворе или в суспензии, из органического растворителя и получить водный раствор соли. Поскольку соли клавулановой кислоты с трет-октиламином прекрасно растворимы в воде, такой водный раствор можно хорошо сконцентрировать, например, до 20-30 мас.

При использовании этого способа очень большая часть органических примесей в растворе клавулановой кислоты в органическом растворителе остается в органическом растворителе, тогда как клавулановую кислоту в виде соли с третоктиламином в относительно чистом состоянии получают в водном растворе. Полученный таким образом водный раствор клавулановой кислоты можно подвергнуть дальнейшей стандартной обработке, например, очистке или превращению в клавулановую кислоту или в фармацевтически приемлемые соль или эфир в соответствии с нижеописанным.

В другой альтернативной или дополнительной методике клавулановую кислоту и трет-октиламин можно смешивать в растворе в первом органическом растворителе, затем соль можно отделить от раствора посредством добавления второго органического растворителя. В соответствии с изобретением первый органический растворитель может представлять собой органический сложный эфир, например этилацетат, а второй растворитель может, например, быть галогенированным растворителем, таким как хлороформ, простым эфиром, например диэтиловым эфиром, углеводородом, например толуолом, спиртом, например этанолом, или растворителем вышеприведенной формулы, например ацетоном или метилизобутилкетоном.

В предпочтительном варианте осуществления изобретения соль клавулановой кислоты и трет-октиламина можно использовать в виде ацетонного сольвата. Ацетонные сольваты в некоторых случаях обладают преимущественной устойчивостью и показателями чистоты, по сравнению с солями клавулановой кислоты с аминами как таковыми. Такие сольваты особенно полезны при использовании в настоящем изобретении, поскольку часто их можно выделить в виде стабильного кристаллического соединения с высокой чистотой.

Изобретение также предусматривает соль клавулановой кислоты с трет-октиламином в виде ацетонного сольвата. Во время выделения и/или сушки некоторое количество ацетона может быть потеряно, поскольку прочность сольватации может не быть высокой, но количество ацетона в продукте не является определяющим.

Ацетонный сольват может быть образован при контактировании клавулановой кислоты с трет-октиламином в присутствии ацетона. Как правило, когда соль осаждается, раствор, содержащий клавулановую кислоту, можно смешать с по крайней мере таким же объемом ацетона, содержащим амин.

Трет-октиламин может быть растворен в ацетоне и смешан с раствором клавулановой кислоты в органическом растворителе. Предпочтительные органические растворители включают этилацетат, тетрагидрофуран, метилэтилкетон, метилизобутилкетон и смеси таких растворителей, среди этих растворителей предпочтителен этилацетат. Или же водный раствор соли клавулановой кислоты и трет-октиламина, получаемый посредством экстракции водой в соответствии с вышеописанным, может быть смешан с ацетоном для образования сольвата. В соответствии с изобретением концентрированный водный раствор соли может быть смешан с избытком ацетона для образования сольвата.

Перекристаллизация соли клавулановой кислоты или ацетонного сольвата может быть полезной для дополнительного уменьшения содержания примесей. Обычный растворитель для перекристаллизации представляет собой водный ацетон. Подобную перекристаллизацию осуществляют стандартным образом, например, соль или сольват растворяют в воде, обрабатывают небольшим количеством ацетона, фильтруют и затем обрабатывают большими объемами ацетона с необязательным перемешиванием и/или охлаждением с тем, чтобы получить перекристаллизованный продукт.

Еще в одном аспекте изобретение предлагает способ получения клавулановой кислоты или ее фармацевтически приемлемых соли или эфира, причем этот способ включает превращение соли клавулановой кислоты и трет-октиламина в клавулановую кислоту или ее фармацевтически приемлемые соль или эфир.

Фармацевтически приемлемые соли и эфиры клавулановой кислоты, полученные посредством способов настоящего изобретения, включают производные, описанные в патентах Великобритании NN 1508977 и 1508978.

Наиболее пригодные фармацевтически приемлемые соли включают фармацевтически приемлемые соли щелочных и щелочно-земельных металлов, например соли натрия, калия, кальция и магния. Среди этих солей предпочтительны соли натрия и калия, наиболее предпочтительны соли калия.

Приемлемые эфиры включают эфиры, расщепляемые с образованием клавулановой кислоты или ее соли посредством химических методов, например, гидрогенолиза или биологических методов.

Соль клавулановой кислоты и трет-октиламина необязательно в виде ацетонного сольвата может быть превращена в клавулановую кислоту или ее фармацевтически приемлемые соль или эфир посредством, например ионного замещения в случае свободной кислоты или солей или посредством этерификации.

