способ добавления в детскую питательную смесь докозагексановой кислоты и арахидоновой кислоты (варианты) и композиция (варианты)

Формула изобретения

1. Способ добавления в детскую питательную смесь докозагексановой кислоты (ДГК) и арахидоновой кислоты (АРК), предусматривающие введение в детскую смесь источников ДГК и АРК, отличающийся тем, что в качестве источников ДГК и АРК использут масло, содержащее ДГК, и масло, содержащее АРК, причем ДГК и АРК находятся в виде триглицеридов, и по меньшей мере одно из масел, содержащих ДГК и АРК, является микробным маслом, по существу свободным от эйкозапентановой кислоты (ЭПК), при этом указанные масла смешивают и смесь вводят в детскую смесь в количестве, достаточном для обеспечения ДГК, АРК и ЭПК в детской смеси в количествах, сравнимых с содержанием ДГК, АРК и ЭПК в материнском молоке.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что упомянутые масла смешивают в соотношении около 2 12 мас.ч. АРК на приблизительно 1 5 мас.ч. ДГК, а соотношение ЭПК АРК в масляной смеси составляет приблизительно 1 5 20.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что оба масла являются микробными, причем масла смешивают так, чтобы получить соотношение приблизительно 2 12 мас. ч. АРК на приблизительно 1 5 мас.ч. ДГК, при этом смесь масел по существу свободна от ЭПК.

4. Способ по п. 1, или 2, или 3, отличающийся тем, что АРК-содержащее масло содержит приблизительно 20 40% АРК.

5. Способ по п. 1, или 2, или 3, отличающийся тем, что ДГК-содержащее масло содержит приблизительно 20 40% ДГК.

6. Способ по п.1, или 2, или 3, отличающийся тем, что ДГК-содержащее масло и АРК-содержащее масло добавляют в детскую питательную смесь так, чтобы обеспечить соотношение АРК ДГК приблизительно 3 2 1.

7. Способ по п. 1, или 2, или 3, отличающийся тем, что микробное масло, практически свободное от ЭПК, получают из грибков.

8. Способ по п. 1, или 2, или 3, отличающийся тем, что микробное масло, практически свободное от ЭПК, получают из микроводорослей.

9. Способ по п. 1, или 2, или 3, отличающийся тем, что АРК-содержащее масло получают путем культивирования Pithium insidiosum или Mortierella alpina.

10. Способ по п. 1, или 2, или 3, отличающийся тем, что ДГК-содержащее масло получают путем культивирования ДГК-содержащих видов Crypthecodinium.

11. Способ по одному из пп. 1 10, отличающийся тем, что по меньшей мере одно микробное масло смешивают с рыбьим жиром перед добавлением упомянутой смеси в детскую питательную смесь.

12. Способ добавления в детскую питательную смесь докозагексановой кислоты (ДГК) и арахидоновой кислоты (АРК), предусматривающий введение в детскую смесь источников ДГК и АРК, отличающийся тем, что в качестве источников ДГК и АРК используют смесь микробного масла, содержащего ДГК, и масла, содержащего гаммалиноленовую кислоту (ГЛК), причем смесь вводят в таком количестве, чтобы количество ДГК, потребляемое со смесью, соответствовало содержанию ДГК в материнском молоке, а количество ГЛК, потребяемое со смесью, при превращении в детском организме в АРК, соответствовало содержанию АРК в материнском молоке.

13. Способ по п. 12, отличающийся тем, что ГЛК-содержащее масло выбирают из масла семян первоцвета, бурачника и черной смородины.

14. Способ по п. 12, отличающийся тем, что ГЛК-содержащее масло является микробным маслом.

15. Способ по п. 12, отличающийся тем, что по меньшей мере одно микробное масло смешивают с рыбьим жиром перед добавлением упомянутой смеси в детскую питательную смесь.

16. Способ по п. 11, отличающийся тем, что по меньшей мере одно микробное масло является АРК-содержащим маслом.

17. Способ по п. 11, отличающийся тем, что соотношение рыбьего жира и микробного масла составляет 1 1 15.

18. Способ по п. 11, отличающийся тем, что соотношение между рыбьим жиром, АРК-содержащим микробным маслом и ДГК-содержащим микробным маслом составляет приблизительно 1 10 3.

19. Композиция, содержащая источник докозагексановой кислоты (ДГК) и арахидоновой кислоты (АРК), отличающаяся тем, что источником ДГК и АРК является смесь ДГК-содержащего масла и АРК-содержащего масла, причем ДГК и АРК находятся в виде триглицеридов и по меньшей мере одно из указанных масел является микробным маслом, по существу свободным от эйкозапентановой кислоты (ЭПК).

20. Композиция по п. 19, отличающаяся тем, что упомянутые масла смешивают в соотношении приблизительно 2 12 мас.ч. АРК на 1 5 мас.ч. ДГК.

21. Композиция по п. 19, отличающаяся тем, что масла смешивают так, чтобы получить соотношение АРК ДГК ЭПК приблизительно 5 1 1 20 10 1.

22. Композиция по п. 19, отличающаяся тем, что содержит смесь микробного триглицеридного масла, содержащего АРК, и микробного триглицеридного масла, содержащего ДГК, причем микробные триглицеридные масла смешаны в количествах, обеспечивающих соотношение АРК ДГК приблизительно 2 12 1-5 и упомянутые масла практически свободны от ЭПК.

