способ ингибирования вирусных инфекций гепатита в
Классы МПК: | A61K31/395 с атомами азота в качестве гетероатомов, например гуанетидин, рифамицины |
Автор(ы): | Джордж Роберт Пейнтер III (US), Филип Аллен Фурман (US) |
Патентообладатель(и): | Дзе Велкам Фаундейшн Лимитед (GB) |
Приоритеты: |
подача заявки:
1992-03-05 публикация патента:
10.08.1998 |
Изобретение относится к медицине и касается способа ингибирования вирусных инфекций гепатита B. Изобретение заключается в том, что вводят 1-(2-(гидроксиметил)-1,3-оксатиолан-5-ил)-5-фторцитозин в виде единичной дозы, содержащей от 10 до 150 мг в форме цис-изомера. Изобретение обладает сильной активностью против гепатита B. 1 з.п. ф-лы, 3 табл.
Рисунок 1
Формула изобретения
1. Способ ингибирования вирусных инфекций гепатита В, включающий введение активного соединения, отличающийся тем, что вводят 1-(2-(гидроксиметил)-1,3-оксатиолан-5-ил)-5-фторцитозин формулы I
в виде единичной дозы, содержащей 10 - 1500 мг соединения. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что соединение формулы I используют в форме цис-изомера.
Описание изобретения к патенту
Изобретение относится к использованию производного 1-/2/гидроксиметил/-1,3-оксатиолан-5-ил/-цитозина и его физиологически функциональных производных для лечения вирусных инфекций гепатита B. Вирус гепатита B /ВГВ/ является вирусным патогеном, играющим в мире важную роль. ВГВ наиболее распространен в странах Азии и преобладает в африканских странах юга Сахары. Этот вирус этиологически связан с первичной печеночно-клеточной карциномой и, как представляется, служит причиной 80% случаев заболевания раком печени в мире. В Соединенных Штатах Америки более десяти тысяч человек каждый год госпитализируется по причине ВГВ-заболевания, причем констатируется в среднем 250 смертельных исходов в результате скоротечности заболевания. В Соединенных Штатах в настоящий момент имеется примерно 500000 - 1 миллион инфицированных носителей. Хронический активный гепатит развивается у более, чем 25% носителей и часто переходит в цирроз. Приблизительно 5000 больных погибает от цирроза, связанного с ВГВ, каждый год в США и , вероятно, 1000 больных погибает от рака печени, связанного с ВГВ. Даже в тех случаях, когда имеется универсальная ВГВ-вакцина, продолжает ощущаться необходимость в эффективных анти-ВГВ-соединениях. Большие количества устойчиво инфицированных носителей, примерно 220 миллионов во всем мире, не могут извлечь пользы от вакцинации и поэтому будут непрерывно подвергаться высокому риску заболевания печени, вызванного ВГВ. Эти группы носителей могут также быть источником инфекции для восприимчивого организма, который всегда сохраняется, в частности, в эндемических областях или среди групп высокого риска, например, при неправильном введении лекарственных препаратов и среди гомосексуалов. Таким образом, ощущается острая необходимость в эффективных противовирусных агентах как для контроля за хроническими инфекциями, так и для снижения развития печеночно-клеточной карциномы. Клинические эффекты ВГВ-инфекции включают головную боль, жар, недомогание, тошноту, рвоту, анорексию и боли брюшной области. Репликация этого вируса в общем случае контролируется иммунной реакцией с периодом восстановления от нескольких недель до нескольких месяцев у человека, но инфекция может быть более сильной, что приводит к устойчивому хроническому заболеванию печени, о котором речь шла выше. В книге "Viral Infection of Humas " /второе издание, изд. Plenum Publishing Corporation/1982/, New York, ред. Evans, A.S./, глава 12, описана этиология инфекций вирусного гепатита. В европейском Патентном Описании 0382526 предложены некоторые аналоги 1,3-оксатиолан нуклеозида, которые эффективны при ингибировании репликации вируса иммунодефицита человека (ВИЧ). Заявитель неожиданным образом установил, что производное 1-/2-/гидроксиметил/-1,3-оксатиолан-5-ил/-цитозина формулы I:
а именно, 1-/2-/гидроксиметил/-1,3-оксатиолан-5-ил/-5-фторцитозин и его физиологически функциональное производное обладают сильной активностью против ВГВ. Необходимо заметить, что соединение формулы I содержит два хиральных центра и поэтому оно существует в форме двух пар оптических изомеров /т.е. энантиомеров/ и их смесей, включая рацемические смеси. Таким образом, соединение формулы I может быть либо цис, либо транс-изомером, либо их смесями. Каждый цис- и транс-изомер может существовать в виде одного из двух энантиомеров или их смесей, включая рацемические смеси. Все такие изомеры и их смеси, включая рацемические смеси, и таутомерные формы соединения формулы I находятся в области, охватываемой настоящим изобретением. Цис-изомеры соединения формулы I предпочтительны. В соответствии с одним из отличительных свойств настоящего изобретения предлагается соединение формулы I или его физиологически функциональное производное для использования при лечении или профилактике инфекции вируса гепатита B. В соответствии с еще одним отличительным свойством настоящего изобретения предлагается способ использования соединения формулы I или его физиологически функционального производного при изготовлении медицинского препарата для лечения или профилактики инфекции вируса гепатита B. В соответствии с еще одним аспектом настоящего изобретения предлагается способ лечения или профилактики инфекции вируса гепатита B у хозяина, например млекопитающего такого, как человек, который содержит обработку хозяина терапевтически эффективным количеством соединения формулы I или его физиологически функционального производного. Под термином "физиологически функциональное производное" подразумевается приемлемая с фармацевтической точки зрения соль, амид, сложный эфир или соль сложного эфира соединения формулы I или любое другое соединение, которое после применения к пациенту способно дать /непосредственно или косвенно/ вышеупомянутое соединение формулы I, или его активный метаболит или остаток. Предпочтительные сложные эфиры в соответствии с настоящим изобретением включают сложные эфиры карбоновых кислот, в которых некарбонильную составляющую карбоновокислотной части сложного эфира выбирают из алкила с линейной или разветвленной целью, например н-пропила, третичн.-бутила, н-бутила, алкоксиалкила /например, метоксиметила/, арилалкила /например, бензила/, арилоксиалкила /например, феноксиметила/ и арила /например, фенила/; сложные эфиры сульфонатов, такие как алкил- или арилалкилсульфонил /например, метансульфонил/; сложные эфиры аминокислот /например, L-валил или L-изолейцил/; сложные эфиры дикарбоновых кислот /например, полусукцинат/ и 5"-моно-, ди- или три-фосфатные сложные эфиры. Фосфатные сложные эфиры могут быть затем этерифицированы, например, C1-20 спиртом или его химически активным производным, 2,3-ди/C6-24/ ацилглицерином. Любая алкильная составляющая, содержащаяся в таких сложных эфирах, в предпочтительном варианте содержит от 1 до 18 атомов углерода, в частности от 1 до 4 атомов углерода. Любая арильная составляющая, содержащаяся в таких сложных эфирах, в предпочтительном варианте содержит фенильную группу, необязательно замещенную, например, галогеном, C1-4 алкилом, C1-4 алкокси или нитро. Вышеупомянутые, приемлемые с фармацевтической точки зрения, амиды соединения формулы I включают такие производные, в которых группа амино цитозина находится в форме амида, например -NHCOR, в которой R является C1-6 алкилом или арилом /например, фенилом, необязательно замещенным галогеном, C1-4 алкилом, C1-4 алкокси, нитро или гидроксилом/. Примеры приемлемых с фармацевтической точки зрения солей в соответствии с настоящим изобретением включают основные соли, например, полученные из соответствующего основания, такого как щелочной металл /например, натрий/, соли