средство для профилактики и/или лечения заболеваний, сопровождающихся чрезмерным образованием лейкотриенов и/или простагландинов

Формула изобретения

1. Применение куркумина или его производного, или вещества, полученного из растения Curcuma longa или другого растения, содержащего куркумин, в качестве средства для профилактики и/или лечения заболеваний, сопровождающихся чрезмерным образованием лейкотриенов и/или простагландинов.

2. Применение по п.1 в качестве средства для профилактики и/или лечения хронического воспалительного заболевания кишечника.

3. Применение по п.2, в качестве средства для профилактики и/или лечения Colitis ulcerosa или Morbus Crohn.

4. Применение по п.1, в качестве средства для профилактики и/или лечения гепатита или хронической бронхиальной астмы, или псориаза.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к применению препаратов растения Curcuma Ionga или других растений, содержащих куркумин или производные куркумина, для профилактики и/или борьбы с болезнями, которые сопровождаются образованием избыточного количества лейкотриенов и/или простагландинов.

Указанные препараты применяют, преимущественно при хронических воспалительных заболеваниях кишечника, таких как Colitis ulcerosa или Morbus Crohn и при хронических гепатитах, хронической бронхиальной астме и псориазе.

Например, их с успехом применяют при Morbus Crohn и при Colitis ulcerosa - двух хронических воспалительных заболеваниях кишечника, которые до сих пор не поддавались терапии совсем, либо поддавались лишь в недостаточной степени. Обнаружено патофизиологически, что чрезмерное образование так называемых лейкотриенов (медиаторы воспаления, которые служат особенно, в качестве блокирующего вещества для белых кровяных клеток) приводит, главным образом, к тому, что процесс заболевания поддерживается. До сих пор практически не было действенного медикамента против воспалительных заболеваний кишечника. В распоряжении находятся лишь так называемые глюкокортикоиды (производные гормонов коры надпочечников), особенно, кортизон (Машковский М.Д. Лекарственные средства. - М. : Медицина, ч.1, с. 564-567). Однако им сопутствует значительное побочное действие, так что их использование является проблематичным. Применение сульфасалазина (Sulfasalazin) также является неудовлетворительным. Сульфасалазин является веществом, которое, главным образом, препятствует образованию так называемых простагландинов (также медиаторы воспаления), которые все-таки каким-то образом нарушают ход воспалительного процесса, и которые принципиально отличаются от лейкотриенов. Ингибирование синтеза простагландина все же не достигают цели при таких заболеваниях.

Хроническая астма и псориаз являются заболеваниями, для которых до настоящего времени нет удовлетворительно действующих лекарственных средств. Оба заболевания лечат кортизоном или производным кортизона. Употребление кортизона и его производных, особенно, продолжительное время, связано, однако, со значительным вредом для здоровья. Аналогичным образом не может удовлетворительно излечиваться хронический гепатит.

Известно, что в состав клеточных мембран входят фосфолипиды. От фосфолипидов клеточных мембран под действием фосфолипазы A2 отщепляется арахидоновая кислота, которая, в свою очередь, превращается в простагландины и лейкотриены под действием циклооксигеназы и липоксигеназы. Простагландины и лейкотриены поддерживают воспалительные процессы при хронических воспалительных заболеваниях кишечника, при хронических гепатитах, хронической бронхиальной астме и псориазе.

В основу изобретения положена задача разработать средство для профилактики и/или лечения заболеваний, сопровождающихся чрезмерным образованием лейкотриенов и/или простагландинов, обладающее высокой эффективностью действия, незначительной токсичностью, хорошей переносимостью пациентами, характеризующееся простыми способами употребления.

Задача решена тем, что согласно изобретению в качестве средства для профилактики и/или лечения заболеваний, сопровождающихся чрезмерным образованием лейкотриенов и/или простагландинов применяют куркумин или его производные, или вещества, полученные из растения Curcuma longa или другого растения, содержащего куркумин. Предпочтительно применять указанное средство для профилактики и/или лечения хронического воспалительного заболевания кишечника и более предпочтительно для профилактики и/или лечения Colitits ulcerosa или Morbus Crohn. Заявляемое средство согласно изобретению также применяют для лечения гепатита или хронической бронхиальной астмы, или псориаза.