23. Композиция по п.19, или 20, или 21, или 22, отличающаяся тем, что ДГК-содержащее масло содержит приблизительно 20 40% ДГК.

24. Композиция по п. 19, или 20, или 21, или 22, отличающаяся тем, что АРК-содержащее масло содержит приблизительно 20 40% АРК.

25. Композиция по п. 19, или 20, или 21, или 22, отличающаяся тем, что масла смешивают, чтобы получить соотношение АРК ДГК приблизительно 2 1.

26. Композиция по п.19, или 20, или 21, или 22, отличающаяся тем, что микробное масло, практически свободное от ЭПК, получают из грибков.

27. Композиция по п. 19, или 20, или 21, или 22, отличающаяся тем, что микробное масло, практически свободное от ЭПК, получают культивированием микроводорослей.

28. Композиция по п. 19, или 20, или 21, или 22, отличающаяся тем, что АРК-содержащее масло получают путем культивирования Pithium insidiosum или Mortierella alpina.

29. Композиция по п. 19, или 20, или 21, или 22, отличающаяся тем, что ДГК-содержащее масло получают путем культивирования ДГК-содержащих видов Cryphtecodinium.

30. Композиция по одному из пп. 19 29, отличающаяся тем, что содержит рыбий жир, смешанный с по меньшей мере одним микробным маслом.

31. Композиция по пп. 19 30, отличающаяся тем, что является детской питательной смесью.

32. Композиция по п. 19, отличающаяся тем, что она предназначена для использования в детской питательной смеси.

33. Композиция по п. 19, отличающаяся тем, что она предназначена для использования в пищевой добавке.

34. Композиция по п. 19, отличающаяся тем, что она предназначена для использования в полной парентеральной смеси.

35. Композиция по пп. 19 30, отличающаяся тем, что является детской питательной смесь, включающей в себя смесь микробного масла, содержащего ДГК, и микробного масла, содержащего АРК, причем ДГК и АРК имеют форму триглицеридов, и масла смешаны с обеспечением соотношения АРК ДГК приблизительно (2 12) (1-5), при этом количество ДГК-содержащего масла и количество АРК-содержащего масла в детской питательной смеси достаточны для обеспечения содержания ДГК и АРК, сравнимые с содержанием ДГК и АРК в материнском молоке, а детская питательная смесь также содержит ЭПК в количестве, не превышающим 1/20 количества АРК.

36. Композиция по пп. 19 30, отличающаяся тем, что является детской питательной смесью, содержащей ДГК и АРК, имеющих форму триглицеридов, причем указанные триглицериды связаны с обеспечением соотношения АРК ДГК приблизительно (2 12) (1 5), а количества ДГК-содержащего триглицерида и АРК-содержащего триглицерида достаточны для обеспечения содержания ДГК и АРК, сравнимых с содержанием ДГК и АРК в материнском молоке, при этом детская питательная смесь практически свободна от ЭПК.

37. Композиция, содержащая источники докозагексановой кислоты (ДГК) и арахидоновой кислоты (АРК), отличающаяся тем, что источниками ДГК и АРК являются масло, содержащее ДГК, и масло, содержащее ГЛК, взятые в таком соотношении, чтобы при добавлении в детскую питательную смесь некоторого количества этой композиции обеспечить содержание ДГК, сравнимое с его содержанием в материнском молоке, и обеспечить такое количество ГЛК в детской смеси, которое после введения детской смеси ребенку может быть превращено в организме ребенка в количество АРК, сравнимое с количеством АРК, получаемым из материнского молока.

38. Композиция по п. 37, отличающаяся тем, что ГЛК-содержащее масло выбирают из масла семян первоцвета, бурачника и черной смородины.

39. Композиция по п. 37, отличающаяся тем, что ГЛК-содержащее масло является микробным маслом.

40. Композиция по п. 38, отличающаяся тем, что микробное масло продуцировано Mucor javonicus и Mortierella isabella.

41. Композиция по пп. 37 40, отличающаяся тем, что является детской питательной смесью, содержащей смесь ДГК-содержащего масла и ГЛК-содержащего масла, причем количества ДГК-содержащего масла достаточно, чтобы обеспечить содержание ДГК, сравнимое с его содержанием в материнском молоке, а количество ГЛК-содержащего масла достаточно, чтобы обеспечить а такое содержание ГЛК, которое после потребления детской смеси ребенком может быть превращено детским организмом в количество АРК, сравнимое с количеством АРК, получаемым из материнского молока.

42. Композиция по п. 37, или 38, или 39, или 40, или 41, отличающаяся тем, что содержит рыбий жир, смешанный с по меньшей мере одним микробным маслом.

43. Композиция по п. 30, отличающаяся тем, что по меньшей мере одно микробное масло является АРК-содержащим маслом.

44. Композиция по п. 30, отличающаяся тем, что соотношение рыбьего жира и микробного масла составляет от 1 1 до 1 15.

45. Композиция по п. 30, отличающаяся тем, что соотношение между рыбьим жиром, АРК-содержащим микробным маслом и ДГК-содержащим микробным маслом составляет приблизительно 1 10 3.

46. Композиция по пп. 37 45, отличающаяся тем, что является детской питательной смесью.

