(-)-энантиомер цис-4-амино-1-(2-гидроксиметил-1,3- оксатиолан-5-ил)-(1н)-пиримидин-2-она или его соль, или его сложный эфир, или соль его сложного эфира, смесь (-)- энантиомера и (+)-энантиомера, способы их получения, антивирусная композиция и способ лечения млекопитающих, включая человека, страдающих от вирусной инфекции или восприимчивых к ней
Классы МПК: | C07D411/04 связанные непосредственно A61K31/505 пиримидины; гидрированные пиримидины, например триметоприм C12P41/00 Способы использования ферментов или микроорганизмов для разделения рацемической смеси на оптические изомеры |
Автор(ы): | Джонатан Алан Виктор Коутс[GB], Ян Мартин Маттн[GB], Чарльз Ричард Пенн[GB], Ричард Сторер[GB], Кристофер Уильямсон[GB] |
Патентообладатель(и): | ИАФ Биокем Интернэшнл Инк. (CA) |
Приоритеты: |
подача заявки:
1991-12-28 публикация патента:
20.12.1997 |
Использование: в качестве препарата при лечении вирусных инфекций. (-) энантиомер цис-4-амино-1-(2-гидроксиметил-1,3-оксатиолан -5-ил)-(1H)-пиримидин-2-он получают, подвергая смесь (-)-энантиомера и (+)-энантиомера хиральной высокоэффективной жидкостной хроматографии или энантио-селективному катаболизму, проводимому при посредстве фермента. 6 с. и 12 з.п. ф-лы, 4 табл.
Рисунок 1
Формула изобретения
1. (-)-Энантиомер цис-4-амино-1-(2-гидроксиметил-1,3- оксатиолан-5-ил)(1Н)-пиримидин-2-она, или его соль, или его сложный эфир, или соль его сложного эфира. 2. Смесь (-)-энантиомера цис-4-амино-1-(2-гидроксиметил-1,3-оксатиолан-5-ил)-(1Н)-пиримидин-2-она и (+)-энантиомера цис-4-амино-1-(2- гидроксиметил-1,3-оксатиолан 5-ил)-(1Н)-пиримидин-2-она или их солей, или их сложных эфиров, или солей сложных эфиров, в которой (+)-энантиомер присутствует в количестве не более примерно 5 мас. 3. Смесь по п. 2, отличающаяся тем, что (+)-энантиомер присутствует в количестве не более примерно 2 мас. 4. Смесь по п. 2, отличающаяся тем, что (+)-энантиомер присутствует в количестве не более примерно 1 мас. 5. Антивирусная композиция, содержащая производное 1,3-оксатиолана и фармацевтически приемлемый носитель, отличающаяся тем, что производным 1,3-оксатиолана является (-)-энантиомер или смесь (-)-энантиомера и (+)-энантиомера цис-4-амино-1-(2-гидроксиметил-1,3-оксатиолан-5-ил)- (1Н)-пиримидин-2-она, или его солей, или его сложных эфиров, или солей сложных эфиров по любому из пп.1 4 в эффективном количестве. 6. Композиция по п.5, отличающаяся тем, что производным 1,3-оксатиолана является (-)-энантиомер цис-4-амино-1-(2- гидроксиметил-1,3-оксатиолан-5-ил)-(1Н)-пиримидин-2-она, или его соль, или его сложный эфир, или соль сложного эфира по п.1 в эффективном количестве. 7. Композиция по п.5, отличающаяся тем, что производным 1,3-оксатиолана является смесь (-)-энантиомера цис-4-амино-1-(2-гидроксиметил-1,3-оксатиолан-5-ил)- (1Н)-пиримидин-2-она и (+)-энантиомера цис-4-амино-1-(2- гидроксиметил-1,3-оксатиолан-5-ил)-(1Н)-пиримидин-2-она или их солей, или их сложных эфиров, или солей сложных эфиров по любому из пп.1 4 в эффективном количестве. 8. Способ лечения млекопитающих, включая человека, страдающих от вирусной инфекции или восприимчивых к ней, включающий назначение для приема антивирусного агента, отличающийся тем, что в качестве антивирусного агента используют антивирусную композицию по любому из пп.5 7 в эффективной дозе, определяемой по содержанию производного 1,3-оксатиолана и составляющей 0,1 -750,0 мг/кг массы тела реципиента в день. 9. Способ по п.8, отличающийся тем, что эффективное количество антивирусной композиции составляет 0,5 60,0 мг/кг массы тела реципиента в день. 10. Способ по п.8, отличающийся тем, что эффективное количество антивирусной композиции составляет 1 20 мг/кг массы тела реципиента в день. 11. Способ получения соединения по п.1, отличающийся тем, что смесь (-)-энантиомера и (+)-энантиомера подвергают хиральной высокоэффективной жидкостной хроматографии или энантиоселективному катаболизму, проводимому при посредстве фермента. 12. Способ получения смеси по любому из пп.2 4, отличающийся тем, что смесь (-)-энантиомера и (+)-энантиомера, содержащую более чем 5 мас. (+)-энантиомера, подвергают хиральной высокоэффективной жидкостной хроматографии или энантиоселективному катаболизму, проводимому при посредстве фермента. 13. Способ по п.11 или 12, отличающийся тем, что для жидкостной хроматографии в качестве стационарной фазы применяют ацетилированный бета-циклодекстрин или триацетат целлюлозы. 14. Способ по п.11 или 12, отличающийся тем, что фермент применяют в иммобилизованной форме. 15. Способ по пп.11, 12 или 14, отличающийся тем, что в качестве фермента используют цитидин-дезаминазу. 16. Способ по пп.11, 12 или 14, отличающийся тем, что в качестве фермента используют 5"-нуклеотидазу. 17. Способ по п. 11, отличающийся тем, что смесью (-)-энантиомера и (+)-энантиомера является рацемическая смесь. 18. Способ по п. 12, отличающийся тем, что смесью (-)-энантиомера и (+)-энантиомера, содержащей более 5 мас. (+)-энантиомера является рацемическая смесь.Описание изобретения к патенту
Изобретение относится к нуклеозидным аналогам и их использованию в медицине. Более конкретно, настоящее изобретение относится к нуклеозидным аналогам 1,3-оксатиолана, фармацевтическим составам на их основе и их использованию при лечении вирусных инфекций. Соединение формулы (1)![(-)-энантиомер цис-4-амино-1-(2-гидроксиметил-1,3- оксатиолан-5-ил)-(1н)-пиримидин-2-она или его соль, или его сложный эфир, или соль его сложного эфира, смесь (-)- энантиомера и (+)-энантиомера, способы их получения, антивирусная композиция и способ лечения млекопитающих, включая человека, страдающих от вирусной инфекции или восприимчивых к ней, патент № 2099338](/images/patents/373/2099338/2099338t.gif)
также известно под маркой ВСН-189 или NGPB-21 и было описано как соединение, обладающее противовирусной активностью, в частности, как средство против вируса иммунодефицита человека (ВИЧ), являющегося причиной СПИД (5 th Anti-Aids Conference, Montreal, Canada 5-9 June 1989: Abstracts T.C.O.1 and M. C. P. 63; European Patent Application Publication N 0382562). Соединение формулы (I) это рацемат двух энантиомеров формулы (1-1) и формулы (1-2):
![(-)-энантиомер цис-4-амино-1-(2-гидроксиметил-1,3- оксатиолан-5-ил)-(1н)-пиримидин-2-она или его соль, или его сложный эфир, или соль его сложного эфира, смесь (-)- энантиомера и (+)-энантиомера, способы их получения, антивирусная композиция и способ лечения млекопитающих, включая человека, страдающих от вирусной инфекции или восприимчивых к ней, патент № 2099338](/images/patents/373/2099338/2099338-2t.gif)