Заявителем было неожиданно обнаружено, что куркумин или его производные или препараты из растений Curcuma longa или других растений, содержащих куркумин, предотвращают воспалительные заболевания, вызываемые образованием лейкотриенов и простагландинов.

Заявитель в процессе исследования механизма общего противовоспалительного действия, описанного на животных образцах крысиных лапок (обзор ammon und Wahl, 1990), провел фармакологические опыты и получил следующие биохимические данные.

Куркумин ингибирует in vitro активность:

a) конечных энзимов биосинтеза лейкотриенов (5-липоксигеназы) в стимулировании нейтрофильных гранулоцитов крыс в полумаксимальной ингибирующей концентрации (IC₅₀) примерно 20 мкмоль/л. На фиг. 1 показано влияние концентрации на ингибирование образования лейкотриенов B4 из эндогенного субстрата в свежих нейтрофильных гранулоцитах крысы под действием куркумина [Метод: Safayhi, Tiegs, Wendel: Biochem. Pharmacol. 34: 2691-2694, 1984];

b) конечных энзимов биосинтеза простаноида (простагландин/тромбоксин/простоциклин) в свежих стимулированных кровяных пластинках человека при IC₅₀ примерно 2 мкмоль/л. На фиг. 2 показано влияние концентрации на ингибирование куркумином активности циклооксигеназы в свежих кровяных пластинках (тромбоцитах). [Метод: Safayhi et al. JPET accepted];

c) 12-липоксигеназы в свежих кровяных пластинках человека при IC₅₀ примерно 20 мкмоль/л. На фиг. 2 показано влияние концентрации на ингибирование куркумином образования 12-гидроксиэйкозатетраноевой кислоты (12-HETE) в свежих кровяных пластинках человека. [Метод: Safayhi et al. JPET accepted] ;

d) образования пероксидированного продукта арахидоновой кислоты в открытой клеточной системе при IC₅₀ примерно 1 мкмоль/л. На фиг. 3 показано ингибирование образования оксидированного продукта арахидоновой кислоты, индуцированного системой Fe/аскорбат, под действием куркумина. [Метод: Safayhi et al. JPET accepted].

Эти данные объясняют, что куркумин ингибирует образование в свежих клетках медиаторов из арахидоновой кислоты (лейкотриена via 5-липоксигеназы, 12-HETE via 12-липоксигеназа и простагландина via циклооксигеназа), ускоряющих воспалительные процессы, а также предотвращает образование токсичных перекисей. Активность от a) до d) вместе образует механизм ингибирования воспалительных процессов и характеризует вещество, для которого нет аналогов на рынке лекарственных средств. Раскрытие этого механизма равным образом рассматривается как изобретение в области терапии вышеназванных заболеваний.

Хотя при обоих вышеназванных заболеваниях на передний план выступает образование лейкотриенов, все же нельзя было предвидеть, что и другие медиаторы воспалительных процессов, такие как простагландины и кислородные радикалы, способствуют воспалительным процессам (Они прекращаются благодаря антиокислительным свойствам куркумина). В табл. 1 представлены важнейшие медиаторы воспалительных процессов.

Схема поясняет метод атаки находящихся на сегодняшний день в распоряжении на рынке фармакологических средств, с помощью которых можно воздействовать на воспалительные процессы посредством так называемого каскада арахидоновой кислоты.

Глюкокортикоиды.

Глюкокортикоиды хотя и ингибируют образование простагландинов, также как лейкотриенов, однако они рассматриваются как предшественники стероидных гормонов, которые, как уже упоминалось выше, обладают разнообразными отягчающими побочными действиями.

Нестероидальная антифлогистика.

Нестероидальная антифлогистика (ацетилсалициловая кислота, индометацин, диклофенак, ибупрофен и т. д. ) ингибируют биосинтез простагландина посредством атаки в области циклооксигеназы. Они могут однако привести благодаря этому косвенным путем к усилению синтеза лейкотриенов и, таким образом, патофизиологические реакции, посредством которых являются лейкотриены, даже усиливаются (например, аспирин-астма). Оба класса ингибиторов (глюкокортикоиды) не проявляют защитного действия посредством веществ, ингибирующих образование перекисей.