47. Композиция по пп. 37 45, отличающаяся тем, что является детской питательной смесью, включающей в себя смесь микробного масла, содержащего ДГК, и микробного масла, содержащего АРК, причем ДГК и АРК имеют форму триглицеридов, и масла смешаны с обеспечением соотношения АРК ДГК приблизительно (2 12) (1 5), при этом количество ДГК-содержащего масла и количество АРК-содержащего масла в детской питательной смеси достаточны для обеспечения содержания АРК и ДГК, сравнимого с содержанием ДГК и АРК в материнском молоке, а детская питательная смесь также содержит ЭПК в количестве, не превышающем 1/20 количества АРК.

48. Композиция по пп. 37 45, отличающаяся тем, что является детской питательной смесью, содержащей ДГК и АРК, имеющих форму триглицеридов, причем указанные триглицериды смешаны с обеспечением соотношения АРК ДГК приблизительно (2 12) (1 5), а количества ДГК-содержащего триглицерида и АРК-содержащего триглицерида достаточны для обеспечения содержания ДГК и АРК, сравнимого с содержанием ДГК и АРК в материнском молоке, при этом детская питательная смесь практически свободна от ЭПК.

49. Композиция по п. 37, отличающаяся тем, что она предназначена для использования в детской питательной смеси.

50. Композиция по п. 37, отличающаяся тем, что она предназначена для использования в пищевой добавке.

51. Композиция по пп. 49 и 50, отличающаяся тем, что включает в себя смесь ДГК-содержащего микробного масла и АРК-содержащего микробного масла, взятых в соотношении АРК ДГК, составляющем приблизительно (2 12) (1 - 5), при этом масла содержат ДГК и АРК в форме триглицеридов.

52. Композиция по п. 47, или 48, или 50, отличающаяся тем, что пищевая добавка предназначена для человека.

53. Композиция по п. 52, отличающаяся тем, что человеком является ребенок.

54. Композиция по п. 52, отличающаяся тем, что человеком является беременная или кормящая женщина.

55. Композиция по п. 37, отличающаяся тем, что она предназначена для использования в полной парентеральной смеси.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к смесям, или микстурам из микробных масел, содержащих полиненасыщенные жирные кислоты, и к их применению. В предпочтительном воплощении это изобретение касается использования таких масел в качестве добавок или дополнения к пище человека, например, добавки к детской питательной смеси.

Давно известно, что полиненасыщенные жирные кислоты с длинной цепью (ПНЖК) являются неотъемлемой частью диеты у человека, особенно в период быстрого роста тканей.

Sanders et al. Am.J. Clin Nutr. 31:805-813 (1978). Некоторые из этих длинноцепочечных кислот, такие как арахидоновая кислота (АРК), не могут синтезироваться де ново у человека. Только благодаря метаболизирующей линолевой кислоте (ЛК), которая превращается в гамма-линоленовую кислоту (ГЛК) и затем в АРК, в человеческом организме образуется АРК, ЛК, наоборот, является незаменимой кислотой, которая может быть получена только из пищевых источников. В дополнение к этому, наличие эйкозапентаеновой кислоты (ЭПК) в пище подавляет метаболическое превращение ЛК в АРК. Carlson et al. INFORM Т:306 (1990), АРК и докозагексановая кислота (ДГК) являются важными элементами тканей мышц, органов и сосудов.

Младенчество наиболее значимый период быстрого роста в человеческой жизни. Младенцы могут увеличивать вес своего тела в три и более раз в первый год жизни. Согласно этому является существенным, что младенцы получают достаточное количество ПНЖК, поддерживающих развитие структур и органов организма. Женское грудное молоко содержит высокое количество ПНЖК, в которых соотношение АРК и ЭПК обычно составляет 20:1. Однако многие женщины выбирают нагрудное вскармливание своих детей в течение либо части, либо всего первого года жизни младенцев.

Как показали Czandinin et al. в патенте США N 4670285, использованном здесь в виде ссылки, существующие составы детских питательных смесей содержат недостаточное количество длинноцепочечных (C₂₀ и C₂₂) ПНЖК. Clandinin et al. описали приготовление детской смеси из смеси липидов растительного масла и яичного желтка и/или рыбьего жира, которое обеспечивает композицию из общих жирных кислот, сопоставимую с таковой в женском грудном молоке. Предпочтительная композиция состояла из 75-95 частей по весу яичного желтка и 5-25 частей растительного масла. Эта композиция является целиком липидным составом детской питательной смеси и она неэкономична при приготовлении. В дополнении к этому, детская смесь, раскрытая Clandinin et al. содержит ЭПК в 16 раз больше, чем содержание ЭПК в грудном женском молоке, и только 1/4 часть АРК от содержания ее в грудном молоке.

В патенте DE N 3603000 AI (Milupa) указан подсчитанный профиль смеси из сильно полиненасыщенных жирных кислот и обсуждается использование такой смеси при приготовлении детских питательных смесей. В качестве источников жирных кислот приведены типы высших макроскопических водорослей (т.е. морские водоросли), рыбий жир, органные жиры из говядины и свинины и высокоочищенные жиры яичного желтка. В добавление к ДГК из рыбьего жира потенциальным источником ДГК и АРК, как сказано, могут быть макроскопические водоросли, но только морские водоросли. Не предполагалось использование какого-нибудь типа микробов и тем более микробного масла.