и было описано и исследовано в форме рацемата. В настоящее время только соединение 3-азидо-3-дезокситимидин (AZT, зидовудин, BW 509) апробировано в качестве препарата для лечения заболеваний, спровоцированных ВИЧ. Однако это соединение обладает значительным побочным действием и поэтому либо не может быть использовано, или, будучи однажды использованным, может привести к выводу из строя значительного числа больных. В связи с этим существует постоянная потребность в создании соединений, которые были бы эффективны против ВИЧ и в то же время обладали бы значительно лучшим терапевтическим индексом. К нашему удивлению недавно мы обнаружили, что оба энантиомера соединения формулы (I) обладают равным действием против ВИЧ, но один из энантиомеров ( (-)-энантиомер) обладает существенно более низкой цитотоксичностью, чем другой энантиомер. Таким образом возникает первый аспект настоящего изобретения обеспечивается (-) (или левовращающий) энантиомер соединения формулы (I) и фармацевтически приемлемые соединения на его основе. Химическая формула (-) энантиомера представлена следующим образом: (-)-цис -4-амино-(2-гидроксиметил-1,3-оксатиолан -5-ил)-(1H) -пиримидин-2-он (здесь далее соединение A). Он абсолютно стереохимичен с соединением формулы (1 -1), формула которого (2R, цис) -4-амино -1-(2-гидроксиметил-1,3-оксатиолан-5-ил) -(1H)-пиримидин-2-он. Предпочтительно, когда обеспечивается создание преимущественно свободного от соответствующего (+) -энантиомера соединения A, т.е. когда это соединение А содержит не более 5 вес/вес./ (+)-энантиомера, а более предпочтителен вариант, когда количество (+) энантиомера не превышает примерно 2 вес. /вес. и самый оптимальный вариант, когда он присутствует в количестве примерно менее 1%
Под фармацевтически приемлемыми производными подразумевают любые фармацевтически приемлемые соли, эфиры или соли таких эфиров соединения (A) или любого другого соединения, которое при введении реципиенту способно выделить (прямо или опосредованно) соединение (A) или противовирусный активный метаболит или остаток на основе этого соединения. Специалисты в данной области понимают, что соединение (A) может быть модифицировано с целью создания фармацевтически приемлемых производных на его основе, за счет функциональных групп как пиримидинового основания, так и за счет оксиметильной группы оксатиоланового кольца. Модификации за счет всех этих функциональных групп включаются в рамки настоящего изобретения. Однако особый интерес представляют фармацевтически приемлемые производные, полученные путем модификации 2-оксиметильной группы оксатиоланового кольца. Предпочтительные эфиры соединения (A) включают соединения, в которых атом водорода 2-оксиметильной группы ацильной функциональной группой R-C=0, в которой некарбонильная группировка R эфира выбрана из группы: водород, линейный или разветвленный алкил (например, метил, этил, н-пропил, трет-бутил, н-бутил), алкоксиалкил (например, метоксиметил), аралкил (например, бензил), арилоксиалкил (например, феноксиметил,) арил (например, фенил, возможно замещенный галогеном, C1-4 алкилом, или C1-4-алкоксилом); сульфоновые эфиры (например, алкил- или аралкилсульфонил, например, метансульфонил); эфиры аминокислот (например, L-валил или L -изолейцил), а также моно-, ди или трифосфаты. Что касается вышеописанных эфиров, то, если отсутствует другая спецификация, любая представленная алкильная группировка преимущественно содержит 1-16 атомов углерода, в частности 1-4 атома углерода. Любая арильная группировка, представленная в таких эфирах, преимущественно включает фенильную группу. В частности, эфирами могут быть C1-16 алкиловые эфиры, незамещенный бензиловый эфир или бензиловый эфир, замещенный по крайней мере одним атомом галогена (бромом, хлором, фтором или йодом), C1-6 алкилом, C1-6 алкокси, нитро или трифторметильной группой. Фармацевтически приемлемые соли соединения (A) включают те, которые получены из фармацевтически приемлемых неорганических и органических кислот и оснований. К подходящим кислотам относятся, например, хлористоводородная, бромистоводородная, серная, азотная, перхлорная, фумаровая, малеиновая, фосфорная, гликолевая, молочная, салициловая, янтарная, пара-толуолсульфо -, винная, уксусная, лимонная, метансульфо-, муравьиная, бензойная, малоновая, нафталин-2-сульфо-, и бензолсульфо-кислоты. Другие кислоты, такие как, щавелевая, хотя сами по себе фармацевтически не приемлемы, могут быть использованы как посредники при получении соединений настоящего изобретения и их фармацевтически приемлемых кислых солей присоединения. Соли, полученные из соответствующих оснований, включают щелочные металлы (например, натрий), щелочно-земельные металлы (например, магний), аммоний и NR+4 (где R-C1-4 алкил). Следующие здесь далее ссылки на соединения, соответствующие данному изобретению, включают и соединение (A) и его фармацевтически приемлемые производные. Соединения данного изобретения либо сами по себе обладают противовирусной активностью, либо переходят в таковые в процессе метаболизма. В частности, эти соединения эффективны при ингибировании репликации ретровирусов, включая ретровирусы человека, такие как вирус иммунодефицита человека (ВИЧ), являющийся причиной СПИДа. Таким образом здесь обеспечивается еще один аспект изобретения - соединение (A) или его фармацевтически приемлемое производное предлагается использовать в качестве активного терапевтического средства, в частности в качестве противовирусного средства, например при лечении ретровирусных инфекционных заболеваний. Еще одним или альтернативным аспектом в данном изобретении является обеспечение способа лечения вирусных инфекционных заболеваний, в частности заболеваний, причиной которых является ретровирус, такой как ВИЧ, как у животных, так и человека, способа, который включает введение эффективного количества соединения (A) или его фармацевтически приемлемого производного. В данном изобретении также обеспечивается использование соединения (A) или его фармацевтически приемлемого производного для производства медикамента для лечения вирусного заболевания. Соединения настоящего изобретения также полезны при лечении осложнений, вызванных СПИД, таких СПИД -ассоциированный комплекс (ARC), прогрессирующая генерализованная лимфоденопатия (PGL) СПИД -ассоциированные осложнения нервной системы, такие как тропический парапарез или слабоумие (деменция), анти-ВИЧ серопозитивные и ВИЧ-положительные осложнения, саркома Капоши, тромбоцитопеническая пурпура и ассоциированные инфекционные заболевания, например пневмоцистоз Pneumocystis carinii. Соединения настоящего изобретения также полезны в предотвращении прогрессии клинических заболеваний индивидуумов, анти-ВИЧ-сероположительных или ВИЧ-антиген положительных, а также в профилактике последующей устойчивости к ВИЧ. Соединение (A) или его фармацевтически приемлемые производные могут быть также использованы для предотвращения загрязнением вирусом физиологических жидкостей, таких как кровь или семенная жидкость in vitro. Специалистам, работающим в данной области понятно, что термин "лечить" здесь распространяется и на профилактику, а также на лечение установившихся инфекционных заболеваний или симптомов. Кроме того, понятно, что количество соединения (A) данного изобретения, которое необходимо для лечения может варьироваться не только в зависимости от соединения, выбранного для лечения, но также от способа его введения, природы заболевания, которое необходимо лечить, возраста и состояния больного, и может быть в конце концов представлено на усмотрение врача или ветеринара. Однако, как правило, подходящая доза может находиться в интервале от примерно 0,1 до примерно 750 мг/кг массы тела в сутки, предпочтительно в интервале от примерно 0,5 до 60 мг/кг/сутки, наиболее предпочтительно, от 1 до 20 мг/кг/сутки. Необходимая доза может обычно вводиться за один раз или же быть может осуществлено дробное введение через соответствующие интервалы, например, необходимое количество вводимого препарата может быть разбито на две, три, четыре или более суб-доз в сутки. Соединение удобно вводить в единицах лекарственной формы, содержащей например, от 10 до 1500 мг, обычно от 20 до 1000 мг, и более удобно, когда содержится от 50 до 700 мг активного ингредиента на единицу лекарственной формы. В идеальном варианте активный ингредиент следует вводить в таком количестве, чтобы пик концентраций активного ингредиента в плазме составлял примерно от 1 до 75
![(-)-энантиомер цис-4-амино-1-(2-гидроксиметил-1,3- оксатиолан-5-ил)-(1н)-пиримидин-2-она или его соль, или его сложный эфир, или соль его сложного эфира, смесь (-)- энантиомера и (+)-энантиомера, способы их получения, антивирусная композиция и способ лечения млекопитающих, включая человека, страдающих от вирусной инфекции или восприимчивых к ней, патент № 2099338](/images/patents/373/2099187/956.gif)
![(-)-энантиомер цис-4-амино-1-(2-гидроксиметил-1,3- оксатиолан-5-ил)-(1н)-пиримидин-2-она или его соль, или его сложный эфир, или соль его сложного эфира, смесь (-)- энантиомера и (+)-энантиомера, способы их получения, антивирусная композиция и способ лечения млекопитающих, включая человека, страдающих от вирусной инфекции или восприимчивых к ней, патент № 2099338](/images/patents/373/2099049/946.gif)
![(-)-энантиомер цис-4-амино-1-(2-гидроксиметил-1,3- оксатиолан-5-ил)-(1н)-пиримидин-2-она или его соль, или его сложный эфир, или соль его сложного эфира, смесь (-)- энантиомера и (+)-энантиомера, способы их получения, антивирусная композиция и способ лечения млекопитающих, включая человека, страдающих от вирусной инфекции или восприимчивых к ней, патент № 2099338](/images/patents/373/2099338/2099338-3t.gif)
в которой аномерная группа L является замещаемой группой, подвергается взаимодействию с соответствующим основанием. Подходящие группы L включают - OR, где R алкильная группа, например C1-6 алкильная группа, такая как метильная группа или R представляет ацильную группу, например C1-6 ацильная группа, такая как ацетил или галоген, например йод, бром или хлор. Соединение формулы YIII преимущественно взаимодействует с предшественником пиримидинового основания (предварительное силилированное основание таким силилирующим средством, как гексаметилдисилазан) или цитозином в подходящем растворителе, таком как метиленхлорид, с использованием кислоты Льюиса, такой как тетрахлорид титана, олова IY, соединения, например, SnCl4 или триметилсилилтрифлат. 1,3-оксатиолан формулы (YIII) может быть получен, например, при взаимодействии альдегида формулы (YII) с меркаптоацеталем формулы (YI) в подходящем органическом растворителе, таком как толуол в присутствии кислотного катализатора, например, кислоты Льюиса, такой как хлорид цинка. (HSCH2CH(OC2H5)2 формула (YI) и C6H5CO2CH2CHO формула (YII). Меркаптоацетали формулы (YI) могут быть получены способами, которые известны специалистам в данной области, например, G.Hesseul. Jorder, Chem. Ber 85, 924-932 (1952). Альдегиды формулы (YII) могут быть получены согласно известным методам, например, E. G. Halloquist и H.Hibbert, Can. J.Research, 8, 129-136 (1933). Преимущественно неочищенный альдегид (YII) может быть очищен путем превращения в кристаллический бисульфитный аддукт присоединения с последующим восстановлением этого аддукта в свободный альдегид. Во втором процессе (B) соединение (A) получают путем интерконверсии соединения формулы (IX)
![(-)-энантиомер цис-4-амино-1-(2-гидроксиметил-1,3- оксатиолан-5-ил)-(1н)-пиримидин-2-она или его соль, или его сложный эфир, или соль его сложного эфира, смесь (-)- энантиомера и (+)-энантиомера, способы их получения, антивирусная композиция и способ лечения млекопитающих, включая человека, страдающих от вирусной инфекции или восприимчивых к ней, патент № 2099338](/images/patents/373/2099338/2099338-4t.gif)
в которой B-представляет основание, превращаемое в цитозин. Такая интерконверсия может быть осуществлена либо путем простой химической трансформации (например, конверсии урацила в цитозин), или путем ферментативного превращения с использованием деоксирибозилтрансферазы. Такие способы и условия для интерконверсии основания хорошо известны специалистам в области химии нуклеозидов. В третьем процессе (C) соединение формулы (XI)
![(-)-энантиомер цис-4-амино-1-(2-гидроксиметил-1,3- оксатиолан-5-ил)-(1н)-пиримидин-2-она или его соль, или его сложный эфир, или соль его сложного эфира, смесь (-)- энантиомера и (+)-энантиомера, способы их получения, антивирусная композиция и способ лечения млекопитающих, включая человека, страдающих от вирусной инфекции или восприимчивых к ней, патент № 2099338](/images/patents/373/2099338/2099338-5t.gif)
может быть превращено в соединение (A) путем конверсии аномерной NH2 группы в цитозиновое основание способами, хорошо известными специалистам в химии нуклеозидов. В большинстве реакций, описанных здесь выше, сообщалось в контексте нуклеозидного синтеза, например, в книге Аналоги нуклеозидов Химия, Биология и Применение в медицине, R.T.Walker и др. eds, Plenum Press, New York (1979), с. 165-192; T. Ueda в работе "Химия нуклеозидов и нуклеотидов", т.1, L.B. Townsend ed, Plenum Press, New York (1988) с.165-192. Следует понять, что вышеприведенные реакции для своего осуществления могут нуждаться в использовании исходных материалов, имеющих защищенные функциональные группы, и вследствие этого может понадобиться либо на промежуточной, либо на конечной стадии снятие защитной группы для получения необходимого соединения. Защита и снятие защиты функциональных групп может осуществляться с использованием традиционных методов. Так, например, аминогруппы могут быть защищены группой, выбранной из следующей группы: аралкил (например, бензил), а ацил, арил, (например, 2,4 динитрофенил) или силил; последующее удаление защитной группы осуществляется, если это необходимо, путем гидролиза или гидрогенолиза в подходящих стандартных условиях. Гидроксильная группа может быть защищена с использованием любых традиционных гидроксилзащитных групп, например, описанных в книге "Защитные группы в органической химии", Ed.J.F.W. Mcomie Plenum Press, 1973) или "Защитные группы в органическом синтезе" Theodora W.Greene (John Wiley and Sons, 1981). К подходящим гидроксилзащитным группам относятся, например, алкил (например, метил, трет.