Неожиданно было найдено, что куркумин и содержащие куркумин препараты растения Curcuma longa или других куркуминсодержащих растений или производные куркумина, хотя и ингибируют образование простагландина, также как лейкотриенов, по профилю действия в отношении антифлогических свойств сравнимы со стероидами, однако они не проявляют нежелательных побочных действий стероидов и особенно кортизона. Это может быть представлено следующим образом:



Однако принцип действия куркумина существенно отличается от предшественников стероидных гормонов. Куркумин дополнительно содержит вещества, обладающие антиокислительным действием, вследствие чего можно ожидать дальнейшего лечебного действия при воспалительных процессах. Так как куркумин не являются гормоном, у него отсутствует также нежелательные побочные действия, присущие гормональной природе глюкокортикоида, хотя с точки зрения активности ингибирования воспалительных процессов достигается желаемое действие стероида.

Куркумин также влияет на ход воспалительных процессов тройным образом. Его антиокислительное действие, которое достигается уже при концентрации 1 мкМ, следует представить следующим образом:

1. Антиокислительное действие ингибирует активированные молекулы кислорода и радикалы. До сих пор не существовало медикаментов с таким действием.

2. Благодаря антиокислительному действию должно происходить ингибирование образования продуктов циклооксигеназы.

3. Благодаря антиокислительному действию ингибируется образование продуктов 5- и 12-липоксигеназы.

Куркумин представляет собой совершенно новый тип антифлогистика. Его ценность заключается в том, что помимо ингибирования возникающих при любых воспалительных процессах активированных кислородных образований и продуктов циклооксигеназы, ингибируется также образование лейкотриенов.

Было неожиданно, что куркумин может оказывать действие при обоих названных заболеваниях, особенно при воспалительных заболеваниях кишечника. В литературе описано, что куркумин при экспериментальных язвах желудка крыс не приводит к улучшению состояния. Bratia et al. (Bratia A., Sigh G.B. und Khanna N. M. (1964), Indian I.Exptl. Biol. 2, 158-160) не обнаружил защитного действия куркумина у морских свинок при язвах желудка, индуцированных гистамином. Кроме того, Prasad et al. (Prasad, D.N.Gupta B., Srivastava, R.K. und Satyavati G. V. (1976), Indian I.Pysiol, Pharmacol. 20, 92) обнаружил вредное действие больших доз куркумина на слизистую оболочку желудка, когда ежедневная оральная доза составляла 100 мг/кг в течение 6 дней.

Простагландины в физиологических концентрациях обладают защитной функцией по отношению к слизистой оболочке желудка. Простагландины не выполняют защитной функции по отношению к слизистой оболочке кишечника (в противоположность желудку). Синхронное ингибирование куркумином медиаторов воспаления (простагландинов и лейкотриенов), также как ингибирование образования перекисей, особенно при воспалении слизистой оболочки кишок (Colitis ulcerosa и Morbus Crohn), было поэтому в такой комбинации неожиданным для специалиста.

Согласно изобретению применяются препараты растения Curcuma longa, преимущественно препараты, которые добывают из корней или из корневищ, препараты других растений, содержащих куркумин, например, Curcuma longa L. (Синоним: Amomum Curcuma Iacq., Curcuma domestica Lovr., Curcuma xanthorriza Naves), Curcuma Xanthorrhiza Roxb. (Синоним: Curcuma Xanthorrhiza Dietrich, Curcuma Xanthorrhiza Roxb), натуральный или синтетический куркумин или производные куркумина. Под куркумином подразумевают составляющую его основное содержание так называемую куркуму (Curcuma longa), а также Curcuma xanthorrhiza. Куркума с давних пор применяется в азиатских странах преимущественно при диспепсиях (затрудненное пищеварение). Кроме того, она является составной частью всех обычно употребляемых пряностей.

В следующих лекарственных средствах содержатся сесквитерпены, а в них может также содержаться куркумин: Curcuma aromatica Salisb. (Синоним: Curcuma zeodaria Roxb), Curcuma Kwandsiensis Lee et Liang, Curcuma zeodaria (Berg. ) Rosc (Синоним: Amomum zeodaria Berg., Amomum zerumbet Koen., Costus Luteus Blanco, Curcuma nigricans Blanco, Curcuma zerumbet Roxb., Roscoea Lutea Hassk. , Roscoea nigrociliata Hassk.). Эти вещества также могут быть использованы согласно изобретению, т.к. они содержат куркумин. Куркумин, как таковой, кроме того, едва обнаруживается в крови после перорального введения. Куркумин, кроме того, пригоден для локального использования [псориаз, хроническая бронхиальная астма (распыление, ингаляция)]. Так как куркумин находят в печени (Ammon und Wahl 1990), то его можно использовать при хронических воспалительных гепатитах.