Способы получения микробных масел раскрываются в следующих сообщениях, каждое из которых используется здесь в качестве ссылки. Заявка США N 07/496,572 от 21.03.90 раскрывает получение отдельных клеточных масел, содержащих эйкозапентанеоевую кислоту (EPASCO). Патентная заявка США N 07/479,135 от 13.02.90 раскрывает способ получения отдельного клеточного масла, содержащего докозагексанеоевую кислоту (DHASCO). Патентная заявка США N 07/645,454 относится к получению отдельного клеточного масла, содержащего арахидоновую кислоту (A PA CO). В патенте Европы EP N 322227 также раскрывается микробная система, продуцирующая масло. Ни одна из этих ссылок не указывает на использование смеси, содержащей немодифицированные микробные масла, в качестве пищевого дополнения, или на использование смеси микробных масел в качестве добавки к существующим детским питательным смесям, обеспечивающим подобие смеси с композицией длинноцепочечных ПНЖК и грудного женского молока.

Целью настоящего изобретения является обеспечение получения ПНЖК-обогащенных добавок, композиция которых затем добавляется к коммерческой детской питательной смеси, с обеспечением желаемой длинноцепочечной ПНЖК в количествах, сопоставимых с количеством ПНЖК, обнаруженном в грудном женском молоке.

Также целью настоящего изобретения является разработка экономичного способа получения вышеуказанной композиции.

Эти и другие цели достигаются настоящим изобретением, описанным здесь.

Это изобретение относится к использованию микробных масел, которые содержат полиненасыщенные жирные кислоты с длинной цепью.

Кроме того, в различных воплощениях этого изобретения, рыбий жир и/или растительные масла могут быть смешаны с такими микробными маслами для того, чтобы сформировать желаемые композиции. Композиции могут использоваться как пищевые добавки, особенно в детских пищевых смесях, а также в фармацевтии и в косметических средствах.

Изобретение также относится к экономически жизнеспособным процессам для изменяющихся композиций полиненасыщенных жирных кислот с длинной цепью для питательных смесей для младенцев и/или для детского питания. Предпочтительно, чтобы измененные композиции имели сходство с грудным женским молоком.

В широком смысле настоящее изобретение включает в себя смеси или микстуры, содержащие неизменные микробные масла. Использованный здесь термин "неизмененные" означает отсутствие химических или ковалентных изменений. Понятно, что благодаря этому специфическому обозначению термины "микробное масло" или "масло" имеют в виду, если не другое специфическое состояние, то немодифицированное масло. "Микробные масла" или "отдельные клеточные масла" являются такими маслами, которые продуцируются микроорганизмами в течение их переживания. Такие масла могут быть сильно полиненасыщенными жирными кислотами с длинной цепью. Потребитель имеет представление, что некоторые из этих масел, которые смешивают с другими микробными маслами, рыбьим жиром, растительными маслами или с любыми комбинациями из них, могут создать композицию, полезную для питания, фармацевтии или косметических средств.

Различные микробные масла могут быть получены, например, процессами, указанными выше в патентных заявках США NN 07/496572, C7/749,135 и в ЕП N 07/322,227 (Yamada et al. Suntory) или в заявке на патент США N 07/645,454. Описание каждой из этих ссылок включено в настоящий патент.

Понятно, что настоящее изобретение охватывает использование отдельного микробного масла, содержащего по крайней мере две желаемые ПНЖК, такие как АРК и ДГК. Особенно желательны масла, использованные здесь, однако каждое содержит отдельную желаемую ПНЖК.

Любое нетоксичное, ПНЖК-содержащее микробное масло может быть использовано в настоящем изобретении. Наиболее предпочтительными являются микробные масла, которые богаты омега-3 или омега-6 ПНЖК, особенно ДГК, ГЛК или АРК. Эти ПНЖК обычно отсутствуют или их содержание не обеспечено в количественном отношении в пищевых добавках, таких как смеси для младенцев или детское питание. Термин "смесь для младенцев" используется здесь для обозначения продукта энтерального питания, который может замещать грудное женское молоко при вскармливании младенцев, и обычно составляется из смеси жиров в необходимом количестве с желаемым количеством углеводов и белков в водном растворе (процентное соотношение). Часто также присутствуют микроэлементы питания, такие как следы металлов и витамины или другие желательные добавки.

Примеры таких микроэлементов питания и других добавок раскрываются Clandinin et al. в патенте США N 4670285, который представлен здесь в виде ссылки.

В настоящем изобретении типы масел из различных микробов могут смешиваться вместе, чтобы получить желаемую композицию. Альтернативно или в качестве дополнения, микробные масла, содержащие ПНЖК, могут быть смешаны с рыбьим жиром, растительным маслом или смесью из них для того, чтобы получить желаемую композицию.

Объективно для того, чтобы композиция стала подобна грудному женскому молоку, в питательные смеси для младенцев добавляют желаемое количество омега-3 и омега-6 ПНЖК. В целом пропорция необходимых жирных кислот в микробных маслах может варьироваться, и эта пропорция легко может быть определена и установлено необходимое количество масла, которое необходимо добавить, чтобы обеспечить желаемое количество ПНЖК. Подобным образом процент необходимых ПНЖК в рыбьем жире или в растительном масле может легко определяться и количество масла, которое может быть добавлено, может быть доведено до необходимого, чтобы достигнуть желаемых результатов.

"Рыбий жир" это масла, получаемые из рыб. Такие масла обычно содержат ДГК в количествах от 3 до 20% Однако обычно рыбий жир содержит также ЭПК, которая подавляет продукцию АРК в организме. Добавление микробных масел, содержащих повышенное количество АРК, к композициям, содержащим рыбий жир, существенно решает эту задачу.