щелочноземельных металлов /например, магния/, аммония и NX+4 /в которой X является C1-4 алкилом/. Приемлемые с фармацевтической точки зрения соли присоединения кислот включают соли органических карбоновых кислот таких, как уксусная, молочная, винная, малеиновая, изетионовая, лактобионовая и янтарная кислоты; органических моносульфокислот таких, как метан/моно/сульфокислота, этан/моно/сульфокислота, бензол-/моно/сульфокислота и пара-толуол/моно/сульфокислота, и неорганических кислот таких, как хлористоводородная, серная, фосфорная и сульфаминовая кислоты. Количество соединения формулы I, в дальнейшем именуемого также как "активный ингредиент"/ или его физиологически функционального производного, которое необходимо для изготовления медицинского препарата, чтобы гарантировать целевой эффект, будет зависеть от нескольких факторов, в частности от специфических условий применения, природы конкретного используемого соединения, способа применения и состояния пациента. В общем случае, соответствующая доза будет изменяться в области от 3,0 до 120 мг на килограмм массы тела пациента в день, в предпочтительном варианте в области от 6 до 90 мг на килограмм массы тела в день, а в наиболее предпочтительном варианте в области от 15 до 60 мг на килограмм массы тела в день. Необходимая доза в предпочтительном варианте может быть представлена в виде двух, трех, четырех, пяти, шести и более поддоз, которые применяют в соответствующие моменты времени в течение дня. Эти поддозы могут быть применены в форме единичных доз, например, содержащих от 10 до 1500 мг, в предпочтительном варианте от 20 до 1000 мг, а в самом предпочтительном варианте от 50 до 700 мг активного ингредиента на форму единичной дозы. В идеальном случае активный ингредиент необходимо применять таким образом, чтобы добиться пиковой концентрации в плазме активного ингредиента в области от примерно 1 до примерно 75




в которой
R1 является водородом или гидрокси-защищающей группой, а L является удаляемой группой; или
b/ взаимодействия соединения формулы IIB:

/в которой
R1 уже был определен выше, а Ra1 является аминозащищающей группой/ с фторирующим агентом, который позволяет ввести атом фтора в 5 позицию кольца цитозина; или
c/ взаимодействия соединения формулы IIC:

/в которой
R1 уже был определен выше/ с агентом, который служит для превращения оксо-группы в 4-позиции урацильного кольца в амино группу; любые оставшиеся защищающие группы удаляют, например, при помощи кислотного или щелочного гидролиза, чтобы получить целевой продукт. Что касается процедуры а/, то гидрокси-защищающая группа включает такие защищающие группы, как ацил /например, ацетил/, арилацил /например, бензоил или замещенный бензоил/, тритил или монометокситритил, бензил или замещенный бензил, триалкилсилил /например, диметил-третичн.-бутилсилил/ или дифенилметилсилил. Соединение 5-R-цитозина может быть защищено силилом, например, триметил силиловыми группами. Такие группы могут быть удалены при помощи стандартных приемов. Удаляемая группа L является одной из тех, которые хорошо известны в химии нуклеозидов, например, галоген такой, как хлор или бром, алкокси такой, как метокси или этокси, или ацил такой, как ацетил или бензоил. Реакция в процессе а/ может быть осуществлена в органическом растворителе /например, 1,2-дихлорэтане или ацетонитрила/ в присутствии кислоты Льюиса такой, как хлорид олова и/или триметилсилил трифлат (triflate). Соединения формулы IIА могут быть получены из соответствующим образом защищенного 2-гидроксиацетальдегида формулы III
R1OCH2CHO (III)
в которой