При заболеваниях с повышенным синтезом лейкотриенов, при которых куркумин не является действенным после орального введения, следует иметь в виду возможность парентерального употребления или использование способных в ресорбции производных с ограниченным "First Pass"-эффектом.

Куркумин имеет следующую формулу:



Куркумин практически не обнаруживает токсичного действия при дозах 3 г/кг при оральном применении у морских свинок и крыс.

Заявляемое средство может применяться внутрибрюшинно, орально, ректально, внутримышечно, подкожно, локально, внутрисуставно или внутривенно в виде таблеток, драже, капсул, растворов, эмульсий, мазей, кремов, ингаляций, аэрозолей или суппозиторий. Оральное использование является преимущественным. Испытания заявляемого средства при лечении воспалительных заболеваний кишечника, гепатита, бронхиальной астмы, псориаза показало эффективность его действия. Средство применялось преимущественно орально в разовой дозе 15-30 мг. Заявляемое средство легко переносится пациентами, не токсично, не имеет побочных действий.

Применение заявляемого средства возможно в сочетании с другими химически чистыми лекарственными веществами и/или другими растительными лекарственными средствами. Например, такими другими химически чистыми лекарственными средствами являются:

Бронхолитика и антиастматика.

Симпатомиметика:

- карбутерол-HCl (Carbuterol-HCl)

- кленбутерол-HCl (Clenbuterol-HCl)

- фенотерол-HBr (Fenoterol-HBr)

- изоэтарин-HCl (Isoetarin-HCl)

- орсипреналинсульфат (Orciprensulfat)

- пирбутерол-HCl (Pirbuterol-HCl)

- прокатерол-HCl (Procaterol-HCl)

- репротерол-HCl (Reproterol-HCl)

- субутамолсульфат (Subutamolsulfat)

- тербуталинсульфат (Terbutalinsulfat)

- тулобутерол-HCl (Tulobuterol-HCl)

Антипсориатика.

Нестероидальная антифлогистика:

- салициловая кислота и ее производные

Витамины:

- фолиевая кислота

- витамин E

- витамин B₁₂

- витамин A

Различные:

- сульфид кадмия

- бензалькониумхлорид (Bensalkoniumclorid)

- натрийбитуминосульфонат (Natriumbituminosulfat)

- аммоидин (Ammoidin)

- аллантоин (Allantoin)

- метотрексат (Methotrexat)

- парафин (Paraffin)

- тиоксолон (Tioxolon)

- дитранол (Dithranol)

- фумаровая кислота

- ундециленовая кислота

- полиоксиэтиленлаурилэфирсульфат

- этретинат (Etretinat)

- окись цинка

- мочевина

- молочная кислота

Заявляемое средство приготавливают известным методом с использованием одного или нескольких фармацевтически приемлемых наполнителей или разбавителей. Композиция для орального, парентерального, ректального или внутриносового употребления или для употребления путем ингаляции или инсуффляции готовят обычными методами. Преимущественными являются композиции для орального употребления. Фармацевтические композиции для орального употребления могут быть в форме, например, таблеток или капсул, которые изготавливают известными способами с фармацевтически пригодными разбавителями, связующими (например, желатинизированный маисовый крахмал, поливинилпирролидон или гидроксипропилметилцеллюлоза), наполнителями (например, лактоза, сахароза, маннит, маисовый крахмал, микрокристаллическая целлюлоза или гидрофосфат кальция), смазками (например, стеариновая кислота, полиэтиленгликоль, стеарат магния, тальк или двуокись кремния), разделителями (например, картофельный крахмал, натрийкарбоксиметилцеллюлоза) или смачивателями (например, лаурилсульфат натрия).