Ионное замещение можно осуществлять, используя ионообменные смолы, например, пропуская раствор соли через слой катионообменной смолы в натриевой, калиевой или кальциевой форме. Пригодные катионообменные смолы включают Amberlite 1R 120 и равноценные смолы.

Или же ионное замещение можно осуществлять посредством реакции протонирования катиона трет-октиламина солью-предшественинком, которая может быть, например, карбонатом, бикарбонатом или гидроксидом фармацевтически приемлемого щелочного или щелочноземельного металла или солью органической карбоновой кислоты с фармацевтически приемлемым катионом, таким как щелочной или щелочноземельный металл, например, солью алкановой кислоты формулы (IV):

R¹⁰ СО₂Н (IV)

где R¹⁰ представляет собой алкильную группу, содержащую, например, от 1 до 20 атомов углерода, предпочтительно от 1 до 8 атомов углерода. Примеры приемлемых солей включают ацетаты, пропионаты или этилгексаноаты, причем 2-этилгексаноат калия и 2-этилгексаноат натрия являются предпочтительными. Обычно соль клавулановой кислоты и трет-октиламина в растворе может быть приведена во взаимодействие с солью щелочного металла и кислоты (IV) в растворе или суспензии в приемлемом растворителе, который может, например, представлять собой органический растворитель, воду или смесь воды и органического растворителя, например, изопропанола. В соответствии с изобретением растворы соли клавулановой кислоты и трет-октиламина и сольобразующего соединения можно смешать и позволить кристаллизоваться фармацевтически приемлемой соли.

В соответствии с изобретением реакцию можно осуществлять при температуре ниже температуры окружающей среды, например от О до 15^oС, например, от О до 10^oС, приемлемо от О до 0,5^oС. В соответствии с изобретением, если соль клавулановой кислоты с трет-октиламином образуется в водном растворе, ее можно высадить, смешивая водный раствор с избытком ацетона.

Приемлемые способы этерификации включают:

а) реакцию соли клавулановой кислоты и трет-октиламина с соединением формулы Q R¹¹, где Q представляет собой легко замещаемую группу, а R¹¹ является органической группой;

b) реакцию соли клавулановой кислоты и трет-октиламина со спиртом или тиолом в присутствии средства, промотирующего конденсацию, например, карбодиимида; и

с) реакцию соли клавулановой кислоты и трет-октиламина с диазосоединением.

Предыдущие способы включают стадии, в которых соль клавулановой кислоты и трет-октиламина сначала превращается в клавулановую кислоту или еще одну ее соль, а впоследствии превращается в желаемый эфир. Дополнительные детали способов этерификации описываются в патентах Великобритании NN 1508977 и 1508978. Использование изобретения позволяет легче получать соли и эфиры клавулановой кислоты, чем используя способы патентов Великобритании NN 1508977 и 1543563.

Пример 1. Трет-октиламин смешивали с клавулановой кислотой в растворе в ТГФ и наблюдали быструю кристаллизацию с образованием твердой соли (см. таблицу).

Пример 2. Сырьевой раствор клавулановой кислоты в этилацетате, содержащий приблизительно 28 г/л клавулановой кислоты в неочищенном виде, получали посредством экстракции неочищенного ферментационного бульона S.clavuligerus этилацетатом. К 46 мл сырьевого раствора добавляли трет-октиламин (0,84). Через 10 мин смесь становилась мутной, и выкристаллизовывались мелкие кристаллы соли. К аликвоте раствора добавляли хлороформ, что приводило к образованию игл большего размера. К следующей аликвоте добавляли ацетон, что снова приводило к образованию игольчатых кристаллов, но меньшего размера и медленнее, чем с хлороформом. К оставшейся части раствора добавляли приблизительно 20 мл хлороформа, затем объем толуола, приблизительно равный начальному объему раствора, что приводило к осаждению значительного количества игольчатых кристаллов.

К 500 мл полученного сырьевого раствора добавляли трет-октиламин (6,7 г). Раствор становился слегка туманным. Добавляли ацетон (20 мл), что проясняло раствор. К аликвоте раствора добавляли диэтиловый эфир, что приводило к немедленной кристаллизации. Диэтиловый эфир (5 мл) добавляли к основной массе раствора, что приводило к кристаллизации. Кристаллы отфильтровывали и промывали ацетоном. Выход (12,9 г) представлял 77%-ное извлечение клавулановой кислоты из раствора.

Пример 3. Раствор клавулановой кислоты в этилацетате (приблизительно 20 мг/мл) разбавляли равным объемом ацетона. Затем при 10^oС в течение 1/2 ч по каплям добавляли раствор трет-октиламина в ацетоне (1,25 моль - эквивалента). После дальнейшего перемешивания в течение 1 ч осажденные кристаллы собирали, промывали ацетоном и сушили в вакууме.