"Растительное масло" включает все те масла из растений, которые содержит ПНЖК. Обычно же, растительные масла не содержат длинноцепочечные ПНЖК (ПНЖК с по крайней мере 20-углеродными атомами), в отличие от животных органных жиров, которые обычно рассматриваются как источник ПНЖК. Таким образом, вегетарианцы, особенно матери-вегетерианки, получают с пищей недостаточно ПНЖК. Известно, что растительные масла, содержащие ПНЖК, могут содержать ГЛК, ГЛК является с 18:3 омега-6 ПНЖК. К таким маслам относятся масла из семян черной смородины, масло из буранчика лекарственного, масло из лепестков роз. В то же время ГЛК является метаболическим предшественником АРК, однако процессы конверсии очень слабы, требуют участка фермента 6-дезатуразы. Этот фермент представлен у человека в очень малых количествах. Burre et al. Lipids, 25:354-336 (1990). Таким образом, будет предпочтительнее обеспечить организм АРК, чем ее предшественником ГЛК.

Способы получения растительных масел известны и не входят составной частью в настоящее изобретение. Кроме того, некоторые грибы продуцируют масла, содержащие ПНДЖ. Например, виды Mucor вырабатывают масло, содержащее ГЛК.

DHASCO, указанное здесь как одиночное клеточное масло, содержащее докозагексанеоевую кислоту, может быть получено, например, из Crypthecodinium cohnii как раскрыто в указанной ссылке на заявку США N 07/479135. ДГК представляет собой С 22:6 омега-3 длинноцепочечную ПНЖК.

EPASCO указано здесь как одиночное клеточное масло, содержащее эйкозапентанеоевую кислоту, может быть получено, например, из Nitzschia alba, как указано в ссылке, приведенной выше, заявка США N 07/496572. ЭПК представляет собой С 20:5 омега-3 длинноцепочечную ПНЖК.

APASCO, указанное здесь как одиночное клеточное масло, содержащее арахидоновую кислоту, может быть получено из таких видов, как Pythium insidiosum или Mortierella alpina как описано в заявке США 07/645 454. АРК представляет собой С 20:4 омега-6 длинноцепочечную ПНЖК.

Другой аспект изобретения раскрывает способ добавления или изменения композиции коммерчески доступных питательных смесей для младенцев таким образом, чтобы обеспечить их композицией с ПНЖК и сделать их наиболее близкими к обычному содержанию их в грудном женском молоке. "Обычно" используется здесь в смысле среднего количества ПНЖК, которое измерено в грудном молоке. Одним из преимуществ настоящего изобретения является то, что, если нужно, кормящие матери могут изменить вскармливание по выбору после проведения анализа грудного молока на содержание в нем ПНЖК.

Кроме того, специально предусмотрена добавка для коммерчески доступного состава, которая будет дополнять количество ПНЖК до сопоставимых значений. Микробные масла, содержащие длинноцепочечную ПНЖК из по крайней мере двух микроорганизмов, могут быть получены и смешаны для обеспечения желаемой композиции. Предусмотрено, что смесь затем может быть добавлена к питательной смеси для младенцев. Предпочтительно, чтобы количество смеси эффективно обеспечивало количество необходимых ПНЖК, подобных тем, которые обнаружены в грудном женском молоке.

Обычно грудное женское молоко содержит от 0,5 до 0,6% АРК от содержащихся в нем жирных кислот, 0,15-0,36% ДГК и от 0,03 до 0,13% ЭПК. Таким образом, предпочтительное соотношение АРК:ДГК:ЭПК составляет от 5:1:1 до 20:10:1, соответственно. Количество масел, приблизительно обеспечивающее это соотношение ПНЖК, может быть определено без дополнительных исследований.

В предпочтительном воплощении микробные масла включают APASCO, DHASCO и EPASCO или смесь из них. Также предпочтительно использовать масла из микробов родов Mortirella, Pythium, Crypthecodinium и Nitzschia или любую комбинацию из них. Особенно предпочтительны виды этих родов M.alpina, P.insidiosum, C.cohnii и Nalba. Это предпочтительное воплощение будет обеспечивать приемлемую альтернативу для вегетарианцев, включая женщин, вскармливающих грудным молоком, или беременных женщин-вегетарианок.

При необходимости рыбий жир может растираться или смешиваться с любой комбинацией из (или индивидуально) микробных масел, чтобы получить композицию, которая затем добавляется в состав смеси для младенцев, изменяя содержимое ПНЖК в необходимой степени. Такая композиция не подходит для отказывающихся от ее потребления вегетарианцев.

Предпочтителен рыбий жир, специально получаемый Menhaden oil (вырабатываемый Zapata, Hayne, Inc), который обычно содержит около 9% ДГК. Конечно, другие жиры рыб также можно использовать.

Если DHA S СО смешивают с ARASCO, и другие содержащие ПНЖК масла не используются, желательно смешивать достаточные количества масел, предусматривая от 1 до 5 частей ДГК с 2-12 частями АРК. Наиболее предпочтительно соотношение ДГК и АРК 1:3, соответственно.

Другим примером является Menhaden рыбий жир, указанный выше, обычно содержащий около 9 мас. ДГК. ARASCO обычно содержит от 20 до 40 мас. АРК. DHASCO обычно содержит 25-40 мас. ДГК. Было обнаружено, что добавление смеси из одной части рыбьего жира (Menhaden) содержащего около 9 мас. ДГК, десяти частей ARASCO, содержащего 33 мас. АРК, и трех частей DHASCO, содержащего 35 мас. ДГК, к составу питательной смеси для младенцев делает состав этой смеси близким по содержанию АРК и ДГК к грудному женскому молоку. Другие соотношения могут быть легко просчитаны.

