производные 3,4-дигидроизохинолина или их фармацевтически приемлемые соли, способ их получения и фармацевтическая композиция на их основе

Формула изобретения

1. Производные 3,4-дигидроизохинолина общей формулы I



где X - группа формул:















где X₁ - моно- или дизамещенный трифторметилом или этоксигруппой фенил, замещенный метоксилом и фтором фенил или 2-метоксифенил, который может быть дополнительно замещен фтором,

или группа формулы



где X₂ - группа -CH₂-CH₂- или -CH₂-CH(CH₃)-;

X₃ - 2,3,4-триметоксифенил, 2,3-диметоксифенил, 2,6-диметоксифенил, 3,6-диметоксифенил, тиенил, моно- или дизамещенный трифторметилом или этоксигруппой фенил или замещенный метоксигруппой и фтором фенил,

или их фармацевтически приемлемые соли.

2. Способ получения производных 3,4-дигидроизохинолина общей формулы I



где X - группы формул















где X₁ - моно- или дизамещенный трифторметилом или этоксигруппой фенил, замещенный метоксилом и фтором фенил или 2-метоксифенил, который может быть дополнительно замещен фтором,

или группа формулы



где X₂ - группа -CH₂-CH₂- или -CH₂-CH(CH₃)-;

X₃ - 2,3,4-триметоксифенил, 2,3-диметоксифенил, 2,6-диметоксифенил, 3,6-диметоксифенил, тиенил, моно- или дизамещенный трифторметилом или этоксигруппой фенил или замещенный метоксигруппой и фтором фенил,

или их солей, отличающийся тем, что соединение общей формулы II



где X - имеет указанное значение,

подвергают циклизации в присутствии агента конденсации с последующим выделением целевого продукта в свободном виде или в виде фармацевтически приемлемой соли.

3. Фармацевтическая композиция с ингибирующей трансмембранный переход кальция в клетках активностью, содержащая активное начало и фармацевтически приемлемый носитель, отличающаяся тем, что в качестве активного начала она содержит соединение общей формулы I



где X - группа формул















где X₁ - моно- или дизамещенный трифторметилом или этоксигруппой фенил, замещенный метоксилом и фтором фенил или 2-метоксифенил, который может быть дополнительно замещен фтором,

или группа формулы



где X₂ - группа -CH₂-CH₂- или -CH₂-CH(CH₃)-;

X₃ - 2,3,4-триметоксифенил, 2,3-диметоксифенил, 2,6-диметоксифенил, 3,6-диметоксифенил, тиенил, моно- или дизамещенный трифторметилом или этоксигруппой фенил или замещенный метоксигруппой и фтором фенил,

или его фармацевтически приемлемую соль в эффективном количестве.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к новым химическим веществам, обладающим биологической активностью, в частности к производным 3,4-дигидроизохинолина общей формулы (I)



где X - группы формул



где X₁ означает моно- или дизамещенный трифторметилом или этокси-группой фенил, замещенный метоксилом и фтором фенил или 2-метоксифенил, который может быть дополнительно замещен фтором, или группа формулы



где X₂ означает группу -CH₂-CH₂- или -CH₂-CH(CH₃)-, а X₃ - 2,3,4-триметоксифенил, 2,3-диметоксифенил, 2,6-диметоксифенил, 3,6-диметоксифенил, тиенил, моно- или дизамещенный трифторметилом или этокси-группой фенил или замещенный метокси-группой и фтором фенил, и их фармацевтически приемлемым солям.

Предлагаемые производные 3,4-дигидроизохинолина формулы (I) могут иметься в следующих таутомерных формах А и Б:



Эти таутомерные формы также охватываются данным изобретением.

Предпочтительными производными 3,4-дигидроизохинолина формулы (I) являются соединения, у которых X означает группы



где X₁ означает 2-метоксифенил, который может быть дополнительно замещен фтором,



где X₂ означает группу -CH₂CH₂-, а X₃ - 2,3,4-триметоксифенил, 2,3-диметоксифенил, 2,6-диметоксифенил, 3,6- диметоксифенил, 2- или 3-тиенил, замещенный трифторметилом или этокси-группой фенил или замещенный метокси-группой или фтором фенил, и их фармацевтически приемлемые соли.

