производные фосфолипидов, способ их получения, фармацевтическая композиция и способ ее получения

Формула изобретения

1. Производные фосфолипидов общей формулы I



в которой R - алкильный радикал с неразветвленной или разветвленной цепью с 10 - 24 атомами углерода, который может также содержать двойные или тройные связи;

R¹ и R² независимо друг от друга - водород или каждый неразветвленный, разветвленный циклический насыщенный или ненасыщенный алкильный остаток с 1 - 6 атомами углерода, который может также содержать Cl-, OH- или NH₂-группу и причем два этих радикала могут быть соединены также в кольцо;

A - простая связь или одна из групп формул II, III, IV, V, VI

-CH₂-CH₂-CH₂-O-; (II)

-CH₂-CH₂-O-; (III)



-S-(CH₂)₈-O-; (V)



причем группы формул II и VI ориентированы таким образом, что атом кислорода соединен с атомом фосфора соединения I;

X - атом кислорода или серы или NH, если A - простая связь, или атом кислорода или серы, если A - одна из групп формул II - IV;

Y равен 0 или является натуральным числом от 1 до 3;

m и n независимо друг от друга равны 0 или являются натуральными числами при условии, что m + n равны от 2 до 8.

2. Производные фосфолипидов по п.1 общей формулы I, в которой X - атом кислорода.

3. Производные фосфолипидов по п.1 или 2 общей формулы I, в которой A - простая связь.

4. Производные фосфолипидов по пп.1 - 3 общей формулы I, в которой R¹ и R² являются соответственно метиловыми группами.

5. Производное фосфолипидов по пп.1 - 4 общей формулы I, отличающееся тем, что таким производным является октадецил-(1,1-диметилпиперидино-4-ил)-фосфат, октадецил-(1,1-диметилгексагидроазефино-4-ил)-фосфат.

6. Способ получения производных фосфолипидов формулы I по пп.1 - 5, отличающийся тем, что соединение общей формулы VII

R-X-A-H,

где R, X и A имеют указанные в п.1 значения,

вводят в реакцию взаимодействия с фосфороксотрихлоридом в присутствии подходящего вспомогательного основания с растворителем или без растворителя с последующей обработкой полученного продукта соединением общей формулы VIII



где R¹ и R², Y, m и n имеют указанные в п.1 значения;

Y^- - галогенид, мезилат или тозилат,

или соединением общей формулы IX



где R¹, Y, m и n имеют указанные в п.1 значения,

и гидролизом, причем в случае использования соединения формулы IX осуществляют последующее алкилирование полученного продукта с помощью

R² - Y,

где R² - как указано в п.1 формулы;

Y - галогенид, мезилат или тозилат.

7. Способ получения производных фосфолипидов формулы I по п.6, отличающийся тем, что раствор соединений формулы I обрабатывают в органическом растворителе ионообменником совместного H-OH-ионирования или смесью кислого и основного ионообменников, или кислым и затем основным ионообменником, или наоборот.

8. Фармацевтическая композиция, обладающая противоопухолевым действием, содержащая в качестве активного начала производное фосфолипидов и целевые добавки, отличающаяся тем, что в качестве производного фосфолипидов она содержит эффективное количество одного или нескольких соединений по п.1 или их фармацевтически приемлемых солей.

9. Способ получения фармацевтической композиции, обладающей противоопухолевым действием, включающий смешение производного фосфолипидов с фармацевтически приемлемыми целевыми добавками, отличающийся тем, что в качестве производного фосфолипидов используют эффективное количество одного или нескольких соединений по п.1 или их фармацевтически приемлемых солей.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к новым производным фосфолипидов, а именно к алкилфосфатам или алкенфосфатам, холиновый остаток которых является частью гетероциклического кольца, способу получения класса этих соединений, а также к лекарственным средствам и способу получения лекарственных средств, которые содержат соединения в качестве биологически активных веществ.

Европейская заявка на патент N 108565 касается соединений общей формулы:



и их фармацевтически используемых солей, в которых R¹ является алифатическим остатком углеводородов с 8-30 атомами углерода, остатки R², R³, R⁴ одинаковы или различны и являются водородом или низкими алкильными радикалами, или в которой группа NR₂ R₃ R₄ обозначает циклическую аммониевую группу и n имеет значение 0 и 1. Для этих соединений указывается антиопухолевое действие, а также подавляющее грибки действие.

Неожиданным образом соединения согласно изобретению обладают лучшим антиопухолевым действием, чем описанные в выложенной Европейской заявке на патент N 108565 производные с открытой цепью.

Изобретение касается также способа получения и способа очистки новых соединений.

Способ получения производных фосфолипидов характеризуется тем, что соединение общей формулы

R - X - A - H - (VII)

где R, X и A имеют указанные в пункте 1 значения, вводят в реакцию взаимодействия с фосфороксотрихлоридом в присутствии подходящего вспомогательного основания с растворителем или без растворителя с последующей обработкой полученного продукта соединением общей формулы VIII.

где

R¹ и R₂, y и имеют указанные в пункте 1 значения

y^- - галогенид, мезилат или тозилат, или соединением общей формулы IX



где

R¹, y, и имеют указанные в пункте 1 значения,

и гидролизом, причем в случае использования соединения формулы IX, осуществляют последующее алкилирование полученного продукта с помощью R²-y, где R², как указано в п. 1 формулы, а y -галогенид, мезилат или тозилат, причем раствор соединений формулы I, обрабатывают в органическом растворителе ионообменником, совместного H-OH-ионирования или смесью кислого или основного ионообменников, или кислым и затем основным ионообменником или наоборот.

Первая стадия способа заключается в реакции хлорокиси фосфора со спиртом с длинной цепью в галогенированных или ароматических углеводородах, насыщенных циклических простых эфирах или ациклических простых эфирах.

Первая стадия способа А заключается в реакции оксихлорида фосфора со спиртом с длинной цепью в галогенированных углеводородах, насыщенных циклических простых эфирах, ациклических простых эфирах, насыщенных углеводородах с 1 - 5 атомами углерода, жидких ароматических углеводородах, которые также могут быть замещены галогеном (в частности, хлором), или в смесях из вышеупомянутых растворителей или без растворителей, в случае необходимости в присутствии обычной для этого основной у субстанции.

В качестве галогенированных углеводородов во внимание принимаются, например углеводороды с 1-6 атомами углерода, причем один или несколько, или все атомы водорода заменены атомами хлора. Могут использоваться, например, хлористый метилен, хлороформ, хлористый этилен, хлорбензол, дихлорбензол. Если речь идет о замещенных галогенами ароматических углеводородах, то они предпочтительно замещены одним или двумя атомами галогена.

В качестве простых насыщенных циклических эфиров могут использоваться, например, эфиры с размером кольца 5-6, которые состоят из атомов углерода и одного или двух атомов кислорода.