В другом воплощении настоящего изобретения раскрывается способ получения дополнения для питательной смеси для младенцев и детского питания, которое готовится смешиванием масла, содержащего ДГК, с маслом, содержащим ГЛК. Понятно, что в основном могут быть использованы любые комбинации ГЛК-, ЭПК-, АРК- и ДГК-содержащих масел с или без рыбьего жира. Источником ГЛК может быть растительное масло, такое как масло из лепестков роз, масло из семян черной смородины, масло из буранчика лекарственного, или микробное масло, такое как, например, масло из Mucor javonicus или Mortierella isabellina. В табл. 1 помещена композиция ГЛК из таких масел. В смысле предпочтительности этого воплощения смешивают около 1 части масла Menhaden, содержащего около 9% ДГК, около 4 частей масла из семян черной смородины ГЛК-содержащее масло с содержанием ГЛК 18% и около 1 части DHASCO, содержащего около 33% ДГК. Другое соотношение может быть выбрано, как описано.

Другим аспектом настоящего изобретения является композиция, включающая смесь из любых комбинаций вышеописанных микробных масел с или без каждого из двух, или с двумя, рыбьим жиром и растительным маслом. В то же время, композиция включает любое соотношение масел, предварительно описанное или желаемое.

В другом предпочтительном воплощении композиция служит пищевым дополнением. Обычно такие добавки инкапсулированы в желатиновые капсулы. Такие капсулы обеспечивают легкую форму для приема внутрь лицам, нуждающимся в таких дополнениях, например, беременным и кормящим женщинам. Однако парентеральное введение имеет право выбора по жизненным показаниям, и в одном воплощении композиция содержит жирные компоненты общего состава смеси для парентерального питания. Такие составы известны и коммерчески доступны.

Как будет понятно, композиция настоящего изобретения особенно полезна для кормящих или беременных женщин. Женщины вегетарианки в особенности могут нуждаться в увеличенных количествах ДГК и АРК, хотя в прошлом они имели сложности в получении этих кислот, так как единственным доступным их источником служили животные.

Изобретение предварительно в главном описано, представленные примеры не ограничивают изобретение, а иллюстрируют только цели изобретения.

Пример 1. Получение липида из Р.insidiosum

В 80-литровом (общий объем) ферменторе смешивают 51 л водопроводной воды, 1,2 кг глюкозы, 240 г дрожжевого экстракта и 15 мл MAZU 210S (пеногаситель). Ферментор стерилизуют при 121^oC в течение 45 мин. Дополнительно добавляют 5 л дистиллированной воды во время процесса стерилизации, pH доводят до 6,2 и добавляют приблизительно 1 л инокулума (засевающий материал; плотность клеток 5-10 г/л из Pythium insidiosum (АТСС 28251). Величину встряхивания доводят до 125 оборотов (250 см/с по верхнему концу мешалки) и величину аэрации устанавливают 1 СКФМ (стандартный кубический фут в минуту). Через 24 ч аэрацию увеличивают до 3 СКФМ. Через 28 ч добавляют дополнительно 2 л 50%-ного сиропа глюкозы (1 кг глюкозы). Через 50 ч из ферментора собирают "урожай" грибов, составляющий около 2,2 кг влажного веса (примерно 15 г сухого веса) на литр. Собранную биомассу выжимают до получения твердой лепешки (50% -ная твердость) на фильтре с отсосом перед высушиванием замораживанием. Высушенную биомассу растирают в ступке пестиком и экстрагируют 1 л гексана на 200 г сухой биомассы при комнатной температуре при перемешивании в течение 2 ч. Смесь затем фильтруют, фильтрат выпаривают до получения 5-6 г грубого (неочищенного) масла на 100 г сухой биомассы. Биомассу затем повторно экстрагируют 1 л этанола на 20 г сухой биомассы в течение 1 ч при комнатной температуре, фильтруют, растворитель выпаривают, получая дополнительно еще 22 г грубого масла на 100 г сухой биомассы. Вторая фракция состоит в основном из фосфолипидов, тогда как первая фракция содержит смесь фосфолипидов и триглицеридов. Из объединенных фракций получают масло, содержащее 30-35% арахидоновой кислоты, оно не содержит определенных количеств ЭПК.

Пример 2. Получение липида из M.alpina Mortirella alpina (АТСС 42430) проращивают в двухлитровом встряхивающем флаконе, содержащем 1 л водопроводной воды и 20 г среды декстрозы картофеля. Флакон подвергают постоянному встряхиванию на круговом встряхивателе при 25^oC в течение 7 дн. После сбора центрифугированием биомассу высушивают при замораживании до получения 8 г обогащенного липидом мицелия. Мицелий экстрагируют, используя гексан, как описано в примере 1, и получают около 2,4 г грубого масла. Это масло содержит около 23% арахидоновой кислоты.