Производные 3,4-дигидроизохинолина общей формулы (I) могут получаться известными методами, например, за счет того, что

а) соединение общей формулы (II)



где X имеет вышеуказанное значение,

подвергают циклизации в присутствии агента конденсации,

или

б) соединение общей формулы (III)



где Y означает гидроксил или галоид,

подвергают взаимодействию с соединением общей формулы (IV)

XH, (IV)

где X имеет вышеуказанное значение,

в присутствии агента конденсации.

В качестве агента конденсации пригодны многочисленные кислоты Льюиса, такие как оксихлорид фосфора, трифторид бора, тетрахлорид олова или тетрахлорид титана, сильные минеральные кислоты, такие как серная кислота, фторсульфокислоты, фторводородная кислота или полифосфорная кислота, а также карбодиимиды, например циклогексилкарбодиимид, и карбонилдиимидазол. Обычно их добавляют в избытке.

Для осуществления способа а) предпочтительно применяют оксихлорид фосфора, а для осуществления способа б) - циклогексилкарбодиимид или карбонилдиимидазол.

Реакции а) и б) можно проводить как в присутствии, так и в отсутствии растворителей. Пригодны все инертные растворители, необходимо только, чтобы они обладали способностью хорошо растворять реагенты и чтобы они имели достаточно высокие точки кипения. Примерами являются бензол, алкилбензолы, хлорбензол, декалин, хлороформ, метиленхлорид, ацетонитрил и т.п. Вариантом является случай, когда агент конденсации сам является растворителем, например оксихлорид фосфора.

Температура реакций не является лимитирующим параметром. Взаимодействие согласно изобретению можно проводить в очень широкой области температур, предпочтительно при нагревании почти до точки кипения растворителя.

Предлагаемые соединения формулы (I) являются основаниями и их можно обычным образом с использованием неорганических или органических кислот, а также соле- или комплексообразователей переводить в любые физиологически переносимые аддукты (соли).

Пригодными для солеобразования кислотами являются, например, соляная, бромистоводородная, иодистоводородная, фтористоводородная, серная, фосфорная, азотная, уксусная, пропионовая, масляная, капроновая, валерьяновая, щавелевая, малоновая, янтарная, малеиновая, фумаровая, молочная, винная, лимонная, яблочная, бензойная, пара-гидроксибензойная, фталевая, коричная, салициловая, аскорбиновая кислоты, метансульфокислота и им подобные.

Получение предлагаемых соединений формулы (I) поясняется следующим примером.

Пример 1

Гидрохлорид3,4-дигидро-1-бензил-6,7-диметокси--[ди-2-(2,3,4-триметоксифенил)этил]аминокарбонил-изохинолина



а) N, N-ди-[2-(2,3,4-триметоксифенил)-этил] -амид 2-(3,4-диметоксифенил)-этиламинокарбонил-фенилуксусной кислоты

В раствор 18,0 г (52,4 ммоль) 2-(3,4-диметоксифенил)-этиламида сложного моноэтилового эфира фенилмалоновой кислоты в 150 мл обезвоженного диметилформамида при комнатной температуре и при перемешивании вводят порциями 9,0 г (55,5 ммоль) карбонилдиимидазола. Через 30 мин добавляют 18,0 г (44,3 ммоль) ди-[2-(2,3,4-триметоксифенил)-этил] -амина и перемешивают в течение 30 мин. После этого растворитель отгоняют в вакууме, остаток разводят в 1,5 л дихлорметана и после этого дважды встряхивают вместе с 250 мл воды и 200 мл 1 н. соляной кислоты. После сушки над сульфатом натрия органическую фазу сгущают и остаток очищают на колонке с силикагелем с применением в качестве элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 100 : 2, после чего кристаллизуют из смеси этилацетата и диэтилового эфира.

Выход: 35,5 г

б) 35,0 г (47,5 ммоль) амида со стадии а) и 15 мл (164 ммоль) оксихлорида фосфора в 150 мл обезвоженного ацетонитрила в течение 30 мин нагревают до кипения. По окончании взаимодействия (контроль по тонкослойной хроматографии) отгоняют в вакууме растворитель и непрореагировавший оксихлорид фосфора.

