способ получения биомассы чумного микроба
Классы МПК: | C12N1/20 бактерии; питательные среды для них |
Автор(ы): | Ковтун А.Л., Рогожин А.З., Непранов В.П., Нестеров Ю.Е., Черкасов Н.А. |
Патентообладатель(и): | Научно-исследовательский институт микробиологии МО РФ |
Приоритеты: |
подача заявки:
1994-07-19 публикация патента:
20.01.1998 |
Использование: биотехнология, может быть применено при приготовлении вакцин или для выделения клеточных структур чумного микроба. Сущность изобретения: способ предусматривает глубинное культивирование посевного материала микробных клеток в жидкой питательной среде при перемешивании и аэрации, отделение биомассы седиментацией, причем в качестве питательной среды используют смесь, состоящую из культуральной жидкости после седиментации биомассы, отработанной от предыдущей стадии культивирования, и/или культуральной жидкости после выбраковки полуфабриката чумной вакцины по технологическим параметрам с порцией свежей питательной среды в количестве не менее 15 - 20% от исходного объема среды. 4 табл.
Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4
Формула изобретения
Способ получения биомассы чумного микроба, предусматривающий глубинное культивирование посевного материала микробных клеток в жидкой питательной среде при перемешивании и аэрации, отделение биомассы седиментацией, отличающийся тем, что в качестве питательной среды используют смесь, состоящую из культуральной жидкости после седиментации биомассы, отработанной от предыдущей стадии культивирования и/или культуральной жидкости после выбраковки полуфабриката чумной вакцины по технологическим параметрам с порцией свежей питательной среды в количестве не менее 15 20% от исходного объема среды.Описание изобретения к патенту
Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способам получения биомассы чумного микроба и может быть использовано при приготовлении вакцин или для выделения клеточных структур чумного микроба. Известен способ получения биомассы чумного микроба штамма ЕВ на плотной питательной среде из перевара Хоттингера в АКМ-III, используемой для приготовления чумной живой сухой вакцины [1]К недостаткам данного способа следует отнести большую продолжительность культивирования (до 48 час), использование плотной питательной среды и низкий выход биомассы с объема среды. Наиболее близким к предлагаемому способу по технической сущности и достигаемому результату является способ получения биомассы чумного микроба в жидкой питательной среде глубинным культивированием [2]
К недостаткам данного способа следует отнести то, что культуральная жидкость после извлечения биомассы автоклавируется и сливается в канализацию. Кроме того, культуральная жидкость (полуфабрикат чумной вакцины), по каким-либо причинам не соответствующая требованиям РП 377-92 и забракованная для дальнейшего использования, также автоклавируется и сливается в канализацию. Задачей изобретения является сокращение объема сточных вод и повышение выхода биомассы. Поставленная задача достигается тем, что в качестве питательной среды используется смесь, состоящая из супернатанта культуральной жидкости, полученной со стадии деконтации суспензии клеток после культивирования, и/или культуральной жидкости после выбраковки полуфабриката чумной вакцины по техническим параметрам и порции свежей питательной среды, составляющей не менее 15-20% от исходного объема среды. Осуществление предлагаемого способа возможно благодаря тому, что в процессе производства чумной живой сухой вакцины для ее приготовления применяют биомассу чумного микроба штамма ЕВ, выращенную глубинным способом в жидкой питательной среде (РП 377-92), после чего полученную биомассу концентрируют путем седиментации, а оставшуюся жидкость (супернатант в количестве 80-85% от исходного объема) автоклавируют в канализацию. Однако в отработанной культуральной жидкости, по нашим данным (см. табл.1), находятся до 50% неизрасходованных свободных аминокислот, а также минеральные элементы, стимуляторы и другие вещества, необходимые для роста и размножения микробных клеток. Состав исходной питательной среды, культуральной жидкости после седиментации клеток и после введения в нее свежей порции среды, приведен в табл.1. Кроме того, повторно может быть использована культуральная жидкость (полуфабрикат чумной вакцины), по каким-либо причинам не соответствующая требованиям РП 377-92 и забракованная для дальнейшего использования на стадии приготовления вакцины, т.к. в ней находится достаточное количество аминокислот (табл.2). Сущность предложенного способа заключается в следующем. Выращивают биомассу чумного микроба в реакторе вместимостью 0,25 м3 по режимам, изложенным в РП 377-92. По окончании выращивания отделяют микробную суспензию путем седиментации, а отработанную жидкость собирают в реактор, куда вводят дополнительную порцию свежей питательной среды в количестве не менее 15-20% по объему, стерилизуют, охлаждают до 28oC, вносят посевной материал и проводят повторное выращивание в соответствии с требованиями РП 377-92. Полученную по данному способу биомассу концентрируют путем седиментации и используют для приготовления чумной живой сухой вакцины. В выбракованную на стадии культивирования по технологическим параметрам культуральную жидкость вводят дополнительную порцию свежей питательной среды не менее 15-20% от объема жидкой среды, стерилизуют, охлаждают до 28oC, вносят посевной материал и проводят повторное выращивание в соответствии с требованиями РП 377-92. Полученную по данному способу биомассу концентрируют путем седиментации и используют для приготовления чумной живой сухой вакцины. Предложенный способ позволяет на 80% повысить выход биомассы с единицы питательной среды и в 2 раза сократить объем сточных вод. Наличие причинно-следственной связи между совокупностью существенных признаков заявляемого объекта и достигаемым техническим результатом показано в табл.3. Возможность осуществления заявляемого изобретения показана следующими примерами. Пример 1. Получение биомассы на культуральной жидкости, используемой повторно. В реактор вместимостью 0,25 м3 заливают 150 л жидкой питательной среды, стерилизуют ее, охлаждают до температуры 28oC и вводят посевной материал из расчета не менее 0,4 млрд кл. в мл. Культуру выращивают при температуре (27
![способ получения биомассы чумного микроба, патент № 2102472](/images/patents/369/2102003/177.gif)
![способ получения биомассы чумного микроба, патент № 2102472](/images/patents/369/2102003/177.gif)
![способ получения биомассы чумного микроба, патент № 2102472](/images/patents/369/2102003/177.gif)
![способ получения биомассы чумного микроба, патент № 2102472](/images/patents/369/2102003/177.gif)
Класс C12N1/20 бактерии; питательные среды для них