растворитель для живых бактерийных вакцин
Классы МПК: | A61K39/00 Лекарственные препараты, содержащие антигены или антитела C12N1/04 консервирование или сохранение жизнеспособных микроорганизмов |
Автор(ы): | Ярцев М.Я., Шишов В.П., Анисимова Л.В., Александрова М.Л. |
Патентообладатель(и): | Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности |
Приоритеты: |
подача заявки:
1996-05-31 публикация патента:
20.07.1998 |
Изобретение относится к биологической промышленности и может быть использовано в ветеринарной практике. Растворитель предназначен для растворения сухих живых бактерийных вакцин (против листериоза животных, сальмоноллеза, рожи свиней, пастереллеза птиц, бруцеллеза крупного рогатого скота и др.) перед применением. Входящий в состав растворителя пептон, взятый в оптимальных концентрациях, и буферный компонент, содержащий изотоническую среду, обеспечивают близкую к стопроцентной выживаемость микроорганизмов как при растворении сухих вакцин, так и в регидратированном состоянии. Для изготовления растворителя навеску пептона концентрацией 0, 25-1,00% растворяют в калий-фосфатном буферном растворе рН 7,2-7,5 и стерилизуют автоклавированием в течение 30 мин под давлением 1 атм. 5 табл.
Рисунок 1
Формула изобретения
Растворитель для живых бактерийных вакцин, содержащий стабилизатор и буферный компонент, отличающийся тем, что в качестве стабилизатора растворитель содержит пептон, а в качестве буферного компонента - калий-фосфатный буферный раствор при следующем соотношении компонентов, мас.%:Пептон - 0,25 - 1,00
Калий-фосфатный буферный раствор - Остальное до 100
Описание изобретения к патенту
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в ветеринарной практике для растворения сухих бактерийных вакцин против листериоза животных, сальмонеллезов, рожи свиней, пастереллеза птиц, бруцеллеза крупного рогатого скота и др. Сухие бактерийные вакцины содержат взвесь живых микроорганизмов, высушенных в защитной среде. Перед использованием вакцину необходимо растворить, причем процесс растворения (регидратации) оказывает на бактерии повреждающее действие и делает необходимым применение эффективного растворителя (разбавителя) для сохранения исходной активности разведенной вакцины в течение всего периода вакцинации. При анализе патентной документации и научно-технической литературы не обнаружено достаточно эффективного разбавителя для живых бактерийных вакцин. Известен растворитель для живых бактерийных вакцин, принятый за прототип. К числу недостатков данного растворителя, обнаруженных в процессе применения при вакцинации, относятся следующие: реактогенность, связанная с высоким содержанием пептона (2 - 5%) и отрицательным воздействием трилона Б на жизнеспособность бактерий, сложность и дороговизна изготовления. Целью изобретения является повышение стабилизирующей эффективности растворителя, стандартизация его состава и упрощение технологии его изготовления. Поставленная цель достигается за счет того, что в качестве стабилизирующего вещества растворитель содержит пептон, а в качестве буферного компонента - калий-фосфатный буферный раствор (КФБ) при следующем соотношении компонентов, мас.%: пептон 0,25 - 1,00; КФБ - остальное до 100. Для изготовления растворителя навеску пептона (ГОСТ 13805-76) из расчета его концентрации 0,25 - 1,00% растворяют в КФБ (0,925 г KH2PO4 и 5,4 г K2HPO4 на 1 л дистиллированной воды) и устанавливают величину pH 7,2 - 7,5. Приготовленный растворитель стерилизуют автоклавированием в течение 30 мин под давлением 1 атм (120oC), стерильный растворитель расфасовывают по 100, 200 или 500 см3 в стерильные флаконы, закрывают стерильными резиновыми пробками, обкатывают металлическими колпачками и этикетируют. Входящий в состав растворителя пептон, взятый в оптимальных концентрациях, и буферный компонент, создающий изотоническую среду, обеспечивают близкую к 100%-ной выживаемость микробных тел (листерий, сальмонелл, бактерий рожи, пастерелл, бруцелл и др.) как при растворении сухих вакцин, так и в регидратированном состоянии в течение всего времени вакцинации животных. Входящие в состав разбавителя компоненты - пептон и фосфаты калия - физиологически индифферентные вещества, хорошо растворимые в воде, стерилизуются автоклавированием, не оказывают токсического действия на людей и животных, не обладают антигенностью. Влияние концентрации пептона в растворителе на жизнеспособность бактерий в вакцине поясняется следующими примерами. Пример 1. Растворитель с минимальным количеством пептона 0,25% в КФБ. Сухую вакцину растворяют в данном растворителе и выдерживают в течение 0,5 ч при температуре 18oC, после чего делают высевы на мясо-пептонный агар для определения количества жизнеспособных клеток. Для сравнения использовали известный растворитель и употребляемый для этих целей физиологический раствор. Результаты исследований, приведенные в табл. 1, показывают, что жизнеспособность бактерий при содержании 0,25% пептона в растворителе выше, чем при использовании прототипа и физиологического раствора. Пример 2. Растворитель с оптимальным количеством пептона 0,5% в КФБ. Сухую вакцину растворяют в данном растворителе, выдерживают в течение 0,5 ч при температуре 18oC, после чего определяют количество жизнеспособных клеток. Для сравнения использовали известный растворитель и физиологический раствор. Результаты исследований, приведенные в табл. 2, показали, что содержание в растворителе 0,5% пептона значительно повышает жизнеспособность бактерий по сравнению с прототипом и физиологическим раствором. Пример 3. Растворитель с максимальным количеством пептона 1,0% в КФБ. Сухую вакцину растворяют в данном растворителе, выдерживают в течение 0,5 ч при температуре 18oC, после чего определяют количество жизнеспособных клеток. Для сравнения использовали известный растворитель и физиологический раствор. Результаты исследований, приведенные в табл. 3, показывают, что при содержании в растворителе 1,0% пептона жизнеспособность бактерий выше, чем в прототипе и физиологическом растворе. Пример 4. Растворитель с количеством пептона ниже минимального 0,1% в КФБ. Сухую вакцину растворяют в данном растворителе, выдерживают в течение 0,5 ч при температуре 18oC, после чего определяют количество жизнеспособных клеток. Для сравнения использовали известный растворитель и физиологический раствор. Результаты исследований, приведенные в табл. 4, показывают, что при содержании в растворителе 0,1% пептона жизнеспособность бактерий падает и приравнивается к жизнеспособности в физиологическом растворе. Пример 5. Растворитель с количеством пептона выше максимального 1,5% в КФБ. Сухую вакцину растворяют в данном растворителе, выдерживают в течение 0,5 ч при температуре 18oC, после чего определяют количество жизнеспособных клеток. Для сравнения используют известный растворитель и физиологический раствор. Результаты исследований, приведенные в табл. 5, показывают, что при содержании в растворителе 1,5% пептона жизнеспособность бактерий становится ниже, чем в прототипе и физиологическом растворе. Предлагаемый растворитель технологичнее, дешевле, более стандартен по сравнению с существующим, не требует использования ценного пищевого сырья при изготовлении и не вызывает реактогенных реакций у животных, а самое главное, повышает жизнеспособность бактерий.Класс A61K39/00 Лекарственные препараты, содержащие антигены или антитела
Класс C12N1/04 консервирование или сохранение жизнеспособных микроорганизмов