Остаток примешивают к ледяной воде, раствором соды устанавливают щелочное значение pH и порционно экстрагируют 1 л дихлорметана. Органическую фазу промывают водой, сушат над сульфатом натрия и концентрируют. Остаток дважды очищают на колонке с силикагелем с применением в качестве первого элюента смеси дихлорметана и метанола в соотношении 100 : 2-100 : 4, а в качестве второго элюента смеси дихлорметана и этилацетата в соотношении 1 : 1.

Из очищенного продукта (6,5 г) растворением в 50 мл этанола и добавлением спиртовой соляной кислоты получают гидрохлорид. После концентрирования и сушки в высоком вакууме при 50^oC остается 11,5 г аморфного целевого продукта с т. пл. 56-64^oC.

Аналогичным образом можно получать соединения, указанные в табл. 1.

Предлагаемые соединения формулы (I) можно применять в качестве средства для защиты головного мозга, лечения хронических воспалительных процессов и торможения свертывания крови.

Приведенные ниже результаты испытаний показывают биологическую активность новых соединений.

Ишемическая толерантность

Ишемия путем пережатая сонной артерии под эфирным наркозом в течение 10 мин. Соединения примера давали четырежды в течение 24 ч, начиная через 2 ч после освобождения артерии, при дозах 1 и 10 мг/кг.

Через 72 ч после пережатая сосуда животных умерщвляли и препарировали их мозг для испытаний. Недостатком ишемического поражения или соответственно его повторения считалось повреждение клеток в области CA₁-зоны аммонова рога в определенном вырезе гистологического препарата. Испытание проводили на группах, в которых каждый раз было по пять животных.

В группе, в которой животным совсем не давали испытуемое соединение, все животные показали четкое повреждение исследуемой CA₁-зоны.

В противоположность этому при даче соединения примера наблюдалась четкая, зависимая от дозы защита от поражения гипоксией. При дозе 1 мг соединения на 1 кг наблюдалось повреждение CA₁-зоны только у двух из пяти животных. Доза 10 мг соединения A на 1 кг дает полное отсутствие повреждения у всех пяти животных.

Из этих результатов можно заключить, что соединения общей формулы (I) можно применять для лечения нейрологических нарушений, например, вызванных кровоизлиянием в мозг.

Результат этого испытания показывает также, что соединения преодолевают гематоэнцефалический барьер, что является существенным признаком изобретения.

Последующие испытания на выделенных клеточных культурах показывают действие испытуемых соединений. Далее, из результатов этих испытаний можно сделать вывод (также как и из результатов вышеописанных испытаний на животных), что соединения общей формулы (I) можно применять для указанного в данной заявке лечения.

В выделенных клеточных культурах (например, нейтрофильных гранулоцитов, клеток HL-60, тромбоцитов и др.) соединение примера могло в зависимости от дозы ингибировать спровоцированную различными агонистами (например, активирующим тромбоциты фактором (далее: "АТФ") лейкотриенами, эндотелином, пептидом, тринуклеотидом формилметионина, фенилаланина и лейцина (далее: тринуклеотид FMLP), или изопреналином) "перегрузку кальцием" и гибель клетки (значение KT₅₀ (=концентрация торможения) находится в области 1 мкмоль).

Измеряли полумаксимальную концентрацию торможения соединения примера, которую ингибируют индуцируемый тринуклеотидом FMLP (1 наномоль) переход кальция на клетках HL-60 (10⁶ клеток в суспензии), содержащих FLUO₃. Она составляет 5,410^-6 моль.

На отдельных клетках HL-60 с использованием метода "фиксации пятна" измеряли электрофизиологически трансмембранное поступление через "неселективный канал катионов" после стимуляции аденозинтрифосфорной кислотой. Соединение примера ингибирует это поступление (значение KT₅₀ : 7 наномоль).

