способ получения вакцинных штаммов вируса гриппа в для производства инактивированных и живых гриппозных вакцин

Формула изобретения

Способ получения вакцинных штаммов вируса гриппа B для производства инактивированных и живых гриппозных вакцин, включающий генетическую реассортацию двух родительских штаммов вирусов гриппа B и отбор клонов, отличающийся тем, что в качестве одного из родительских вирусов используют штамм B (Ленинград) 14/76/50 донор безвредности и высокой репродуктивности.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицинской вирусологии и может быть применено при производстве вакцинных препаратов для массовой профилактики гриппа.

В настоящее время принцип конструирования штаммов для производства инактивированных и живых гриппозных вакцин методом реассортации базируется на использовании двух различных доноров донора высокой репродуктивности (для инактивированной гриппозной вакцины) и донора безвредности (для живой гриппозной вакцины) (Полежаев Ф.И. Гаврилов А.А. Будиловский Г.Н. и др. // В сб. Новое в эпидемиологии и профилактике вирусных инфекций. Л. 1086, с. 109-116). Так, в качестве донора для получения высокоурожайных реассортантов при производстве инактивированных гриппозных вакцин используется штамм вируса гриппа В/Ли/40. Для создания безвредных реассортантов для живой гриппозной вакцины типа В применяют штаммы В/Ленинград/14/55/17, В/СССР/1/69/69 и В/Ленинград/2/67/115.

Необходимость использования различных доноров при получении реассортантных штаммов для производства гриппозных вакцин инактивированных или живых приводит к усложнению технологичности вакцин, замедлению темпов производства и увеличению их себестоимости.

При получении штаммов вируса гриппа В методом генетической реассортации для производства инактивированных и живых гриппозных вакцин мы предлагаем использовать новый универсальный донор безвредности и высокой репродуктивности. Предлагаемый базовый донор объединяет в себе признаки, которые передаются по наследству в процессе реассортации и необходимые вакцинным штаммам: высокая репродукционная способность (для ИГВ) и безвредность (для ЖГВ). В качестве такого единого донора безвредности и высокой репродуктивности разработали штамм В/Ленинград/14/76/50. Указанный штамм получен методом серийного пассирования исходного вируса В/Ленинград/14/76 при оптимальной и пониженной температуре инкубации с последующим многократным клонированием в развивающихся 10-дневных куриных эмбрионах и на культуре клеток куриных фибробластов. В результате селекции отобрали клон данного штамма с высокой репродуктивностью и холодоадаптированностью. На основе внутренних генов вируса гриппа В/Ленинград/14/76/50, используя феномен генетической реассортации в процессе совместного культивирования двух штаммов, получили реассортант с поверхностными белками эпидемического штамма В/Панама/45/90. Данный реассортант В/Панама/30/90 унаследовал способность размножаться при 32^oC до 8,5-8,75 L_g ЭИД₅₀/0,2 мл и при 26^oC до 4,0-4,25 L_g ЭИД₅₀/0,2 мл, т.е. обладал высокой репродуктивностью и холодоадаптированностью маркером безвредности, признаками, необходимыми для производства инактивированных и живых гриппозных вакцин.

Все вышеизложенное подтверждается материалами, представленными в таблицах.

Как видно из табл. 1, реассортант унаследовал от родительского штамма - донора В/Ленинград/14/76/50 холодоадаптированность, способность репродуцироваться в развивающихся куриных эмбрионах до 4,25 L_g ЭИД₅₀/0,2 мл при 26^oC и высокую репродукционную активность (8,75 L_g ЭИД₅₀/0,2 мл при 32^oC).

Представленные в табл. 2 данные свидетельствуют о низкой реактогенности ЖГВ (1,2% ) для взрослых людей, что не превышает допустимого уровня частоты лихорадочных температурных реакций средней тяжести (2%) по НТД на живую гриппозную вакцину для взрослых людей.

Материалы табл. 3 свидетельствуют о том, что все серии инактивированной гриппозной вакцины, подготовленные с использованием универсального донора, имеют высокие титры гемагглютинирующей и репродукционной активности как до, так и после лиофилизации, что обеспечивает достаточно высокий выход биомассы на единицу субстрата при производстве ИГВ.

Предлагаемый способ получения реассортантных штаммов при производстве инактивированной и живой гриппозных вакцин, основанный на использовании единого донора, также упростит технологию получения, внедрения и наработки вакцинных штаммов по сравнению с ныне существующим.