способ получения нуклеопротеинового комплекса из отходов производства лидазы

Формула изобретения

1. Способ получения нуклеопротеидного комплекса из отходов производства лидазы, включающий измельчение, обработку раствором солей, отделение экстракта, выделение из него конечного продукта и его сушку, отличающийся тем, что измельченные отходы обрабатывают щелочным 7 10%-ным раствором хлорида натрия при соотношении отходы щелочной раствор 1 6 10, pH 8,0 8,5, полученный экстракт направляют на ультрафильтрацию с концентрированием до содержания 1,8 3,0% сухих веществ, концентрат сушат, после чего сухой продукт обрабатывают этанолом при 40 50^oС в соотношении продукт этанол 1 3 6 и сушат на воздухе.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что сушку концентрированного экстракта ДНК проводят распылительным способом при температуре распыляемого воздуха на входе сушилки (225 25)^oС, а на выходе сушильного агрегата (90 5)^oС.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что сушку концентрированного раствора ДНК проводят сублимационным способом при -30 +20^oС.

4. Способ по п.1, отличающийся тем, что сушку концентрированного раствора ДНК проводят в вакууме при 10^-1 10^-2 мм рт.ст. при 60 - 80^oС.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к получению биологически активных веществ, используемых в медицине.

Известен способ производства натриевой соли ДНК из животного сырья /Патент РФ N 2005724, кл. C 07 H 21/04/. Способ включает измельчение и гомогенизацию в цитратно-солевом растворе, обработку гомогената детергентов и концентрированным раствором хлористого натрия, обработку реакционной массы ультразвуком с частотой 8 35 кГц и интенсивностью 0,2 2,0 Вт/см², смешивание ее с кизельгуром, при соотношении сорбент: реакционная масса 1:5 - 25, фильтрование с последующим концентрированием барофильгарацией, осаждение продукта этиловым спиртом и сушку осадка соли ДНК при 20 60^oC.

Известен способ выделения ДНК /Патент РФ N 2026864, кл. C 07 H 21/04/, включающий обработку крови раствором хлорида триметилоктадециламмония в концентрации 0,5 1% в трис HCl буфере, солюбилизацию в 1 1,5 М растворе NaCl, и осаждение ДНК этанолом.

Известен способ выделения натриевой соли ДНК из тканей животного происхождения /Патент РФ N 2017496, кл. A 61 K 35/60/. Способ включает измельчение и гомогенизацию в цитратно-солевом растворе /ССЦ/, трехкратную промывку ядерного материала ССЦ. Затем отмытый ядерный материал помещают в реактор с ССЦ и 6% раствором додецилсульфата натрия в 45% этиловом спирте, нагревают до 60^oC, добавляют равный объем раствора 5 М хлористого натрия, перемешивают, охлаждают до 12 16^oC; обрабатывают реакционную массу ультразвуком, отделяют раствор ДНК от осадка балластных веществ фильтрацией реакционной массы через кизельгур на нутч-фильтре; концентрируют фильтрат на мембране с размером пор 0,45 мкм /потери ДНК при этом до 3%/, отмывают концентрат диальфильтрацией на той же мембране до отрицательной реакции на белок в пермеате.

Полученная натриевая соль ДНК имеет следующие характеристики:

содержание белка не более 1,5%

молекулярная масса 450 к Дальтон,

молекулярный эффект 44%

содержание РНК не более 2%

содержание полисахаридов не более 2%

Известен способ получения ДНК и ее солей из рыбных молок /Патент ФРГ N 1142365, кл. A 61 K 36/56/, включающий измельчение молок, обработку их раствором гидроксида натрия, обработку 80% спиртом с получением натриевой соли ДНК, обработку ее спиртом, сушку, обработку осадка раствором сульфата кальция при температуре 80^oC, фильтрацию, выделение из фильтра ДНК обработкой 75

80% спиртом, содержащим 1,8 ч. соляной кислоты, и промывку осадка спиртом, затем ацетоном с последующей сушкой на воздухе готового продукта.

Известен способ получения дезоксирибомононуклеотидов из отходов производства протаминсульфата из молок рыб /Авт. свид. N 534236 кл. A 61 K 37/10/. Способ включает растирание отходов до порошкообразного состояния, перемешивание в 7% трехуксусной кислоте, встряхивание жидкости, центрифугирование, сбор надосадочной жидкости, содержащей кислоторастворимые продукты олигонуклеотиды, мононуклеотиды, азотистые основания.