Примерами этого являются тетрагидрофуран, диоксан.

Ациклические простые эфиры состоят из 2-8 атомов углерода и являются жидкими.

Во внимание принимаются, например, диэтиловый эфир, диизобутиловый эфир, третичный метилбутиловый эфир, диизопропиловый эфир.

В качестве насыщенных углеводородов во внимание принимаются углеводороды с неразветвленной и разветвленной цепью, которые состоят из 5-10 атомов углерода и являются жидкими.

Во внимание принимаются, например, пентан, гексан, гептан, циклогексан.

В качестве ароматических углеводородов во внимание принимаются, например, бензол и замещенные алкилом бензолы, причем алкильные заместители состоят из 1-5 атомов углерода.

В качестве основных субстанций как для реакции хлорокиси фосфора со спиртом с длинной цепью, так и для последующего преобразования в диэфир фосфорной кислоты во внимание принимаются амины, например алифатические амины формулы NR₁R₂R₃, причем R₁, R₂, R₃ одинаковы или различны и обозначают водород или C₁-C₆ - алкил, или также такие ароматические амины, как пиридин, пиколин, хинолин. При преобразовании до диэфира фосфорной кислоты в данном случае может добавляться необходимая здесь основная субстанция одновременно или также перед аминоспиртом или перед солью аммониевого спирта.

В любом случае для этой реакции необходим растворитель; т.е. если первая стадия реакции происходит без специального растворителя, то теперь растворитель необходимо добавлять. Молярное отношение хлорокиси фосфора к спирту с длинной цепью находиться, например, в пределах от 1,5:1 до 0,8:1.

Аминоспирт или соль аммониевого спирта используется, например, в отношении к спирту с длинной цепью в избытке (примерно 1,1 - 1,5 - молярного избытка).

Если реакция хлорокиси фосфора со спиртом с длинной цепью происходит в присутствии основной субстанции, то количество основной субстанции составляет, например, от 1 до 3 моль, отнесенных к 1 моль POCl. Для последующего преобразования в диэфир фосфорной кислоты использованное количество основной субстанции составляет, например, от 1 до 5 моль отнесенных к 1 моль.

Температура реакции преобразования хлорокиси фосфора со спиртом с длинной цепью находится в пределах от -30^oC до +30^oC, предпочтительно от -15^oC до +5^oC, в частности от -10^oC до -5^oC.

Время реакции этого преобразования составляет, например, 0,5-5 ч, предпочтительно 1-3 ч, в частности 1,5 - 2 ч. Если реакция происходит в присутствии основной субстанции, то она протекает в общем случае быстро (примерно в течение 30 мин).

Затем порциями или полностью добавляется аминоспирт или соль аммониевого спирта.

В качестве солей аммониевого спирта во внимание принимаются соли с минеральными кислотами, (как, например, серная кислота, соляная кислота), кроме того соли с органическими кислотами, как например уксусная кислота, паратолуолсульфокислота и им подобные.

Этот шаг реакции происходит в растворителе. В качестве растворителя здесь во внимание принимаются такие же, которые применяются для преобразования фосфора со спиртом с длинной цепью, если это преобразование происходит в растворителе.

Затем основная субстанция растворяется в одном из указанных растворителей или добавляется каплями без растворителя.

Предпочтительно в качестве растворителей для основных субстанций в данном случае применяются галогенированные углеводороды, простые насыщенные циклические эфиры, простые ациклические эфиры, насыщенные углеводороды с 5-10 атомами углерода, жидкие ароматические углеводороды или смеси вышеупомянутых растворителей.

В данном случае речь идет о тех же растворителях, которые могут использоваться для преобразования хлорокиси фосфора со спиртом с длинной цепью.

Благодаря добавлению основной субстанции повышается температура. Необходимо позаботиться о том, чтобы температура поддерживалась в пределах 0 - 40^oC, предпочтительно 10 - 30^oC, в частности 15 - 20^oC.

Затем реакционную смесь еще перемешивают при 5 - 30^oC, предпочтительно 15 - 25^oC (например, в течение 1 - 40 ч., предпочтительно 3 - 15 ч).

Гидролиз реакционной исходной смеси осуществляют путем добавления воды, причем температура должна поддерживаться в пределах 10 - 30^oC, предпочтительно 15 - 30^oC, в частности 15 - 20^oC.

Упомянутые выше гидролизные жидкости могут содержать также основные субстанции. В качестве таковых основных субстанций во внимание принимаются карбонаты и гидрокарбонаты щелочных и щелочноземельных металлов.

Затем с целью завершения гидролиза реакционная смесь еще перемешивается в течение 0,5 - 4 ч, предпочтительно 1-3 ч, в частности 1,5 - 2,5 чья при температуре 10 - 30^oC, предпочтительно 15 - 25^oC, в частности 18 - 22^oC.

Затем реакционный раствор промывают с помощью смеси из воды и спиртов (предпочтительно алифатических насыщенных спиртов с 1-4 атомами углерода), которая при необходимости может содержать еще основную субстанцию.

Отношение в смеси воды к спирту может составлять, например, 5-0,5, предпочтительно 1-3 (V/V).

В качестве основных субстанций для промывочной жидкости во внимание принимаются, например, карбонаты и гидрокарбонаты щелочных и щелочноземельных металлов, а также аммиак (например, водный аммиак). Особенно предпочтительным является 3-процентный раствор карбоната натрия в воде.

Затем при необходимости может осуществляться промывка реакционного раствора с помощью кислого раствора.

Предпочтительно промывка кислым раствором осуществляется для удаления еще непрореагированных основных фракций реакционного раствора, в частности, при использовании в качестве растворителя метиленхлорида.

Промывочный раствор состоит из смеси воды и спирта.

Предпочтительно во внимание принимаются смеси из алифатических насыщенных спиртов с 1-4 атомами углерода, причем при необходимости может присутствовать еще и кислая субстанция. Отношение в смеси воды к спирту может составлять, например 5-0,5, предпочтительно 1-3 (V/V).

В качестве кислых субстанций для промывочной жидкости во внимание принимаются, например, минеральные и органические кислоты, например соляная кислота, серная кислота, винная или лимонная кислота. Особенно предпочтительным является 10-процентный раствор соляной кислоты в воде.

Затем реакционный раствор еще раз промывают с помощью смеси из воды и спиртов. Предпочтительно во внимание принимаются смеси из алифатических насыщенных спиртов с 1-4 атомами углерода, причем при необходимости может присутствовать еще и основная субстанция.

Отношение в смеси воды к спирту может составлять, например, 5-0,5, предпочтительно 1-3 (V/V).

Затем промытые фазы объединяются и высушивают обычным образом, а затем растворитель (предпочтительно при пониженном давлении, например, от 5 до 100 мбар) удаляют, при необходимости после добавления 150-1000 мл, предпочтительно 300 - 700 мл, в частности 450-550 мл алифатического спирта (отнесенных к 1 моль массовой части сухого продукта).