Таблетки могут изготавливаться известными способами. Жидкие композиции для орального употребления могут выпускаться в виде, например, водных или масляных растворов, сиропов, эликсиров, эмульсий или суспензий. Они также могут выпускаться в виде сухого продукта для соединения с водой или другими подобными носителями перед употреблением. Такие жидкие композиции могут изготавливаться известными способами с фармацевтически приемлемыми добавками, как, например, суспензионными средствами (например, сорбитовый сироп, производные целлюлозы, глюкоза/сахарный сироп, желатин, гелеобразный стеарат алюминия или гидрированные съедобные жиры), эмульгаторы (например, лецитин, Acacia или моноолеатсорбитана), неводные носители (например, миндальное масло, масляный эфир, этиловый спирт или очищенное растительное масло), консервант (например, метил- или пропилгидроксибензоат или сорбиновая кислота). Жидкие композиции могут также содержать по потребности известные буферы, вкусовые вещества, ароматизирующие вещества, красители и вещества, придающие сладкий вкус.

Для парентерального употребления соединения могут вводиться посредством инъекций преимущественно внутривенно, внутримышечно или подкожно. Композиции для инъекций могут употребляться в дозированной форме, например в ампулах или резервуарах, содержащих несколько доз, с добавкой консервантов. Композиции могут употребляться в форме суспензий, растворов или эмульсий в масляном или водном растворителе и содержать вспомогательные добавки, такие как диспергаторы, стабилизаторы и/или эмульгаторы, и/или средства для регулирования тоничности раствора. Альтернативно активное вещество может употребляться в порошкообразной форме для соединения с подходящим разбавителем, например стерильной водой.

Соединения могут также изготавливаться в виде ректальных композиций, например суппозиторий. Такие композиции могут содержать известную основу, например масло какао и другие глицериды.

Для внутриносового употребления соединения могут употребляться в виде жидких аэрозолей или капель.

Для употребления ингаляций соединения целесообразно выпускать в форме аэрозольных распылителей из баллончиков под давлением с использованием подходящих носителей или пульверизаторов. В случае действующих под давлением аэрозолей определяют дозу содержимого с тем, чтобы регулированием вентиля можно было видеть, какое количество содержимого использовано.

Капсулы и патроны, например, из желатина для употребления в ингаляторах или инсуффляторах изготавливаются таким образом, что они содержат порошкообразную смесь из активного соединения по изобретению и подходящего порошкообразного наполнителя, такого как лактоза или крахмал.

В дальнейшем изобретение иллюстрируется примерами, подтверждающими активность действия заявляемого средства на модели гепатита и примерами приготовления препарата.

Пример A. Проведены исследования защиты печени с использованием модели гепатита, индуцированного эндотоксином - галактозамином.

1. Цель эксперимента.

Исследование потенциального защитного действия на печень экстрактов из куркумы.

2. Тестируемое вещество.

Тестируемое вещество было предоставлено фирмой Steigerwald Arzneimittel GmbH - Штайнгервальд Арцнаймиттель (фармацевтика) - с поручением применить его в модели экспериментального гепатита мышей, индуцированного эндотоксином (LPS)/галактозамином (GalN):

Сухая субстанция A2: Куркума = экстракт травы куркума M.

Растворы:

Для достижения сопоставимости всех твердых субстанций каждый раз применяли свежеприготовленные непосредственно в день опыта 1%-ные тилозные суспензии соединений.

3. О модели.

Гепатит, индуцированный эндоксином/галактозамином, у мышей является экспериментальной моделью шока и сепсиса с органоспецифической направленностью (повреждение печени). Патофизиологическая картина шокового синдрома в общем понимается как "отравление медиатора". В этой модели речь идет о сильном повреждении печени. У человека вышеуказанный процесс наблюдается при септическом шоке, отторжении печени при трансплантации органов или при хроническом гепатите C.

Степень тяжести картины поражения печени в представленной модели может быть по меньшей мере частично снижена защитной дозой многочисленных веществ, которые вмешиваются в синтез и действие многих медиаторов. Примерами веществ, оказывающих защитное действие в этой модели, являются: неспецифические ингибиторы липоксигеназы, FPL 55712 (антагонист лейкотриена D₁), илопрост (аналог простациклина), WEB 2086 (антагонист PAF), ингибиторы протеаз, антагонисты TNFальфа, ингибиторы PDE, супероксиддисмутаза, катализа и др. Хотя, конечно, многие медиаторные системы в сложном случае взаимодействуют синергически, в качестве допустимых этапов хронологически упорядоченной упрощенной модели можно представить следующие патофизиологические процессы:

GalN приводит в печени к расщеплению УТФ и тем самым к блокированию биосинтеза РНК и белка, в то время как индуцированный эндотоксином LPS биосинтез лейкотриена D₁ вызывает временную ишемию из-за сосудосужающего действия. Последующая фаза реперфузии отличается избыточным образованием супероксида, в результате чего в частности дезактивируется альфа1-антитрипсин (ингибитор сериновых протеаз). Активирующиеся вследствие этого сериновые протеазы высвобождают (запускают) моноцитарные первичные этапы (действия) TNFальфа, который в свою очередь в условиях подавленного биосинтеза белка индуцирует апоптоз гепатоцитов. Наблюдалось также прямое повреждающее действие протеаз на гепатоциты. В качестве дистальных или терминальных веществ-посредников, свидетельствующих о разрушении гепатоцитов, в этом процессе наблюдались в этот момент TNFальфа и высвобождающаяся из стимулированных лейкоцитов эластаза лейкоцитов человека. Модель GalN/LPS отличается не только в отношении генезиса, но также и в отношении терапии в обычно применяемых моделях химически индуцированного повреждения печени (например, четыреххлористым углеродом, адреномицином или спиртом). Вещества, действующие в этой модели, необязательно будут оказывать действие в других моделях.

4. Животные.

Мыши. Доставка минимум за 2-3 недели до дня испытаний, содержание в стандартных условиях до максимум 4 недель в индивидуальной клетке, масса 355 г, со свободным доступом к воде и стандартному корму с альтромином, определение массы и формирование групп накануне опыта.

5. Порядок проведения опытов.

В случае высушенных экстрактов.

Опыты всегда начинали в 7 ч 30 мин утра с введения перорально суспензии тестируемых соединений через желудочный зонд в объеме 100 мкл на 10 г массы мыши. Час спустя проводилась одновременная (внутрибрюшинная) инъекция галактозамина (GalN 700 мк/кг) и эндотоксина (LPS 33 мкг/кг) в объеме 200 мкл/30 г мышь.

В конце опыта в 17 ч 30 мин после взятия крови под глубоким эфирным наркозом из шейных сосудов в обработанные гепарином пробирки мышь погибала. Для получения сыворотки пробы центрифугировали 10 мин при 4^oC (5000 об/мин на Hettrich Mikrorapid K). После хранения в течение ночи при -20^oC в ходе дальнейших 24 ч определялись активности сывороточных трансаминаз при 25^oC фотометрически (спектрофотометр Pharmacia Biotech Ultraspec 200 УФ/видимая области спектра).

Основание для защитного применения.

Действие многих защитных субстанций в этой системе при лечебном применении теряется. Поэтому в этой модели тестируемые субстанции будут применяться с ориентиром на конечное действие у всех групп, обрабатываемых соединениями, токсичными для печени.

6. Данные и статистика.

Все данные представлены как среднее значение стандартная ошибка. Проведены статистические оценки с помощью различных тестов (ANOVA, Dunnett тест множественного сравнения, непарный t-тест (или непараметрический анализ) (программы: InStat версия 1.15 программы GraphPad для t-теста). Сравнения проведены при использовании твердых субстанций (от A1 до A4) по активностям трансаминазы между опытной и контрольной (тилозной) группой, а при использовании жидких тестируемых субстанций - с контрольной (NaCl) группой. Если активность трансаминазы у животных была до 40 ед/л, их во всех группах не считали за респондеров и при расчете трансаминазы не учитывали, а результаты, полученные с ними, представляли отдельно.

Пояснение обозначений: (^*) - пограничное

^* = значительное

^** = высокое значение

7. Результаты.

Таблица A. Сводка опытов по влиянию обработок субстанциями (см. в конце текста).

n - количество проверенных сывороток

NR - не респондеры; не рассматриваемые сыворотки, в которых трансаминазы были увеличены не менее чем на 100%,

M - смертность

E - число обработанных животных (соответствует 100%),

(%) - эффект в процентах внутри опытной группы: округлено.

8. Оценка результатов.