Кислотный экстракт нейтрализуют 4 N аммиаком до pH 7,0, добавляют MgSO₄7H₂O и препарат нуклеаз. Реакционную смесь подвергают инкубации в течении 24 ч. После окончания ферментативного гидролиза олигонуклеотидов и добавления 96^o гидролизного спирта, полученный раствор фильтруют, упаривают, разводят дистиллированной водой и фильтруют через активированный уголь

Разделение смеси дезоксирибонуклеотидов осуществляют, используя смолу "Дауэкс-1" в хлоридной форме, достигая первоначального разделения продуктов гидролиза ДНК.

Идентификацию фракции нуклеотидов, собранных с колонки осуществляют при помощи спектрофотометрии.

Полученные растворы дезоксирибомононуклеотидов каждый в отдельности концентрируют путем реадсорбции на ионообменных колонках, промывают водой и элюируют разбавленными растворами соляной кислоты.

В качестве прототипа выбран способ получения протаминов /1144700, кл. A 61 K 35/08/, включающий очищение молок от жира и соединительной ткани, их измельчение /гомогенизацию/ с одновременной обработкой гимогената раствором Рингера (который в своем составе содержит хлориды калия, кальция, натрия, однозамещенный фосфорнокислый калий, кислый углекислый натрий и фосфат магния), фильтрацию через хлопковую ткань. Осадок промывают раствором Рингера и центрифугируют, после чего повторно обрабатывают в 0,1 М -трис HCl, pH 8, содержанием 1,4 М NaCl. На полученный гомогенизат действуют ультразвуком и выделяют целевой продукт на катионообменнике.

Задача, решаемая изобретением переработка отходов от производства лидазы. когда в качестве сырья использовались семенники крупного рогатого скота или текучие молоки.

Сущность предлагаемого способа заключается в следующем: отходы, полученные после экстракции лидазы, обрабатывают щелочным 7 10% раствором хлорида натрия с pH 8,0 8,5 в соотношении отходы: раствор 1 6 1 10. Экстракт отделяют и подают на ультрафильтрацию с концентрированием до содержания сухих веществ 1,3 3,0% после чего концентрированный раствор сушат при температуре 85 210^oC, сухой продукт обрабатывают 96% этанолом при 40 50^oC при соотношении продукт:этанол 1 (3-6), сушат на воздухе с получением готового продукта. Содержание ДНК около 70%

Пример 1. 125 г отходов после производства лидазы из семенников крупного рогатого скота (КРС) обрабатывают 7% щелочным раствором NaCl c pH 8,0 при соотношении 1 6 (отходы: щелочной раствор) в течение 2,5 ч. Полученный экстракт направляют на ультрафильтрационный волоконный аппарат с плоскими мембранами 100 тыс. дальтон. Сконцентрированный экстракт до содержания 1,8% сухих веществ сушат в аппарате распылительной сушки марки МАРС-1, после чего сухой продукт обрабатывают этанолом при температуре 40^oC в соотношении продукт: этанол (1:3) и сушат на воздухе.

Вес полученного препарата 7 г, что составляет 6% выхода ДНК, при содержании ДНК равном 69%

Пример 2. 500 г отходов производства лидазы из семенников КРС обрабатывают 10% щелочным раствором NaCl с pH 8,5 при соотношении 1:10 (отходы: щелочной раствор) в течение 3,5 ч. Полученный экстракт направляют на ультрафильтрационный волокнистый аппарат с плоскими мембранами 100 тыс. дальтон. Сконцентрированный экстракт до содержания 3% сухих веществ сушат в аппарате растительной сушки марки МАРС-1, после чего сухой продукт обрабатывают этанолом при температуре 50^oC в соотношении продукт:этанол (1:6) и сушат на воздухе.

Выход нуклеопротеина 28 г, что составляет 5%

Содержание ДНК в продукте составляет 69%

Пример 3. Получение нуклеопротеинового комплекса из 1000 г отходов производства лидазы проводят в условиях примера 1, но сушку концентрированного экстракта ДНК проводят сублимационным способом. Для этого экстракт наливают в кюветы слоем не более 10 мм, замораживают при -30^oC и сублимируют в течении 36 часов. Вес полученного препарата 56 г, что составляет 5,6% выхода ДНК, при содержании ДНК 70%

Пример 4. Получение нуклеопротеинового комплекса из 2 г отходов производства лидазы проводят в условиях примера 2, но сушку концентрированного экстракта ДНК проводят в вакууме при 10^-1 мм рт.ст при температуре 80^oC. Вес полученного препарата 70 г, что составляет 4,0% выхода ДНК, при содержании ДНК 72%

Пример 5. Получение нуклеопротеинового комплекса из 1000 г отходов производства лидазы проводят в условиях примера 1, но сушку концентрированного экстракта ДНК проводят в вакууме при 10^-2мм рт.ст при температуре 60^oC. Вес полученного препарата 54 г, что составляет 5,4 выхода ДНК, при содержании ДНК 69%