В качестве спиртов во внимание принимаются предпочтительно насыщенные алифатические спирты с длиной цепи 1 и 5 атомов углерода. При этом особенно предпочтительным в качестве спирта являются n-бутанол, изопропанол. Целью этой спиртовой обработки является полное удаление остатков воды и предотвращение пенообразования.

Дальнейшая очистка продукта может осуществляться, например, тем, что исходный продукт в горючем виде растворяют в этаноле, отфильтровывают осадок, обрабатывают с помощью комбинированного ионообменника, как, например, амберлит МВ3, в этаноловом растворе. Вместо комбинированного ионообменника могут также использоваться одновременно или последовательно все имеющиеся в продаже кислые или основные ионообменики.

Затем раствор перекристаллизовывают из кетонов, как, например, ацетон или метилэтиловый кетон, в некоторых случаях извлекается путем его многократного смешивания с горячими вышеупомянутыми растворителями.

Целесообразным может быть очищение продуктов с помощью хроматографии на колонне или мгновенной хроматографии на силикагеле. В качестве растворителей используются, например, смеси из хлороформа, метиленхлорида, метанола и 25-процентного раствора аммиака.

Вариант способа B заключается в дополнительном алкилировании продуктов, которые были получены по способу A при использовании аминоспиртов. В качестве алкилирующих агентов могут использоваться, например, сложные метиловые эфиры p-толуолсульфокислоты или диметилсульфат.

В качестве растворителей во внимание принимаются вышеупомянутые растворители.

В качестве основных субстанций используются, например, карбонаты щелочных металлов.

Взаимодействие осуществляется при повышенной температуре, например, при температуре кипения растворителей.

Пример 1: наименование (номенклатура Международного союза по чистой и прикладной химии (ЮПАК)

Внутренняя соль 4-(((октадецилокси)гидроксифосфенил)окси)-1,1- диметилпиперидингидроксида.

Краткое наименование:

октадецил-(1,1-диметилпиперидинио-4-ил)-фосфат.

C₂₅H₂₅NO₄P (461.66) 1/2 H₂O

Вариант получения A

10,3 мл (0,11 моль) хлорокиси фосфора помещают в 100 мл хлороформа и охлаждают до 5-10^oC.

В течение 30 мин каплями добавляют при перемешивании 27.0 (0,10 моль) - 1 - октадеканола, растворяют в 100 мл хлороформа и 35 мл пиридина. После 30 мин дополнительного перемешивания при 5-10^oC смешивают с 39,1 г (0,13 моль) 4-гидрокси-1,1-метилпиридинтозилата в одной порции. После добавления 40 мл пиридина и 30 мл диметилформамида перемешивают смесь в течение 24 ч. при комнатной температуре. Затем гидролизуют с помощью 15 мл воды, дополнительно перемешивают в течение 30 мин и промывают органическую фазу соответственно с помощью растворов: 200 мл вода/метанол (1:1), 200 мл 3-процентного раствора Na₂CO₃/метанол (1: 1) и затем 200 мл вода/метанол (1:1). Органическую фазу концентрируют, осадок в горячем виде растворяют в 300 мл этанола и после охлаждения фильтруют. Фильтрат перемешивают с 80 г ионообменника амберлита МВ3, отфильтровывают и концентрируют. Осадок перекристаллизовывают из 300 мл метилэтилового кетона, фильтруют на нутче и высушивают в вакууме с помощью P₂O₅.

Выход 4,71 г (10%)

Элементный анализ:

Рассчитано,%:

C 65,26; H 11,63; N 2,62

Найдено,%:

C 64,38; H 11,61; N 2,73%

C 65,04; H 11,80; N 2,78%

Хроматограмма тонкослойной хроматографии: (хлороформ/метанол/1 М ацетата натрия в 25% аммиака 70:40:10), R_f=0,17 (1-бутанол/ледяная уксусная кислота/вода 40:10:10), R_f=0,12.

Температура плавления: 270-271^oC (разложение)

Вариант получения B

20,1 мл (0,22 моль) хлорокиси фосфора помещают в 100 мл метиленхлорида, охлаждают до 5-10^oC и при перемешивании в течение 30 мин смешивают с раствором 54,1 г (0,20 моль) октадеканола в 400 мл метиленхлорида и 70,5 мл пиридина.

После одного часа дополнительного перемешивания каплями добавляют 29,9 г (0,26 моль) 4-гидрокси-1-метилпиперидина в 80 мл пиридина. После 3 ч перемешивания при 10^oC реакционный раствор гидролизуют при охлаждении льдом с помощью 30 мл воды и дополнительно перемешивают в течение одного часа. Органическая фаза промывается соответственно с помощью 200 мл раствора вода/метанол (1:1), 3-процентного раствора соляная кислота/метанол (1:1) и раствора вода/метанол (1). Высушенную с помощью Na₂SO₄ органическую фазу концентрируют до помутнения и смешивают с 1 л метилэтилового кетона. Кристаллизат перекристаллизовывают из 1 л метилэтилового кетона, фильтруют на нутче и высушивают с помощью P₂O₅ в вакууме.

Выход: 54,1 г (60%) октадецил-(1-метилпиперидинио-4-ил)-фосфата.

98,1 г (0,22 моль) октадецил-(1-метилпиперидинио-4-ил)-фосфата суспендируют в 500 мл абсолютного этанола и нагревают до кипения. При флегме добавляют в восемь порций попеременно в целом 71,8 г (0,39 моль) метилового эфира p-толуолсульфокислоты и 26,5 г (0,19 моль) карбоната калия в течение 2 ч. После окончания добавления продолжают нагревание при флегме еще в течение одного часа. После охлаждения отфильтровывают, концентрируют фильтрат до половины и смешивают раствор со 150 г влажного ионообменника амберлита МВЗ. После двухчасового перемешивания осуществляют с помощью смеси кизельгур/активированный уголь отсасывание на нутче, фильтрат концентрируют и кристаллизуют в присутствии ацетона. Кристаллический осадок перекристаллизуют из метилэтилового кетона и высушивают с помощью P₂O₅ в вакууме.

Выход: 46,1 г (46%) октадецил-(1,1-диметилпиперидинио-4-ил)-фосфата.

