способ оценки фагоцитарной активности моноцитов крови человека
Классы МПК: | G01N33/48 биологических материалов, например крови, мочи; приборы для подсчета и измерения клеток крови (гемоцитометры) |
Автор(ы): | Извекова Вера Андреевна, Учайкин Василий Федорович |
Патентообладатель(и): | Извекова Вера Андреевна, Учайкин Василий Федорович |
Приоритеты: |
подача заявки:
1994-05-05 публикация патента:
10.09.1997 |
Способ оценки фагоцитарной активности моноцитов крови человека относится к медицине (клинической иммунологии), патологии клеточного иммунитета, заключается в определении функционального состояния моноцитов в реакции фагоцитоза опсонизированных частиц зимозана, которую проводят на стекле с прилипшими клетками, получаемыми из суспензии мононуклеарных клеток, выделяемых из венозной крови человека в градиенте плотности фиколл-верографина. По количеству фаготицирующих зимозан клеток, равному 94,8
4,7%, определяют функциональное состояние моноцитов крови, как нормальное. Способ позволяет оценить функциональное состояние моноцитов крови здоровых людей и его нарушение при патологии. 2 ил.
Рисунок 1, Рисунок 2
![способ оценки фагоцитарной активности моноцитов крови человека, патент № 2089899](/images/patents/383/2089003/177.gif)
Формула изобретения
Способ оценки фагоцитарной активности моноцитов крови человека, отличающийся тем, что из суспензии мононуклеарных клеток, прилипанием к стеклу, получают препарат моноцитов, инкубируют с опсонизированными частицами зимозана, окрашивают по Романовскому, микроскопируют в световом микроскопе, подсчитывают процент фагоцитирующих клеток и по их количеству 94,8![способ оценки фагоцитарной активности моноцитов крови человека, патент № 2089899](/images/patents/383/2089003/177.gif)
Описание изобретения к патенту
Способ относится к медицине (клинической иммунологии), патологии клеточного иммунитета, оценке фагоцитарной активности моноцитов крови человека, которая позволяет установить степень угнетения функциональной активности клеток. Известен способ (аналог), позволяющий с помощью частиц латекса оценить фагоцитарную активность моноцитов крови человека (V. Myhrvold, B. Morland, Acta path. immunol. Scand, Sec, C. 1985, vol. 93, p. 43-48). Пластиковые чашки Петри (9 см диаметром) покрываются 5 мл 2%-го раствора желатины в воде. Инкубируют 2 ч при 37oC. Удаляют желатину. Сушат чашки при комнатной температуре. Перед использование добавляют 5 мл сыворотки человека. Инкубируют 30 мин при 37oC. В момент использования сыворотку удаляют. Цитратную кровь (450 мл) от здоровых доноров центрифугируют 15 мин при 1500 g при 4o. К осадку добавляют среду RPMI (Gibco) на буфере NaHCO3 (pH= 7,3) до объема 210 мл. Мононуклеарные клетки крови человека выделяют стандартным методом (A. Boyum, Scand. j. clin. lab. invest. 1968, vol. 21 (Suppl. 97), p. 9-29). 10 мл суспензии мононуклеарных клеток в концентрации 2 4![способ оценки фагоцитарной активности моноцитов крови человека, патент № 2089899](/images/patents/383/2089002/183.gif)
![способ оценки фагоцитарной активности моноцитов крови человека, патент № 2089899](/images/patents/383/2089002/183.gif)
![способ оценки фагоцитарной активности моноцитов крови человека, патент № 2089899](/images/patents/383/2089041/956.gif)
![способ оценки фагоцитарной активности моноцитов крови человека, патент № 2089899](/images/patents/383/2089002/183.gif)
![способ оценки фагоцитарной активности моноцитов крови человека, патент № 2089899](/images/patents/383/2089002/183.gif)
![способ оценки фагоцитарной активности моноцитов крови человека, патент № 2089899](/images/patents/383/2089899/2089899-2t.gif)
Данным способом обследовано 23 здоровых доноров в возрасте от 18 до 26 лет. Фагоцитарный индекс моноцитов крови в группе составляет 94,8
![способ оценки фагоцитарной активности моноцитов крови человека, патент № 2089899](/images/patents/383/2089003/177.gif)
Пример 1. Описанным методом исследовали фагоцитарную активность моноцитов крови здорового донора Сахарова В. 18 лет. Препарат, окрашенных моноцитов обработанных зимозаном, анализировали в световом микроскопе "ЛОМО" (об. 100 с иммерсией) (фото 1). В поле зрения видны моноциты крови с гематоксилинположительным ядром округлой или бобовидной формы, цитоплазма которых полностью поглотила неокрашенные сферические частицы зимозана, а также видны непоглощенные частицы зимозана. Фагоцитарный индекс в данном случае составляет 98%
Пример 2. Исследовали фагоцитарную активность моноцитов крови Антоника В. 10 лет, история болезни N 534 1992 г. больного хроническим активным гепатитов в период обострения. В световом микроскопе "ЛОМО" (об. 100 с иммерсией) (фото 2) видны гематоксилинположительные ядра моноцитов округлой или бобовидной формы, окруженные светлой цитоплазмой. В некоторых клетках видны единичные включения неокрашенных частиц зимозана (одна или две частицы). Фагоцитарный индекс в данном случае составляет 25%
Данные примеры свидетельствуют о широком диапазоне возможностей предлагаемого метода при оценке функционального состояния моноцитов крови человека. Так фагоцитарный индекс больного (25%) был существенно снижен на фоне обострения хронического активного гепатита по сравнению с показателем фагоцитарной активности здорового донора (98%). Положительный эффект от применения способа для исследователя заключается в том, что значительно упрощается метод определения уровня фагоцитарной активности и возникает возможность длительно хранить цитологические препараты. Кроме того, сокращается время, необходимое для получения конечного результата, за счет исключения применения пластиковых чашек и необходимости снятия прилипших к пластику клеток и отмывки клеток центрифугированием. Вместо этого, предлагается использовать способность моноцитов крови прилипать к предметному стеклу в среде, содержащей 20% эмбриональную телячью сыворотку и добавлять фагоцитируемый объект (частицы зимозана) непосредственно к прилипшим клеткам без их снятия с поверхности и отмывки центрифугированием. К недостаткам оценки фагоцитарной активности моноцитов с помощью опсонизированных эритроцитов барана (прототип), исключаемого заявленным способом, относятся трудности выявления дифференциальных различий между поглощенными эритроцитами и собственными вакуолями моноцитов, вследствие того, что плазматические мембраны эритроцитов, как и вакуоли цитоплазмы моноцитов, имеют сходную фосфолипидную структуру и одинаковую толщину мембран. В данном способе используют опсонизирвоанные частицы зимозана, которые представляют собой объект растительного происхождения (дрожжи), имеющие плотную оболочку, хорошо видимую в световом микроскопе (фото 1, 2), что уменьшает фактор субъективной оценки и повышает точность метода. Использование частиц зимозана и светового микроскопа повышает экономическую эффективность метода, так как позволяет избежать затрат на содержание животных в виварии, необходимых как источник получения эритроцитов и антител для их опсонизации, а также на приобретение дорогостоящего фазово-контрастного микроскопа Zeiss (прототип). Таким образом, данный метод является более простым, точным и экономически эффективным.
Класс G01N33/48 биологических материалов, например крови, мочи; приборы для подсчета и измерения клеток крови (гемоцитометры)