Эти результаты обосновывают непосредственную точку воздействия на выделенных клетках. В живом организме применяемые в дальнейшем в испытаниях гранулоциты или соответствующие лейкоциты после поражения клеток головного мозга (например, в результате кровоизлияния в мозг) специально внедряются в зону повреждения, где они активируются процессом, вызванным кальцием, разрушаются, и при этом выделяются медиаторы, поражающие ткани, в том числе также и хемотактические (например, АТФ, лейкотриены, простагландины, тринуклеотид FMLP и др.). Привлеченные хемотаксисом дополнительные лейкоциты увеличивают зону поражения. Описанные выше опыты показали, что этот порочный круг можно блокировать дачей описанных выше активных веществ. Нейрологическое нарушение остается таким образом ограниченным.

Можно было показать, что классические антагонисты кальция (например, верапамил, нифедипин, дилтиазем) не ингибируют активирование лейкоцитов.

Дальнейшие испытания с соединением примера подтвердили вышеприведенное утверждение:

На выделенных нейрональных клетках из коры головного мозга и из аммонова рога головного мозга эмбрионов крыс показана непосредственная нейрональная атака соединения примера. На выделенных содержащих FURA-2 клетках измерены кривые концентрация - время (переход кальция) цитоплазматического Ca²⁺.

Как механическим повреждением, так и путем дачи возбуждающих аминокислот (незаменимая аминокислота, глутамат, каинат, квисквалат и NMDA) провоцировали сильный подъем цитоплазматической концентрации кальция, который во всех случаях ингибировался в зависимости от дозы (KT₅₀ при 3 мкмоль) соединением примера.

Механизм действия этого торможения исследовали как на культурах нейрональных клеток, так и на нейрофильных гранулоцитах и на HL 60-клетках человека и тромбоцитах. Можно было показать, что соединение примера тормозит трансмембранный переход кальция в клетках, который стимулируется агонистами рецепторов (например, незаменимая аминокислота, тринуклеотид FMLP, лейкотриены АТФ, эндотелии и др. ). Этот так называемый "опосредствованный рецептором вход Ca²⁺ приток не ингибируется классическими антагонистами кальция. Классические антагонисты кальция не могут предотвратить активирование лейкоцитов и тромбоцитов, поскольку эти клетки не имеют зависимых от напряжения каналов для Ca²⁺. Блокаду для трансмембранного притока кальция можно подтвердить электрофизиологически (метод фиксации вольтажа) на HL 60-клетках и на нейрональных клетках.

Результаты опытов представлены в табл. 2.

%T=% торможения трансмембранного притока Ca²⁺ (нейрональные клетки).

Торможение свертывания крови или агрегирования тромбоцитов соответственно предлагаемыми соединениями можно продемонстрировать в стандартных испытаниях: на тромбоцитах человека, содержащих QUIN 2 и стимулированных аденозиндифосфатом (АДФ), вазопрессином, PGF2 тромбином или серотонином, можно показать, что внутриклеточное неустойчивое нахождение кальция, которое ведет к агрегированию тромбоцитов, тормозится 3 мкмоль соединения примера.

Как уже указывалось выше, предлагаемые соединения общей формулы (I) воздействуют на воспалительные или нервные клетки.

В основе патофизиологии хронической бронхиальной астмы лежат воспалительные процессы, которые вызваны активированием воспалительных клеток.

Регулируемое рецепторами активирование этих клеток (например, нейтрофильные гранулоциты и тучные клетки или их постоянные клеточные линии HL 60-клеток или RBL-клеток соответственно) ингибируются независимо от вида стимулирующего агониста (например, эндотелии, ФТР, лейкотриены или хемотактичный пептид FMLP) блокатором неселективного канала катионов (НКК). По этому каналу внеклеточный кальций попадает в клетки, что необходимо для постоянства активирования клеток, обусловленного рецептором. Если этот переход Ca²⁺ прерывается, происходит блокада активирования воспалительных клеток. Классические антагонисты кальция типа дигидропиридина или фенилалкиламина соответственно не тормозят ни неселективные каналы катионов, ни воспалительные процессы.