Элементный анализ:

Рассчитано, %:

C 65,26 H 11,63 N 2,62

Найдено, %:

C 65,18 H 11,62 N 2,68

C 65,07 H 11,07 N 2,70

Температура плавления: 271 - 272^oC (разложение)

Пример 2: гексадецил-пиперидинио-4-ил-фосфат

C₂₁H₄₄NO₄P (405,558)

7,1 мл (77 миллимоль) хлорокиси фосфата растворяют в 50 мл сухого тетрагидрофурана и после охлаждения до 5 - 10^oC при перемешивании каплями смешивают с раствором из 17 г (70 миллимоль) гексадеканола и 48 мл триэтиламина в 150 мл тетрагидрофурана. После окончания добавления дополнительно перемешивают раствор в течение 30 мин в ледяной ванне и затем доводят температуру до комнатной 10,1 г (100 миллимоль) 4-пиперидинола растворяют в 100 мл тетрагидрофурана, смешивают с 17 мл триэтиламина и при перемешивании каплями добавляют реакционный раствор, так чтобы температура не превышала 40^oC.

После окончания добавления раствор кипятят в течение часа при флегме. Еще горячий раствор отфильтровывают от хлорида триэтиламмония и после охлаждения при перемешивании вливают в смесь лед-2M-соляная кислота. Выпадающий в осадок при охлаждении в холодильном шкафу продукт впитывается в метиленхлорид, высушивается с помощью MgSO₄ и после концентрирования хроматографируется на силикагеле с помощью смеси метиленхлорид/метанол/25-процентный аммиак (70: 30 - 5). Содержащие продукт фракции объединяются и концентрируются. После перекристаллизации из метанола осуществляется высушивание с помощью P₂O₅ в вакууме.

Выход: 10,0 г (35%)

Элементный анализ:

Рассчитано, %:

С 62,19 H 10,94 N 3,45

Найдено, %:

С 65,15 H 11,14 N 3,54

С 62,41 H 11,19 N 3,34

Хроматограмма тонкослойной хроматографии: (хлороформ/метанол/25-процентный аммиак 70:20:10) R_f = 0,42; (1 - бутанол/ледяная уксусная кислота/ вода 40:10""10) R_f = 0,33.

Пример 3: гексадецил - (1,1- диметилпиперидинио-4-ил)-фосфат

C₂₅H₅₂NO₄P (461,64)H₂O

5,7 г (14 миллимоль) гексадецил-пиперидинио-4-ил-фосфат растворяют в 100 мл метанола и смешивают с 11,6 г (84 миллимоль) карбоната калия. При хорошем перемешивании в течение 30 мин каплями добавляют 4,0 мл (42 миллимоль) диметилсульфата. Смесь дополнительно перемешивают в течение 4 ч при 40^oC, после охлаждения фильтруют и концентрируют. Осадок извлекают из раствора путем его многократного смешивания с горячим растворителем и после отсасывания на нутче растворяют в 100 мл 96-процентного этанола. Добавляют 15 г ионообменника амберлита МВЗ и перемешивают в течение 3 ч. После отфильтровывания производят концентрирование и дважды перекристаллизовывают из метилэтилового кетона. Сушка осуществляется с помощью P₂O₅ в вакууме.

Выход: 3,70 г (61%)

Элементный анализ:

Рассчитано, %:

C 61,17 H 11,16 N 3,10

Найдено, %:

C 60,83 H 11,14 N 2,99

C 60,92 H 11,26 N 3,00

Хроматограмма тонкослойной хроматографии: (хлороформ/метанол/ 25-процентный аммиак 70:20:10) R_f = 0,28; (1 - бутанол/ледяная уксусная кислота/ вода 40:10:10), R_f = 0,13.

Температура плавления: 230^oC (разложение)

Пример 4: эруцил- (1,1 - диметилпиперидинио-4-ил)-фосфат

C₂₉H₅₈NO₄P (515,765)H₂O

10,3 мл (0,11 моль) хлорокиси фосфора помещают в 50 мл хлороформа и каплями при 5 - 10^oC смешивают с раствором из 32,5 г (0,10 моль) эруцилового спирта и 32 мл пиридина в 100 мл хлороформа. После дополнительного перемешивания в течение получаса добавляют порцией в 39,1 г (0,13 моль) 4-гидрокси- 1,1-диметилпиперидинсульфата. После добавления каплями 40 мл пиридина доводят температуру раствора до комнатной и перемешивают в течение 3 ч. Затем гидролизуют с помощью 15 мл воды, дополнительно перемешивают в течение получаса и промывают соответственно с помощью 100 мл раствора вода-метанол (1: 1), 100 мл 3-процентного раствора карбоната натрия/метанол (1:1), 100 мл 3-процентного раствора лимонная кислота/метанол (1:1) и 100 мл раствора вода/метанол (1:1). Полученный после концентрирования органической фазы остаток извлекается с помощью ацетона и затем растворяется в 150 мл 96-процентного этанола. Этот раствор перемешивается в течение 3 ч с 20 г ионообменника амберлита МВЗ и отфильтровывается до получения светлого раствора с помощью кизельгура. После концентрирования проводится хроматография на силикагеле с помощью смеси хлороформ/метанол/25-процентный аммиак 70:40:10. Содержание продукта фракции объединяются и концентрируются в вакууме до сухости.

Выход: 4,4 г (9%)

Элементный анализ:

Рассчитано, %:

C 65,26 H 11,63 N 2,62

Найдено, %:

C 64,38 H 11,61 N 2,73

C 65,04 H 11,80 N 2,78

Хроматограмма тонкослойной хроматографии: (хлороформ/метанол/ 1 M ацетата натрия в 25-процентном аммиаке 70:20:10) R_f = 0,30.

Пример 5 гексадецил - (1,1- диметилпиперидинио-3-ил)-фосфат

C₂₃H₄₈NO₄P (433.616)H₂O

10,3 мл (0,11 моль) хлорокиси фосфора помещают в 50 мл хлороформа и охлаждают до 0 - 10^oC 24,2 г (0,10 моль n-гексадеканола растворяют в 100 мл хлороформа, смешивают с 32 мл пиридина и в течение часа при охлаждении льдом каплями добавляют в раствор хлорокиси фосфора. После дополнительного получасового перемешивания добавляют порцией в 39,2 г (0,13 моль) 3-гидрокси - 1,1 - диметилпиперидинтозилата и при комнатной температуре в течение 15 минут каплями добавляют 40 мл пиридина. После перемешивания в течение 16 ч при комнатной температуре раствор гидролизуют с помощью 15 мл воды, перемешивают в течение получаса и промывают соответственно с помощью 100 мл раствора вода/метанол (1: 1), 100 мл 3-процентного раствора карбоната натрия/ метанол (1: 1), 100 мл раствора лимонная кислота/метанол (1:1) и 100 мл раствора вода/метанол (1:1). Органическая фаза после высушивания с помощью сульфата натрия концентрируется. Остаток растворяют в 150 мл 96-процентного этанола, фильтруют и фильтрат смешивают с ионообменником амберлитом МВЗ. После отфильтровывания ионообменника раствор концентрируют, остаток с помощью ацетона доводят до кристаллизации и после отсасывания на нутче высушивают с помощью P₂O₅ в вакууме.