При оценке результатов критически привлекались два критерия: смертность и рост или снижение LPS/GalN-индуцированного подъема сывороточного трансаминазного "зеркального" эффекта. Снижение уровня трансаминазы в сыворотке относительно контрольной группы значимо только тогда, когда обработка тестируемой субстанцией не вызывает повышения смертности. Повышенная смертность может инсценировать мнимое снижение трансаминазного "зеркального" эффекта. С другой стороны, отчетливое снижение доли смертности заметно также без влияния на уровень сывороточной трансаминазы и может указывать на защитный эффект.

8.1 Смертность.

В тилозной группе (контроль) умерло 24% обработанных GalN/LPS животных в течение опытов до того, как у них смогли забрать кровь. Отчетливое повышение смертности должно также приниматься во внимание как одиночный критерий при рассмотрении эффектов, так как при высокой смертности предположительно выпадают соответствующие многие значения высокого трансаминазного "зеркального" эффекта,

При 5 мг/мл A2 доля смертности изменялась неотчетливо.

8.2 Сывороточные трансаминазы.

Обобщение показывает результаты непарных t-тестов (программа GraphPad: InStat версия 1.15). Сравнивались уровни трансаминазы опытных групп с обработанной тилозой контрольной группой. Во всех случаях сывороточные уровни, которые обнаруживали значение SGOT, повышенное не менее чем на 100% против необработанных животных (базовый уровень), были исключены из обобщения как не респондеры. Это приводит в итоге к недооценке потенциально существующего защитного действия, но не к ложно положительному утверждению.

Таблица B. Влияние тестируемых соединений с A1 по A4 на активности трансаминазы в сыворотке. Обобщение результатов (см. в конце текста). Значение трансаминазной активности в единицах на л. Среднее значение стандартное отклонение;

n - количество протестированных сывороток на обработанную группу

SGOT

В случае A2 при дозе 5 мг/кг наблюдалось маргинальное значительное снижение значений SGOT.

SGPT

Значительное снижение SGPT (при сравнимой доле смертности) наблюдалось при 5 мг/кг A2.

9. Заключение.

У куркумы наблюдалось защитное действие на печень в модели GalN/LPS при пероральном введении мыши 5 мг/кг. На основании многофакторного генезиса повреждения печени в этой модели наблюдается более чем частичная защита, то есть полная нормализация уровня трансаминазы, что не наблюдалось у других многочисленных защитных соединений, проверенных ранее.

Пример 1.

Таблетки для орального употребления

A. Прямая компрессия

/1/

Активное вещество: производное куркумина - 15-30 мг/таблетка

(соответственно, пульверизированное лекарственное вещество) - 0,5-1,0 г/таблетка

Стеарат магния BP - 0,65 мг/таблетка

Безводная лактоза - 80 мг/таблетка

Активное вещество смешивают с безводной лактозой и стеаратом магния и смесь просеивают. Приготовленную смесь прессуют на машине для таблетирования.

/2/

Активное вещество: производное куркумина - 15-30 мг/таблетка

(соответственно, пульверизированное лекарственное вещество) - 0,5-1,0 г/таблетка

Стеарат магния BP - 0,7 мг/таблетка

Микрокристаллическая целлюлоза - 100 мг/таблетка

Активное вещество просеивают и смешивают с микрокристаллической целлюлозой и стеаратом магния. Полученную смесь прессуют в таблетки на машине для таблетирования.

Влажное гранулирование

Активное вещество: производное куркумина - 15-30 мг/таблетка

(соответственно, пульверизированное лекарственное вещество) - 0,5-1,0 г/таблетка

Лактоза BP - 150,0 мг/таблетка

Крахмал BP - 30,0 мг/таблетка

Желатинизированный маисовый крахмал BP - 15,0 мг/таблетка

Стеарат магния - 1,5 мг/таблетка

Активное вещество просеивают через соответствующее сито и смешивают с лактозой, крахмалом и желатинизированным маисовым крахмалом. Добавляют требуемое количество очищенной воды, и порошок гранулируют. После сушки гранулы просеивают и смешивают со стеаратом магния. Затем гранулы прессуют в таблетки посредством пробивного штампа с соответствующим диаметром отверстий. Могут быть изготовлены таблетки другого состава с другим содержанием активного вещества по отношению к лактозе или другой плотности с использованием соответствующего пробивного штампа.

Пример 2.