Для оценки активирования клеток или соответственно для оценки его торможения блокером неселективных каналов катионов измеряли фторметрически кинетику цитоплазматической концентрации Ca²⁺ в содержащих FURA 2 клетках по методу, описанному Гринкиевичем и др. , 1985. Эти процедуры указываются в рамках данной заявки как надежные методы скрининга для выявления блокаторов неселективных каналов катионов. Применяются или отдельные клетки RBL-2H3, связанные со стекловидными бляшками и стабильно передающиеся M₁-рецепторами человека (т.е. мышечным типом 1-рецептора), или применяются суспензии клеток HL 60. Вследствие переноса клетки можно стимулировать карбахолом. Последовательно открытые неселективные каналы катионов ингибируются блокаторами неселективных каналов катионов.

Соединения согласно изобретению испытывали в обеих клеточных системах, и при этом они показали выдающуюся эффективность блокирования неселективных каналов катионов. Поскольку из-за техники измерения можно применять клеточные суспензии для тестирования соединений без собственной флюоресценции, проводили испытания флюоресцирующих тестируемых веществ на клетках RBL. При связанных отдельных клетках собственной флюоресценцией можно пренебречь. Культивирование, диференцирование, снабжение HL 60-клеток веществом FURA 2, а также фторметрическое измерение кальция в этих клетках осуществляют аналогично методу, описанному Питте и др. Для измерения применяли спектрофториметр фирмы Перкин Элмер.

Культивирование и адгезию RBL-2H3-клеток осуществляли по методу Хайда и Бивена. Фторметрическое измерение кальция в цитоплазме отдельных связанных RBL-2H3-хлеток осуществляли по аналогии с описанным Кудо и Огура методом для нервных клеток. Применяли флюоресцентный микроскоп "Аксиоверт 35" фирмы Цейсс в сочетании с имиджинг-системой Хамаматсу, состоящей из системы обработки изображения, остаточной камеры с контролирующим узлом и усилителя изображения DVS 3000.

Кинетика цитоплазматической концентрации Ca²⁺ выражается в виде кривой "концентрация - время" по активированию клеток, вызываемому рецептором. Площадь ниже этой кривой (ПНК) измеряется суммарно и является мерой активирования клеток. Интенсивность ингибирующего действия испытуемых блокеров неселективных каналов катионов определяется по следующему уравнению:



где

%T - торможение в процентах прохода кальция через неселективные каналы катионов, что стимулируется 30 мкмоль карбахола или соответственно 10 нмоль FMLP на RBL-, или соответственно HL 60-клетках и ингибируется 10 мкмоль испытуемого вещества. ПНК_ИНГ - площадь под кривой, которая получена в присутствии стимулятора плюс 10 мкмоль ингибирующего тестируемого вещества. ПНК - площадь под кривой, полученной после добавления стимулирующего агониста (30 мкмоль карбахола на RBL-клетках или соответственно 10 нмоль FMLP на HL 60-клетках).

Соединения, ингибирующие приток Ca²⁺ при указанных условиях испытаний, более чем на 500 испытывали дальше для определения полумаксимума концентрации активного вещества.

Значение соединения примера составляет 61,16%.

Предлагаемые соединения можно переводить в стандартные фармацевтические препараты. Такими препаратами являются, например, таблетки, капсулы, свечи, растворы, соки, сиропы, эмульсии, аэрозоли или диспергируемые порошки. Соответствующие таблетки можно получать, например, путем смешения одного или нескольких активно действующих веществ с обычными целевыми добавками, например с инертными разбавителями, такими как карбонат кальция, фосфат кальция или молочный сахар, разрыхлителями, такими как кукурузный крахмал или альгиновая кислота, связующими средствами, такими как крахмал или желатина, смазочными средствами, такими как стеарат магния или тальк, и/или средствами для достижения эффекта накопления, такими как карбоксиполиметилен, карбоксиметилцеллюлоза, ацетат-фталат целлюлозы или поливинилацетат. Таблетки могут содержать несколько слоев.