Выход: 13,5 г (31%)

Элементный анализ:

Рассчитано, %:

C 61,17 H 11,16 N 3,10

Найдено, %:

C 60,78 H 11,41 N 2,87

C 60,85 H 11,31 N 2,86

Хроматограмма тонкослойной хроматографии: (хлороформ/метанол/ 1 М ацетат натрия в 25-процентном аммиаке 70:40:10) R_f = 0,37

Пример 6: октадецил- (1,1-диметилпиперидинио-3-ил)-фосфат

C₂₅H₅₂NO₄P (461,670)1/2 H₂O

Получение аналогично примеру 5 из 10,3 мл (0,11 моль) хлорокиси фосфора, 27,0 г (0,10 моль) октадеканола, 32 + 40 мл пиридина и 39,2 г (0,13 моль) - 3-гидрокси - 1,1-диметилпиперидинтозилата.

Выход : 18,7 г (40%)

Элементный анализ:

Рассчитано, %:

C 63,80 H 11,35 N 2,98

Найдено, %:

C 63,38 H 11,72 N 2,63

C 63,61 H 11,98 N 3,61

Хроматограмма тонкослойной хроматографии: (хлороформ/метанол/

1 M ацетата натрия в 25-процентном аммиаке 70 : 40 : 10) R_f = 0,35

Пример 7 гексадецил-(1,1-диметилпиперидинио-2-ил)метилфосфат

C₂₆H₅₀NO₄P (447,643) 1/2 H₂O

Получение аналогично примеру 5 из 10,3 мл (0,11 моль) хлорокиси фосфора, 24,2 г (0,10 моль) гексадеканола, 32 + 40 мл пиридина и 41,0 г (0,13 моль) 2 - гидроксиметил - 1,1 - диметилпиперидинтозилата.

Выход: 22,9 (51%)

Элементный анализ:

Рассчитано, 5:

C 63,13 H 11,26 N 3,07

Найдено, %:

C 63,69 H 11,73 N 3,04

C 63,75 H 11,71 N 3,04

Хроматограмма тонкослойной хроматографии : (хлороформ/метанол/ 1 M ацетата натрия в 25-процентном аммиаке 70 : 40 : 10) R_f = 0,47

Пример 8: октадецил - (1,1-диметилпиперидинио-2-ил) метил-фосфат

C₂₆H₅₄NO₄P (475,697) 1/2 H₂O

Получение аналогично примеру 5 из 10,3 мл (0,11 моль) хлорокиси фосфора, 27,0 г (0,10 моль) октадеканола, 32 + 40 мл пиридина и 41,0 г (0,13 моль) 2-гидроксиметил-1,1-диметилпиперидинтозилата.

Выход: 23,9 г (50%)

Элементный анализ:

Рассчитано, %:

C 64,43 H 11,44 N 2,89

Найдено, %:

C 64,50 H 11,61 N 2,67

C 64,11 H 11,49 N 2,77

Хроматограмма тонкослойной хроматографии: (хлороформ/метанол/ 1 M ацетата натрия в 25-процентном аммиаке 70 : 40 : 10) R_f = 0,47

Пример 9: гексадецил - (1,1 - диметилпиперидинио-3-ил)метилфосфат

C₂₄H₅₀NO₄P (447,643) 1 H₂O

Получение аналогично примеру 5 из 10,3 мл (0,11 моль) хлорокиси фосфора, 24,2 г (0,10 моль) гексадеканола, 32 + 40 мл пиридина и 41,0 г (0,13 моль) 3-гидроксиметил- 1,1-диметилпиперидинтозилата.

Выход: 17,2 г (39%)

Элементный анализ:

Рассчитано, %:

C 61,91 H 11,26 N 3,01

Найдено, %:

C 62,32 H 12,21 N 2,86

C 61,79 H 11,96 N 2,98

Хроматограмма тонкослойной хроматографии: (хлороформ/метанол/ 1 M ацетата натрия в 25-процентном аммиаке 70 : 40 : 10) R_f= 0,29

Пример 10: октадецил-(1,1-диметилпиперидинио-3-ил)метилфосфат.

C₂₆H₅₄NO₄P (475,697) H₂O

Получение аналогично примеру 5 из 10,3 мл (0,11 моль) хлорокиси фосфора, 27,0 г (0,10 моль) октадеканола, 32 + 40 мл пиридина и 41,0 г (0,13 моль) 3-гидроксиметил-1,1,-диметилпиперидинтозилата.

Выход: 16,7 г (35%)

Элементный анализ:

Рассчитано, %:

C 63,25 H 11,43 N 2,84

Найдено, %:

C 62,98 H 12,21 N 2,76

C 63,67 H 12,47 N 2,80

Хроматограмма тонкослойной хроматографии: (хлороформ/метанол/ 1 M ацетата натрия в 25-процентном аммиаке 70 : 40 : 10) R_f = 0,30

Пример 11: тетрадецил-(1,1-диметилгексагидроазефинио-4-ил)- фосфат

C₂₂H₄₆NO₄P (419,54) H₂O

Получение аналогично примеру 5 из 9,6 г (45 миллимоль) тетрадеканола, 4,6 мл (50 миллимоль) хлорокиси фосфора, 10 + 20 мл пиридина и 21,3 г (67,5 миллимоль) гидрокси-1,1-диметил- гексагидроазепинтозилата.

Очистка осуществляется с помощью мгновенной хроматографии на силикагеле с использованием смеси метиленхлорид/метанол/25-процентный аммиак 70 : 40 : 10.

Выход: 2,70 г (15%)

Элементный анализ:

Рассчитано, %:

C 60,40 H 11,05 N 3,20

Найдено, %:

C 60,47 H 11,29 N 3,63

C 60,78 H 11,52 N 3,68

Хроматограмма тонкостенной хроматографии: (хлороформ/метанол/1 M ацетата натрия в 25-процентном аммиаке 70 : 40 : 10) R_f = 0,08.

Пример 12: гексадецил-(1,1-диметилгексагидроазефинио-4-ил)- фосфат

C₂₄H₄₈NO₄P (445,62)

Получение аналогично примеру 5 из 10,8 г (45 миллимоль) гексадеканола, 4,6 мл (50 миллимоль) хлорокиси фосфора, 10 + 20 мл пиридина и 21,3 г (67,5 миллимоль) 4-гидрокси-1,1-диметил-1,1- диметилгексагидроазефинтозилата.

Очистка осуществляется с помощью мгновенной хроматографии на силикагеле с использованием смеси метиленхлорид/метанол/25-процентный аммиак 70 : 30 : 10.