Капсулы

Активное вещество: производное куркумина - 15-30 мг/капсула

(соответственно, пульверизированное лекарственное вещество) - 0,5-1,0 г/капсула

Крахмал 1500 - 150,00 мг/капсула

Стеарат магния BP - 1,00 мг/капсула

Активное вещество просеивают и смешивают с другими компонентами. Смесью наполняют капсулы N 2 из твердого желатина с использованием соответствующего устройства. Могут быть изготовлены другие капсулы, с другой массой наполнения и, соответственно, с другим размером капсул.

Пример 3.

Сироп

Композиция, не содержащая сахарозу - мг/5 мл дозы

Активное вещество: производное куркумина - 15-30

Гидроксипропилметилцеллюлоза (тип вязкости 4000) - 22,5

Буфер - по потребности

Вкусовое вещество - по потребности

Краситель - по потребности

Консерватор

Вещество, придающее сладкий вкус

Очищенная вода - до 5,0 мл

Гидроксипропилметилцеллюлозу диспергируют в горячей воде, охлаждают и затем смешивают с водной суспензией, содержащей активное вещество и другие компоненты композиции. Полученный раствор доводят до необходимого объема и перемешивают.

Пример 4.

Суспензия - мг/5 мл дозы

Активное вещество: производное куркумина - 15-30

(соответственно, пульверизированное лекарственное вещество - 0,5-1,0 г

(соответствует высушенному экстракту лекарственного вещества)

Стеарат алюминия - 75,0

Вещество, придающее сладкий вкус - по потребности

Вкусовое вещество - по потребности

Краситель

Очищенное кокосовое масло - до 5,00

Стеарат алюминия диспергируют в примерно 90% очищенного кокосового масла. Полученную суспензию нагревают при перемешивании до 115^oC и охлаждают. Добавляют вещество, придающее сладкий вкус, вкусовое вещество и краситель, и диспергируют активное вещество. Суспензию доводят до необходимого объема остальным количеством очищенного кокосового масла и перемешивают.

Пример 5.

Сублингвальные (подъязычные) таблетки

Активное вещество: производное куркумина - 15-30 мг/таблетка

(соответственно, экстракт лекарственного вещества) - 0,5-1,0 г/таблетка

Прессованный сахар - 50,5 мг/таблетка

Стеарат магния BP - 0,5 мг/таблетка

Активное вещество просеивают через соответствующее сито и прессуют с использованием подходящего пробивного штампа. Могут быть приготовлены таблетки с другим содержанием активного вещества по отношению к разбавителю или с другим весом после прессования.

Пример 6.

Суппозитарии для ректального употребления

Активное вещество: производное куркумина - 15-30 мг

Witepsol H15⁺ - до 1,0 г

+ - соответствующее количество Adeps solidus Ph.Eur.

Готовят суспензию активного вещества в расплавленном Witepsol H15⁺ и наполняют посредством соответствующего устройства однограммовые формы суппозиторий.

Пример 7.

Внутривенные инъекции

Активное вещество: производное куркумина - 15-30 мг/мл

Хлорид натрия для внутривенного вливания, BP, 0,9% мас./об. - до 1 мл

Объем композиции 2500 мл.

Активное вещество растворяют в 1 ч. хлорида натрия для внутривенного вливания и доводят раствор до требуемого объема хлоридом натрия для внутривенного вливания. Раствор тщательно перемешивают. Раствором наполняют прозрачные 10 мл. стеклянные ампулы, тип 1, и запаивают. Ампулы стерилизуют в автоклаве при 120^oC в течение не менее 20 мин.

Пример 8.

Патроны для ингаляции

Активное вещество (микронизиров.):

Производное куркумина - 15-20 мг/патрон

Лактоза BP - 25,00

Активное вещество микронизируют в энергетической мельнице до мельчайших частиц и смешивают с лактозой. Порошкообразной смесью наполняют капсулы N 3 из твердого желатина.

Пример 9.

Носовое распыление

Активное вещество: куркумин - 15-30 мг/мл

Консервант

Хлорид натрия BP - по потребности

Очищенная вода - до 100

Общий вес - 100 мг (эквивалентно 7 мг активного вещества)

Активное вещество, консервант и хлорид натрия растворяют в 1 ч. воды. Раствор доводят до требуемого объема водой и тщательно перемешивают.