бутил, или метоксиметил), аралкил (например, бензил, дифенилметил, или трифенилметил), гетероциклические группы, такие как тетрагидропиранил, ацил (например, ацетил, или бензоил) и силильные группы, такие как триалкилсилил (например, трет-бут илдиметилсилил). Гидроксилзащищающие группы могут быть удалены традиционными способами. Так, например, алкил, силил, ацил и гетероциклические защитные группы можно удалить путем сольволиза, например, при гидролизе в присутствии кислоты или основания. Аралкильные защитные группы могут быть удалены, например, такие как трифенилметил, аналогично путем сольволиза, например, путем гидролиза в кислой среде. Такие аралкильные группы, как бензил, можно отщепить, например, путем обработки BF3эфиратом и уксусным ангидридом с последующим удалением образующихся при этом ацетатных групп на соответствующей стадии синтеза. Силильные группы можно удалить, использовав для этих целей источник фторидионов, такой как тетра-н-бутиламмоний фторид. В предыдущих процессах соединение (A), как правило, получают в виде смеси цис- и транс-изомеров, из которых цис -изомер представляет интерес. Это изомеры могут быть разделены физическими методами, например путем хроматографирования на силикагеле, или путем фракционной кристаллизации, с использованием либо непосредственно самого соединения или подходящего производного этого соединения, например ацетатов (полученных, например, при воздействии с уксусным ангидридом), которые затем возвращают после разделения в исходный продукт (например, путем деацетилирования в метанольном растворе аммиака). Фармацевтически приемлемые соли настоящего изобретения могут быть получены в соответствии с описанием, приведенным в патенте США N4383114, раскрытие которого дается здесь как ссылка. Так, например, когда хотят получить кислую соль присоединения соединения (A), продукт из любого вышеприведенного способа может быть превращен в соль путем обработки полученного свободного основания подходящей кислотой с использованием традиционных методов. Фармацевтически приемлемые кислые соли присоединения могут быть получены при взаимодействии свободного основания с соответствующей кислотой возможно в присутствии подходящего растворителя, такого как эфир, например этилацетата, или спирта, например этанола, метанола или изопропанола. Неорганические основные соли могут быть получены при взаимодействии исходного соединения с подходящим основанием, таким как алкоксид, например метоксид натрия, возможно в присутствии растворителя, такого как спирт, например метанол. Фармацевтически приемлемые соли могут быть также получены из других солей, включая фармацевтически приемлемые соли, соединения (A) с использованием стандартных методов. Соединение (A) может быть превращено в фармацевтически приемлемый фосфат или другую соль (эфир) при взаимодействии с фосфорилирующим соединением, таким как POCl3 или подходящим этерифицирующим агентом, таким как галоидангидрид или ангидрид. Эфир или соль соединения (A) могут быть превращены в исходное соединение (A) путем гидролиза. Разделение конечного продукта или промежуточного продукта или исходного материала может быть осуществлено известными способами, описанными, например, "Стереохимия соединений углерода" E. L. Eliel (McGraw Hill, 1962) и "Таблицы растворителей" S.H.Wilen. Так, например, соединение (A) может быть получено методом хиральной ВЭЖХ с использованием подходящей стационарной фазы, например ацетилированного
![(-)-энантиомер цис-4-амино-1-(2-гидроксиметил-1,3- оксатиолан-5-ил)-(1н)-пиримидин-2-она или его соль, или его сложный эфир, или соль его сложного эфира, смесь (-)- энантиомера и (+)-энантиомера, способы их получения, антивирусная композиция и способ лечения млекопитающих, включая человека, страдающих от вирусной инфекции или восприимчивых к ней, патент № 2099338](/images/patents/373/2099049/946.gif)
5-метокси-1,3-оксатиолан-2-метанол -бензоат. Раствор хлорида цинка (1,6 г) в горячем метаноле (15 мл) добавили при перемешивании к перемешиваемому раствору меркаптоацетальдегида, диметилацеталя (34,2 г) и бензоилоксиацетальдегида (48,3 г) в толуоле (1300 мл), затем полученный раствор нагревали с обратным холодильником в токе азота в течение 50 мин. Охлажденную смесь сконцентрировали, разбавили некоторым количеством толуола, затем отфильтровали через кизельгур. Соединенные фильтраты и толуол промыли насыщенным раствором водного бикарбоната натрия дважды и рассолом, высушили (MgSO4), затем упарили до масла, которое пропустили через хроматографическую колонку, заполненную диоксидом кремния (2 кг, Merck 9385), проэлюировали хлороформом и получили озаглавленный продукт в виде масла (45,1 г), представляющего смесь аномеров (1:1); параметры ЯМР спектра (DMCO-d6) d (3,1 -3,3 (4H), 3,42 (6H), 4,4-4,6 (4H), 5,41 (1H), 5,46 (1H), 5,54 (1H), 5,63 (1H), 7,46 (4H), 7,58 (2H), 8,07 (4H); j макс (CHBr3) 1717 см-1. Промежуточный продукт 2
(+)-цис-1-(2-бензоилоксиметил-1,3 -оксатиолан-5-ил)-(1H)- пиримидин-2-4 -дион
Смесь тщательно измельченного урацила (9,62 г), гексаметилсилазана (50 мл) и сульфата аммония (30 мг) нагрели с обратным холодильником в токе азота, нагревали до тех пор пока раствор не стал прозрачным. Этот раствор охладили и затем упарили до образования бесцветного масла, которое затем растворили в атмосфере азота в ацетонитриле (50 мл). Раствор добавили к перемешиваемому охлажденному льдом раствору 5-метокси -1,3-оксатиолан-2 - метанолабензоата/промежуточное соединение 1/ (19,43 г) в ацетонитриле (600 мл) и добавили триметилсилилтрифторметансульфонат (14,7 мл). Удалили ледяную баню и раствор нагревали в течение 45 мин в токе азота. После охлаждения и упаривания, остаток очистили методом колоночной хроматографии, пропустив над 1 кг силикагеля (Merck 9385) и проэлюировав смесью хлороформ: метанол 9:1. Нужные фракции охладили и упарили, получив в результате сырой остаток. Этот остаток подвергли фракционной кристаллизации из минимального количества горячего метанола (1200 мл), в результате получили озаглавленное соединение (6,32 г) в виде белых кристаллов. Параметры ЯМР спектра: (DMCO-db/ d 11,36 (1H, м);
7,50-8,00 (6H, м); 6,20 (1H, м); 5,46 (2H, м);
4,62 (2H, м); 3,48 (1H, м); 3,25 (1H, м). Промежуточное соединение 3
(
![(-)-энантиомер цис-4-амино-1-(2-гидроксиметил-1,3- оксатиолан-5-ил)-(1н)-пиримидин-2-она или его соль, или его сложный эфир, или соль его сложного эфира, смесь (-)- энантиомера и (+)-энантиомера, способы их получения, антивирусная композиция и способ лечения млекопитающих, включая человека, страдающих от вирусной инфекции или восприимчивых к ней, патент № 2099338](/images/patents/373/2099030/177.gif)
Метод (a)