R1 был определен выше, как это описано в работе Can.J Research, т.8, с. 129 /1933/ и Европейском Патентном описании N0382526. Реакция соединений формулы III с меркаптоацеталем HSCH2CH/PR/2, в которой R является C1-4 алкокси таким, как HSCH2CH/OC2H5/2, известная в этой области техники /Chem. Ber., т. 85, с. 924 - 932, 1952/, дает соединения формулы IIA, в которой L является OR /алкокси/, например, метокси или этокси. В качестве альтернативы соединения формулы IIA, в которой L является алкокси, может быть превращено в соединения формулы IIA, в которой L является галогеном или ацилом, при помощи приемов, известных в области химии углеводов. Соединения формулы III могут быть получены из 1,2-O-изопропилиден глицерина при помощи введения R1 /например, трехзамещенного силила, бензила или тритила/ и удаления группы изопропилидена с использованием слабой кислоты /например, водного раствора муравьиной или уксусной кислоты/ или бромида цинка в ацетонитриле, далее осуществляют окисления группы спирта водным периодатом. Что касается процедуры b/, то 5-фтор заместитель может быть введен при помощи приемов, известных в этой области техники /M.J. Robins и др., в книге "Nucleic Acid Chemistry", Part 2, ред. L. B. Townsend и R.S. Tipson, изд. J. Wiley and Sons, New-York, с. 895 - 900 /1978/ и ссылки, приведенные там; R. Duschinsky в книге "Nucleic Acid Chemistry", Part 1, ред. L. B. Townsend и R. S. Tipson, изд. J. Wiley and Sons, New-York. с. 43 - 46 /1978/ и ссылки, приведенные там/. Фторирующим агентом может быть, например, триметилгипофторит в фтортрихлорметане. Что касается процедуры c/, то соединение формулы IIC в предпочтительном варианте обрабатывают 1,2,4-триазолом, в предпочтительном варианте вместе с 4-хлорфенил дихлорфосфатом, чтобы получить соответствующее 4-/1,2,4-триазолиловое/ соединение, которое затем превращают в гелевое соединение 4-амино/цитидина/ в результате взаимодействия, например, с метанолом. Исходные материалы формулы IIB и IIC могут быть получены, например, в результате взаимодействия соответствующего /необязательно защищенного/ основания с соединением формулы IIA при помощи той же процедуры, что описана в процедуре a/. 5-Фторурацил и 5-фторцитозин можно получить от фирмы Aldrich Chemical Co., Milwaukee, WI 53233, USA. Разделение /













В приводимых ниже примерах композиций "активным ингредиентом" является цис-1-/2-/гидроксиметил/-1,3-оксатиолан-5-ил/-5-фторцитозин. Пример 2
Композиция таблеток
1H ЯМР (DMCO-d6)


Активный ингредиент - 100
Лактоза - 200
Крахмал - 50
Повидон - 5
Стеарат магния - 4 - 359
Приводимые ниже композиции D и E получали при помощи прямого прессования смешанных ингредиентов. Лактоза в композиции E предназначена для прямой прессовки /фирма Dairy Crest "Zeparox"/. Композиция D - мг/таблетка
Активный ингредиент - 250
Предварительно желатинизированный крахмал NF 15 - 150 - 400
Композиция E - мг/таблетка
Активный ингредиент - 250
Лактоза - 150
Авицел - 100 - 500
Композиция F /композиция для регулируемого высвобождения/
Эту композицию получали при помощи влажной грануляции ингредиентов /перечисленных ниже/ с раствором повидона с последующим добавлением стеарата магния и прессовкой. - мг/таблетка
/a/ Активный ингредиент - 500
/b/ Гидроксипропилметилцеллюлоза /Methocel K4M Premium/ - 112
/c/ Лактоза /Фармакопея Великобритании/ - 53
/d/ Повидон /Фармакопея Великобритании/ - 28
/c/ Стеарат магния - 7 - 700
Высвобождение препарата имеет место в течение примерно 6 - 8 ч и завершается спустя 12 ч. Пример 3
Композиции для капсул
Композиция A
Композицию для капсул получали при помощи смещения ингредиентов из Композиции D в примере 2 выше и заполнения ею жесткой желатиновой капсулы, состоящей из двух частей. Композицию B /см. ниже/ получали аналогичным образом. Композиция B - мг/капсула
/a/ Активный ингредиент - 250
/b/ Лактоза /Фармакопея Великобритании/ - 143
/c/ Натрий гликоллат крахмала - 25
/d/ Стеарат магния - 2 - 420
Композиция C - мг/капсула
/a/ Активный ингредиент - 250
/b/ Макрогол 4000 /Фармакопея Великобритании/ - 350 - 600
Композиция D - мг/капсула
Активный ингредиент - 250
Лецитин - 100
Арахисовое масло - 100 - 450