Выход: 5,0 г (25%)

Элементный анализ:

Рассчитано, %:

C 64,69 H 10,86 N 3,14

Найдено, %:

C 63,90 H 11,54 N 3,22

C 64,08 H 11,59 N 3,24

Хроматограмма тонкослойной хроматографии: (хлороформ/метанол/25-центный аммиак) R_f = 0,10 (1-бутанол/ледяная уксусная кислота/вода, 40 : 10 : 10) R_f = 0,10

Температура плавления: выше 250^oC (разложение)

Пример 13: октадецил-(1,1-диметилгексагидроазефинио-4-ил)-фосфат

C₂₆H₅₄NO₄P (475,695) 1/2 H₂O

Получение аналогично примеру 5 из 12,1 г (45 миллимоль) актадеканола, 4,6 мл (50 миллимоль) хлорокиси фосфора, 10 + 20 мл пиридина и 21,3 г (67,5 миллимоль) 4-гидрокси-1,1-диметилгексагидроазефинтозилата.

Очистка осуществляется с помощью мгновенной хроматографии на силикагеле с использованием смеси метиленхлорид/метанол/25-процентный аммиак 70 : 30 : 10.

Выход: 5,5 г (26%)

Элементный анализ:

Рассчитано, %:

C 64,43 H 11,44 N 2,89

Найдено, %:

C 64,54 H 11,64 N 2,82

C 64,66 H 11,58 N 2,64

Хроматограмма тонкослойной хроматографии: (хлороформ/метанол/1 M ацетата натрия в 25-процентном аммиаке 70 : 40 : 10) R_f = 0,22.

Температура плавления: выше 250^oC (разложение)

Пример 14: цис- ⁹ -октадецинил-(1,1-диметилгексагидроазефинио -4-ил)-фосфат

C₂₆H₅₂NO₄P (473,679) H₂O

Получение аналогично примеру 5 из 12,1 г. (45 миллимоль) цис- ⁹ -октадеканола, 4,6 мл (50 миллимоль) хлорокиси фосфора, 10 + 20 мл пиридина и 21,3 г (67,5 миллимоль) 4-гидрокси-1,1- диметилгексагидроксиазефинтозилата.

Очистка осуществляется с помощью мгновенной хроматографии с использованием смеси метиленхлорид/метанол/25-процентный аммиак 70 : 30 : 10.

Выход: 4,5 г (21%)

Элементный анализ:

Рассчитано, %:

C 63,51 H 11,07 N 2,85

Найдено, %:

C 64,05 H 11,21 N 3,10

C 63,80 H 11,06 N 3,06

Хроматограмма тонкослойной хроматографии: (хлороформ/метанол/25-процентный аммиак 70 : 40 : 10), R_f = 0,28; (1-бутанол/ледяная уксусная кислота/ вода 40 : 10 : 10) R_f = 0,10.

Пример 15: эйкозил-(1,1-диметилгексагидроазефинио-4-ил)-фосфат

C₂₈H₅₈NO₄P (503,754) H₂O

Получение аналогично примеру 5 из 13,4 г (45 миллимоль) эйкозанола, 4,6 мл (50 миллимоль) хлорокись фосфора, 10 + 20 мл пиридина и 21,3 г (67,5 миллимоль) 4-гидрокси-1,1- диметилгексагидроазефинтозилата.

Очистка осуществляется с помощью мгновенной хроматографии на силикагеле с использованием смеси метиленхлорид/метанол/25-процентный аммиак 70 : 30 : 10.

Выход: 5,7 г (25%)

Элементный анализ:

Рассчитано, %:

C 64,46 H 11,59 N 2,68

Найдено, %:

C 63,51 H 11,48 N 2,95

C 64,00 H 11,79 N 2,91

Хроматограмма тонкослойной хроматографии: (хлороформ/метанол/25-процентный аммиак 70 : 40 : 10) R_f = 0,12

Пример 16: эруцил-(1,1-диметилгексагидроазефино-4-ил)-фосфат

C₃₀H₆₀NO₄P (529,789) H₂O

Получение аналогично примеру 5 из 16,2 г (50 миллимоль) эруцилового спирта, 5,1 мл (55 миллимоль) хлорокиси фосфора, 18 + 30 мл пиридина и 20,5 г (65 миллимоль) 4-гидрокси-1,1-диметилгексагидроазефинтозилата.

Очистка осуществляется с помощью мгновенной хроматографии на силикагеле с использованием смеси метиленхлорид/метанол/25-процентный аммиак 70 : 30 : 10.

Выход: 4,1 г (16%)

Элементный анализ:

Рассчитано, %:

C 65,78 H 11,41 N 2,56

Найдено, %:

C 65,76 H 12,01 N 2,97

C 65,82 H 11,63 N 2,96

Хроматограмма тонкослойной хроматографии: (хлороформ/метанол/ 1 M ацетата натрия в 25-процентном аммиаке 70 : 40 : 10) R_f = 0,30

Пример 17: октадецил-(1,1-диметилпирролидинио-3-ил)-фосфат

C₂₄H₅₀NO₄P (447,643) 1/2 H₂O

Получение аналогично примеру 5 из 3,25 г (12 миллимоль) октадеканола, 1,21 мл (13 миллимоль) хлорокиси фосфора, 3,7 + 4,8 мл пиридина и 4,31 г (15 миллимоль) гидрокси-1,1-диметилпирролидинтозилата. Очистка исходного продукта осуществлялась путем растворения в 96-процентном этаноле и обработки с помощью ионообменника амберлита МВЗ.

Выход: 1,31 г (25%)

Элементный анализ:

Рассчитано, %:

C 63,13 H 11,26 N 3,07

Найдено, %:

C 62,99 H 11,28 N 2,80

C 62,74 H 11,27 N 2,89

Хроматограмма тонкослойной хроматографии: (хлороформ/метанол/ 1 M ацетата натрия в 25-процентном аммиаке 70 : 40 : 10) R_f = 0,25.

Пример 18: гексадецил-2-(1,1-диметилпирролидинио-2-ил)-фосфат

C₂₄H₅₀NO₄P (447,643) H₂O

Получение аналогично примеру 5 из 9,21 г (38 миллимоль) гексадеканола, 3,9 мл (42 миллимоль) хлорокиси фосфора, 13 + 16 мл пиридина и 15,8 г (50 миллимоль) 2-(2-гидроксиэтил)-1,1- диметилпирролидинтозилата.

Очистка осуществлялась путем растворения в 96-процентном этаноле и обработки с помощью ионообменника амберлита МВЗ.

Выход: 6,0 г (35%)

Элементный анализ:

Рассчитано, %:

C 61,91 H 11,26 N 3,01

Найдено, %:

C 61,82 H 11,69 N 3,21

C 61,93 H 11,86 N 3,28

Хроматограмма тонкослойной хроматографии: (хлороформ/метано/1 M ацетата натрия в 25-процентном аммиаке 70 : 40 : 10), R_f = 0,38.