Суспензию цитозина (20,75 г) и сульфата аммония несколько мл в гексаметилдисилазане (110 мл) перемешивали и нагревали с обратным холодильником в течение двух с половиной часов в токе азота. Растворитель удалили упариванием, а твердый остаток растворили в сухом ацетонитриле (350 мл). Этот раствор перенесли, используя гибкую иглу, в перемешиваемый, охлажденный льдом раствор 5-метокси-1,3 оксатиолан-2-метанол бензоата (промежуточное соединение 1) (43,57 г) в ацетонитриле (650 мл) в токе азота. Добавили триметилсилилтрифторметансульфонат (33 мл), раствору позволили нагреться до комнатной температуры (1,5 ч), затем в течение ночи нагревали с обратным холодильником. Оставшуюся смесь сконцентрировали, разбавили насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (500 мл), затем проэкстрагировали этилацетатом (3
![(-)-энантиомер цис-4-амино-1-(2-гидроксиметил-1,3- оксатиолан-5-ил)-(1н)-пиримидин-2-она или его соль, или его сложный эфир, или соль его сложного эфира, смесь (-)- энантиомера и (+)-энантиомера, способы их получения, антивирусная композиция и способ лечения млекопитающих, включая человека, страдающих от вирусной инфекции или восприимчивых к ней, патент № 2099338](/images/patents/373/2099008/183.gif)
![(-)-энантиомер цис-4-амино-1-(2-гидроксиметил-1,3- оксатиолан-5-ил)-(1н)-пиримидин-2-она или его соль, или его сложный эфир, или соль его сложного эфира, смесь (-)- энантиомера и (+)-энантиомера, способы их получения, антивирусная композиция и способ лечения млекопитающих, включая человека, страдающих от вирусной инфекции или восприимчивых к ней, патент № 2099338](/images/patents/373/2099008/183.gif)
![(-)-энантиомер цис-4-амино-1-(2-гидроксиметил-1,3- оксатиолан-5-ил)-(1н)-пиримидин-2-она или его соль, или его сложный эфир, или соль его сложного эфира, смесь (-)- энантиомера и (+)-энантиомера, способы их получения, антивирусная композиция и способ лечения млекопитающих, включая человека, страдающих от вирусной инфекции или восприимчивых к ней, патент № 2099338](/images/patents/373/2099114/948.gif)
3,14 (1H); 3,50 (1H); 4,07 (2H); 5,52 (1H);
5,66 (1H); 6,28 (1H); 7,22 (2H); 7,56
(2H); 7,72 (2H); 8,10 (2H). Метод (b)
Оксихлорид фосфора (7,0 мл) по каплям добавили к перемешиваемой, охлаждаемой льдом суспензии 1,2,4 -триазола (11,65 г) в ацетонитриле (120 мл), затем, сохраняя температуру внутри реакционного сосуда ниже 15oC, по каплям добавили триэтиламин (22,7 мл). Через 10 мин медленно добавили раствор (
![(-)-энантиомер цис-4-амино-1-(2-гидроксиметил-1,3- оксатиолан-5-ил)-(1н)-пиримидин-2-она или его соль, или его сложный эфир, или соль его сложного эфира, смесь (-)- энантиомера и (+)-энантиомера, способы их получения, антивирусная композиция и способ лечения млекопитающих, включая человека, страдающих от вирусной инфекции или восприимчивых к ней, патент № 2099338](/images/patents/373/2099030/177.gif)
![(-)-энантиомер цис-4-амино-1-(2-гидроксиметил-1,3- оксатиолан-5-ил)-(1н)-пиримидин-2-она или его соль, или его сложный эфир, или соль его сложного эфира, смесь (-)- энантиомера и (+)-энантиомера, способы их получения, антивирусная композиция и способ лечения млекопитающих, включая человека, страдающих от вирусной инфекции или восприимчивых к ней, патент № 2099338](/images/patents/373/2099008/183.gif)
(
![(-)-энантиомер цис-4-амино-1-(2-гидроксиметил-1,3- оксатиолан-5-ил)-(1н)-пиримидин-2-она или его соль, или его сложный эфир, или соль его сложного эфира, смесь (-)- энантиомера и (+)-энантиомера, способы их получения, антивирусная композиция и способ лечения млекопитающих, включая человека, страдающих от вирусной инфекции или восприимчивых к ней, патент № 2099338](/images/patents/373/2099030/177.gif)
Суспензию (цис)-4-амино-1-(2 -бензоилоксиметил-1,3-оксатиолан- 5-ил) -(1H)-пиримидин-2-она (промежуточное соединение 3) (8,19 г) и Амберлитовой смолы IPA-400 (OH) (8,24 г) в метаноле (250 мл) перемешивали и нагревали с обратным холодильником в течение 1 ч 15 мин. Твердые вещества отфильтровывали, затем промывали метанолом. Объединенные фильтраты упаривали. Остаток растирали с этил-ацетатом (80 мл). Полученный белый остаток отфильтровывали, получая указанный в заголовке продукт (5,09 г), параметры ЯМР спектра 1H ЯМР (DMCO d6) d 3,04 (1H), 3,40 (1H), 3,73 (2H), 5,18 (1H), 5,29 (1H), 5,73 (1H), 6,21 (1H), 7,19 (2H), 7,81 (1H). Пример 2. Хиральное ВЗЖХ разделение энантиомеров (
![(-)-энантиомер цис-4-амино-1-(2-гидроксиметил-1,3- оксатиолан-5-ил)-(1н)-пиримидин-2-она или его соль, или его сложный эфир, или соль его сложного эфира, смесь (-)- энантиомера и (+)-энантиомера, способы их получения, антивирусная композиция и способ лечения млекопитающих, включая человека, страдающих от вирусной инфекции или восприимчивых к ней, патент № 2099338](/images/patents/373/2099030/177.gif)
Колонка: Меrcк Hibar триацетат целлюлозы, 250
![(-)-энантиомер цис-4-амино-1-(2-гидроксиметил-1,3- оксатиолан-5-ил)-(1н)-пиримидин-2-она или его соль, или его сложный эфир, или соль его сложного эфира, смесь (-)- энантиомера и (+)-энантиомера, способы их получения, антивирусная композиция и способ лечения млекопитающих, включая человека, страдающих от вирусной инфекции или восприимчивых к ней, патент № 2099338](/images/patents/373/2099008/183.gif)
Элюент: этанол
Скорость потока: 3 мл/мин
Детектор: УФ, 270 нм
Температура: комнатная. Выпаривание соответствующих собранных фракций, давало (-)-(2R, цис) -4-амино-1-(2-гидроксиметил-1,3-оксатиолан-5-ил)-(1H)-пиримидин- 2-она (6,8 мг примерно 100%) [
![(-)-энантиомер цис-4-амино-1-(2-гидроксиметил-1,3- оксатиолан-5-ил)-(1н)-пиримидин-2-она или его соль, или его сложный эфир, или соль его сложного эфира, смесь (-)- энантиомера и (+)-энантиомера, способы их получения, антивирусная композиция и способ лечения млекопитающих, включая человека, страдающих от вирусной инфекции или восприимчивых к ней, патент № 2099338](/images/patents/373/2099048/945.gif)
![(-)-энантиомер цис-4-амино-1-(2-гидроксиметил-1,3- оксатиолан-5-ил)-(1н)-пиримидин-2-она или его соль, или его сложный эфир, или соль его сложного эфира, смесь (-)- энантиомера и (+)-энантиомера, способы их получения, антивирусная композиция и способ лечения млекопитающих, включая человека, страдающих от вирусной инфекции или восприимчивых к ней, патент № 2099338](/images/patents/373/2099048/945.gif)
Колонка: ASTEC циклобонд 1 ацетил, 250% 4,6 мм;
Элюент: 0,2% ацетат триэтиламмония (получен добавлением ледяной уксусной кислоты к 0,2% раствору триэтиламина в воде до конечной величины pH 9,2);
Скорость потока: 2 мл/мин;
Детектор: УФ, 500 нм;
Температура: комнатная. Выпаривание соответствующих фракций давало неочищенный
(-)(2R, цис)-4-амино-1-(2-гидроксиметил-1,3-оксатиолан-5-ил)-(1H) -пиримидин-2-он (25 мг) и неочищенный (+)(2S, цис)-4-амино-1-(2- гидроксиметил -1,3-оксатиолан-5-ил)-(1H)-пиримидин-2-он (17 мг). Эти фракции раздельно подвергали дальнейшей препаративной БЭЖХ в следующих условиях:
Колонка: ASTEC циклобонд 1 ацетил, 250