Капсулы с композицией D получали при помощи диспергирования активного ингредиента в лецитине и арахисовом масле, и заполнения дисперсией мягких, эластичных желатиновых капсул. Композиция E /капсула для регулируемого высвобождения/. Следующую композицию для капсулы с регулируемым высвобождением получали при помощи экструзии ингредиентов a, b и c, используя экструдер, грануляции экстрадированного продукта и сушки. Высушенные гранулы затем покрывали мембраной /d/ для регулируемого освобождения, а затем ими заполняли жесткие желатиновые капсулы, состоящие из двух частей. - мг/капсула
/a/ Активный ингредиент - 250
/b/ Микрокристаллическая целлюлоза - 125
/c/ Лактоза /Фармакопея Великобритании/ - 125
/d/ Этил целлюлоза - 13 - 513
Пример 4
Композиция для инъекций
Композиция А
Активный ингредиент - 0,200 г
Раствор хлористоводородной кислоты, 0,1 М или раствор гидрата окиси натрия, 0,1 М - Сколько нужно, чтобы обеспечить pH от 4,0 до 7,0
Стерильная вода - Сколько нужно до 10 мл
Активный ингредиент растворяли в большей части воды /35-40oC/ и pH обеспечивали на уровне от 4,0 до 7,0 при помощи хлористоводородной кислоты или гидрата окиси натрия, в зависимости от цели. Затем эту порцию доводили до необходимого объема при помощи воды и фильтровали через стерильный микропористый фильтр в стерильный 10 мл желтый стеклянный пузырек /типа I/ и герметически закрывали в стерильных условиях. Композиция В
Активный ингредиент - 0,125
Стерильный, свободный от пирогенов, pH 7 фосфатный буфер - Сколько нужно до 25 мл
Пример 5
Внутримышечная инъекция
Активный ингредиент - 0,20 г
Бензиловый спирт - 0,10 г
Гликофурол 75 - 1,45 г
Бензиловый спирт - Сколько нужно до 3,00 мл
Активный ингредиент растворителя в гликофуроле. Затем добавляли бензиловый спирт и получали раствор, затем добавляли воду до 3 мл. Затем смесь фильтровали через стерильный микропористый фильтр и заполняли ею стерильные 3 мл желтые стеклянные пузырьки /типа I/. Пример 6
Сироп
Активный ингредиент - 0,25 г
Раствор сорбита - 1,50 г
Глицерин - 2,00 г
Бензоат натрия - 0,005 г
Вкусовой агент, Peach 17.42.316 9 - 0,0125 мл
Очищенная вода - Сколько нужно до 5,00 мл
Активный ингредиент растворяли в смеси глицерина и большей части очищенной воды. Водный раствор бензоата натрия затем добавляли в раствор, затем добавляли раствор сорбита и, наконец, вкусовой агент. Объем доводили до необходимого очищенной водой и тщательно перемешивали. Пример 7
Суппозиторий - мг/суппозиторий
Активный ингредиент - 250
Твердый жир, Фармакопея Великобритании /Witepsol H15 - фирма Dynаmit Nobel/ - 1770 - 2020
Одну пятую жира Witepsol H15 плавили в чашке, снабженной паровой рубашкой, при максимальной температуре 45oC. Активный ингредиент просеивали через сито 200


Активный ингредиент - 250
Безводная декстроза - 380
Картофельный крахмал - 363
Стеарат магния - 7 - 1000
Перечисленные выше ингредиенты непосредственно перемешивали, а пессарии получали при помощи прямого прессования полученной в результате смеси. Пример 9. Противовирусная активность против Вируса Гепатита B /ВГВ/
Соединение цис-1-/2-/гидроксиметил/-1,3-оксатиолан-5-ил/-5-фтор-цитозин испытывали в соответствии с описанием, приведенным ниже. Линия клеток продуцента человеческого ВГВ HepG2, 2,2.15, описанная и охарактеризованная в работах Sell и др., PNAS, т. 84, с. 1005, 1987 и J. Virol. , т. 62, с. 2836, 1988, как было установлено, обладает многими характеристиками хронически ВГВ-инфицированного гепатоцита. Он инфекционен, что подтверждали тем фактом, что он вызывал заболевание у шимпанзе. Эту линию клеток использовали in vitro, чтобы идентифировать соединения с анти-ВГВ-активностью. Для того чтобы испытать соединения на противовирусную активность, монослойные культуры обрабатывали соединением, 500-200

Класс A61K31/395 с атомами азота в качестве гетероатомов, например гуанетидин, рифамицины