Пример 19: октадецил-2-(1,1-диметилпирролидинио-2-ил)этил-фосфат

C₂₆H₅₄NO₄P (475,697) 1/2 H₂O

Получение аналогично примеру 5 из 10,3 г (38 миллимоль) октадеканола, 3,9 мл (42 миллимоль) хлорокиси фосфора, 13 + 16 мл пиридина и 15,8 г (50 миллимоль) 2-(2-гидроксиэтил)-1,1- диметилпирролидинтозилата.

Очистка осуществлялась путем растворения в 96-процентном этаноле и обработки с помощью ионообменника амберлита МВЗ.

Выход: 7,8 г (43%)

Элементный анализ:

Рассчитано, %:

C 64,43 H 11,44 N 2,89

Найдено, %:

C 64,69 H 11,77 N 2,64

C 64,84 H 11,88 N 2,69

Хроматограмма тонкослойной хроматографии: (хлороформ/метанол/ 1 M ацетата натрия в 25-процентном аммиаке 70 : 40 : 10), R_f = 0,35.

Пример 20: гексадецил-(1,1-диметилпирролидинио-2-ил)-метилфосфат

C₂₃H₄₈NO₄P (433,616) 1/2 H₂O

Получение аналогично примеру 5 из 9,21 г (30 миллимоль) гексадеканола, 3,9 мл (42 миллимоль) хлорокиси фосфора, 13 + 16 мл пиридина и 15,1 г (50 миллимоль) 2 - гидроксиметил-1,1-диметилпирролидинтозилата.

Очистка осуществлялась путем растворения в 96-процентном этаноле и обработки с помощью ионообменника амберлита МВЗ.

Выход: 8,3 г (51%)

Элементный анализ:

Рассчитано, %:

C 62,41 H 11,16 N 3,16

Найдено, %:

C 62,09 H 11,48 N 3,01

C 62,25 H 11,66 N 3,09

Хроматограмма тонкослойной хроматографии: (хлороформ/метанол/ 1 M ацетата натрия в 25-процентном аммиаке 70 : 40 : 10) R_f = 0,33

Пример 21: октадецил-(1,1-диметилпирролидинио-2-ил)метил-фосфат

C₂₅H₅₂NO₄P (461,67) 1/2 H₂O

Получение аналогично примеру 5 из 10,3 г (38 миллимоль) октадеканола, 3,9 мл (42 миллимоль) хлорокиси фосфора, 13 + 16 мл пиридина и 15,1 г (50 миллимоль) 2-гидроксиметил-1,1- диметилпирролидинтозилата.

Очистка осуществлялась путем растворения в 96-процентном этаноле и обработки с помощью ионообменника амберлита МВЗ.

Выход: 9,0 г (52%)

Элементный анализ:

Рассчитано, %:

C 63,80 H 11,35 N 2,98

Найдено, %:

C 63,13 H 11,57 N 2,84

C 63,55 H 11,66 N 2,82

Хроматограмма тонкослойной хроматографии: (хлороформ/метанол/ 1 M ацетата натрия в 25-процентном аммиаке 70 : 40 : 10) R_f = 0,35

Пример 22: гексадецил-(1-хинуклидинио-3-ил)-фосфат

C₂₄H₄₈NO₄P (445,64) 1,5 H₂O

2,7 мл (30 миллимоль) хлорокиси фосфора растворяют в 25 мл хлороформа, охлаждают до 5 - 10^oC и в течение одного чага каплями смешивают с раствором из 6,4 г (26 миллимоль) гексадеканола и 10 мл пиридина в 50 мл хлороформа. После получасового дополнительного перемешивания при комнатной температуре добавляется раствор из 4,5 г (35 миллимоль) 3 - гидроксихинуклидина и 5 мл пиридина в 10 мл хлороформа. После перемешивания в течение 5 ч при комнатной температуре раствор гидролизуется с помощью 15 мл воды и дополнительно перемешивается в течение получаса. Затем дважды осуществляют промывание соответственно с помощью 100 мл раствора вода/метанол (1:1) и концентрируют органическую фазу после сушки с помощью сульфата магния до сухости. Остаток хроматографируется на силикагеле с использованием смеси метиленхлорид/метанол 80:25 и затем метиленхлорид/метанол/25-процентный аммиак. Содержащие продукт фракции очищают, выпаривают до сухости и с целью кристаллизации смешивают с ацетоном. Сушка осуществляется в вакууме с помощью P₂O₅.

Выход: 4,95 (44%) гексадецил-(хинуклидинио-3-ил)-фосфат.

4,95 г. (11,5 миллимоль) гексадецил -(хинуклидинио-3-ил)-фосфата растворяют в 30 мл метанола, смешивают с 13,7 г (69 миллимоль) карбоната калия, 8,5 мл воды и каплями при хорошем перемешивании с раствором из 3,3 мл (35 миллимоль) диметилсульфата в 5 мл метанола. После перемешивания в течение 14 ч при комнатной температуре отфильтровывают неорганические соли, фильтрат концентрируют до сухости и остаток растворяют в метиленхлориде. После фильтрования хроматографируют на силикагеле с использованием смеси метиленхлорид/метанол/-25-процентный аммиак 70:30:5. Содержащие продукт фракции объединяют, выпаривают до сухости и с целью кристаллизации смешивают с ацетоном. Сушка осуществляется в вакууме с помощью P₂O₅.

Выход: 2,7 г (48%)

Элементный анализ:

Рассчитано, %:

C 60,99 H 10,88 N 2,96

Найдено, %:

C 61,38 H 11,04 N 3,29

C 61,46 H 11,22 N 3,25

Хроматограмма тонкослойной хроматографии: (хлороформ/метанол/ 25-процентный аммиак 70:40:10) R_f=0,44

Пример 23: октадецил-(1-метилхинуклидинио-3-ил)-фосфат

C₂₆H₅₂NO₄P(473,68)2H₂0

Получение аналогично примеру 5 из 18,3 г (67,5 миллимоль) октадеканола, 7,0 мл (75 миллимоль) хлорокиси фосфора, 18 + 20 мл пиридина и 28,3 (90 миллимоль) 3-гидрокси-1-метилхинуклидинтозилата. Очистка осуществлялась путем растворения в 96-процентном этаноле и обработки с помощью ионообменника амберлита МВ 3.

Выход: 18,4 г (57%)

Элементный анализ:

Рассчитано, %:

C 61,27 H 11,07 N 2,75

Найдено, %:

C 61,27 H 10,91 N 2,45

C 61,95 H 11,23 N 2,51

Хроматограмма тонкослойной хроматографии: (хлороформ/метанол/ 1М ацетата натрия в 25-процентном аммиаке 70:40:10),

R_f= 0,37

(1-бутанол/ледяная уксусная кислота/ вода 40:10/10),

R_f=0,13

Пример 24: гексадецил -(1,1-диметилтропанио-4-ил)-фосфат

C₂₅H₅₀NO₄P (459,654)H₂O

Получение аналогично примеру 5 из 12,1 г (50 миллимоль) гексадеканола, 5,1 мл (55 миллимоль) хлорокиси фосфора, 17 + 40 мл пиридина и 21,3 г (65 миллимоль) 4-гидрокси- 1,1-тропантозилата. Очистка осуществлялась путем растворения в 96-процентном этаноле обработки с помощью ионообменника амберлита МВ 3 и перекристаллизации из ацетона.