![(-)-энантиомер цис-4-амино-1-(2-гидроксиметил-1,3- оксатиолан-5-ил)-(1н)-пиримидин-2-она или его соль, или его сложный эфир, или соль его сложного эфира, смесь (-)- энантиомера и (+)-энантиомера, способы их получения, антивирусная композиция и способ лечения млекопитающих, включая человека, страдающих от вирусной инфекции или восприимчивых к ней, патент № 2099338](/images/patents/373/2099008/183.gif)
Элюент: 15 мМ ацетат аммония, pH 6,8;
Скорость потока: 0,5 мл/мин;
Детектор: УФ, 300 нм;
Температура: 5oC. Упаривание соответствующих собранных фракций давало 5,0 мг (около 91%) (-)(2R, цис)-4-амино-1-(2-гидроксиметил-1,3-оксатиолан-5- ил)-(1H) -пиримидин-2-она и 7,6 мг (около 96%) (+)(2S, цис)-4-амино-1- (2-гидроксиметил -1,3-оксатиолан-5-ил)-(1H)-пиримидин-2 -она. Пример 3. (-)-(2R, цис)-4-амино-1-(2 -гидроксиметил-1,3-оксатиолан-5-ил)- (1H) -пиримидин-2-он. (i)(
![(-)-энантиомер цис-4-амино-1-(2-гидроксиметил-1,3- оксатиолан-5-ил)-(1н)-пиримидин-2-она или его соль, или его сложный эфир, или соль его сложного эфира, смесь (-)- энантиомера и (+)-энантиомера, способы их получения, антивирусная композиция и способ лечения млекопитающих, включая человека, страдающих от вирусной инфекции или восприимчивых к ней, патент № 2099338](/images/patents/373/2099030/177.gif)
![(-)-энантиомер цис-4-амино-1-(2-гидроксиметил-1,3- оксатиолан-5-ил)-(1н)-пиримидин-2-она или его соль, или его сложный эфир, или соль его сложного эфира, смесь (-)- энантиомера и (+)-энантиомера, способы их получения, антивирусная композиция и способ лечения млекопитающих, включая человека, страдающих от вирусной инфекции или восприимчивых к ней, патент № 2099338](/images/patents/373/2099030/177.gif)
![(-)-энантиомер цис-4-амино-1-(2-гидроксиметил-1,3- оксатиолан-5-ил)-(1н)-пиримидин-2-она или его соль, или его сложный эфир, или соль его сложного эфира, смесь (-)- энантиомера и (+)-энантиомера, способы их получения, антивирусная композиция и способ лечения млекопитающих, включая человека, страдающих от вирусной инфекции или восприимчивых к ней, патент № 2099338](/images/patents/373/2099108/955.gif)
1H ЯМР (D20)
![(-)-энантиомер цис-4-амино-1-(2-гидроксиметил-1,3- оксатиолан-5-ил)-(1н)-пиримидин-2-она или его соль, или его сложный эфир, или соль его сложного эфира, смесь (-)- энантиомера и (+)-энантиомера, способы их получения, антивирусная композиция и способ лечения млекопитающих, включая человека, страдающих от вирусной инфекции или восприимчивых к ней, патент № 2099338](/images/patents/373/2099114/948.gif)
![(-)-энантиомер цис-4-амино-1-(2-гидроксиметил-1,3- оксатиолан-5-ил)-(1н)-пиримидин-2-она или его соль, или его сложный эфир, или соль его сложного эфира, смесь (-)- энантиомера и (+)-энантиомера, способы их получения, антивирусная композиция и способ лечения млекопитающих, включая человека, страдающих от вирусной инфекции или восприимчивых к ней, патент № 2099338](/images/patents/373/2099030/177.gif)
[
![(-)-энантиомер цис-4-амино-1-(2-гидроксиметил-1,3- оксатиолан-5-ил)-(1н)-пиримидин-2-она или его соль, или его сложный эфир, или соль его сложного эфира, смесь (-)- энантиомера и (+)-энантиомера, способы их получения, антивирусная композиция и способ лечения млекопитающих, включая человека, страдающих от вирусной инфекции или восприимчивых к ней, патент № 2099338](/images/patents/373/2099048/945.gif)
![(-)-энантиомер цис-4-амино-1-(2-гидроксиметил-1,3- оксатиолан-5-ил)-(1н)-пиримидин-2-она или его соль, или его сложный эфир, или соль его сложного эфира, смесь (-)- энантиомера и (+)-энантиомера, способы их получения, антивирусная композиция и способ лечения млекопитающих, включая человека, страдающих от вирусной инфекции или восприимчивых к ней, патент № 2099338](/images/patents/373/2099338/176.gif)
1H ЯМР (DMCO)
![(-)-энантиомер цис-4-амино-1-(2-гидроксиметил-1,3- оксатиолан-5-ил)-(1н)-пиримидин-2-она или его соль, или его сложный эфир, или соль его сложного эфира, смесь (-)- энантиомера и (+)-энантиомера, способы их получения, антивирусная композиция и способ лечения млекопитающих, включая человека, страдающих от вирусной инфекции или восприимчивых к ней, патент № 2099338](/images/patents/373/2099114/948.gif)
![(-)-энантиомер цис-4-амино-1-(2-гидроксиметил-1,3- оксатиолан-5-ил)-(1н)-пиримидин-2-она или его соль, или его сложный эфир, или соль его сложного эфира, смесь (-)- энантиомера и (+)-энантиомера, способы их получения, антивирусная композиция и способ лечения млекопитающих, включая человека, страдающих от вирусной инфекции или восприимчивых к ней, патент № 2099338](/images/patents/373/2099048/945.gif)
ЯРМ (DMCO)
![(-)-энантиомер цис-4-амино-1-(2-гидроксиметил-1,3- оксатиолан-5-ил)-(1н)-пиримидин-2-она или его соль, или его сложный эфир, или соль его сложного эфира, смесь (-)- энантиомера и (+)-энантиомера, способы их получения, антивирусная композиция и способ лечения млекопитающих, включая человека, страдающих от вирусной инфекции или восприимчивых к ней, патент № 2099338](/images/patents/373/2099114/948.gif)
![(-)-энантиомер цис-4-амино-1-(2-гидроксиметил-1,3- оксатиолан-5-ил)-(1н)-пиримидин-2-она или его соль, или его сложный эфир, или соль его сложного эфира, смесь (-)- энантиомера и (+)-энантиомера, способы их получения, антивирусная композиция и способ лечения млекопитающих, включая человека, страдающих от вирусной инфекции или восприимчивых к ней, патент № 2099338](/images/patents/373/2099008/183.gif)
![(-)-энантиомер цис-4-амино-1-(2-гидроксиметил-1,3- оксатиолан-5-ил)-(1н)-пиримидин-2-она или его соль, или его сложный эфир, или соль его сложного эфира, смесь (-)- энантиомера и (+)-энантиомера, способы их получения, антивирусная композиция и способ лечения млекопитающих, включая человека, страдающих от вирусной инфекции или восприимчивых к ней, патент № 2099338](/images/patents/373/2099008/183.gif)
![(-)-энантиомер цис-4-амино-1-(2-гидроксиметил-1,3- оксатиолан-5-ил)-(1н)-пиримидин-2-она или его соль, или его сложный эфир, или соль его сложного эфира, смесь (-)- энантиомера и (+)-энантиомера, способы их получения, антивирусная композиция и способ лечения млекопитающих, включая человека, страдающих от вирусной инфекции или восприимчивых к ней, патент № 2099338](/images/patents/373/2099008/183.gif)
![(-)-энантиомер цис-4-амино-1-(2-гидроксиметил-1,3- оксатиолан-5-ил)-(1н)-пиримидин-2-она или его соль, или его сложный эфир, или соль его сложного эфира, смесь (-)- энантиомера и (+)-энантиомера, способы их получения, антивирусная композиция и способ лечения млекопитающих, включая человека, страдающих от вирусной инфекции или восприимчивых к ней, патент № 2099338](/images/patents/373/2099008/183.gif)
![(-)-энантиомер цис-4-амино-1-(2-гидроксиметил-1,3- оксатиолан-5-ил)-(1н)-пиримидин-2-она или его соль, или его сложный эфир, или соль его сложного эфира, смесь (-)- энантиомера и (+)-энантиомера, способы их получения, антивирусная композиция и способ лечения млекопитающих, включая человека, страдающих от вирусной инфекции или восприимчивых к ней, патент № 2099338](/images/patents/373/2099008/183.gif)