Пример 3. В 30-литровый рабочий объем ПБФ (перемешивающий бак ферментора) помещают среду в количестве 1/4 объема бака сильной искусственной морской воды, 7 л из 10 объединяют с 18 л водопроводной воды. Ферментор, содержащий среду, стерилизуют и охлаждают затем до 28^oC. К среде добавляют 400 мл концентрированного YE (455 г/л), 900 мл сиропа глюкозы (400 г/л) и 1 л инокулума из засевающего раствора, содержащего 270⁷ клеток/мл C.cohnii или биомассу 20 г/л (доведенной до конечной концентрации около 10⁵ клеток/мл, или биомасса около 700 мг/л). Клетки C.cohnii обозначенные как МК 8840, получают из американской Коллекции типовых культур, обозначенные там как АТСС 40750. Устанавливают перемешивание Т20 см/с (по концу лопасти вертушки) и аэрацию со скоростью 1 ООМ (об/об/мин) (30 л/мин). Через 30 ч добавляют дополнительное количество сиропа глюкозы (900 мл) и следующие 4,2 л через следующие 42 ч. Таким образом, в общем добавляют 6 л сиропа глюкозы. Концентрированный раствор YE/400 мл/добавляют через 6 ч к общему объему и следующие 1,2 л добавляют через следующие 48 ч до получения общего количества 2 л. Поддерживают до выше чем 20% через 24 ч скорость вращения конца лопасти вертушки увеличивают до 150 см/с, а через 48 ч до 160 см/с. Через 72 ч скорость вращения лопасти вертушки увеличивают до 200 см/с и культуру выращивают дополнительное время, достаточное для превращения конечного запаса глюкозы в клеточное масло. Культуру затем собирают центрифугированием и клеточный осадок сохраняют. Собранный осадок замораживают и высушивают (лиофилизируют) до 4% влажности. Гексан (2,8 л) добавляют к сухой биомассе и перемешивают в стеклянном сосуде в течение 1,5 ч при 50^oC. Для удаления гексана используют роторный испаритель, получая около 175 г грубого ДГК-содержащего масла.

Пример 4. В общепринятый 30-литровый ПБФ добавляют питательную среду табл. А, за исключением витаминов, глюкозы и силиката. Ферментор оборудуют перемешивающей турбиной типа Rushton. ПБФ и среду стерилизуют. После охлаждения среды до 30^oC добавляют витамины, вслед за этим добавляют необходимое количество 40%-ного сиропа глюкозы до создания необходимой концентрации глюкозы около 80 г/л. Концентрированный раствор метасиликата пентагидрата натрия (100 г/л) добавляют, чтобы обеспечить общую концентрацию силиката около 200 мг/л. Затем инокулируют необходимое количество культуры клеток N. alba, полученной из американской Коллекции типов культур и обозначенной как АТСС 40775, добавляют в количестве приблизительно 5% общего объема ферментора, т.е. 1,5 л/30 л. Начинают перемешивание со скоростью вращения конца лопасти вертушки 85-90 см/с и аэрируют с начальной скоростью 1 ООМ. Через 16 ч добавляют добавочные количества концентрированного раствора метасиликата (0,53 л) и скорость перемешивания увеличивают до 126 см/с. Спустя следующие 24 ч добавляют дополнительное количество концентрированного силиката (0,83 л). Скорость перемешивания увеличивают до 180-185 см/с. Через следующие 3 ч добавляют дополнительные 0,15 л концентрированного метасиликата. Таким образом, общее количество добавленного метасиликата составляет около 156 г, или около 1,6 л концентрированного раствора. Через 48 ч добавляют дополнительное количество глюкозы (около 5 л), общее количество добавленной глюкозы составляет около 4,8 кг или около 12 л 40%-ного сиропа глюкозы. Культура растет в течение дополнительных 16 ч при поддерживающем перемешивании и аэрации. Затем собирают урожай, используя центрифугу Sharples с непрерывным протоком, получая биомассу плотностью примерно 45-48 г сухого веса на литр. Полученный осадок, около 20-33% твердости, удаляют и замораживают при -20^oC. Вакуумное высушивание на поддоне используют для удаления влаги из осадка. Одиночное клеточное масло осадка экстрагируют гексаном. Гексан последовательно удаляют дисцилляцией, получая экстрагированное одиночное клеточное масло.

Пример 5. Получение масляной смеси 1 и добавление ее к составу питательной смеси для младенцев.

Первая микстура представляет собой добавки арахидоновой кислоты и докозагексаеноевой кислоты из растительных источников. Эта добавка, как считается, будет приемлема для лиц, ограничивающих себя вегетарианской диетой. Sanders et al (Amer. J. Czin. Nutr) 31:805, 1978 доложили, что содержание ДГК в грудном молоке матерей-вегетарианок снижено. Добавка для приема внутрь из смеси одиночных клеточных масел, содержащих ДГК и АРК, увеличивают концентрацию ДГК в сыворотке, и, следовательно, в грудном молоке до значений, наблюдаемых у всеядных кормящих матерей. Эта смесь готовится смешиванием 1 части DHASCO, содержащего около 35% ДГК (полученного из Crypthecodinium cohnii, как описано в примере 3) с 3 частями ARASCO, содержащего около 33% АРК (полученного из Pythium insidiosum, как описано в примере 1). Полученная микстура или смесь имеет композицию жирных кислот, представленную в табл.2.

Смесь перемешивают в соотношении одна часть смеси к четырем частям масла, обычно находящегося в составе питательной смеси для младенцев, обычно около 2,8-3,0 г на 100 мл смеси. При нормальном содержании жира 30 г жира на 1 л смеси Симилака (смесь для питания младенцев), это соответствует добавлению 750 мг приготовленной микстуры на 1 л смеси. Эта добавка обеспечивает содержание АРК и ДГК в смеси, равное их содержанию в грудном женском молоке.