Выход : 11,3 г (49%)

Элементный анализ :

Рассчитано, %:

C 62,86 H 10,97 N 2,93

Найдено, %:

C 62,45 H 11,52 N 2,82

C 62,58 H 11,52 N 2,75

Хроматограмма тонкослойной хроматографии : (хлороформ/метанол/ 1 М ацетата натрия в 25-процентном аммиаке 70:40:10).

R_f=0,28

Пример 25 : октадецил - (1,1-диметилтропанио-4-ил)-фосфат

C₂₇H₅₄NO₄P (487,708)

Получение аналогично примеру 5 из 13,5 г (50 миллимоль) октадеканола, 5,1 мл (55 миллимоль) хлорокиси фосфора, 17 + 20 мл пиридина и 21,3 г (65 миллимоль) 4-гидрокси-1,1-диметилтропантозилата. Очистка осуществлялась путем растворения в 96-процентном этаноле и обработки с помощью ионообменника амберлита МВ 3.

Выход : 10,7 г (44%)

Элементный анализ:

Рассчитано :

C 66,49 H 11,16 N 2,87

Найдено:

C 65,72 H 11,48 N 2,64

C 66,27 H 11,78 N 2,65

Хроматограмма тонкослойной хроматографии : (хлороформ/метанол/ 1 М ацетата натрия в 25-процентном аммиаке 70:40:10),

R_f = 0,22

Фармакологические данные представлены в таблице.

DMDA-индуцированная карцинома молочной железы крысы

Самка крыс Sprague - Dawley, которым было 50 дней отроду, (Селекционный центр Моллегарда, ДК-4236 Ejby) вводили орально разовой дозой по 20 мг на животное 7,12-диметилбенз(а)антрацен (DMBA), растворенный в 1 мл оливкового масла. Первые опухоли развиваются приблизительно спустя месяц после введения DMBA. Вес опухолей оценивали пальпацией (ощупыванием) и сравнением с заранее заготовленными моделями из пластилина аналогично Druckrey et al. Определяется вес модели и с помощью коэффициента, учитывающего различия в удельном весе опухолевой ткани и пластилина, пересчитывают в опухолевые веса. Надежность этого метода проверялась одновременным определением весов 99 индивидуальных опухолей, с одной стороны, посредством пальпации, а с другой стороны, путем непосредственного взвешивания вырезанных опухолей. Статистическая обработка дала в результате коэффициент корреляции 0,98.

Крыс с общей массой опухоли 1 г случайным образом распределяют в различные по дозам группы и контрольную группу, так что в каждой группе находится по 6-7 животных. Благодаря этому обеспечивается приблизительно равномерное распределение опухолей с различными инкубационными периодами, общими весами и количеством отдельных узлов в экспериментальных группах. Непосредственно после рандомизации начинается терапевтический опыт. Испытательные вещества растворяют в 0,9-процентном растворе NaCl и вводят в организм посредством желудочного зонда. После дачи последней дозы животные наблюдаются по меньшей мере 7 дней а опухолевые веса регистрируются. Контрольные животные получают водопроводную воду согласно схеме лечения. Результаты подсчитывают и выражают в виде показателя замедления роста (WHI) - нем. = Wackstumshemmungs index = то же, что и GII в процентах.

где

W_c средняя разность веса опухолей в контрольной группе считая на вид лечения

W_t - средняя разность веса опухолей в лечебной группе считая на вид лечения.

Условия содержания животных.

Все животные содержатся в специфически свободных от патогенов условиях (SPF) с неограниченным доступов к воде (подкисленной до pH 3) и корму (стандартный лабораторный корм Альтромин 1324).

КВ-опухоль в "голых" мышах.

В опытах используют самок "голых" мышей NMRI - nu/nu, которым отроду 9-10 недель (Селекционный и исследовательский центр Бомхольдгарда, ДК-8680 R_y). Фрагменты человеческой КВ-опухоли (средний диаметр 2 мм) трансплантируют подкожно в правый бок. Животных группируют случайным образом и лечебную и контрольную группы, состоящие каждая из 7 животных. Лечение начинается, когда имплантат достигнет веса приблизительно 2 г. Вес опухолей оценивается путем пальпации (ощупывания) и сравнения с предварительно изготовленными пластилиновыми моделями аналогично Druckrey et al. Определяют вес моделей и пересчитывают посредством коэффициента, учитывающего различия в удельном весе опухолевой ткани и пластилина, в опухолевые ткани. Надежность этого метода проверялась путем одновременного определения весов 99 индивидуальных опухолей, с одной стороны, посредством пальпации, с другой стороны, путем непосредственного взвешивания вырезанных опухолей. Статистическая обработка дала в результате коэффициент корреляции 0,98.

где

W_c - средняя разность опухолевых весов в контрольной группе, отнесенная на вид лечения

W_t средняя разность в опухолевых весах в лечебной группе, отнесенная на вид лечения.

Условия содержания животных.

Все животные содержатся в специфически свободных от патогена условиях (SPF) с неограниченным доступом к воде (подкислена до pH 3) и корму (стандартный лабораторный корм Альтромин 1324).

Пример на получение таблеток.

500 г активного вещества согласно изобретению, 500 г кукурузного крахмала и 40 г высокодисперсного оксида кремния просеивают и затем смешивают в течение 20 мин в подходящем смесителе. Смесь гранулируют 220 г воды, пропускают через сито с размером ячеек 2,5 мм и сушат при 40^oC 65 мин на решетках. Образовавшийся таким образом гранулят просеивают вместе с 620 г кукурузного крахмала, 400 г микрокристаллической целлюлозы, 400 г вторичного фосфата кальция и 10 г высокодисперсного оксида кремния и смешивают в течение 30 мин. Затем добавляют 10 г стеарата магния и еще раз смешивают в течение 5 мин. Полученную таким образом массу прессуют в таблетки весом по 250 мг. Одна таблетка содержит 60 мг действующего начала.

Пример на получение растворимых в желудочном соке пленочных таблеток.

В 400 г нагретой воды при перемешивании вносят 31,25 г полиэтиленгликоля 800 и 75 г гидроксипропилметилцеллюлозы и растворяют. В подходящем сосуде гомогенизируют 93,2 г воды вместе с 0,63 г симетикона и 25 г тиоксида титана. Обе жидкости затем после охлаждения до комнатной температуры смешивают друг с другом. Полученную суспензию затем распыляют на 2500 г ядер. Одна полученная таким образом пленочная таблетка весит 256 мг и содержит 50 мг действующего начала.