Колонка: капилярный патрон, Сферисорб ODS 2(5m M), 150
![(-)-энантиомер цис-4-амино-1-(2-гидроксиметил-1,3- оксатиолан-5-ил)-(1н)-пиримидин-2-она или его соль, или его сложный эфир, или соль его сложного эфира, смесь (-)- энантиомера и (+)-энантиомера, способы их получения, антивирусная композиция и способ лечения млекопитающих, включая человека, страдающих от вирусной инфекции или восприимчивых к ней, патент № 2099338](/images/patents/373/2099008/183.gif)
Детектор: УФ, 270 нм
Времена удерживания: BCH-189)-5 мин, дезаминированный BCH-189 8. 1 мин. 2. Аналитическая хиральная ВЭЖХ
Колонка: Циклобонд 1 ацетил, 250
![(-)-энантиомер цис-4-амино-1-(2-гидроксиметил-1,3- оксатиолан-5-ил)-(1н)-пиримидин-2-она или его соль, или его сложный эфир, или соль его сложного эфира, смесь (-)- энантиомера и (+)-энантиомера, способы их получения, антивирусная композиция и способ лечения млекопитающих, включая человека, страдающих от вирусной инфекции или восприимчивых к ней, патент № 2099338](/images/patents/373/2099008/183.gif)
Элюент: 0,2% раствор триэтиламмоний ацетата (pH 7,2)
Скорость потока 1,0 мл/мин
Детектор: УФ, 270 нм
Времена удерживания BCH-189 11,0 и 12,5 мин, дезаминированный BCH-189 8,5 и 10,2 мин. (Биопревращение отслеживалось путем наблюдения за снижением пика в момент 12,5 мин и накоплением продукта в момент 10,2 мин.). Пример 5
(-)-цис-4-амино-1-/2-гидроксиметил -1,3-оксатиолан-5-ил)-(1H) -пиримидин-2 -он
Бактериальные петли B клеток E.coli (ATCC 32848), снятые с хорошо проросших чашек с питательным агаром, были использованы для инокуляции двух колб Florence каждая из которых содержала 250 мл питательного бульона. Культуру инкубировали при 37oC при встряхивании (250 об/мин, 5 см) в течение 18 ч. Затем содержимое этих колб было использовано для инокуляции 40 л СДД-среды с цитидином в 70-литровом ферментере. Условия ферментации были следующие: аэрация 40 л/мин, скорость перемешивания 750 об/мин при температуре 37oC. Три импеллера Rushton были вставлены в ферментер. Ферментационный процесс длился 18 ч, затем выращенный урожай собрали, использовав центрифугу Sharples для непрерывного центрифугирования. Клеточную пасту (вес влажный 150 г) заморозили при -20oC прежде чем провести разрушение клеток. СДД среда г/л
L-глутаминовая кислота 3
MgSO4 0,2
K2SO4 2,5
NaCl 2,3
NaH2BO4 0,6
Na2HPO4 1,1
Была приготовлена эта среда на дистиллированной воде. Простерилизована при 121oC в течение 30 мин. Цитидин (1,2 г/л) был простерилизован и добавлен перед иннокуляцией. Замороженная клеточная паста (150 г) была оттаяна и суспендирована в 750 мл 100 мМ HEPES(N-[2-гидроксиэтил]пиперазин-N"-2- этансульфокислота])буфера (pH 7,5), содержащем 1 мМ этилендиаминтетрауксусной кислоты (натриевая соль) и 1 мМ дитиотрейтола (разрушающий буферный раствор). Клетки были разрушены в результате пропускания суспензии через Manton-Baulin гомогенизатор под давлением 7500 фунт/дюйм2 (42
![(-)-энантиомер цис-4-амино-1-(2-гидроксиметил-1,3- оксатиолан-5-ил)-(1н)-пиримидин-2-она или его соль, или его сложный эфир, или соль его сложного эфира, смесь (-)- энантиомера и (+)-энантиомера, способы их получения, антивирусная композиция и способ лечения млекопитающих, включая человека, страдающих от вирусной инфекции или восприимчивых к ней, патент № 2099338](/images/patents/373/2099008/183.gif)
A. Следующий состав получен путем влажной грануляции ингредиентов с раствором провидона в воде, высушивания и проверки, вслед за которой идет добавление стеарата магния и прессование. (a) Активный ингредиент 250
(b) Лактоза Б.Ф. 210
(c) Провидон Б.Ф. 15
(d) Натрия крахмальный эликолят 20
(e) Магния стеарат 5 500
B. Следующий состав получен непосредственным прессованием; лактоза -непосредственный компонент прессования мг/таблетка
Активный ингредиент 250
Лактоза 145
Авицел 100
Магния стеарат 5
Итого 500
C. (Состав с контролируемым выделением). Этот состав получен путем влажной грануляции ингредиентов с раствором провидона в воде, сушкой и скринингом, за которым следует добавление стеарата магния и прессование. - мг/таблетка
(a) Активный ингредиент 500
(b) Оксипропилметилцеллюлоза 112
(c) Лактоза Б.Ф. 53
(d) Провидон Б.Ф. 28
(e) Магния стеарат 7
Итого 700
Пример 7
Состав для капсул
Состав для капсул получен путем смешения ингредиентов и заполнения этой смесью капсулы, состоящей из двух частей. Капсула изготовлена из жесткого желатина мг/капсула
Активный ингредиент 125
Лактоза 72,5
Авицел 50
Магния стеарат 2,5
Итого 250
Пример 8
Состав для инъекций
Активный ингредиент 0,200 г, раствор гидроксида натрия, 0,1 М для доведения pH до примерно 11, стерильная вода до 10 мл. Активный ингредиент суспендируют в некотором количестве воды, которая может быть подогрета, и pH доводят до примерно 11 раствором гидроксида натрия. Дозировку затем доводят до требуемого объема и фильтруют через стерильный градуированный мембранный фильтр в стерильную стеклянную ампулу объемом 10 мл и закупоривают стерильной пробкой и запечатывают сверху изолирующим слоем. Пример 9 мг/суппозиторный
Активный ингредиент 250
Твердый жир Б.Ф. 1770
Итого 2020
Одну пятую часть твердого жира расплавляют в лотке, оборудованном паронагревательной рубашкой при 45oC максимум. Активный ингредиент просеивают через 200 m м сито и добавляют к расплавленной основе при перемешивании, используя для этого мешалку с высоким сдвигом. Перемешивание ведут до тех пор, пока не будет получена однородная суспензия. Выдерживая смесь при 45oC к ней добавляют оставшийся твердый жир и перемешивают до тех пор, пока не уверятся в образовании гомогенной смеси. Суспензию целиком пропускают через 250 m м сито из нержавеющей стали и при непрерывном помешивании оставляют охлаждаться до 40oC. При температуре от 38 до 40oC по 2,02 г смеси помещают в подходящие 2 мл формочки из пластмассы. Суппозитории (свечи) оставляют охлаждаться до комнатной температуры. Пример 10. Биологическая активность
Противовирусная активность
Противовирусная активность соединений примера 2 была исследована в отношении трех штаммов ВИЧ-1 и одного штамма ВИЧ-2 в следующих линиях клеток. J M клетки, полузрелые T-клетки, полученные от больного с лимфобластозной лейкемией, инфицировали ВИЧ-1 штамм GB-8. C8166 клетки, человеческие T -лимфобластовидные клетки, инфицировали ВИЧ-1 штаммом RF. СЕМ клетки, человеческие T -лимфобластоидные клетки, инфицированные ВИЧ-1, штаммы RF и U455, или ВИЧ-2, штамм ROD. МТ-4 клетки, человеческие T -клетки лейкемической клеточной линии, инфицированные ВИЧ-1, штамм RF. Противовирусная активность в C8166, JM, и СЕМ клетках определяли путем ингибирования образования синцитин (Tochikura и др. Вирусология, 164, 542 -546), а в MT-4 клетках путем ингибирования превращения формазана (Вава и др. (1987) Biochem Biophys Res Comm. 142, 128-134; Mossman (1983) J.Immuh. Meth; 65, 55-57). Противовирусная активность препаратов определялась путем анализа количества ВИЧ p 24 антигенов, синтезируемых в присутствии и в отсутствии энантомеров. Результаты приведены в табл.1 и 2. B. Цитотоксичность