Пример 6. Получение масляной смеси 2 и добавление к питательной смеси для младенцев.

Эта микстура содержит длинноцепочечные ПНЖК из растительных источников, и как полагают, будет пригодна для лиц с вегетарианской диетой. Эта смесь готовится смешиванием трех частей DHASCO, содержащего около 35% ДГК (полученного из Crypthecodinium cohnii, как описано в примере 3), с десятью частями ARASCO, содержащего около 33% АРК (полученного из Pythium insidiosum, как описано в примере 1) и пять частей EPASCO, содержащего около 5% ЭПК (полученного из N.alba, как описано в примере 4). Полученная микстура, или смесь, содержала композицию жирных кислот, представленную в табл.3. Смесь перемешивали в соотношении одна часть смеси с 30 частями масел регулярного состава смеси для младенцев. При нормальном содержании жира 30 г жира на 1 л смеси для младенцев Симилак, это должно соответствовать добавке 1 г на 1 л приготовленной смеси. Эта добавка обеспечивает содержание АРК, ДГК и ЭПК, эквивалентное их содержанию в грудном женском молоке.

Пример 7. Получение масляной смеси 3 и добавление к питательной смеси для младенцев.

Эта микстура представляет собой смесь из ARASCO и рыбьих жиров. Масляная смесь 3 готовится добавлением одной части специально приготовленного масла Menhaden (Zapata Hayne Inc.), содержащего около 9% ДГК, к одной части ARASCO, полученного из Pythium insidiosun, как описано раньше, содержащего 33 АРК. Полученная композиция жирных кислот показана в табл. 4. Эта смесь перемешивается в соотношении одна часть композиции к 30 частям масла, обычно содержащегося в составе смеси для питания младенцев. При нормальном содержании жира в ней 30 г жира на 1 л, это соответствует добавлению 1 г композиции на 1 л приготовленной смеси. Это добавка обеспечивает содержание АРК и ДГК, эквивалентной смеси. Эта добавка обеспечивает содержание АРК и ДГК, эквивалентное содержанию в грудном женском молоке а содержание ЭПК в 8 раз выше, чем в грудном молоке.

Пример 8. Получение масляной смеси 4 и добавление к питательной смеси для младенцев

Масляная смесь 4 разработана с использованием ГЛК вместо арахидоновой кислоты. Эту смесь готовят смешиванием одной части специально приготовленного масла Menhaden, содержащего около 9% ДГК (Zapata Hayne Inc.) с четырьмя частями масла из семян черной смородины, содержащего около 18% ГЛК, и одной частью DHASCO, содержащего около 35% ДГК. Полученная композиция жирных кислот показана в табл. 5. Эту смесь перемешивают из расчета одна часть смеси на четыре части масла смеси питания для младенцев. При нормальном содержании жира 30 г жира на 1 л, это должно соответствовать добавлению 750 мг на 1 л приготовленной смеси. Эта добавка обеспечивает содержание ЭПК до количеств, эквивалентных грудному женскому молоку. Содержание АРК составляет около 1/10 от количества ее в грудном женском молоке. Однако содержание ГЛК от 20 до 30 раз выше, чем содержание ГЛК в грудном женском молоке, которой там обычно содержится мало.

Пример 9. Приготовление масляной смеси 5 и ее добавление к составу питательной смеси для младенцев.

Масляная смесь 5 была разработана, чтобы обеспечить большое тождество по содержанию ДГК, АРК и ЭПК с грудным женским молоком. Это масло готовят смешиванием одной части специально полученного масла Menhaden, содержащего около 9% ДГК (Zapata Hayne Inc.) с десятью частями ARASCO, содержащего около 33% АРК, и тремя частями DHASCO, содержащего около 35% ДГК. Полученная композиция жирных кислот показана в табл.6. Эту смесь смешивают в соотношении одна часть смеси к 40 частям масла обычной питательной смеси для младенцев. При нормальном содержании жира 30 г жира на 1 л смеси для младенцев, это соответствует добавлению 750 мг/л приготовленного раствора. Эта добавка обеспечивает содержание ЭПК, ДГК и АРК до уровня их содержания в женском грудном молоке.

Пример 10. Получение масляной смеси 6 и добавление к питательной смеси для младенцев.

Эта смесь представляет собой арахидоновую и докозагексаеноевую кислоту из общего растительного источника. Эта добавка, как ожидается, рассчитана на лиц, находящихся на вегетарианской диете. Sanders et al (Amer. J. Clin. Nutr. 31: 805, 1979) количество ДГК в грудном молоке матерей-вегетарианок снижено. Принимаемая внутрь добавка из смеси масел будет увеличивать содержание ДГК в сыворотке крови и, следовательно, в грудном молоке до значений, наблюдаемых у всеядных матерей. Эту смесь готовят смешиванием одной части масла ДГК (полученного из Crypthecodinium cohnii, как описано в примере 3) с пятью частями масла АРК (полученного из Mortierella alpina, как описано с примере 2). Полученная смесь содержит композицию жирных кислот, показанную в табл. 7. Эту смесь перемешивают в соотношении одна часть к 35 частям масел стандартной питательной смеси для младенцев. При нормальном содержании жира 35 г жира на 1 л, это соответствует добавлению 1 г на 1 л приготовленной смеси. Эта добавка обеспечивает содержание АРК и ДГК, эквивалентное грудному женскому молоку.