Осадок образовывался довольно быстро и был белого цвета. Выход (скорректированный в зависимости от чистоты) 76%

Пример 4. Неочищенный экстракт клавулановой кислоты, представляющий собой сырой экстракт из ферментационного бульона S.clavuligerus после некоторой предварительной очистки при помощи ионообмена (500 мл, 21 мг/мл в этилацетате) смешивали с ацетоном (20 мл) и постепенно обрабатывали раствором трет-октиламина (7,6 г, 1,0 экв.), что давало небольшую туманность. Добавление диэтилового эфира (55 мл) вызывало выделение аминной соли в виде мелких белых игл, которые отфильтровывали и промывали ацетоном. Выход 12,9 г, 77,2% выделение, 62,8% pfa (теоретическое 60,6%).

Пример 5. Неочищенный водный раствор клавулановой кислоты, получаемый из ферментационного бульона S.clavuligerus предварительной очисткой, включающей ионообменную хроматографию или в основном вышеописанную, содержащий приблизительно 17,1 г/л, подкисляли 25 об.-ной серной кислотой до рН 2,0 и затем непрерывно экстрагировали в этилацетат. Этилацетатный экстракт охлаждали до 2^oС. Обезвоживали центрифугированием, затем сушили MgSO₄, затем пропускали через СРG угольную колонку. На этой стадии этилацетатный экстракт содержал 6,02 г/л клавулановой кислоты, и затем его концентрировали посредством выпаривания до концентрации 25,7 г/л клавулановой кислоты и использовали при этой концентрации. Содержание влаги в концентрате составляло приблизительно 0,26 об.

7,8 мл трет-октиламина смешивали с 25 мл свежего этилацетата. Эту смесь медленно добавляли к 2 л обогащенного клавуланатом этилацетатного экстракта, снова разбавляли свежим этилацетатом при быстром перемешивании до титра 23,0 г/л. Суспензию перемешивали при 5^oС еще 1 ч. Трет-октиламинклавуланат впоследствии отделяли фильтрованием и промывали этилацетатом. Значительную сушку осуществляли в течение ночи в вакуумной печи при 2О^oС с отводом азота. Масса продукта 6,13 г.

Пример 6. 5 г аминной соли растворяли в 97 мл изопропанола. Продукт не растворялся легко, и было найдено необходимым применить мягкое нагревание до 24^oС с тем, чтобы осуществить полное растворение. 14 мл 1,5Н 2-этилгексаноата калия в изопропаноле добавляли в течение 10 мин. Суспензию непрерывно перемешивали в течение 1,5 ч при 5^oС. Продукт клавуланат калия затем отфильтровывали, промывали небольшими количествами изопропанола, затем ацетона и сушили в вакууме в течение ночи, с отводом азота при 20^oС. Масса продукта 3,16 г.

Пример 7. Отфильтрованный (RVF) ферментационный бульон S.clavuligerus, содержащий 2 г/л клавулановой кислоты, подкисляли 25 об.-ной серной кислотой до рН 1,6 и непрерывно экстрагировали в этилацетат. Экстракт в растворителе охлаждали до 3^oС, затем обезвоживали центрифугированием, затем сушили MgSO₄, затем пропускали через СPG угольную колонку. Обработанный углем экстракт затем концентрировали выпариванием до концентрации клавулановой кислоты приблизительно 20 г/л с содержанием влаги приблизительно 0,06 об.

13,5 мл трет-октиламина смешивали с 43 мл свежего этилацетата. Эту смесь медленно добавляли к 400 мл обогащенного клавуланатом экстракта в этилацетате при титре клавулановой кислоты 20 г/л и быстром перемешивании. Суспензию перемешивали при 5^oС еще 1 ч. Затем трет-октиламинклавуланат отделяли фильтрованием и промывали этилацетатом. Заключительную сушку осуществляли в течение ночи в вакуумной печи при 20^oС с отводом азота. Масса продукта 12,44 г.

Пример 8. 11 г соли амина растворяли в 213 мл изопропанола. Продукт не растворялся легко даже после применения мягкого нагревания до 24^oС. Для того, чтобы обеспечить растворение, добавляли воду (3,75 мл). Как только получали раствор, добавляли дополнительный изопропанол (100 мл) для того, чтобы перед кристаллизацией снизить содержание воды. Через 15 мин добавляли 30 мл 1,5Н 2-этилгексаноата калия в изопропаноле. Суспензию непрерывно перемешивали в течение 1,5 ч при 5^oС. Продукт клавуланат калия затем отфильтровывали, промывали небольшими количествами изопропанола, затем ацетона и сушили в вакууме в течение ночи при 20^oС с отводом азота. Масса продукта 7,29 г.