Соответственно можно получать драже путем нанесения на ядра, полученные аналогично получению таблеток, оболочек, обычных для использования в качестве оболочек драже, например коллидон или шеллак, гуммиарабик, тальк, двуокись титана или сахар. Для достижения эффекта накопления или для предотвращения несовместимости ядро также может состоять из нескольких слоев. Равным образом оболочка драже может состоять из нескольких слоев для достижения эффекта накопления, причем можно применять указанные выше для таблеток вспомогательные вещества.

Сиропы, содержащие соединения согласно данному изобретению или соответствующей комбинации активно действующих веществ, могут дополнительно содержать средства для подслащивания, такие как сахарин, глицерин или сахар, а также вкусовые добавки, например ароматизирующие вещества, такие как ванилин или апельсиновый экстракт. Они могут, кроме того, содержать суспендирующие агенты или загустители, такие как натрий-карбоксиметилцеллюлоза, смачивающие агенты, такие как продукты конденсации жирных спиртов с окисью этилена, или защитные вещества, такие как пара-гидроксибензоат.

Растворы для инъекций получают обычным образом, например, с добавлением консервантов, таких как пара-гидроксибензоат, или стабилизаторов, таких как соли щелочных металлов этилендиаминтетрауксусной кислоты, и заполняют инъекционные сосуды или ампулы.

Капсулы, содержащие одно или несколько активно действующих веществ, можно получать тем, что смешивать активно действующие вещества с инертными носителями, такими как молочный сахар или сорбит, и заполнить этой смесью желатиновые капсулы.

Пригодные для употребления свечи можно получать, например, путем смешения с предназначенными для этого носителями, такими как нейтральные жиры или полиэтиленгликоль, или соответственно их производные.

Предлагаемые соединения можно применять энтерально, парентерально или локально, предпочтительно в количестве от 0,05 до 500 мг на одну дозу для взрослого человека. Преимущественно при оральном употреблении дают от 0,1 до 500 мг на одну дозу и при интравенозном употреблении дают от 0,05 до 150 мг на одну дозу.

Предлагаемая фармацевтическая композиция иллюстрируется следующими примерами.

Пример 2: Таблетки

Соединение N. A - 40,0 мг

Молочный сахар - 100,0 мг

Кукурузный крахмал - 50,0 мг

Коллоидный силикагель - 2,0 мг

Стеарат магния - 3,0 - Всего 200,0 мг

Получение:

Активное вещество смешивают с частью вспомогательных веществ и гранулируют с раствором растворимого крахмала в воде. После сушки гранул добавляют остаток вспомогательных веществ и смесь таблетируют.

Пример 3: Драже

Соединение N A - 20,0 мг

Молочный сахар - 100,0 мг

Кукурузный крахмал - 65,0 мг

Коллоидный силикагель - 2,0 мг

Растворимый крахмал - 5,0

Стеарат магния - 3,0 - Всего 195,5 мг

Получение:

Активное вещество и вспомогательные вещества таблетируют, как указано в примере 1, до ядра в виде таблетки и затем дражируют обычным образом с сахаром, тальком и гуммиарабиком.

Пример 4: Свечи

Соединение N A - 50,0 мг

Молочный сахар - 250,0 мг

Масса свечи - До 1,7 мг

Получение:

Активное вещество и молочный сахар смешивают друг с другом и смесь гомогенно суспендируют в расплавленной массе суппозитория. Суспензии выливают в охлажденные формы для образования свечей весом 1,7 г.

Пример 5: Ампулы

Соединение N A - 20,0 мг

Хлорид натрия - 5,0 мг

Бидистиллированная вода - До 2,0 мг

Получение:

Активное вещество и хлорид натрия растворяют в бидистиллированной воде и раствором стерильно заполняют ампулы.

Пример 6: Ампулы

Соединение N A - 10,0 мг

Хлорид натрия - 7,0 мг

Бидистиллированная вода - До 1,0 мг

Пример 7: Капли

Соединение N A - 0,70 г

Метиловый сложный эфир пара-гидроксибензойной кислоты - 0,07 г

Пропиловый сложный эфир пара-гидроксибензойной кислоты - 0,03 г

Деминерализованная вода - До 100,0 мл

Получение:

Активное вещество и консерванты растворяют в деминерализованной воде, раствор фильтруют и им заполняют бутылочки по 100 мл.