Цитотоксичность соединений примера 2, рацемата (BCH-189; пример 1) и 50/50 смеси двух энантиомеров определяли на пяти СД4 клеточных линиях: H 9, JM, CEM, C8166 и U937. Соединения, предназначенные для тестирования, были сериально разбавлены от 100 до 0,3 г/мл) граничные концентрации/ в 96 лунках титрационных микропланшетов, 3,6
![(-)-энантиомер цис-4-амино-1-(2-гидроксиметил-1,3- оксатиолан-5-ил)-(1н)-пиримидин-2-она или его соль, или его сложный эфир, или соль его сложного эфира, смесь (-)- энантиомера и (+)-энантиомера, способы их получения, антивирусная композиция и способ лечения млекопитающих, включая человека, страдающих от вирусной инфекции или восприимчивых к ней, патент № 2099338](/images/patents/373/2099008/183.gif)
Пример 11. В трех Европейских центрах проводилось исследование фазы 1/11 по определению профиля безопасности (-) -(2R, цис)-4-амино-1-(2- гидроксиметил -1,3-оксатиолан-5-ил)-(1H)-пиримидин-2 -она, назначаемого для приема ежедневно два раза, и по проведению предварительной оценки его активности два раза, и по проведению предварительной оценки его активности против инфекции вируса иммунодефицита человека (ВИЧ). Сто четыре пациента (104) получали дозы препарата в расчете на их вес тела в кг, равные дозам в интервале между 0,5-20 мг/кг в день, в течение начального периода лечения 24 недели. Эффективность лечения оценивалась путем анализирования изменений следующий заменяющих маркеров: абсолютный подсчет CD4, подсчет CD4 в процентах, сывороточный p24 антиген, неоптерин и b2-микроглобулин. Объективные клинические ответные реакции оценивались на основе прироста веса и показателя Карновского (Karnofsky). Для оценки эффективности лечения использовались также изменения вирусной нагрузки. Результаты
Явствует, что монотерапия хорошо переносится. Нет никакого явного увеличения случаев вредного действия при увеличении дозы, и все серьезные неблагоприятные результаты рассматривались как причинно не связанные с лечением. Анализ иммунологических, вирусных и клинических заменяющих маркеров показал активность во всем исследуемом интервале доз. Повсюду имелись незначительные и недлительные увеличения числа CD4 и процента CD4. Имели место снижения меры вирусной нагрузки, все из которых поддерживались ниже базовой линии на протяжении всего периода анализа у большинства пациентов. Наблюдалось также небольшое, но продолжительное увеличение веса. Пример 12. При исследовании фазы II-III, включающем 129 ВИЧ-положительных пациентов сравнивалось сочетание (-) -(2R, цис)-4-амино-1-(2- гидроксиметил -1,3-оксатиолан-5-ил)-(1H)-пиримидин-2 -она и 3"-азидо- 3"дезокситимидина (AZT) с одним AZT. При комбинационной терапии пациенты получали 300 мг дозы заявленного соединения дважды в день и 200 мг дозы AZT три раза в день. Пациенты с монотерапией AZT получали 200 мг дозы три раза в день. При 24-недельном изучении оценивались три показателя эффективности: число CD4 клеток лимфоцитов; уровни вируса, обнаруживаемые в клетках крови; и уровни вируса в плазме/сыворотке крови. Пациентам, которые находились на лечении одним AZT, давалась возможность подключиться на комбинационное лечение, спустя 24 недели на дополнительный период в 24 недели. Результаты
Пациенты, получающие комбинационное лечение, имели максимальное среднее увеличение 85 CD4 клеток, которое происходило на 8-ю неделю. Увеличение продолжительно составляло 80 клеток выше базовой линии (базовая линия относится к измерениям, проводившимся при вступлении в исследование) на 24-ю неделю. Пациенты, которые оставались на комбинационной терапии, имели среднее увеличение на 48-ю неделю свыше 49 клеток. Максимальное среднее увеличение у пациентов, принимающих только один AZT, составило 34 CD4 клеток, что имело место на 4-ю неделю. К 24-й неделе пациенты, принимающие один AZT, обнаружили уменьшение в среднем на семь клеток ниже базовой линии. Однако те пациенты, которые переходили с монотерапии AZT на комбинационную терапию, показали среднее увеличение на 40 клеток выше базовой линии на 48-ю неделю. У пациентов, принимающих комбинационный препарат, уровни вирусов в кровяных клетках снизились на 99% на 24-ю неделю, причем у пациентов, которые продолжали данный курс терапии, имело место продолжительное снижение на 99% ниже базовой линии к 48-й неделе. У пациентов, принимавших только один AZT, уровни вируса в клетках крови снижались к 4-й неделе на 70% а к 24-й неделе возвращались к показателю в пределах 11% относительно базовой линии. Пациенты, которые находились на лечении одним AZT, и которые переходили на комбинационную терапию в 24-ю неделю, имели степень снижения 98% на 48-ю неделю. Уровни вируса в плазме/сыворотке крови у пациентов, принимающих комбинационную терапию, понижались на 92% ниже базовой линии уже на 2 неделю, и поддерживались на уровне 86 и 91% на 24-ю и 48-ю неделю соответственно. Уровни вируса в плазме/сыворотке крови у пациентов, принимающих один AZT, снижались на 76% во 2-ю неделю, и этот показатель возвращался к величине 36% к 24-й неделе. Пациенты, которые переходили с приема одного AZT на комбинационную терапию, имели 92% снижение уровней вируса от базовой линии к 48-й неделе. Пример 13
Инициировалось исследование фазы I/II с повышением дозы для оценки безопасности и активности соединения (-) -(2R,цис)-4-амино-1-(2- гидроксиметил-1,3 -оксатиолан-5-ил)-(1H)-пиримидин-2-она. У отобранных пациентов было заболевание ARC или СПИД, и число CD4 менее 300 клеток на куб. мм. Ежемесячно снимались показатели CD4, p24 антигена, бета-2-микроглобулина (B2M), неоптерина (N) и ВИЧ-РНК (PCR). Каждые 3 месяца собирались РВМС на культуру ВИЧ. Зарегистрировано было 97 пациентов (78 ARC, 19 СПИД) с дозами 0,5, 1, 2, 4, 8, 12 и 20 мг/кг/день. 85 (88%) пациентов получали предварительную анти-ретровирусную терапию (в среднем более 2 лет). Тридцать пять пациентов отошли от испытаний; у девяти пациентов развилась условно патогенная инфекция. У одиннадцати имело место снижение числа CD4. Один пациент был отведен от исследования вследствие связанной с лекарством нейтропении; никаких других связанных с лекарством признаков токсичности не было, когда сообщались эти данные. У нескольких пациентов, принимающих дозы 20 мг/кг/день было отмечено снижение абсолютного числа нейтрофилов и увеличение MCV. Статистически значимое (p=0,0001) увеличение абсолютного числа CD4 было видно через 4 недели у пациентов, получающих 4-12 мг/кг/день. Средние изменения абсолютного показателя CD4, средний процент изменений B2M и N и средний процент изменений p24 Ag у всех пациентов, получающих 4-12 мг/кг/день, приведены в табл.4.
Класс C07D411/04 связанные непосредственно
Класс A61K31/505 пиримидины; гидрированные пиримидины, например триметоприм
Класс C12P41/00 Способы использования ферментов или микроорганизмов для разделения рацемической смеси на оптические изомеры